包括含有GLP-1类似物或其药学上可接受的盐的缓释微球的药物组合物的制作方法

包括含有glp-1类似物或其药学上可接受的盐的缓释微球的药物组合物
技术领域
1.本发明涉及包括含有glp-1类似物或其药学上可接受的盐的缓释微球的药物组合物和所述缓释微球的制备方法。


背景技术：

2.胰高血糖素样肽-1(glp-1)来源于前胰高血糖素原。前胰高血糖素原是158个氨基酸的前体多肽，其在不同组织中加工，形成许多不同的胰高血糖素原诱导肽，包括胰高血糖素、胰高血糖素样肽-1(glp-1)、胰高血糖素样肽-2(glp-2)和胃泌酸调节素(oxm)，它们参与多种生理功能，包括血糖稳态、胰岛素分泌、胃排空和肠道发育以及食物摄取的调节。glp-1作为对应于胰高血糖素原的氨基酸72-108(前胰高血糖素原92-128)的37个氨基酸的肽而产生。glp-1(7-36)酰胺或glp-1(7-37)酸是glp-1的生物活性形式，其对于glp-1受体表现出基本上相当的活性。已经发现，作为glp-1受体激动剂的glp-1和glp-1类似物例如提供了有效的血糖控制，用于治疗2型糖尿病患者，体重减轻效果，β细胞功能保持，和减轻高血压、低血糖和/或高脂血症。具体的glp-1类似物，包括&bydureon(艾塞那肽)、(索马鲁肽)、(利拉鲁肽)、(利西拉肽)；(阿必鲁肽)和(度拉糖肽)，是市售的或正在开发中。
3.glp-1激动剂例如索马鲁肽是肽类，由于诸如胃肠道和肠黏膜的酶降解、肠黏膜吸收不充分以及首先通过肝脏代谢等各种障碍，这些肽类的给药通常通过注射进行。最近口服给药的药剂也已商品化，但与注射相比生物利用度非常低，因此用量显著地高。此外，包含索马鲁肽的制剂被配制成直接给药(自行给药)的形式，以持续管理肥胖或糖尿病，因此管理在给药部位可能发生的疼痛、炎症反应等非常重要。
4.另一方面，已知为了诸如glp-1激动剂的肽的长时间洗脱，将肽包封于微球中的技术，但为了发挥有效的长期药理作用，需要在微球中含有高含量的肽。然而，在这种情况下，不可避免地会发生药物的初期突释(initial burst)，特别是glp-1激动剂具有可能由于这种初期突释而导致致命副作用的问题。


技术实现要素：

5.【技术问题】
6.已提出本发明以解决上述问题，并且本发明的目的是提供包括缓释微球的药物组合物和所述缓释微球的制备方法，所述缓释微球包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，其防止索马鲁肽的初期过量药物释放，并表现出长期持续的药物释放的特性。
7.【技术方案】
8.为了达到上述目的，
9.作为一个方面，本发明提供一种药物组合物，其包括可生物降解聚合物，并且包括索马鲁肽缓释微球，索马鲁肽缓释微球具有基于微球总重量的3wt％或更多的索马鲁肽含量。
10.作为另一方面，可生物降解聚合物可以是选自以下项组成的组中的一种或多种：选自由聚丙交酯(pla)、聚乙交酯(pga)、聚丙交酯-共-乙交酯(plga)(其是丙交酯和乙交酯的共聚物)、聚原酸酯、聚酐、聚羟基丁酸、聚己内酯和聚烷基碳酸酯组成的组的聚合物；它们中的两种或更多种的共聚物或简单混合物；所述聚合物和聚乙二醇(peg)的共聚物；以及所述聚合物或共聚物与糖连接的聚合物-糖复合物。
11.作为另一方面，索马鲁肽的药学上可接受的盐可以是乙酸盐、苯甲酸盐、羟基萘酸盐、萘二磺酸盐或帕莫酸盐。
12.作为另一方面，可生物降解聚合物中的聚丙交酯-共-乙交酯或聚丙交酯的特性粘度可以为0.16至1.7dl/g。
13.作为另一方面，含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球的平均粒度可为5μm至100μm。
14.作为另一方面，含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球的跨度值可以为1.2或更小。
15.作为另一方面，含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球的重量可以是20至1000mg、20mg至800mg、20mg至600mg、20mg至500mg、30mg至1000mg、30mg至800mg、30mg至600mg、30mg至500mg、40mg至1000mg、40mg至800mg、40mg至600mg、40mg至500mg、50mg至1000mg、50mg至800mg、50mg至600mg、或50mg至500mg。
16.作为另一方面，微球可以包含一种或多种释放控制剂，所述释放控制剂选自由以下项组成的组：丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、异巴豆酸、油酸、反油酸、山梨酸、亚油酸、花生四烯酸、羟基萘甲酸、萘二甲酸和帕莫酸。
17.作为另一方面，本发明提供了一种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球的制备方法，包括以下步骤：
18.(a)将索马鲁肽或其药学上可接受的盐和可生物降解聚合物溶解在有机溶剂中，以制备含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和可生物降解聚合物的溶液(分散相)；
