治疗外科手术后疼痛的方法与流程

发明领域本发明涉及由外科手术引起的外科手术疼痛(例如外科手术后疼痛)和/或外科手术诱导的焦虑(例如外科手术后焦虑)的治疗。更详细地，本发明提供了治疗方法，该方法包括施用梭菌神经毒素，并且更特别地，涉及使用肉毒梭菌神经毒素治疗外科手术后疼痛和焦虑的方法。背景外科手术后疼痛是由外科手术操作引起的不愉快的感觉。外科手术后疼痛可以由外科手术介入、外科手术操作本身、伤口闭合和在外科手术操作期间施加的任何力对组织的损伤引起。外科手术后的外科手术疼痛(例如外科手术后疼痛)也可以源于伴随外科手术的因素。例如，患者可能由于患者定位在外科手术台上的方式而遭受背部疼痛，或者胸部疼痛可能是由于胸部区域中的外科手术介入。全身麻醉后也可能发生咽喉疼痛，因为呼吸管的插入可能引起刺激。然而，最常见的是由外科手术介入切入皮肤和肌肉引起的外科手术后疼痛。例如，外科手术介入(或更特别地，外科手术切口)可以表示引起疼痛的“有害刺激”。有害刺激(可以引起组织损伤的刺激)可以激活神经递质从伤害性传入末端的释放和神经肽例如物质p和降钙素基因相关肽(cgrp)从感觉末端的释放。然后，有害信息从外周神经系统转导到中枢神经系统，在中枢神经系统中个体感知到疼痛。外科手术后疼痛可以由外科手术介入部位的炎症和神经组织损伤的组合引起。任何炎症和/或神经组织损伤都是外科手术后疼痛的补充。例如，活化的肥大细胞响应于组织损伤的脱粒可以导致多种物质的释放，包括蛋白酶、细胞因子和5-羟色胺。这些物质可以使初级传入神经元敏化(在较低阈值下激活)以产生疼痛超敏反应。由于组织受到广泛的神经支配，身体的任何区域都易受外科手术引起的神经损伤。外科手术后焦虑可能需要患者经历身体症状和行为变化，包括但不限于疲劳、集中和睡眠困难以及肌肉紧张。此外，患者可能经历焦虑的情绪症状，包括不安、易怒、难以控制恐惧或担忧、恐惧和恐慌。外科手术后焦虑可能由麻醉、外科手术本身、外科手术后疼痛和/或来自医院环境的压力的影响引起。例如，外科手术患者在外科手术前(例如由于预期外科手术而产生的压力)和外科手术后通常都处于相当高水平的精神、身体和情绪压力下，这种压力表现为焦虑症状。用于治疗外科手术(例如外科手术后)疼痛的现有方法通常靶向神经递质和肽，并且包括非类固醇抗炎药(nsaids)、阿片样物质、局部麻醉阻断剂或其组合使用。然而，这些治疗方法产生多种副作用，并且值得注意的是，通常诱导依赖性(例如成瘾)。另外，这些治疗方法仅提供急性外科手术后疼痛缓解，例如在施用后仅短时间内提供外科手术疼痛缓解，因此需要连续/重复施用(加剧患者对镇痛剂的依赖性/成瘾的问题)。在没有有效地管理急性外科手术后疼痛的情况下，这可能增加患者发展慢性外科手术后疼痛的机会。此类疼痛管理方法(需要连续施用药物)也经常导致耐药性。与用于管理外科手术后疼痛的先前方法相关的其它问题包括需要高剂量的镇痛药施用以提供镇痛效果，其中不良副作用通常随着剂量而增加。因此，目前治疗外科手术疼痛的方法不适用于(例如，足以)管理/减轻外科手术后疼痛，特别是中度至重度外科手术后疼痛，并且它们也不能提供对患者经历的外科手术后焦虑的适当管理(后者通常需要替代/额外的药物)。因此，越来越需要用于治疗外科手术后疼痛和/或外科手术后焦虑的替代/改善方法。本发明通过提供用于例如甚至在单次(例如紧急)施用之后长期治疗外科手术后疼痛/焦虑(包括降低慢性外科手术后疼痛的倾向)的方法来解决这些问题中的一个或多个。本发明的优选方面基于以下令人惊讶的观察结果：在使患者经受外科手术之前开始治疗(施用)允许在患者从外科手术中出现时有效的外科手术后疼痛或外科手术后焦虑管理(有利地减轻否则将被感知为一般/局部麻醉剂的作用减轻的外科手术后疼痛或外科手术后焦虑)，并且提供了特别适合于基于梭菌神经毒素的治疗的特别外科手术前施用时间点。发明概述更详细地，本发明基于如下令人惊讶的发现：在外科手术前多于5天通过皮内或鞘内施用外科手术前梭菌神经毒素(例如肉毒梭菌神经毒素)治疗外科手术后疼痛并且减轻或抑制外科手术后焦虑。这是完全预料不到的，因为现有技术方法报道了当更接近外科手术时间施用梭菌神经毒素并且通过替代施用途径时的最佳镇痛活性。有利地，本发明人已经证明，通过皮内或鞘内施用在外科手术前多于5天施用梭菌神经毒素，梭菌神经毒素在早在外科手术后1小时的时间点有效治疗外科手术后疼痛，并且在外科手术后持续管理/治疗外科手术后疼痛数天(甚至数周)，而不需要连续施用并且没有与传统镇痛/麻醉药物相关的副作用。因此，当任何“全身”或“局部”麻醉剂(在外科手术期间使用)的作用消失时，梭菌神经毒素可以提供外科手术后疼痛缓解。换言之，外科手术前(>5天外科手术前)施用有利地允许梭菌神经毒素的镇痛作用在患者在外科手术期间使用的主要麻醉剂/镇痛剂的作用逐渐减少时将以其它方式开始感知外科手术后疼痛或外科手术后焦虑的时间点出现(例如达到最大功效/作用)。因此，外科手术后疼痛可以在其出现之前进行治疗，从而防止患者中任何相关的(潜在显著的)不适和痛苦。如下面更详细描述的，外科手术后疼痛(例如急性中度至重度外科手术后疼痛)的此类早期管理可以有利地减轻慢性外科手术后疼痛的发作。这与当更接近外科手术时间(或围外科手术期)施用梭菌神经毒素时观察到的治疗形成对比，后者在外科手术后观察到明显的滞后期或“激活期”，直到提供梭菌神经毒素的任何外科手术疼痛治疗效果。本发明人的另一个令人惊讶的观察结果在于，梭菌神经毒素是特别有效的(例如快速的)外科手术后疼痛/外科手术后焦虑治疗，其中通过皮内施用梭菌神经毒素。实际上，本发明人观察到，当与替代施用途径例如皮下施用和肌内施用相比时，皮内施用可以提供增加的外科手术后疼痛和/或外科手术后焦虑缓解。这是完全预料不到的，因为梭菌神经毒素在其它适应证中通过此类替代施用途径(例如皮下/肌内施用)常规施用，而在功效方面没有任何明显的缺点。本发明人的另一个有利发现在于梭菌神经毒素能够在施用部位远侧的部位发挥作用。例如，在外科手术介入部位处或附近施用梭菌神经毒素后，本发明人观察到脊髓处的snare蛋白裂解(例如snap-25蛋白裂解)(并且在外科手术介入部位处或附近的snare蛋白裂解最小或没有snare蛋白裂解)，这表明梭菌神经毒素通过逆行转运从其施用部位行进至脊髓。这允许梭菌神经毒素在远离可能引起患者不适的损伤部位(例如外科手术介入部位)的部位施用，从而使患者感觉到的任何进一步的疼痛最小化。详细描述在一个方面，本发明提供了用于治疗患者的外科手术后疼痛的梭菌神经毒素，所述方法包括在外科手术前多于5天给患者施用梭菌神经毒素，并且其中通过下列方式施用梭菌神经毒素：i)皮内；或ii)鞘内。换言之，本发明的一个方面提供了用于治疗患者的外科手术后疼痛的方法，所述方法包括在外科手术前多于5天给患者施用梭菌神经毒素，并且其中通过下列方式施用梭菌神经毒素：i)皮内；或ii)鞘内。在一个方面，本发明提供了用于治疗外科手术后疼痛的梭菌神经毒素，所述方法包括在外科手术前多于5天给患者施用(例如通过皮内)梭菌神经毒素。换言之，本发明的一个方面提供了治疗外科手术后疼痛的方法，所述方法包括在外科手术前多于5天给患者施用(例如通过皮内)梭菌神经毒素。在相关观察中，已经发现梭菌神经毒素的预施用(外科手术前)减少或抑制/预防(例如完全预防)患者外科手术后的焦虑(外科手术后焦虑)的发作。因此，本发明提供的另一个令人惊讶的技术效果是由于外科手术前施用梭菌神经毒素而可实现的抗焦虑作用。因此，本发明的另一个方面提供了用于减轻或抑制外科手术后焦虑的梭菌神经毒素，所述方法包括在外科手术前给患者施用梭菌神经毒素，其中通过下列方式施用梭菌神经毒素：i)皮内；或ii)鞘内。换言之，本发明的一个方面提供了减轻或抑制外科手术后焦虑的方法，所述方法包括在外科手术前给患者施用梭菌神经毒素，其中通过下列方式施用梭菌神经毒素：i)皮内；或ii)鞘内。优选地，用于减轻或抑制外科手术后焦虑的方法包括在外科手术前5天或更多天施用梭菌神经毒素；例如，梭菌神经毒素可以在外科手术前多于5天施用。本发明的另一方面提供了用于减轻或抑制外科手术后焦虑的梭菌神经毒素，所述方法包括在外科手术前(例如外科手术前5天或更多天)给患者施用(例如通过皮内)梭菌神经毒素。换言之，本发明的一个方面提供了减轻或抑制外科手术后焦虑的方法，所述方法包括在外科手术前给患者施用(例如通过皮内)梭菌神经毒素。优选地，用于减轻或抑制外科手术后焦虑的方法包括在外科手术前5天或更多天施用梭菌神经毒素；例如，梭菌神经毒素可以在外科手术前多于5天施用。优选地，可以通过皮内施用梭菌神经毒素。另外或可选择地，梭菌神经毒素可以通过鞘内施用(例如通过鞘内施用/注射)。现在描述本发明的多种附加(任选)实施方案。应当注意，以下实施方案中的每一个可以应用于用于本文所述用途的任何方法或梭菌神经毒素。在一个实施方案中，梭菌神经毒素的施用不包括肌内施用。在一个实施方案中，梭菌神经毒素可以在外科手术前5-50天，例如在外科手术前6-50天，任选地在外科手术前5-40天施用。例如，梭菌神经毒素可以在外科手术前5-30天；优选外科手术前5-20天；更优选外科手术前5-15天施用。在一个实施方案中，梭菌神经毒素可以在外科手术前>5天施用(优选在本文所述的用于治疗外科手术后疼痛的方法中)，任选在单次施用步骤中。例如，梭菌神经毒素可以在外科手术前10-20天；在外科手术前14-16天施用(优选在本文所述的用于治疗外科手术后疼痛的方法中)，任选在单个施用步骤中。梭菌神经毒素可以在外科手术前15天或更多天，优选在外科手术前约15天施用。在优选的实施方案中，梭菌神经毒素可以在外科手术前>5天至≤15天施用(优选在本文所述的用于治疗外科手术后疼痛的方法中)，任选在单个施用步骤中。在一个实施方案中，梭菌神经毒素在外科手术前5天或更多天施用(优选在本文所述的用于治疗外科手术后疼痛的方法中)。在一个实施方案中，梭菌神经毒素在外科手术前12天或更多天施用(优选在本文所述的用于治疗外科手术后疼痛的方法中)。在一个实施方案中，梭菌神经毒素在外科手术前15天或更多天通过皮内施用。在优选的实施方案中，梭菌神经毒素在外科手术前约15天通过皮内施用。在一个实施方案中，梭菌神经毒素在外科手术前15天或更多天通过鞘内施用。在优选的实施方案中，梭菌神经毒素在外科手术前约15天通过鞘内施用。梭菌神经毒素通过提供镇痛作用来治疗外科手术后疼痛。因此，如本文所用的术语“治疗”旨在包括镇痛治疗。术语“治疗”包括治疗外科手术后疼痛，使得患者不再感知到外科手术疼痛(或与未用梭菌神经毒素治疗的对照患者相比感知到更少的外科手术疼痛)。