19.(b)将步骤(a)中制备的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液加入到含有表面活性剂的水相(连续相)中，以制备乳液；
20.(c)将有机溶剂从步骤(b)中制备的乳液状态的分散相萃取和蒸发到连续相，以形成微球；和
21.(d)从步骤(c)的连续相中收集微球以制备包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球。
22.作为另一方面，可生物降解聚合物可以是彼此不同的两种或更多种可生物降解聚合物的混合物。
23.作为另一方面，本发明提供了一种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球的制备方法，包括以下步骤：
24.(a')将索马鲁肽或其药学上可接受的盐和彼此不同的两种或更多种可生物降解
聚合物溶解在有机溶剂中，以制备含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液(分散相)；
25.(b')将步骤(a')中制备的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液加入到含有表面活性剂的水相(连续相)中，以制备乳液；
26.(c')将有机溶剂从步骤(b')中制备的乳液状态的分散相萃取和蒸发到连续相，以形成微球；和
27.(d')重复微球制备过程2次或更多次，以制备彼此不同的两种或更多种微球，微球制备过程包括从步骤(c')中的连续相中收集微球以制备微球，
28.(e')将由不同种类的聚合物组成的两种或更多种微球混合。
29.作为另一方面，本发明提供了一种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球的制备方法，包括以下步骤：
30.(a')将索马鲁肽或其药学上可接受的盐和彼此不同的两种或更多种可生物降解聚合物分别溶解在有机溶剂中，以制备两种或更多种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液(分散相)；
31.(b")将步骤(a")中制备的两种或更多种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液分别加入到含有表面活性剂的水相(连续相)中，以制备两种或更多种乳液；
32.(c")通过将步骤(b”)中制备的两种或更多种乳液状态的分散相放入同一反应器中，将有机溶剂从步骤(b")中制备的两种或更多种乳液状态的分散相萃取和蒸发到连续相，以形成微球；和
33.(d")从步骤(c")中的连续相中收集微球。
34.作为另一方面，制备方法中使用的连续相的ph可以为5或更低。
35.【有益效果】
36.根据本发明的一个制备例的包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的缓释药物组合物可以通过防止药物的初期突释来有效抑制致命的副作用，并且可以包含相对于粒度高含量的药物，因此，它具有能够最大限度地减少患者在给药期间可能发生的疼痛和炎症反应的效果。
附图说明
37.图1是确认将对比例1至4中制备的含有索马鲁肽的微球给药至大鼠后血浆药物浓度随时间变化的图。
38.图2是确认将实施例1、2和4中制备的含有索马鲁肽的微球给药至大鼠后血浆药物浓度随时间变化的图。
39.图3是确认将实施例4、6、7和8中制备的含有索马鲁肽的微球给药至大鼠后药物的累积释放随时间变化的图。
40.图4是确认将实施例4、6、7和8中制备的含有索马鲁肽的微球给药至大鼠后血浆药物浓度随时间变化的图。
41.图5是显示使用电子显微镜对根据实施例4制备的微球进行形态分析的结果的照片。
具体实施方式
42.下文中将详细描述本发明。
43.本发明包括作为活性成分的索马鲁肽或其药学上可接受的盐。
44.索马鲁肽(semaglutide)是glp-1受体激动剂n
6.26-{18-[n-(17-羧基-十七酰基)-l-γ-谷氨酰基]-10-氧3,6,12,15-四氧杂-9,18-二氮杂十八烷酰基}-[8-(2-氨基-2-丙酸),34-l-精氨酸]人胰高血糖素样肽1(7-37)，也称为n-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(s)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷基氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][aib8,arg34]glp-1-(7-37)。索马鲁肽的结构如下面的化学式1所示。
[0045]
[化学式1]
[0046][0047]
该索马鲁肽可以如国际专利公开wo2006/097537的制备例4中所述的那样制备，并且可以使用市售的索马鲁肽。
[0048]
索马鲁肽可以特别地以药学上可接受的盐的形式存在。作为盐，可以使用本领域常用的盐而没有限制。本发明的术语“药学上可接受的盐”是指化合物的所有有机或无机加成盐中的任一种，其中这些盐导致的副作用不会减弱相对无毒无害的具有有效作用的浓度下的活性成分的有益效果。具体的例子可以包括索马鲁肽的醋酸盐、苯甲酸盐、羟基萘甲酸盐、萘二磺酸盐或帕莫酸盐等，但不限于此。
[0049]
本发明的活性成分，索马鲁肽或其药学上可接受的盐，可以是各种形式，例如无定形或结晶形式。
[0050]
根据本发明的药物组合物中所包含的索马鲁肽缓释微球中所包含的可生物降解聚合物选自由以下项组成的组：选自由聚丙交酯(pla)、聚乙交酯(pga)、聚丙交酯-共-乙交酯(plga)(其是丙交酯和乙交酯的共聚物)、聚原酸酯、聚酐、聚羟基丁酸、聚己内酯和聚烷基碳酸酯组成的组的聚合物；两种或更多种的共聚物或简单混合物；所述聚合物和聚乙二醇(peg)的共聚物；以及其中所述聚合物或共聚物与糖连接的聚合物-糖复合物。作为一个具体方面，根据本发明的药物组合物可以包括包含两种或更多种可生物降解聚合物的微球。作为另一个具体方面，根据本发明的药物组合物可以包括两种或更多种微球，所述两种或更多种微球分别包括两种或更多种中的一种或多种选自可生物降解聚合物的聚合物。
[0051]
选自聚丙交酯-共-乙交酯和聚丙交酯聚合物中的两种或更多种聚合物不限于此，但共聚物中丙交酯和乙交酯的摩尔比可以为50:50至100:0，60:40至90:10，或70:30至80:20，聚合物的特性粘度可以为0.16dl/g至1.7dl/g，0.2dl/g至1.3dl/g，或0.24dl/g至1.2dl/g。
[0052]
本发明所用的聚丙交酯-共-乙交酯或聚丙交酯的特性粘度是指25℃下在氯仿中0.1％(w/v)的浓度下用乌氏粘度计测得的特性粘度。当聚丙交酯-共-乙交酯或聚丙交酯的特性粘度小于0.16dl/g时，聚合物的分子量不足，因此难以表现出对索马鲁肽或药学上可接受的盐的缓释作用，当特性粘度超过1.7dl/g时，可能会出现过度延迟索马鲁肽或其药学上可接受的盐的释放的效果。此外，当使用特性粘度高的聚合物制造微球时，由于聚合物的
高粘度，存在需要使用过量的制备溶剂的问题，并且难以制造可再现的微球。具有上述特性的市售聚合物的实例可包括：evonik公司的resomer系列rg502h、rg503h、rg504h、rg502、rg503、rg504、rg653h、rg752h、rg752s、rg755s、rg750s、rg757s、rg858s、r202h、r203h、r205h、r202s、r203s、r205s、r206s和r207s，以及corbion公司的pdl 02a、pdl 02、pdl 04、pdl 05、pdlg 7502a、pdlg 7502、pdlg 7507、pdlg 5002a、pdlg 5002、pdlg 5004a和pdlg 5004，等等。
[0053]
根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球中，基于微球的总重量，索马鲁肽或其药学上可接受的盐的含量优选为以索马鲁肽计3wt％或更多、3.5wt％或更多、或3.9wt％或更多。当微球中索马鲁肽或其药学上可接受的盐的含量基于索马鲁肽小于3wt％时，由于聚合物的用量与药物相比过多，索马鲁肽或其药学上可接受的盐的生物利用度可能降低，当含量过高时则不是优选的，因为存在索马鲁肽或其药学上可接受的盐的初期释放高的问题。
[0054]
根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球可以优选地具有平均粒度为5μm至100μm、5至90μm、5μm至80μm、10μm至90μm、10μm至80μm、15μm至100μm、15μm至90μm、15μm至80μm、70μm至100μm、70μm至90μm、70μm至80μm、60μm至100μm、60μm至80μm、60μm至70μm、90μm至100μm、20μm至90μm、20μm至70μm、20μm至60μm、30μm至80μm、30μm至60μm、40μm至70μm、40μm至50μm、30μm至40μm、20μm至30μm、5μm至30μm、5μm至20μm、10μm至20μm、或5μm至10μm的均匀颗粒分布。本发明中使用的术语“平均粒度”是对应于在粒度分布曲线中的体积百分比50％的粒度，是指中值粒度，表示为d50或d(v,0.5)。
[0055]
当含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球的平均粒度小于5μm时，索马鲁肽或其药学上可接受的盐的药物释放太快，因而不是优选的。当平均粒度超过100μm时，向人体给药时针头变得过粗，并因此在注射时可能引起症状，或者注射后药物可能泄漏到注射部位，因此不是优选的。
[0056]
本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球优选具有均匀的颗粒分布。具有均匀颗粒分布的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球在注射过程中具有比不均匀的微球更小的变化，并且可以以更准确的量给药。本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球的尺寸分布或跨度值优选为1.5或更小。更优选地，尺寸分布优选为1.2或更小。更具体地，尺寸分布或跨度值可以为1.5或更小、1.2或更小、0.1至1.5、0.3至1.5、0.5至1.5、0.1至1.0、0.4至1.0、0.6至1.0、0.2至0.8或0.4至0.8。本发明中使用的术语“尺寸分布”或“跨度值”是表示微球粒度的均匀性的指标，是指表示通过以下公式得到的值：跨度值＝(dv0.9-dv0.1)/dv0.5。在本文中，dv0.1为对应于微球粒度分布曲线中体积百分比10％的粒度，dv0.5为对应于微球粒度分布曲线中体积百分比50％的粒度，并且dv0.9是指对应于微球粒度分布曲线中体积百分比90％的粒度。