类似地，梭菌神经毒素通过提供抗焦虑作用抑制外科手术后焦虑。因此，术语“抑制”包括通过施用梭菌神经毒素提供的抗焦虑作用抑制患者的外科手术后焦虑(例如其症状)。抑制可以与外科手术后疼痛治疗同时提供，并且例如作为外科手术后疼痛治疗的结果。因此，不受任何理论束缚，梭菌神经毒素可以通过梭菌神经毒素的镇痛作用提供抗焦虑作用。梭菌神经毒素可以抑制与用于外科手术的麻醉作用、外科手术本身、外科手术后疼痛和/或压力(例如来自医院环境)相关(或由其引起)的外科手术后焦虑的症状。因此，梭菌神经毒素可以以治疗有效量或预防有效量(优选预防有效量)施用于个体。“治疗有效量”是当单独或组合施用于个体用于治疗外科手术后疼痛和/或外科手术后焦虑时，足以实现此类外科手术后疼痛和/或外科手术后焦虑的治疗的梭菌神经毒素的任何量。“预防有效量”是当单独或组合施用于个体时抑制或延迟外科手术后疼痛和/或外科手术后焦虑发作的梭菌神经毒素的任何量。在一些实施方案中，预防有效量完全预防外科手术后焦虑的发作。“抑制”发作意指降低外科手术后疼痛和/或外科手术后焦虑的可能性，或完全预防发作。优选地，治疗和/或预防有效量是不导致肌肉麻痹的量。术语“肌肉麻痹”优选是指长期肌肉麻痹，因为短暂的肌肉麻痹可能在施用后发生短时间。术语“个体”和“患者”在本文中可互换使用，是指哺乳动物个体。在一个实施方案中，“个体”是人、伴侣动物(例如宠物，例如狗、猫和/或兔)、家畜(例如猪、绵羊、牛和/或山羊)和/或马。在优选的实施方案中，个体(患者)是人。本发明特别涉及外科手术后疼痛，其不同于其它类型的疼痛，例如炎性疼痛和神经性疼痛。在这方面，炎性疼痛通常由感染、刺激物或过度活化的免疫应答引起，并且神经性疼痛通常由神经系统障碍/综合征引起。相反，本发明不涉及由这些刺激引起的疼痛。在一个实施方案中，梭菌神经毒素的施用优先于炎性疼痛治疗外科手术后疼痛。在一个实施方案中，梭菌神经毒素的施用治疗最小的炎性疼痛至不治疗炎性疼痛。在一个实施方案中，梭菌神经毒素的施用治疗外科手术后疼痛并且治疗最小的炎性疼痛至不治疗炎性疼痛。提及“外科手术介入”意指涉及治疗个体的损伤或疾病的医疗程序，其包括使身体的一部分经受切口(任选移除或修复身体的受损部分)。尽管侵入性水平(例如所需外科手术切口的水平)可以在外科手术类型之间不同，但是旨在包括具有一旦外科手术完成就在个体中引起外科手术后疼痛和/或外科手术后焦虑的侵入性水平的外科手术。外科手术后疼痛通常由切开患者的皮肤和/或筋膜和/或肌肉和/或骨骼和/或器官的外科手术切口引起。因此，通常在外科手术介入部位处/或附近经历外科手术疼痛。外科手术介入可以包括对皮肤和/或筋膜和/或肌肉的切口。优选地，外科手术介入包括对皮肤的切口。外科手术介入不限于可以由医师进行的外科手术介入，而且还包括例如牙科外科手术介入。外科手术介入的非限制性实例包括阑尾切除术、乳腺活组织检查、隆乳手术或缩乳手术、整容、胆囊切除术、冠状动脉分流术、清创术(例如伤口、烧伤或感染的清创术)、皮肤移植、器官移植和扁桃体切除术。优选地，“外科手术后”可以指在外科手术后(例如外科手术后)至多一天开始的时间期限。换言之，术语“外科手术后”可以指外科手术后不超过一天开始的时间期限。例如，术语“外科手术后”可以指外科手术后1-20小时；任选外科手术后2-15小时；任选外科手术后5-10小时开始的时间点。此类时间可以表示从时间顺序界面开始的时间期限，在该时间期限，来自施用于患者的外科手术麻醉剂的镇痛作用减小(例如，逐渐减小)，并且因此患者开始感知外科手术疼痛。此外，术语“外科手术后(post-operative)”可以与术语“外科手术后(post-surgical)”互换使用，因为“外科手术(operative)”在本文中以“外科手术(surgery)”的意义使用。类似地，术语“外科手术后疼痛”可以指在外科手术后(例如外科手术后)至多一天开始的时间期限内感知到(或更特别地，开始感知到)的外科手术疼痛。换言之，术语“外科手术后疼痛”可以指患者在外科手术后不超过一天开始的时间期限内感知到的外科手术疼痛。例如，术语“外科手术后疼痛”可以指在外科手术后1-20小时；任选在外科手术后2-15小时；任选在外科手术后5-10小时开始的时间期限内感知到的疼痛。所述时间期限可以为外科手术后1-50周；例如5-45周、10-40周或10-35周。这与术语“围外科手术期”形成对比，术语“围外科手术期”可以指例如在患者正在经历外科手术的时间(例如患者在外科手术室中的时间)处或附近的时间期限，适合地是在外科手术前至少1小时开始和/或在外科手术后小于1小时结束的时间期限。本发明的外科手术后治疗可以与围外科手术期和/或外科手术后治疗策略组合以改善功效并且优选增加持续时间或外科手术后疼痛抑制(例如在处于发展外科手术疼痛的高风险的患者中)。在一个实施方案中，本发明的方法可以包括在围外科手术期和/或外科手术后(优选外科手术后)给患者施用另外的镇痛剂。换言之，可以在外科手术期间(例如在外科手术前至少1小时开始和/或外科手术后小于1小时结束的时间段期间)施用另外的镇痛剂。在一个实施方案中，可以在外科手术后(例如在外科手术后10、20、40或50周)施用另外的镇痛剂。外科手术后疼痛可以是由从伤害性传入末端释放神经递质和/或从感觉末端释放神经肽例如物质p和降钙素基因相关肽(cgrp)引起的疼痛，例如由有害的外科手术刺激(优选外科手术切口)诱导的疼痛。然后例如有害信息(由有害刺激引起)可以从外周神经系统转导到中枢神经系统，在中枢神经系统中患者感知到外科手术疼痛。在一个实施方案中，梭菌神经毒素通过抑制疼痛神经调节剂例如物质p和cgrp的胞吐作用来治疗外科手术疼痛。外科手术后疼痛可以由外科手术介入部位的炎症或神经组织损伤或其组合引起。任何炎症和/或神经组织损伤都是外科手术后疼痛的补充。例如，活化的肥大细胞响应于组织损伤的脱粒可以导致多种物质的释放，包括蛋白酶、细胞因子和5-羟色胺。这些物质可以使初级传入神经元敏化(在较低阈值下激活)以产生疼痛超敏反应。由于组织受到广泛的神经支配，身体的任何区域可能易受外科手术引起的神经损伤的影响。换言之，疼痛可以是伤害性疼痛，例如其中外科手术后疼痛由组织损伤引起，并且通过响应于有害刺激的伤害感受器(疼痛受体)的激活来感知。在一个实施方案中，外科手术后疼痛可以是神经性疼痛(例如由影响体感神经系统的损伤或疾病引起的疼痛)。例如，外科手术后疼痛可以是外周神经病变(也称为外周疼痛)，例如其中疼痛由脑和脊髓外的神经(外周神经)损伤引起。外科手术后疼痛可能表现为其它类型的疼痛，例如异常性疼痛。异常性疼痛是指“其它疼痛”。它是由通常不疼痛的刺激引起的疼痛。“触觉”异常性疼痛(也称为静态触觉异常性疼痛或机械性异常性疼痛)的患者可能经历触摸疼痛，例如使外科手术切口的(身体)部位置于床上，或穿着接触所述部位的衣服。因此，异常性疼痛被认为是“由于通常不引起疼痛的刺激引起的疼痛”，与痛觉过敏(来自通常引起疼痛的刺激的疼痛增加)相反。外科手术后疼痛可以优选是急性外科手术后疼痛；例如，一种可能持续小于3个月(外科手术后)的外科手术疼痛。在一个实施方案中，外科手术后疼痛为慢性外科手术后疼痛；例如，一种可能持续长于三个月(外科手术后)并且可能在组织损伤(例如由于外科手术切口)愈合后继续被感知到的外科手术疼痛。更详细地，如本文所用的术语“慢性外科手术后疼痛”优选是指在潜在损伤(例如外科手术切口对肌肉的损伤)消退后持续长于3个月的疼痛，例如外科手术后持续长于3个月的疼痛。“慢性外科手术后疼痛”可以例如由急性外科手术后疼痛(例如一种通常持续小于3个月的外科手术疼痛)的治疗不足(或缺乏)发展。外科手术后“急性外科手术疼痛”的不良管理可能增加此类急性外科手术疼痛变成慢性外科手术后疼痛的机会。因此，有利地，通过在早期阶段管理急性外科手术后疼痛(有利地由于外科手术前施用在外科手术后不久提供镇痛功效)，本发明减缓了慢性外科手术后疼痛的发生。慢性外科手术后疼痛可以在疤痕(在外科手术切口部位形成的疤痕)处或周围感知到。在优选的实施方案中，慢性外科手术后疼痛是慢性瘢痕疼痛。术语“慢性瘢痕疼痛”是指由于组织瘢痕形成而发展的疼痛。“慢性疤痕疼痛”可以由皮肤和/或肌肉组织和/或神经组织的损伤和神经的再生发展而来。在优选的实施方案中，外科手术后疼痛是在外科手术介入部位处感知的外科手术疼痛和/或在外科手术介入部位近侧部位处感知的外科手术疼痛，优选其中外科手术疼痛在已经通过外科手术介入损伤的组织(例如皮肤、肌肉)内感知。外科手术后疼痛也可以是在已经进行活检的身体内部的组织/器官部位处感知到的外科手术疼痛。优选地，梭菌神经毒素的施用降低了外科手术后患者的外科手术疼痛感知水平。例如，与在外科手术前(例如外科手术前5天或更多天)未施用梭菌神经毒素的(对照)患者的外科手术疼痛感知水平相比，患者的外科手术疼痛感知水平可以在外科手术后降低。在一个实施方案中，患者的外科手术后疼痛感知在外科手术后24小时内减少。换言之，梭菌神经毒素的施用可以在外科手术后24小时内降低患者的外科手术后疼痛感知。例如，梭菌神经毒素的施用可以在外科手术后6小时内，优选在外科手术后1小时内减少患者的外科手术后疼痛感知。患者的外科手术后疼痛感知可以在外科手术后减少至少3天、外科手术后至少6天或外科手术后至少9天；例如，外科手术后至少15天；在另一个实例中，在外科手术后至少30天。在优选的实施方案中，患者的外科手术后疼痛可以在外科手术后减少至多3个月(包括3个月)。患者的降低的外科手术后疼痛感知可以在外科手术后维持至少5天、外科手术后维持至少7天或外科手术后维持至少9天，优选在外科手术后维持至少9天。在一个实施方案中，梭菌神经毒素的施用基本上降低了患者的外科手术后疼痛感知，并且其中降低的外科手术后疼痛感知在外科手术后立即维持24小时。在另一个实施方案中，患者的外科手术后疼痛感知在外科手术后立即显著降低并且维持2天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后疼痛感知在外科手术后立即维持3天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后疼痛感知在外科手术后立即维持4天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后疼痛感知在外科手术后立即维持5天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后疼痛感知在外科手术后立即维持6天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后疼痛感知在外科手术后立即维持7天。