[0057]
本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球通过注射途径给药，例如皮下注射，特别地，由于可能自行给药，优选地索马鲁肽在相对较长的时间段内释放。优选地，根据本发明的药物组合物的缓释微球可以释放索马鲁肽或其药学上可接受的盐1个月或更久、2个月或更久、3个月或更久、1个月至2个月、1个月至3个月、1个月至4个月、1个月至5个月、1个月至6个月、2个月至6个月、2个月至5个月、2个月至4个月、2个月至3个月、3个月至5个月、或3个月至4个月，但不限于此。此外，在本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接
受的盐的缓释微球中，该释放方面没有特别限制，但优选地，在活体内给药时，索马鲁肽或其药学上可接受的盐在24小时内的释放量小于10％，小于15％或小于20％。此外，含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球
[0058]
此外，在本发明的药物组合物中，包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球的总量可以为20mg至1000mg、20mg至800mg、20mg至600mg、20mg至500mg、30mg至1000mg、30mg至800mg、30mg至600mg、30mg至500mg、40mg至1000mg、40mg至800mg、40mg至600mg、40mg至500mg、50mg至1000mg、50mg至800mg、50mg至600mg、或50mg至500mg。通过在该范围内将包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球包含在组合物中，根据本发明的组合物具有不仅使给药部位的炎症反应最小化而且允许患者自行给药的优点。
[0059]
本发明的组合物中所包含的包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球还可包含释放控制剂。用作释放控制剂的物质可以包括选自以下项中的一种或多种：例如，丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、月桂酸、十三烷酸、肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、花生酸、异巴豆酸、油酸、反油酸、山梨酸、亚油酸、花生四烯酸、苯甲酸酯、羟基萘甲酸、萘二甲酸和帕莫酸，但不限于次。优选地，释放控制剂可以为羟基萘甲酸、萘二甲酸或帕莫酸，但不限于此。
[0060]
根据本发明的包括包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球的药物组合物可以配制为各种类型的制剂，例如，它可以是已知的肠胃外给药制剂的剂型。因此，除了索马鲁肽或其药学上可接受的盐之外，根据本发明的药物组合物还可以包含增稠剂、稳定剂、等渗剂、ph调节剂、表面活性剂、赋形剂和/或载体。可用的等渗剂可包括水性赋形剂，例如甘露醇、蔗糖、山梨糖醇、海藻糖、乳糖、氯化钠等，或糖类，并且增稠剂可以包括例如羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钠、聚维酮等。对于表面活性剂，聚乙烯醇等是可能的。另外，对于缓冲剂，可以使用磷酸氢二钠、柠檬酸酐、氢氧化钠、氯化钠等。
[0061]
根据本发明的药物组合物可以以索马鲁肽的治疗有效剂量给药，例如，以治疗糖尿病(特别是2型糖尿病)、β细胞功能保持、高血压、高脂血症、肥胖、非酒精性脂肪性肝炎或神经退行性疾病(如阿尔茨海默病和帕金森病)的有效剂量施用。索马鲁肽的治疗有效剂量可由医生评估。根据本发明的包含索马鲁肽的药物组合物可以每月一次至每季度一次给药。在一些具体实例中，基于索马鲁肽，根据本发明的组合物的一个月用量可以是1.0mg至100mg、1.0mg至80mg、1.0mg至30mg、1.0mg至20mg、2.0mg至100mg、2.0mg至80mg、2.0mg至30mg、2.0mg至20mg、4.0mg至100mg、4.0mg至80mg、4.0mg至30mg、4.0mg至20mg、8.0mg至100mg、8.0mg至80mg、8.0mg至30mg、8.0mg至20mg、9.6mg至100mg、9.6mg至80mg、9.6mg至30mg、9.6mg至20mg、10mg至100mg、10mg至80mg、10mg至30mg、10mg至20mg、1.0mg至10mg、1.0mg至9.6mg、1.0mg至8.0mg、1.0mg至6.0mg、2.0mg至10.0mg、2.0mg至9.6mg、2.0mg至8.0mg、2.0mg至6.0mg、2.0mg至24.0mg、或2.0mg至12mg。包含根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球的根据本发明的药物组合物可以通过肠胃外给药来给药，例如通过皮下注射来给药。根据本发明的药物组合物可以使用预填充注射器(例如笔式注射器)给药。该笔式注射器可以是包含单剂量的一次性注射器，或在给药时仅以单剂量注射的计量型剂量注射器(具有剂量计量装置的注射器)。