优选地，基本上所有降低的外科手术后疼痛感知在外科手术后立即维持8天。在一个实施方案中，在外科手术后立即在限定时间点(如前一段落中所述)观察到的疼痛感知水平降低是在施用梭菌神经毒素后任何时间观察到的疼痛感知最大水平降低的至少50％。例如，在外科手术后立即在限定时间点(如前段落中所述)观察到的疼痛感知水平降低是在施用梭菌神经毒素后任何时间观察到的疼痛感知最大水平降低的至少55％、至少60％、至少65％、至少70％，优选至少75％。更详细地，提及“降低的”(就外科手术后疼痛而言)优选意指当与未施用梭菌神经毒素(或施用安慰剂)的个体(同样已经进行外科手术)接受的外科手术疼痛水平相比时，施用梭菌神经毒素的个体(例如患者)感知到更低水平的外科手术疼痛。例如，当与未施用梭菌神经毒素(或施用安慰剂)的个体(同样已经进行外科手术)相比时，施用梭菌神经毒素后外科手术疼痛感知的水平可以降低至少15％、25％、35％、45％、55％、65％、75％、85％或95％。例如，当与未施用梭菌神经毒素(或施用安慰剂)的个体(同样已经进行外科手术)相比时，施用梭菌神经毒素后外科手术疼痛感知的水平可以降低至少75％；优选至少85％；更优选至少95％。用于评估疼痛感知的多种方式是本领域技术人员已知的。例如，机械性异常性疼痛(静态或动态)的评估常规用于人疼痛研究，如pogatzki-zahn等人(pain rep.2017mar；2(2):e588)中所述，其通过引用并入本文。用于评估个体的疼痛感知的适合的(尽管是非限制性实例)方法包括以下：数值评定量表(nrs)评分；尽管本领域技术人员知道可以另外或可选择地使用的其它方法，例如感觉阈值、疼痛感知阈值、静态机械性异常性疼痛、动态机械性异常性疼痛、时间总和、压力疼痛阈值、条件性疼痛调节和温度阈值。疼痛感知量度的其它非限制性实例包括：在每个预定时间点sf-36评分从基线的变化；研究期间服用的救援药物的量和距第一次摄入救援药物的时间。这些可以被认为是“探索性”终点或疼痛感知评估量度。因此，在优选的实施方案中，在施用梭菌神经毒素后，可以通过以下一种或多种评估外科手术后疼痛感知：(a)数值评定量表(nrs)；(b)刺激诱发的nrs；(c)疼痛区域的温度；(d)疼痛区域的大小；(e)镇痛作用开始的时间；(f)峰值镇痛作用；(g)达到镇痛作用峰值的时间；(h)镇痛作用的持续时间；和(i)sf-36生活质量。本领域技术人员知道此类用于评估疼痛感知的方法。为方便起见，下面提供了数值评定评分和生活质量问卷简表-36的进一步描述。数值评定量表(nrs)：通常，根据本发明的外科手术疼痛感知使用数值评定量表(nrs)。nrs是用于评估个体外科手术疼痛感知的11分量表。要求个体给出最适合其外科手术疼痛强度的0至10之间的数字。0表示‘完全没有外科手术疼痛’，而上限10表示‘可能的最严重外科手术疼痛’。nrs可以用于评估外科手术疼痛的许多方面，包括自发性平均外科手术疼痛、自发性最严重外科手术疼痛和自发性当前外科手术疼痛。通过要求个体选择最佳描述个体在一段时间(例如至少6小时、12小时、24小时或至少48小时)内的平均外科手术疼痛(例如感知到的外科手术疼痛)的数字来评估自发平均外科手术疼痛。通过要求个体选择最佳描述个体在指定时间段(例如，至少前6小时、12小时、24小时或前48小时)内最严重的外科手术疼痛的数字来评估自发性最严重外科手术疼痛。通过要求个体选择最佳描述个体在评估时的外科手术疼痛程度的数字来评估自发性当前外科手术疼痛。nrs还可以用于评估个体响应于多种不同刺激的外科手术疼痛感知。为了评估响应于刺激的外科手术疼痛感知，个体将经受施加到疼痛区域的多种性质的刺激。个体将被询问他们在剂量前和刺激后的当前nrs评分如何。使用的刺激的实例包括：(i)轻触(其可以通过在施用如本文所述的von frey细丝后测量径向辐条上疼痛区域表面上的疼痛来评估)；(ii)压力(压力疼痛阈值)，其可以通过要求个体在使用如本文所述的压力痛觉计施加增加的压力时给出nrs评分来评估；和(iii)温度(如本文所述，其可以通过使用施加到疼痛区域的thermode向个体询问温、冷和热刺激的nrs评分来评估)。优选地，当与未施用梭菌神经毒素的对照患者的nrs评分相比时，施用本文所述的梭菌神经毒素降低了外科手术后患者的nrs评分(例如从评分≥7至评分≤6)。生活质量问卷简表-36(sf-36)：sf-36生活质量问卷可以用于评估个体的外科手术疼痛感知。sf-36是36-项、个体报告的个体健康调查。sf-36由八个量表评分(活力、身体功能、身体疼痛、一般健康感知、身体角色功能、情绪角色功能、社会角色功能和心理健康)组成。假设每个问题具有相等的权重，则将每个量表直接转换为0-100量表。sf-36中记录的评分越高，则失能越少。通常在用于治疗外科手术疼痛的临床试验中测试的相关参数是本领域已知的，并且可以由本领域普通技术人员容易地选择。此类参数的实例包括但不限于nrs；刺激诱发的nrs；疼痛区域的温度；疼痛区域的大小；至镇痛作用开始的时间；峰值镇痛作用；达到峰值镇痛作用的时间；镇痛作用的持续时间；和/或sf-36生活质量。用于评估这些参数的方法也是本领域已知的，并且可以由普通技术人员使用常规方法和程序进行。优选地，当与未施用梭菌神经毒素的对照患者的sf-36评分相比时，施用本文所述的梭菌神经毒素增加患者外科手术后的sf-36评分(例如从≤50的评分至≥50的评分)。现在转向“外科手术后焦虑”，对其的提及(即外科手术后焦虑)可以指患者经历身体症状和行为变化的病症，包括但不限于疲劳、集中和睡眠困难以及肌肉紧张。此外，患者可能经历焦虑的情绪症状，包括不安、易怒、难以控制恐惧或担忧、恐惧和恐慌。外科手术后焦虑可能由麻醉、外科手术本身、外科手术后疼痛和来自医院环境的压力的影响引起。因此，在一个实施方案中，外科手术后焦虑是由外科手术后疼痛引起的。可以将外科手术后焦虑定义为惊恐障碍、恐怖症、创伤后精神紧张性障碍、社交焦虑障碍(社交恐怖症)或广泛性焦虑障碍(gad)(例如导致你对广泛的情况和问题而不是一种特定事件感到焦虑的长期病症)。在一个实施方案中，用于减轻或抑制外科手术后焦虑的梭菌神经毒素或包括在外科手术前给患者施用梭菌神经毒素的方法在外科手术前5天或更多天施用，优选其中梭菌神经毒素在外科手术前多于5天施用。在一个实施方案中，梭菌神经毒素的施用基本上降低了患者的外科手术后焦虑感知，并且其中所述降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持24小时。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持2天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持3天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持4天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持5天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持6天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持7天。在一个实施方案中，基本上所有降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持8天。优选地，基本上所有降低的外科手术后焦虑感知在外科手术后立即维持9天。优选地，当与未施用梭菌神经毒素的对照患者的症状相比时，施用本文所述的梭菌神经毒素降低外科手术后焦虑症状(例如降低30％、50％、75％或95％)。外科手术后焦虑症状的实例包括不安、易怒、难以控制恐惧或担忧、恐惧和恐慌。更详细地，提及“降低的”(就外科手术后焦虑而言)优选意指当与未施用梭菌神经毒素(或施用安慰剂)的个体(同样已经进行外科手术)感知到的焦虑水平相比时，施用梭菌神经毒素的个体(例如患者)感知到的焦虑水平更低。例如，当与未施用梭菌神经毒素(或施用安慰剂)的个体(同样已经进行外科手术)相比时，在施用梭菌神经毒素后，焦虑感知水平可以降低至少15％、25％、35％、45％、55％、65％、75％、85％或95％。例如，当与未施用梭菌神经毒素(或施用安慰剂)的个体(同样已经进行外科手术)相比时，在施用梭菌神经毒素后，焦虑感知水平可以降低至少75％；优选至少85％；更优选至少95％。在一个实施方案中，患者经历的外科手术后焦虑在外科手术后24小时内得到抑制。换言之，梭菌神经毒素的施用可以在外科手术后24小时内减轻或抑制患者的外科手术后焦虑。例如，患者的外科手术后焦虑可以在外科手术后2小时内、外科手术后4小时内或外科手术后24小时内；优选在外科手术后4小时内减轻或抑制。本发明人已经证明，可以施用梭菌神经毒素以治疗外科手术后疼痛以及抑制外科手术后焦虑。因此，在一个实施方案中，梭菌神经毒素治疗外科手术后疼痛并且减轻或抑制术后焦虑。总之，本发明通过降低外科手术疼痛和焦虑(否则在外科手术后感知到)的水平，有利地增加了患者的总体“外科手术后健康”，从而改善了患者的生活质量。因此，在一个实施方案中，梭菌神经毒素的施用促进外科手术后健康。下文提供了本发明所包括的梭菌神经毒素的进一步细节以及技术背景信息。梭菌属(clostridia)中的细菌产生高效且特异性的蛋白毒素，其可毒害它们所递送至的神经元和其它细胞。此类梭菌毒素的实例包括由破伤风梭菌(c.tetani)(tent)和肉毒梭菌(c.botulinum)(bont)血清型a-g产生的神经毒素，以及由巴氏梭菌(c.baratii)和丁酸梭菌(c.butyricum)产生的神经毒素。梭菌神经毒素(例如，在自然界中)通过抑制外周神经系统中，特别是在神经肌肉接头处的胆碱能传递而引起肌肉麻痹，因此可能是致命的。在自然界中，梭菌神经毒素被合成为单链多肽，其通过蛋白水解裂解事件翻译后修饰以形成通过二硫键连接在一起的两条多肽链。裂解发生在特定的裂解位点，通常称作活化位点，其位于提供链间二硫键的半胱氨酸残基之间。正是这种双链形式是毒素的活性形式。这两条链称为重链(h链)，其具有约100kda的分子量，和轻链(l-链)，其具有约50kda的分子量。h-链包含n-末端易位组分(hn结构域)和c-末端靶向组分(hc结构域)。裂解位点位于l-链和hn结构域之间。梭菌神经毒素的作用模式依赖于五个不同的步骤：(1)hc结构域与其靶神经元的细胞膜结合，然后(2)结合的毒素通过内体内化到细胞中，(3)l-链通过hn结构域易位穿过内体膜并且进入胞质溶胶，(4)l-链蛋白水解裂解称作snare蛋白的胞内转运蛋白，其提供非细胞毒性蛋白酶功能，和(5)抑制靶细胞的细胞分泌。非细胞毒性蛋白酶通过蛋白水解裂解称作snare蛋白的胞内转运蛋白(例如snap-25、vamp或syntaxin)起作用-参见gerald k(2002)“cell and molecular biology”(4thedition)john wiley&sons,inc.。首字母缩略词snare源自术语可溶性(soluble)nsf附着(attachment)受体(receptor)，其中nsf意指n-乙基马来酰亚胺敏感(sensitive)因子(factor)。snare蛋白与细胞内囊泡融合是一体的，并且因此与通过囊泡转运从细胞分泌分子是一体的。蛋白酶功能是锌依赖性内肽酶活性，并且对snare蛋白表现出高底物特异性。因此，一旦递送至期望的靶细胞，非细胞毒性蛋白酶则能够抑制从靶细胞的细胞分泌。梭菌神经毒素的l-链蛋白酶是裂解snare蛋白的非细胞毒性蛋白酶。由于其独特的性质，梭菌神经毒素(例如肉毒梭菌毒素)已经成功地用于广泛的治疗应用，特别是用于运动和自主障碍，以将例如过度活跃的神经末梢的活性恢复到正常水平。到目前为止，已经描述了至少七种抗原性不同的bont血清型，即bont/a、bont/b、bont/c、bont/d、bont/e、bont/f、bont/g(rossetto,o.等人,“botulinum neurotoxins:genetic,structural and mechanistic insights.”nature reviews microbiology 12.8(2014):535-549)。尽管存在这种多样性，bont/a仍然是治疗中选择的血清型，具有三种通常可获得的商业制品(和)，而市场上仅有一种bont/b产品迄今为止，这些bont/a和bont/b产品(其是从梭菌菌株纯化的毒素)是目前被管理机构批准用于人的仅有的两种bont血清型，其应用范围特别是从痉挛状态、膀胱功能障碍或多汗症(对于bont/a)(参见例如：https://www.medicines.org.uk/emc/medicine/112、https://www.medicines.org.uk/emc/medicine/870、https://www.medicines.org.uk/emc/medicine/2162，通过引用整体并入本文)到颈肌张力障碍(对于bont/b)(参见例如https://www.medicines.org.uk/emc/medicine/20568，通过引用整体并入本文)。与通过杀伤其天然靶细胞起作用的细胞毒性蛋白酶(例如蓖麻毒素、白喉毒素、假单胞菌外毒素)相反，梭菌神经毒素是通过瞬时使其天然靶细胞的细胞功能丧失而起作用的非细胞毒性蛋白酶。重要的是，非细胞毒性蛋白酶不杀死其作用的天然靶细胞。除了梭菌神经毒素(例如肉毒梭菌神经毒素，以例如dysporttm、neurobloctm和botoxtm的名称销售)之外，非细胞毒性蛋白酶的一些最熟知的实例包括iga蛋白酶(参见例如wo99/032272)和安妥酶(antarease)蛋白酶(参见例如wo2011/022357)。如本文所用的术语“梭菌神经毒素”意指进入神经元并且抑制神经递质释放的任何多肽。该过程包括神经毒素与低或高亲和力受体的结合、神经毒素的摄入、神经毒素的内肽酶部分易位入细胞质以及神经毒素底物的酶促修饰。更特别地，术语“神经毒素”包括由梭菌属(clostridium)细菌(梭菌神经毒素)产生的进入神经元并且抑制神经递质释放的任何多肽，以及通过重组技术或化学技术产生的此类多肽。优选地，梭菌神经毒素是肉毒梭菌神经毒素(bont)。bont血清型a-g可以基于通过特异性中和抗血清的失活来区分，其中通过血清型的这种分类与氨基酸水平的百分比序列同一性相关。基于氨基酸百分比序列同一性，将给定血清型的bont蛋白进一步分成不同的亚型。将bont/a神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：1(uniprot保藏号a5hzz9)和seq id no：13，其由作为seq id no：12提供的核苷酸序列编码。将bont/b神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：2(uniprot保藏号b1inp5)。将bont/c神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：3(uniprot保藏号p18640)。将bont/d神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：4(uniprot保藏号p19321)。将bont/e神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：5(保藏号wp_003372387)。将bont/f神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：6(uniprot保藏号q57236)或提供为seq id no：9(uniprot/uniparc保藏号upi0001de3dac)。将bont/g神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：7(保藏号wp_039635782)。将bont/d-c神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：8(保藏号bam65681)。将bont/x神经毒素氨基酸序列的实例提供为seq id no：11(保藏号baq12790.1)。优选地，bont为bont/a，更优选地为野生型bont/a。如本文所用的术语“hc结构域”是指分子量为约50kda的神经毒素重链的功能上不同的区域，其使得神经毒素能够与位于靶细胞表面上的受体结合。hc结构域由两个结构上不同的亚结构域组成，“hcn亚结构域”(hc结构域的n-末端部分)和“hcc亚结构域”(hc结构域的c-末端部分，也称作hcc结构域)，其各自具有约25kda的分子量。hcc结构域能够结合梭菌神经毒素蛋白受体。如本文所用的术语“lhn结构域”是指与hc结构域不同的神经毒素区域，并且其由内肽酶结构域(“l”或“轻链”)和负责内肽酶易位到细胞质中的结构域(重链的hn结构域)组成。内肽酶结构域(“l”或“轻链”)能够裂解snare蛋白。示例性l、hn、hcn和hcc结构域如表1中所示。表1-示例性l、hn、hcn和hcc结构域上述鉴定的参比序列应当被视为指导，因为根据亚血清型可能发生适度改变。作为实例，us 2007/0166332(通过引用整体并入本文)引用了略微不同的梭菌属序列。术语“活化环”是指包含蛋白水解裂解位点的多肽结构域。神经毒素的活化环已经在本领域中描述，例如在wo2016156113(通过引用整体并入本文)中描述。在一个实施方案中，梭菌神经毒素由氨基酸序列组成或包含氨基酸序列，所述氨基酸序列具有与seq id no：1、seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4、seq id no：5、seqid no：6、seq id no：7、seq id no：8、seq id no：9或seq id no：11的任一个至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，梭菌神经毒素由氨基酸序列组成或包含氨基酸序列，所述氨基酸序列具有与seq id no：1至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的序列同一性。在一个实施方案中，梭菌神经毒素由seq id no：1(例如bont/a)的氨基酸序列组成或包含seq id no：1(例如bont/a)的氨基酸序列。在一个实施方案中，梭菌神经毒素为嵌合神经毒素。本文所用的术语“嵌合神经毒素”是指包含一个或多个源自第一神经毒素的结构域和一个或多个源自第二神经毒素的结构域的神经毒素。例如，嵌合神经毒素可以包含源自第一神经毒素血清型或亚型的lhn结构域和源自第二神经毒素血清型或亚型的hc结构域。嵌合神经毒素的另一个实例为包含源自第一神经毒素血清型或亚型的lhn hcn结构域和源自第二神经毒素血清型或亚型的hcc结构域的神经毒素。嵌合神经毒素的另一个实例是包含来自第一神经毒素血清型或亚型的lhn结构域和来自第二神经毒素血清型或亚型的活化环的神经毒素。嵌合神经毒素的实例提供于wo2017191315和wo2016156113中，两者均通过引用整体并入本文。例如，嵌合神经毒素可以包含与来自第二神经毒素的hc结构域共价连接的来自第一神经毒素的lhn结构域，优选其中所述第一和第二神经毒素不同，其中所述lhn结构域的c-末端氨基酸残基对应于将所述第一神经毒素中的lhn和hc结构域分开的310螺旋的第一氨基酸残基，并且其中所述hc结构域的n-末端氨基酸残基相当于将所述第二神经毒素中的lhn和hc结构域分开的310螺旋的第二氨基酸残基。在一个实施方案中，梭菌神经毒素为嵌合神经毒素，其包含来自bont/b的hc结构域和来自bont/a、bont/c、bont/d、bont/e、bont/f或bont/g的lhn结构域。