[0062]
作为一个具体的实施方式，根据本发明的药物组合物中所包含的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球具有相较于微球的容量而言高的药物含量，并且还抑制可
能导致致命副作用的药物初期突释，并在所需时段内表现出足以作为glp-1激动剂的功效，因此，它可用于预防或治疗糖尿病(特别是2型糖尿病)、β细胞功能保持、高血压、高脂血症、肥胖、非酒精性脂肪性肝炎或神经退行性疾病(如阿尔茨海默病和帕金森病)。
[0063]
作为另一方面，本发明提供了一种制备含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球的方法。
[0064]
在下文中，具体说明本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球注射剂的制备方法。
[0065]
根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球注射剂可以采用例如“溶剂萃取蒸发法”制备，但制备方法不限于此。
[0066]
作为根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球的制备方法的一个具体示例，该制备方法包括：(a)将索马鲁肽或其药学上可接受的盐和可生物降解聚合物溶解在有机溶剂中，以制备含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液(分散相)；
[0067]
(b)将步骤(a)中制备的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液加入到含有表面活性剂的水相(连续相)中，以制备乳液；
[0068]
(c)将有机溶剂从步骤(b)中制备的乳液状态的分散相萃取和蒸发到连续相，以形成微球；和
[0069]
(d)从步骤(c)的连续相中收集微球，以制备包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球。
[0070]
在根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球的制备中，为了抑制索马鲁肽或其药学上可接受的盐的初期过度释放，同时以相较于微球的重量而言高的含量包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐，以及以一定浓度释放所需的长时间，例如1个月或更久、3个月或更久、1个月至2个月、1个月至3个月、1个月至4个月、1个月至5个月、1个月至6个月、2个月至6个月、2个月至5个月、2个月至4个月、2个月至3个月、3个月至5个月或3个月至4个月，对于可生物降解聚合物，具体地，优选使用选自由以下项组成的组中的一种或多种：选自由聚丙交酯(pla)、聚乙交酯(pga)、聚丙交酯-共-乙交酯(plga)(其是丙交酯和乙交酯的共聚物)、聚原酸酯、聚酸酐、聚羟基丁酸、聚己内酯和聚烷基碳酸酯组成的组的聚合物；它们中的两种或更多种的共聚物或简单混合物；所述聚合物和聚乙二醇(peg)的共聚物；以及其中所述聚合物或共聚物与糖连接的聚合物-糖复合物。作为一个具体实施方式，在根据本发明的制备方法中，对于可生物降解聚合物，可以使用聚(丙交酯-共-乙交酯)和/或聚丙交酯聚合物。
[0071]
在本发明中，在包含两种或更多种聚合物，该两种或更多种聚合物具有不同的构成聚合物的重复单元和两种或更多种的重复单元的情况下，彼此不同的两种或更多种可生物降解聚合物可以包含重复单元摩尔比不同的两种或更多种聚合物。此外，微球可以是包含聚丙交酯-共-乙交酯的微球和包含聚丙交酯聚合物的微球的混合物，或者是同时包含聚丙交酯-共-乙交酯和聚丙交酯聚合物的微球。在包含两种或更多种重复单元的情况下，具有不同重复单元摩尔比的两种或更多种聚合物的例如聚丙交酯-共-乙交酯中的重复单元丙交酯和乙交酯的摩尔比(丙交酯:乙交酯)为50:50至100:0、60:40至90:10、或70:30至80:20。
[0072]
作为一个具体例子，当彼此不同的可生物降解聚合物为2种时，这些可生物降解聚合物的含量比可以为重量比0.5:10至10:0.5、0.5:8至8:0.5、1:10至10:1、1:4至4:1、1:3至3:1或1:2至2:1，但不限于此。
[0073]
作为更具体的方面，为了制备根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球，当将聚丙交酯-共-乙交酯用作两种或更多种可生物降解聚合物时，可以包括特性粘度为0.25dl/g至0.44dl/g的至少一种或多种可生物降解聚合物。更优选地，可生物降解聚合物的丙交酯和乙交酯重复单元的摩尔比(丙交酯:乙交酯)可以为95:5至50:50、85:15至50:50、75:25至50:50。