例如，在一个实施方案中，hc结构域由下列氨基酸序列组成或包含下列氨基酸序列：相当于seq id no：2(例如bont/b)的氨基酸残基860-1291的氨基酸序列，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％的序列同一性的氨基酸序列，并且lhn结构域由选自如下的氨基酸序列组成或包含选自如下的氨基酸序列：-seq id no：1(例如bont/a)的氨基酸残基1-872，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列，-seq id no：3的氨基酸残基1-867，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列，-seq id no：4的氨基酸残基1-863，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列，-seq id no：5的氨基酸残基1-846，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列，-seq id no：6的氨基酸残基1-865，或具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％与之序列同一性的序列，-seq id no：7的氨基酸残基1-864，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列，-seq id no：8的氨基酸残基1-863，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列，和-seq id no：9的氨基酸残基1-862，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的序列。在优选的实施方案中，梭菌神经毒素为包含来自bont/b的hc结构域和来自bont/a的lhn结构域的嵌合神经毒素。在更优选的实施方案中，hc结构域由相当于seq id no：2的氨基酸残基860-1291的氨基酸序列组成或包含seq id no：2的氨基酸残基860-1291的氨基酸序列，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列，并且lhn结构域包含相当于seq id no：1的氨基酸残基1-872的氨基酸序列，或与之具有至少70％、优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。在其中梭菌神经毒包含来自bont/b的hc结构域的实施方案中(例如，其中梭菌神经毒素为bont/b，或包含来自bont/b的hc结构域的嵌合神经毒素)，梭菌神经毒素可以在重链氨基酸序列上(例如hc结构域)具有一个或多个修饰，得到“修饰的重链”，优选其中所述修饰的重链以高于(或低于)天然神经毒素的亲和力结合靶神经细胞。此类hc结构域中的修饰可以包括可以改变与靶神经细胞的神经节苷脂的结合的hcc结构域的神经节苷脂结合位点中的氨基酸残基的修饰，和/或可以改变与靶神经细胞的蛋白质受体的结合的hcc结构域的蛋白质受体结合位点中的氨基酸残基的修饰。此类修饰的神经毒素的实例描述在wo2006027207和wo2006114308中，两者均通过引用整体并入本文。在重链的氨基酸序列中具有一个或多个修饰的梭菌神经毒素在本文中称作“修饰的梭菌神经毒素”。在本发明的修饰的梭菌神经毒素的一个实施方案中，来自bont/b的hcc结构域与所述bont血清型的天然hcc结构域相比被修饰。在优选的实施方案中，来自bont/b神经毒素的hcc结构域包含至少一个氨基酸残基突变，其与天然bont/b hcc结构域相比增加所述hcc结构域对人syt ii的结合亲和力。此外，优选地，与天然bont/b hcc结构域相比，所述至少一个氨基酸残基突变使所述hcc结构域对人syt ii的结合亲和力增加至少50％。bont/b hcc结构域中的此类适合的氨基酸残基突变已在本领域中描述在wo2013180799和wo2016154534中，两者均通过引用整体并入本文。特别地，与天然bont/b hcc结构域相比，适于将bont/b hcc结构域对人syt ii的结合亲和力增加至少50％的所述至少一个氨基酸残基突变是选自如下的氨基酸残基取代、添加或缺失：1118m、1183m、1191m、1191i、1191q、1191t、1199y、1199f、1199l、1201v、1191c、1191v、1191l、1191y、1199w、1199e、1199h、1178y、1178q、1178a、1178s、1183c、1183p及其任意组合。优选地，所述bont/b hcc结构域中的至少一个氨基酸残基突变由选自如下的两个氨基酸残基取代、添加或缺失组成：1191m和1199l、1191m和1199y、1191m和1199f、1191q和1199l、1191q和1199y、1191q和1199f、1191m和1199w、1191m和1178q、1191c和1199w、191c和1199y、1191c和1178q、1191q和1199w、1191v和1199w、1191v和1199y或1191v和1178q。仍然优选地，所述bont/b hcc结构域中的至少一个氨基酸残基突变由三个氨基酸残基取代、添加或缺失组成：1191m、1199w和1178q。更优选地，所述bont/b hcc结构域中的至少一个氨基酸残基突变由两个氨基酸残基取代、添加或缺失组成：1191m和1199y。在更优选的实施方案中，与天然bont/b hcc结构域相比，适于将bont/b hcc结构域对人syt ii的结合亲和力增加至少50％的所述至少一个氨基酸残基突变是选自如下的氨基酸残基取代：v1118m、y1183m、e1191m、e1191i、e1191q、e1191t、s1199y、s1199f、s1199l、s1201v、e1191c、e1191v、e1191l、e1191y、s1199w、s1199e、s1199h、w1178y、w1178q、w1178a、w1178s、y1183c、y1183p及其任意组合。优选地，所述bont/b hcc结构域中的至少一个氨基酸残基突变由选自如下的两个氨基酸残基取代组成：e1191m和s1199l、e1191m和s1199y、e1191m和s1199f、e1191q和s1199l、e1191q和s1199y、e1191q和s1199f、e1191m和s1199w、e1191m和w1178q、e1191c和s1199w、e1191c和s1199y、e1191c和w1178q、e1191q和s1199w、e1191v和s1199w、e1191v和s1199y、或e1191v和w1178q。仍然优选地，所述bont/b hcc结构域中的至少一个氨基酸残基突变由三个氨基酸残基取代组成：e1191m、s1199w和w1178q。更优选地，所述bont/b hcc结构域中的至少一个氨基酸残基突变由两个氨基酸残基取代组成：e1191m和s1199y。在优选的实施方案中，待修饰的bont/b hcc结构域相当于seq id no:2的氨基酸残基1082-1291(天然bont/b hcc结构域)，或相当于与之具有至少70％，优选至少80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以为嵌合的和修饰的，如上所述。例如，在优选的实施方案中，梭菌神经毒素包含(或由以下组成)氨基酸序列seq id no：10，或与之具有至少70％，优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素可以是嵌合的和修饰的，如上所述。例如，在优选的实施方案中，梭菌神经毒素包含(或由以下组成)氨基酸序列seq id no：10(例如bont/abmy)，或与其具有至少70％，优选至少75％、80％、85％、90％、95％或99％序列同一性的氨基酸序列。本发明的梭菌神经毒素可以使用重组技术产生。因此，在一个实施方案中，本发明的梭菌神经毒素为重组梭菌神经毒素。使用此类重组神经毒素可以有利地拓宽在本文所述的方法中使用的梭菌神经毒素的选择，例如基于被认为适合于任何给定外科手术的性质如效力和作用持续时间来选择。适合的(已知的)重组梭菌神经毒素包括修饰的肉毒梭菌神经毒素a(bont/a)，当与未修饰的bont/a(例如)相比时，其优选具有更长的作用持续时间。所述作用持续时间可以是至少1.25×、1.5×、1.75×、2.0×或2.25×。修饰的bont/a的作用持续时间可以为6至9个月。例如，作用持续时间可以是至少：4.5个月(从开始)、5.0个月、5.5个月、6个月、6.5个月、7.0个月、7.5个月、8.0个月、8.5个月或9.0个月。适合的修饰的bont/a多肽(和编码其的核苷酸序列，如果存在的话)描述在wo2015/004461a1和wo 2017/191315中，两者均通过引用整体并入本文。更详细地，在一个实施方案中，梭菌神经毒素为修饰的重组bont/a神经毒素。在一个实施方案中，修饰的bont/a在选自如下的一个或多个氨基酸残基处包含修饰：asn 886、asn 905、gln 915、asn 918、glu 920、asn 930、asn 954、ser 955、gln 991、glu 992、gln995、asn 1006、asn 1025、asn 1026、asn 1032、asn 1043、asn 1046、asn 1052、asp 1058、his 1064、asn 1080、glu 1081、glu 1083、asp 1086、asn 1188、asp 1213、gly 1215、asn1216、gln 1229、asn 1242、asn 1243、ser 1274和thr 1277，优选地，其中修饰选自：(i)用碱性氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；(ii)用不带电荷的氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；(iii)用碱性氨基酸残基取代不带电荷的表面暴露的氨基酸残基；(iv)碱性氨基酸残基的插入；和(v)酸性表面暴露的氨基酸残基的缺失。当与如seq id no：1所示的未修饰的bont/a相比时，修饰可以是这样一种修饰，其中氨基酸残基编号通过与seq id no：1比对来确定。由于seq id no：1(以及相当于本文所述的修饰的bont/a多肽的seq id no)的位置1处甲硫氨酸残基的存在是任选的，因此技术人员在确定氨基酸残基编号时将考虑甲硫氨酸残基的存在/不存在。例如，当seq id no：1包括甲硫氨酸时，位置编号将如上所定义(例如，asn 886为seq id no：1的asn 886)。可选择的是，当seq id no：1中不存在甲硫氨酸时，氨基酸残基编号应当-1修饰(例如asn 886为seq id no：1的asn 885)。当本文所述的其它多肽序列的位置1处的甲硫氨酸存在/不存在时，类似的考虑适用，并且技术人员将使用本领域常规技术容易地确定正确的氨基酸残基编号。这同样适用于本文所述的任何其它bont(例如，上述嵌合bont)。指示用于修饰的氨基酸残基是表面暴露的氨基酸残基。修饰的bont/a可以由与选自seq id no：14、16、18和20的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列编码。例如，与选自seq id no：14、16、18和20的核酸序列具有至少80％、90％、95％或99.9％序列同一性的核酸序列。优选地，用于本发明的修饰的bont/a可以由包含seq id no：14、16、18或20(或由其组成)的核酸序列编码。修饰的bont/a可以包含与选自seq id no：15、17、19和21的多肽序列具有至少70％序列同一性的多肽序列。例如，与选自seq id no：15、17、19和21的多肽序列具有至少80％、90％、95％或99.9％序列同一性的多肽序列。优选地，用于本发明的修饰的bont/a可以包含选自seq id no：15、17、19和21的多肽序列(更优选地由其组成)。当在修饰的bont/a的上下文中使用时，术语“一个或多个氨基酸残基”优选意指至少2、3、4、5、6或7个所示氨基酸残基。因此，修饰的bont/a可以在指定的氨基酸残基处包含至少2、3、4、5、6或7个(优选7个)修饰。修饰的bont/a可以包含1-30、3-20或5-10个氨基酸修饰。更优选地，当在修饰的bont/a的上下文中使用时，术语“一个或多个氨基酸残基”意指所有指示的氨基酸残基。优选地，除了在指示的氨基酸残基处的一个或多个氨基酸修饰之外，当与seq idno：1相比时，修饰的bont/a不含任何其它氨基酸修饰。最优选地，修饰的bont/a包含在选自以下的一个或多个氨基酸残基处的修饰(更优选由其组成)：asn 886、asn 930、ser 955、gln 991、asn 1026、asn 1052和gln 1229。修饰的bont/a可以由与seq id no：14具有至少70％序列同一性的核酸序列编码。例如，与seqid no：14具有至少80％、90％、95％或99.9％序列同一性的核酸序列。优选地，用于本发明的修饰的bont/a可以由包含seq id no：14(或由其组成)的核酸编码。修饰的bont/a可以包含与seq id no：15具有至少70％序列同一性的多肽序列。例如，与seq id no：15具有至少80％、90％、95％或99.9％序列同一性的多肽序列。优选地，用于本发明的修饰的bont/a可以包含seq id no：15(更优选由其组成)。修饰可以选自：(i)用碱性氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；(ii)用不带电荷的氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；(iii)用碱性氨基酸残基取代不带电的表面暴露的氨基酸残基；(iv)碱性氨基酸残基的插入；和(v)酸性表面暴露的氨基酸残基的缺失。如上所述的修饰产生修饰的bont/a，当与相应的未修饰的bont/a相比时，所述修饰的bont/a具有增加的正表面电荷和增加的等电点。等电点(pi)是给定蛋白质的特定性质。更详细地，等电点(pi)定义为蛋白质显示净电荷为零时的ph值。pi的增加意味着蛋白质需要更高的ph值以显示零的净电荷。因此，pi的增加表示在给定ph下蛋白质的净正电荷的增加。相反，pi的降低意味着蛋白质需要更低的ph值以显示零的净电荷。因此，pi的降低表示在给定ph下蛋白质的净正电荷的降低。测定蛋白质pi的方法是本领域已知的，并且是技术人员熟悉的。作为实例，蛋白质的pi可以由蛋白质中存在的每种氨基酸的平均pka值计算(“计算的pi”)。此类计算可以使用本领域已知的计算机程序进行，例如来自expasy的compute pi/mw tool(https://web.expasy.org/compute_pi/)，其是根据本发明计算pi的优选方法。应当使用相同的计算技术/程序进行不同分子之间的pi值的比较。在适当的情况下，可以使用等电聚焦技术(“观察的pi”)通过试验确认蛋白质的计算的pi。该技术使用电泳根据其pi分离蛋白质。等电聚焦通常使用具有固定ph梯度的凝胶进行。当施加电场时，蛋白质通过ph梯度迁移，直到其达到其具有零净电荷的ph，该点是蛋白质的pi。由等电聚焦提供的结果本质上通常是相对低分辨率的，因此本发明人认为由计算的pi(如上所述)提供的结果更适合使用。在整个本说明书中，除非另有说明，否则“pi”是指“计算的pi”。蛋白质的pi可以通过改变其表面上展示的碱性和/或酸性基团的数量来增加或减少。这可以通过修饰蛋白质的一个或多个氨基酸来实现。例如，pi的增加可以通过减少酸性残基的数目或通过增加碱性残基的数目来提供。本发明的修饰的bont/a的pi值可以比未修饰的bont/a(例如seq id no：1)的pi值高至少0.2、0.4、0.5或1个pi单位。优选地，修饰的bont/a可以具有至少6.6，例如至少6.8的pi。20种标准氨基酸的特性如下表中所示： 氨基酸 侧链 氨基酸 侧链 天冬氨酸 asp d 带电荷(酸性) 甲硫氨酸 met m 不带电荷(极性) 谷氨酸 glu e 带电荷(酸性) 色氨酸 trp w 不带电荷(极性) 精氨酸 arg r 带电荷(碱性) 半胱氨酸 cys c 不带电荷(极性) 赖氨酸 lys k 带电荷(碱性) 丙氨酸 ala a 不带电荷(疏水性) 组氨酸 his h 不带电荷(极性) 甘氨酸 gly g 不带电荷(疏水性) 天冬酰胺 asn n 不带电荷(极性) 缬氨酸 val v 不带电荷(疏水性) 谷氨酰胺 gln q 不带电荷(极性) 亮氨酸 leu l 不带电荷(疏水性) 丝氨酸 ser s 不带电荷(极性) 异亮氨酸 ile i 不带电荷(疏水性) 苏氨酸 thr t 不带电荷(极性) 脯氨酸 pro p 不带电荷(疏水性) 酪氨酸 tyr y 不带电荷(极性) 苯丙氨酸 phe f 不带电荷(疏水性) 以下氨基酸被视为带电荷的氨基酸：天冬氨酸(带负电)、谷氨酸(带负电)、精氨酸(带正电)和赖氨酸(带正电)。在ph 7.4下，天冬氨酸(pka 3.1)和谷氨酸(pka 4.1)的侧链具有负电荷，而精氨酸(pka 12.5)和赖氨酸(pka 10.8)的侧链具有正电荷。天冬氨酸和谷氨酸称作酸性氨基酸残基。精氨酸和赖氨酸称作碱性氨基酸残基。以下氨基酸被视为不带电荷的极性(意指它们可以参与氢键合)氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。以下氨基酸被视为不带电荷的疏水性氨基酸：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸和甘氨酸。在氨基酸插入中，将另外的氨基酸残基(通常不存在的氨基酸残基)掺入bont/a多肽序列中，从而增加所述序列中氨基酸残基的总数。在氨基酸缺失中，从梭菌毒素氨基酸序列中除去氨基酸残基，从而减少所述序列中氨基酸残基的总数。优选地，修饰是取代，其有利地在修饰的bont/a中保持相同数目的氨基酸残基。在氨基酸取代中，形成bont/a多肽序列的一部分的氨基酸残基被不同的氨基酸残基替代。如上所述，替代氨基酸残基可以是20种标准氨基酸之一。可选择的是，氨基酸取代中的置换氨基酸可以是非标准氨基酸(不是上述20种标准组的一部分的氨基酸)。作为实例，替代氨基酸可以是碱性非标准氨基酸，例如l-鸟氨酸、l-2-氨基-3-胍基丙酸或者赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸的d-异构体)。用于将非标准氨基酸引入蛋白质中的方法是本领域已知的，并且包括使用大肠杆菌(e.coli)营养缺陷型表达宿主的重组蛋白质合成。在一个实施方案中，取代选自：用碱性氨基酸残基取代酸性氨基酸残基，用不带电荷的氨基酸残基取代酸性氨基酸残基，和用碱性氨基酸残基取代不带电荷的氨基酸残基。在一个实施方案中，其中取代是酸性氨基酸残基被不带电荷的氨基酸残基取代，酸性氨基酸残基被其相应的不带电荷的酰胺氨基酸残基代替(即天冬氨酸被天冬酰胺代替，以及谷氨酸被谷氨酰胺代替)。优选地，碱性氨基酸残基为赖氨酸残基或精氨酸残基。换言之，取代是用赖氨酸或精氨酸取代。最优选地，修饰是用赖氨酸取代。在根据本发明的修饰后，修饰的bont/a能够与未修饰的bont/a(例如seq id no：1)结合的靶细胞受体结合。描述了适合的修饰的(重组)bont/a神经毒素，例如具有长的作用持续时间，下文描述了适合的修饰的(重组)bont/e神经毒素，其可以相对更快地起作用和/或具有更短的作用期限。这再次证明了由本发明的基于梭菌神经毒素的治疗提供的有利的灵活性。例如，对于侵入性较小的外科手术(例如，预期外科手术后疼痛不会长时间存在的情况)，可以采用此类bont/e来提供更短的作用持续时间。bont/e(例如rbont/e)可以包含与seq id no：5具有至少70％(优选至少80％；更优选至少90％)的序列同一性的多肽序列，条件是多肽序列包含一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个或八个；优选所有八个)如下氨基酸(其中氨基酸位置编号以bont/e蛋白的n-末端甲硫氨酸氨基酸残基开始并且以c-末端氨基酸残基结束)：第177位的甘氨酸、第198位的丝氨酸、第340位的丙氨酸、第773位的亮氨酸、第963位的亮氨酸、第964位的谷氨酰胺、第967位的丙氨酸、第1195位的天冬酰胺。所述氨基酸可以是相对于野生型bont/e多肽序列(例如uniprot q00496的序列)的取代(例如突变)。例如：位置177处的甘氨酸可以是精氨酸至甘氨酸取代(r177g)；在位置198处的丝氨酸可以是c198s取代；在位置340处的丙氨酸可以是r340a取代；在位置773处的亮氨酸可以是i173l取代；在位置963处的亮氨酸可以是f963l取代；在位置964处的谷氨酰胺可以是e964q取代；在位置967处的丙氨酸可以是r967a取代；和/或在位置1195处的天冬酰胺可以是插入(例如野生型bont/e序列(例如uniprot q00496的多肽序列)的g1194与n1195之间的插入)。