[0074]
作为具体的方面，根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球可以通过在步骤(a)中同时将索马鲁肽或其药学上可接受的盐和两种或更多种可生物降解聚合物，例如选自由聚(丙交酯-共-乙交酯)和聚丙交酯聚合物组成的组中的两种或更多种聚合物，溶解在有机溶剂中，来制备包含两种或更多种聚合物的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球。
[0075]
此外，可以通过将使用彼此不同的两种或更多种可生物降解聚合物(例如聚(丙交酯-共-乙交酯)或聚丙交酯聚合物)经步骤(a)至步骤(d)制备的包含彼此不同的聚合物的彼此不同的两种或更多种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球混合，来制备根据本发明的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球。具体地，这样的包含彼此不同的聚合物的彼此不同的两种或更多种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球可以通过包括以下步骤的制备方法来制备。
[0076]
(a')将索马鲁肽或其药学上可接受的盐和彼此不同的两种或更多种可生物降解聚合物溶解在有机溶剂中，以制备含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液(分散相)；
[0077]
(b')将步骤(a')中制备的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液加入到含有表面活性剂的水相(连续相)中，以制备乳液；
[0078]
(c')将有机溶剂从步骤(b')中制备的乳液状态的分散相萃取和蒸发到连续相，以形成微球；和
[0079]
(d')重复制备微球的过程2次或更多次，以制备彼此不同的两种或更多种微球，制备微球的过程包括从步骤(c')中的连续相中收集微球以制备微球，
[0080]
(e')将包含不同种类的聚合物的两种或更多种微球混合。
[0081]
另外，其可以通过包括以下步骤的制备方法制备：
[0082]
(a')将索马鲁肽或其药学上可接受的盐和彼此不同的两种或更多种可生物降解聚合物分别溶解在有机溶剂中，以制备两种或更多种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液(分散相)；
[0083]
(b")将步骤(a")中制备的两种或更多种含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐和聚合物的溶液分别加入到含有表面活性剂的水相(连续相)中，以制备两种或更多种乳液；
[0084]
(c")通过将步骤(b”)中制备的两种或更多种乳液状态的分散相放入同一反应器中，将有机溶剂从步骤(b")中制备的两种或更多种乳液状态的分散相萃取和蒸发到连续相，以形成微球；和
[0085]
(d")从步骤(c")中的连续相中收集微球。
[0086]
在步骤(a)、(a’)或(a”)中，一种或多种可生物降解聚合物可以是聚(丙交酯-共-乙交酯)或聚丙交酯。聚(丙交酯-共-乙交酯)或聚丙交酯的特性粘度优选在0.16dl/g至1.7dl/g的范围内。
[0087]
步骤(a)、(a’)或(a”)中，用于溶解索马鲁肽或其药学上可接受的盐和一种或多种可生物降解聚合物的有机溶剂为一种或多种有机溶剂。此外，有机溶剂可以使用一种或多种有机溶剂混合而成的混合有机溶剂。作为一个具体方面，混合溶剂可以是与水混合的有机溶剂和不与水混合的有机溶剂的混合溶剂。在这种情况下，优选使用至少50％(v/v)或更多的具有不与水混合的性质的有机溶剂。利用有机溶剂的不与水混合的性质，在后述的步骤(b)、(b')或(b”)中，乳液可以通过在含有表面活性剂的连续相中均匀混合分散相来形成。溶解该索马鲁肽或其药学上可接受的盐和一种或多种可生物降解聚合物的有机溶剂的种类没有特别限制，但优选为选自由二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲乙酮、丙酮、乙腈、二甲亚砜、二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮、乙酸酯、甲醇、乙醇、丙醇和苯甲醇组成的组中的一种或多种溶剂的混合溶剂，更优选地，可以使用选自二氯甲烷和乙酸乙酯中的一种溶剂以及选自二甲亚砜、n-甲基吡咯烷酮、甲醇和乙酸酯中的一种或多种有机溶剂。
[0088]
在步骤(b)、(b')或(b”)中，将含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐-聚合物溶液和表面活性剂的连续相均匀混合的方法没有特别限制，但可以使用高速搅拌器、流线混合器(in-line mixer)、膜乳化法、微流体乳化法、超声波混合器或静态混合器等。当使用高速搅拌器、流线混合器、超声波混合器或静态混合器形成乳液时，难以获得均匀的乳液，在步骤(c)和步骤(d)之间、步骤(c')和步骤(d')之间，或者在后述的步骤(c”)和步骤(d”)之间，优选额外进行筛分过程等。当使用膜乳液法和微流体乳液法时，可以获得均匀大小的乳液，因此，在步骤(c)和步骤(d)之间、步骤(c')和步骤(d')之间，或在后述的步骤(c”)和步骤(d”)之间，不额外进行筛分过程等，因此是优选的。