在一个实施方案中，如上所述，所述一种或多种氨基酸的存在提供了与缺乏所述氨基酸的bont/e蛋白相比具有改善的溶解度的bont/e蛋白。所述改善的溶解度增加了异源表达系统(例如大肠杆菌表达系统)中蛋白质的收率。在一个实施方案中，如上所述，所述一种或多种氨基酸的存在提供了与缺乏所述氨基酸的bont/e蛋白相比具有改善的效力的bont/e蛋白。所述改善的效力可以优选是改善的体内效力(更优选在人个体中改善的体内效力)。在一个实施方案中，bont/e为wo 2014/068317 a1中描述的一个(或由wo 2014/068317a1中所述的核苷酸序列编码)，其通过引用并入本文。优选地，梭菌神经毒素(例如用于如本文所述的用途)与至少一种药学上可接受的载体一起是药物组合物的一部分。“药学上可接受的载体”在本文中是指与药物组合物的其它成分(特别是与梭菌神经毒素)相容并且对人患者无害的任何组分。药学上可接受的载体可以根据标准药学实践基于所需的施用途径来选择，并且包括但不限于赋形剂、稀释剂、佐剂、抛射剂和盐。因此，本发明还涉及用于治疗人患者的外科手术后疼痛和/或焦虑的药物组合物，其中所述组合物包含本发明的梭菌神经毒素和至少一种药学上可接受的载体，并且给患者施用的梭菌神经毒素的剂量如上所述。还包括治疗外科手术后疼痛和/或焦虑的相应用途和方法，其包含给人患者施用本发明的药物组合物。在另一个实施方案中，本发明涉及用于促进外科手术后健康的药物组合物，其中外科手术后健康是减轻外科手术后疼痛和焦虑。本发明的梭菌神经毒素可以优选配制用于皮内施用。优选的施用途径是通过皮内施用。优选地，皮内施用意指皮内注射。优选地，治疗外科手术后疼痛和/或外科手术后焦虑的所述bont是纯化的bont。如本文所用，术语“纯化的bont”是指从天然产生它的梭菌菌株(天然存在的梭菌菌株)纯化或使用重组技术纯化的肉毒梭菌神经毒素。纯化的bont/a可以与复合蛋白结合或不含复合蛋白，但优选不含复合蛋白。因此，在一个实施方案中，梭菌神经毒素与bont复合蛋白(也称作无毒神经毒素相关蛋白(nap))结合。换言之，梭菌神经毒素与bont复合蛋白联合或组合施用于人患者。因此，在一个实施方案中，梭菌神经毒素与一种或多种bont复合蛋白复合。商购的纯化和复合蛋白结合的bont/a的实例包括(与bont复合蛋白结合)和(纯化的)。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素不含bont复合蛋白(或不与其结合或组合)。换言之，梭菌神经毒素在不与bont复合蛋白结合或组合的情况下施用于人患者。梭菌神经毒素的剂量可以以纳克测量。本发明的梭菌神经毒素的剂量应理解为活性双链梭菌神经毒素的剂量，即不包括神经毒素可能与之结合的复合蛋白的量。换言之，它是指活性双链梭菌神经毒素的剂量，无论所述神经毒素结合或不结合复合蛋白质施用于患者。如本领域技术人员众所周知的，活性双链梭菌神经毒素能够结合膜(例如细胞膜)受体，将轻链易位到细胞质中并且裂解snare蛋白，而复合蛋白不显示这种生物活性(即不是“活性的”)。另外或可选择地，梭菌神经毒素的剂量可以以梭菌神经毒素的“单位”(u)测量。例如，当施用bont/a(或更特别地，例如，)时，以单位的剂量的测量可能特别适合。实际上，如本领域技术人员众所周知的，梭菌神经毒素的效力与达到ld50(致死剂量50)单位所需的神经毒素的量(例如纳克)相关；一个ld50单位被定义为中位数致死腹膜内剂量(如在小鼠中测量的)。然而，目前市场上的bont药物制剂包含不同量的150kd神经毒素，但也包含ld50单位。此外，在这些制剂中，神经毒素可以或可以不与无毒神经毒素结合蛋白(nap)(也称作复合蛋白)结合(即组合)。为了易于转化(如field等人,“abobotulinumtoxinaonabotulinumtoxinaandincobotulinumtoxinaneurotoxin content and potential implicationsfor duration of response in patients”.toxins 2018,10(12),535中所报道的)：-100单位的(也称作onabotulinumtoxina)包含约0.9ng的150kd bont/a，以及复合蛋白；-500单位的(也称作abobotulinumtoxina)包含约2.69ng的150kd bont/a，以及复合蛋白；1单位的包含约5.38pg bont/a；-100单位的(也称作incobotulinumtoxina)包含约0.40ng的150kdbont/a，不含复合蛋白。应当注意，转化值可以略有不同。例如，frevert,2012(“content of botulinumneurotoxin in和”；drugs rd.2010；10(2):67-73)中报道的转化值如下：-100单位的(也称作onabotulinumtoxina)包含约0.73ng的150kd bont/a，以及复合蛋白；-100单位的(也称作abobotulinumtoxina)包含约0.65ng的150kd bont/a，以及复合蛋白；-100单位的(也称作incobotulinumtoxina)包含约0.44ng的150kdbont/a，不含复合蛋白；-100单位的(也称作rimabotulinumtoxinb)包含约0.2ng-约1ng的150kd bont/b，以及复合蛋白。梭菌神经毒素的量可以由本领域技术人员根据本领域常规使用的方法测量，以优选地以纳克水平定量蛋白质，所述方法特别包括质谱法，例如同位素稀释质谱法(等人,quantification of protein calibrants by amino acid analysis using isotopedilution mass spectrometry,anal.biochem.2011,408、124-131)，或荧光测定法(poras等人,detection and quantification of botulinum neurotoxin type a by a novelrapid in vitro fluorimetric assay,appl environ microbiol.2009年7月；75(13):4382-4390)。皮内施用可以包括用针(例如30号针)进行皮内注射，优选其中将针(例如30号针)相对于外科手术介入部位(其可以在胁腹上)的皮肤表面以约5°-15°的角度插入皮肤的真皮中。注射深度(相对于皮肤表面的深度)可以为约0.2-0.3(优选约0.25)英寸。梭菌神经毒素可以在身体上待进行外科手术介入的部位(例如外科手术切口，或接近外科手术切口部位)施用。在一个实施方案中，梭菌神经毒素可以在患者的外科手术介入部位(例如在患者的外科手术介入部位的一个或多个施用部位)施用(例如通过皮内注射或鞘内注射)。梭菌神经毒素可以在一个或多个部位施用，例如在接近外科手术介入部位的一个或多个部位施用。“接近外科手术介入部位”的部位可以位于距外科手术介入部位至多15cm处；例如，距外科手术介入部位至多10cm；优选距外科手术介入部位至多5cm；更优选距外科手术介入部位至多1cm。在一个实施方案中，在施用后，梭菌神经毒素通过逆行转运行进至脊髓并且在所述脊髓中实现snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)。在一个实施方案中，当在皮内部位施用梭菌神经毒素时，在施用梭菌神经毒素后，在所述皮内部位处或附近观察到所述梭菌神经毒素的最小snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)或没有观察到所述梭菌神经毒素的snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)。在一个实施方案中，在施用梭菌神经毒素后5-7天进行观察，并且在施用梭菌神经毒素后在所述皮内部位处或附近观察到所述梭菌神经毒素的最小snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)或没有观察到所述梭菌神经毒素的snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)。在一个实施方案中，当在鞘内部位施用梭菌神经毒素时，在施用梭菌神经毒素后，在所述鞘内部位处或附近观察到所述梭菌神经毒素的最小snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)或没有观察到所述梭菌神经毒素的snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)。在一个实施方案中，在施用梭菌神经毒素后5-7天进行观察，并且在施用梭菌神经毒素后在所述鞘内部位处或其附近观察到所述梭菌神经毒素的最小snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)或没有观察到所述梭菌神经毒素的snare蛋白质裂解(snap-25蛋白质裂解)。因此，梭菌神经毒素可以在外科手术介入部位的远侧施用以治疗外科手术后疼痛和外科手术后焦虑。因此，在优选的实施方案中，当外科手术后疼痛由外科手术介入引起时，梭菌神经毒素可以在外科手术介入部位远侧的部位(例如在患者切口部位远侧的一个或多个施用部位)施用(例如通过皮内注射或鞘内注射)。梭菌神经毒素可以在外科手术介入部位远侧的一个或多个部位施用，例如在距外科手术介入部位至少15cm；距外科手术介入部位至少50cm或距外科手术介入部位至少100cm的部位施用。本领域技术人员会理解，本发明涉及外科手术前施用，使得提及“在外科手术介入部位处或其近侧”施用是指在外科手术开始后将(例如随后)经受外科手术介入的部位处或其近侧施用。提及“在外科手术介入部位远侧的部位处”施用是指在外科手术开始后将(例如随后)经受外科手术介入的部位远侧施用。梭菌神经毒素可以在至多15个(优选至多10个)部位(例如外科手术介入部位近侧的部位)施用。此类部位可以横穿外科手术介入部位的周边。在优选的实施方案中，待施用用于治疗人患者的外科手术疼痛的本发明的梭菌神经毒素的剂量(即治疗剂量)范围为约0.00025ng-约3ng。在优选的实施方案中，梭菌神经毒素的治疗剂量范围为约0.0003ng-约2ng，优选约0.0004ng-约1.5ng、约0.0005ng-约1ng，仍然优选约0.0006ng-约0.5ng的所述梭菌神经毒素。