[0089]
步骤(b)、(b')或(b”)中使用的表面活性剂的种类没有特别限制，可以使用任一种，只要它可以帮助索马鲁肽或其药学上可接受的盐-聚合物溶液在连续相中形成稳定液滴的分散相。对于表面活性剂，可以使用聚乙烯醇。
[0090]
在步骤(b)、(b')或(b”)中，基于包含表面活性剂的连续相的总体积，含有表面活性剂的连续相中的表面活性剂的含量可以为0.01w/v％至20w/v％，优选为0.03w/v％至18w/v％、0.05w/v％至15w/v％、0.07w/v％至10w/v％、或0.1w/v％至5w/v％。当表面活性剂的含量小于0.01w/v％时，在连续相中可能无法形成液滴形式的分散相或乳液，当表面活性剂的含量超过20w/v％时，由于表面活性剂过量，在连续相中形成微球后，可能难以去除表面活性剂。
[0091]
对于在步骤(b)、(b')或(b”)中使用的连续相，可以使用水，并且为了控制有机溶剂从乳液状态的分散相中的萃取率，可以使用含有选自甲醇、乙醇、丙醇和乙酸乙酯中的一种或多种中的一些的水。
[0092]
此外，连续相的ph可以为5或更小、4或更小、3或更小、2至5、2至4、2至3或2.5至3，但不限于此。当连续相的ph值调整在该范围内时，h和离子浓度得到调整，微球中的索马鲁肽或其药学上可接受的盐的初期释放得到调整，从而可以被大幅降低。
[0093]
在步骤(c)、(c’)或(c”)中，当包含液滴形式的分散相和含有表面活性剂的连续相的乳液在低于有机溶剂沸点的温度下保持或搅拌一定时间(例如2小时到48小时)时，有机
溶剂可以从作为分散相的液滴形式的索马鲁肽或其药学上可接受的盐-聚合物溶液中萃取到连续相中。萃取在连续相中的有机溶剂的一些可以从表面蒸发。随着有机溶剂从液滴形式的索马鲁肽或其药学上可接受的盐-聚合物溶液中萃取和蒸发，液滴形式的分散相可以固化形成微球。
[0094]
在步骤(c)、(c’)或(c”)中，为了有效地另外去除有机溶剂，对于连续相的温度，可以加热一定时间。加热温度没有限制，本领域技术人员可以根据所使用的有机溶剂进行适当调整。例如，当使用二氯甲烷作为有机溶剂时，可以加热以维持30℃或更高、40℃或更高、45℃或更高、30至50℃、40至50℃、或45℃。
[0095]
在步骤(d)、(d')或(d”)中，回收含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的微球的方法可以使用各种已知技术进行，例如，可以使用过滤或离心方法等。
[0096]
在步骤(c)和步骤(d)之间、步骤(c')和步骤(d')之间、或者步骤(c”)和步骤(d”)之间，可以通过过滤和洗涤去除残留的表面活性剂，可以通过再次过滤回收微球。
[0097]
用于去除残留的表面活性剂的洗涤通常可以用水进行，洗涤可以重复数次。
[0098]
此外，如上所述，当在步骤(b)、(b')或(b”)中使用高速搅拌器或流线混合器形成乳液时，在(c)和(d)之间、在步骤(c')和(d')之间，或在步骤(c”)和(d”)之间，可以通过额外使用筛分过程来获得均质的微球。筛分过程可以使用已知技术进行，并且可以通过使用大小不同的筛子过滤出大颗粒和小颗粒的微球来获得尺寸均匀的微球。
[0099]
本发明的制备方法，在(d)、(d’)或(d”)后或在过滤和洗涤后，通过使用常用方法干燥所得到的微球，最终可以得到干燥的微球。
[0100]
除上述事项外，包括索马鲁肽、可生物降解聚合物及其含量在内的所有未单独限定的事项，药物组合物中限定的所有事项均可原样适用。
[0101]
根据本发明的制备方法，可制备含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球注射剂，其中索马鲁肽或其药学上可接受的盐药物在所需时间内保持在有效浓度而不会快速短暂释放。此外，可以制备具有良好给药能力的颗粒均匀的含有索马鲁肽或其药学上可接受的盐的缓释微球注射剂。
[0102]
实施方式
[0103]
实施例
[0104]
在下文中，将通过以下制备例更详细地描述本发明。然而，以下制备例仅用于说明本发明，而本发明的内容不受以下实施例的限制。
[0105]
[制备例]
[0106]
实施例1-37和对比例1-4：包含索马鲁肽或其药学上可接受的盐的可生物降解聚合物微球的制备
[0107]
通过在二氯甲烷(制造商：美国j.t baker)和冰醋酸(制造商：韩国daejeong)的混合溶剂(重量比约为1.7:1)中混合选自plga或pla(商品名：制造商：德国evonik)中的一种或多种的可生物降解聚合物以及药物索马鲁肽(制造商：中国成都)或其药学上可接受的盐(制造商：韩国g2gbio)和释放控制剂来制备分散相。将分散相搅拌30分钟或更久，充分溶解后使用。对于连续相，采用1％聚乙烯醇(粘度：4.8～5.8mpa
·
s)水溶液，将连续相送入装有直径为20μm的多孔膜的乳化设备中，同时，注入制备好的分散相，以制备分散有含有索马鲁肽的可生物降解聚合物微滴的乳液，并将该乳液放入制备容器中并
以200rpm的速度搅拌。
[0108]
膜乳化设备和制备容器的温度保持在25℃，当分散相注入完成时，去除有机溶剂，同时将本发明组合物的悬浮液温度保持在45℃下3小时。去除有机溶剂完成后，将悬浮液温度降至25℃。将悬浮液用超纯水反复洗涤数次以去除残留的聚乙烯醇，并将获得的颗粒状组合物冻干。
[0109]
[表1]
[0110]
[0111]
[0112]
[0113][0114]
a)
索马鲁肽钠盐
[0115]
b)
索马鲁肽游离碱
[0116]
实施例38至实施例43：包括含有彼此不同的聚合物的两种或更多种微球的制剂的制备
[0117]
在上述制备例中制备的含有索马鲁肽或药学上可接受的盐的缓释微球制剂通过如下表2混合而称为实施例38至43。
[0118]
[表2]
[0119][0120]
实验例1：微球中索马鲁肽包封量的测量
[0121]
为了测量制备例1至19中制备的微球的索马鲁肽的包封量，将6mg微球完全溶解在dmso中，然后用流动相稀释。将20μl稀释溶液注入hplc中，在检测波长214nm处进行测量。本实验例使用的色谱柱为zorbax 300sb-c18，5um，4.6x150mm，流动相采用45％0.1％tfa乙腈，55％0.1％tfa水溶液等度模式。测量的包封量显示在下表3中。
[0122]
[表3]
[0123]
[0124]
[0125][0126]
实验例2：微球的电子显微镜形态分析
[0127]
为了分析制备的微球的形态特征，进行了扫描电子显微镜观察。
[0128]
将根据实施例4制备的5mg微球置于具有碳带的铝柱上，并使用ion-coater(韩国coxem)涂覆铂。将铝柱安装在扫描电子显微镜(韩国coxem em-30)上，在14kv的加速电压下观察微球的形态特征。图4是缓释可生物降解聚合物微球的电子显微镜照片。正如图5中可确认的那样，可以确认尽管在本发明中使用乙酸作为制备微球的助溶剂，但制备了具有相对均匀粒度的完美球形微球，并且表面光滑，粒度均一。
[0129]
实验例3：使用激光衍射法分析微球粒度
[0130]
为了定量测量制备的微球的平均粒度、分布和均匀性，进行了测量。实验程序如下。
[0131]
将50mg微球与1ml超纯水混合，用涡旋混合器混合20秒，然后放入超声波发生器中分散1分钟。将微球分散溶液放入粒度分析装置(日本microtrac bluewave)并测量20秒。
[0132]
作为粒度均匀性的指标，跨度值通过以下等式1获得。
[0133]
[等式1]
[0134]
跨度值＝(dv,0.9-dv,0.1)/dv,0.5
[0135]
[表4]
[0136]
[0137][0138]
实验例4：体外初期洗脱测试
[0139]
为了评估索马鲁肽缓释微球的药物递送能力，在体外进行了索马鲁肽洗脱试验。实验程序如下。
[0140]
将25mg微球和6ml 10mm磷酸盐缓冲溶液(ph 7.4)放入8ml hdpe瓶中并储存在37℃的培养箱中。在预定时间取1ml，以13000rpm离心1分钟，取0.5ml上清液，将20μl注入hplc。然后，hplc柱和操作条件与实验例1的hplc分析条件相同。结果如表5所示。
[0141]
[表5]
[0142]
[0143][0144]
从上表5的结果可以确认，当连续相的ph为酸性时，可以确认与使用ph值相对较高(ph5.6)的连续相制备的微球相比，24小时内的初期释放速率低至1/2。此外，对通过改变实施例6的微球的制备中连续相的ph和用于ph调节的缓冲液的组成所制备的实施例9至14的
微球进行体外初期洗脱试验，结果证实，与未调节ph的实施例6的微球相比，24小时内的初期释放率降低至约60％至75％。
[0145]
实验例6：使用大鼠的体内药代动力学试验
[0146]
为了评价根据本发明的索马鲁肽缓释微球的体内药物释放方面，在将其给药至大鼠后测量了血液中的索马鲁肽的浓度。
[0147]
对微球进行计数，使索马鲁肽剂量为12.0mg/kg，分散于0.5ml混悬液中，然后注射到sd大鼠(sprague-dawley rat)中。在预定时间采集0.5ml血液，并使用hplc测量血液中的索马鲁肽的浓度。测得的索马鲁肽血药浓度变化见图1、图2和图4，累积释放率见图3。
[0148]
如上图1所示，在本发明的对比例1至3中制备的含有索马鲁肽的微球的情况下，可以确认，在给药后立即显示出显著高的血浆药物浓度，然后在给药后2至3周内完成药物释放，并且可以确认，对比例4的微球在低初期释放后在2个月内几乎没有药物释放。
[0149]
另一方面，上述图2确认了将本发明实施例1、实施例2和实施例4中制备的含有索马鲁肽的微球给药至大鼠后血浆中药物浓度随时间的变化，并且与对比例相比，根据本发明实施例的聚合物组成制备的微球表现出较低的药物初期释放，之后，可以确认药物连续释放1个月或更久。
[0150]
此外，上述图4确认了本发明实施例4和实施例6至实施例8中制备的含有索马鲁肽的微球给药后血浆中药物浓度随时间的变化，并且在制备微球时调节了连续相ph的实施例6、实施例7和实施例8的情况下，可以证实与实施例4相比药物的初期释放显著降低的结果。
[0151]
上图3确认了在本发明实施例4和实施例6至实施例8的微球给药后药物的累积释放率随时间的变化，并且对于根据本发明实施例的聚合物组成制备的微球，可以确认在给药后药物持续释放5周或更长时间。此外，结果证实，随着连续相ph的调整，初期释放率显著降低，并且药物在给药后持续释放高达63天。