例如，包含bont/a的梭菌神经毒素的剂量(例如总剂量)优选范围为约1ng-约2ng。可以给患者施用100-500u的梭菌神经毒素。例如，可以给患者施用150-300u的梭菌神经毒素；优选175-250u；更优选约200u。可以给患者施用每千克(kg)患者体重80-250皮克(pg)的梭菌神经毒素(例如850-250pg/kg)。例如，可以给患者施用100-200pg/kg、115-175pg/kg或130-150pg/kg。如上所述，梭菌神经毒素可以在一个或多个施用部位施用，例如在多于一个施用部位施用。在一个实施方案中，给患者每个施用部位施用2.5-30u的梭菌神经毒素；优选地，其中给患者每个施用部位施用20u的梭菌神经毒素。例如，10个施用部位可以接受每个施用部位20u的施用，提供200u的总施用。可以以每个施用部位10-170pg的总剂量给患者施用梭菌神经毒素。在一个优选的实施方案中，可以每个施用部位以1-14pg/kg(体重)的剂量给患者施用梭菌神经毒素。在另一个实施方案中，梭菌神经毒素的治疗剂量优选范围为约0.001ng-约2ng。然而，例如，梭菌神经毒素的治疗剂量优选范围为约0.0003ng-约0.05ng。然而，应当理解，所需的剂量范围取决于梭菌神经毒素的确切性质、特定个体(例如人个体)中的最大耐受剂量、皮肤状况、施用途径、制剂的性质、患者的年龄、患者的体重、患者病症的性质、程度或严重程度、禁忌症(如果有的话)以及主治医师的判断。可以使用用于优化的标准经验例程来调整这些剂量水平的变化。在一个实施方案中，给患者施用基于单一肉毒梭菌神经毒素血清型(例如bont/a)的单一疗法。因此，在一个实施方案中，本发明使用单一肉毒梭菌神经毒素血清型(例如bont/a)。与本发明的多种方法相关的实施方案旨在同样适用于其它方法、梭菌神经毒素，例如改造的梭菌神经毒素(无论是单链还是双链形式)、用途或药物组合物，反之亦然。序列同源性可以使用多种序列比对方法中的任一种来确定同一性百分比，包括但不限于全局方法、局部方法和杂交方法，例如像区段逼近方法。确定同一性百分比的方案是本领域技术人员范围内的常规方法。全局方法从分子的开始到结束比对序列，并且通过将各个残基对的得分相加并且通过施加空位罚分来确定最佳比对。非限制性方法包括，例如clustal w，参见例如julie d.thompson等人,clustal w:improving the sensitivity ofprogressive multiple sequence alignment through sequence weighting,position-specific gap penalties and weight matrix choice,22(22)nucleic acids research4673-4680(1994)；和迭代精修，参见例如osamu gotoh,significant improvement inaccuracy of multiple protein.sequence alignments by iterative refinement asassessed by reference to structural alignments,264(4)j.moi.biol.823-838(1996)。局部方法通过鉴定由所有输入序列共享的一个或多个保守基序来比对序列。非限制性方法包括，例如匹配框，参见例如eric depiereux and ernest feytmans,match-box:afundamentally new algorithm for the simultaneous alignment of severalprotein sequences,8(5)cabios 501 -509(1992)；gibbs采样，参见例如c.e.lawrence等人,detecting subtle sequence signals:a gibbs sampling strategy for multiplealignment,262(5131)science 208-214(1993)；align-m，参见例如ivo van waiie等人,align-m-a new algorithm for multiple alignment of highly divergent sequences,20(9)bioinformatics:1428-1435(2004)。因此，通过常规方法测定序列同一性百分比。参见例如altschul等人,bull.math.bio.48:603-16,1986，以及henikoff和henikoff,proc.natl.acad.sci.usa89:10915-19,1992。简言之，使用空位开放罚分10、空位延伸罚分1和如下所示的henikoff和henikoff(同上)的“blosum 62”评分矩阵(氨基酸由标准单字母代码表示)比对两个氨基酸序列以优化比对评分。两个或多个核酸或氨基酸序列之间的“序列同一性百分比”是序列共有的相同位置的数目的函数。因此，％同一性可以计算为相同核苷酸/氨基酸的数目除以核苷酸/氨基酸的总数，乘以100。序列同一性％的计算还可以考虑空位的数量，以及需要引入以优化两个或更多个序列的比对的每个空位的长度。序列比较和两个或更多个序列之间的同一性百分比的确定可以使用本领域技术人员熟悉的特定数学算法(例如blast)进行。用于测定序列同一性的比对评分然后将同一性百分比计算为：基本上同源的多肽的特征在于具有一个或多个氨基酸取代、缺失或添加。这些变化优选具有较小的性质，即保守氨基酸取代(参见下文)和不显著影响多肽的折叠或活性的其它取代；小缺失，通常为1至约30个氨基酸；和小的氨基或羧基末端延伸，例如氨基末端甲硫氨酸残基、至多约20-25个残基的小接头肽或亲和标记物。保守氨基酸取代碱性：精氨酸；赖氨酸；组氨酸酸性：谷氨酸；天冬氨酸极性：谷氨酰胺；天冬酰胺疏水性：亮氨酸；异亮氨酸；缬氨酸芳族：苯丙氨酸；色氨酸；酪氨酸小：甘氨酸；丙氨酸；丝氨酸；苏氨酸；甲硫氨酸除20种标准氨基酸之外，非标准氨基酸(例如4-羟基脯氨酸、6-n-甲基赖氨酸、2-氨基异丁酸、异缬氨酸和α-甲基丝氨酸)可以取代本发明多肽的氨基酸残基。有限数量的非保守氨基酸、不由遗传密码编码的氨基酸和非天然氨基酸可以取代多肽氨基酸残基。本发明的多肽还可以包含非天然存在的氨基酸残基。非天然存在的氨基酸包括但不限于反式-3-甲基脯氨酸、2,4-亚甲基-脯氨酸、顺式-4-羟基脯氨酸、反式-4-羟基-脯氨酸、n-甲基甘氨酸、别-苏氨酸、甲基-苏氨酸、羟基-乙基半胱氨酸、羟基乙基高-半胱氨酸、硝基-谷氨酰胺、高谷氨酰胺、哌啶酸、叔亮氨酸、正缬氨酸、2-氮杂苯丙氨酸、3-氮杂苯丙氨酸、4-氮杂苯丙氨酸和4-氟苯丙氨酸。本领域已知用于将非天然存在的氨基酸残基掺入蛋白质中的几种方法。例如，可以采用体外系统，其中使用化学氨基酰化的抑制子trna抑制无义突变。用于合成氨基酸和氨基酰化trna的方法是本领域已知的。含有无义突变的质粒的转录和翻译在包含大肠杆菌s30提取物和市售酶和其它试剂的无细胞系统中进行。通过色谱法纯化蛋白质。参见例如robertson等人,j.am.chem.soc.113:2722,1991；ellman等人,methods enzymol.202:301,1991；chung等人,science 259:806-9,1993；和chung等人,proc.natl.acad.sci.usa 90:10145-9,1993)。在第二种方法中，通过显微注射突变的mrna和化学氨基酰化的抑制子trna在非洲爪蟾卵母细胞中进行翻译(turcatti等人,j.biol.chem.271:19991-8,1996)。在第三种方法中，在不存在待替代的天然氨基酸(例如苯丙氨酸)和存在所需的非天然存在的氨基酸(例如2-氮杂苯丙氨酸、3-氮杂苯丙氨酸、4-氮杂苯丙氨酸或4-氟苯丙氨酸)的情况下培养大肠杆菌细胞。将非天然存在的氨基酸掺入多肽中以替代其天然对应物。参见koide等人,biochem.33:7470-6,1994。天然存在的氨基酸残基可以通过体外化学修饰转化为非天然存在的种类。化学修饰可以与定点诱变组合以进一步扩大取代范围(wynn和richards,protein sci.2:395-403,1993)。有限数量的非保守氨基酸、不由遗传密码编码的氨基酸、非天然存在的氨基酸和非天然氨基酸可以取代本发明多肽的氨基酸残基。本发明的多肽中的必需氨基酸可以根据本领域已知的程序鉴定，例如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(cunningham和wells,science 244:1081-5,1989)。生物相互作用的位点也可以通过结构的物理分析来确定，如通过例如核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记的技术结合推定的接触位点氨基酸的突变来确定。参见例如de vos等人,science 255:306-12,1992；smith等人,j.mol.biol.224:899-904,1992；wlodaver等人,febs lett.309:59-64,1992。还可以从与本发明多肽的相关组分(例如易位或蛋白酶组分)的同源性分析推断必需氨基酸的身份。可以使用已知的诱变和筛选方法进行和测试多个氨基酸取代，例如reidhaar-olson和sauer(science 241:53-7,1988)或bowie和sauer(proc.natl.acad.sci.usa 86:2152-6,1989)中公开的那些。简言之，这些作者公开了用于同时随机化多肽中的两个或更多个位置，选择功能性多肽，然后对诱变的多肽进行测序以确定每个位置处可允许的取代谱的方法。可以使用的其它方法包括噬菌体展示(例如lowman等人,biochem.30:10832-7,1991；ladner等人,美国专利号no.5,223,409；huse,wipo公布号wo 92/06204)和区域定向诱变(derbyshire等人,gene 46:145,1986；ner等人,dna 7:127,1988)。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。singleton等人,dictionary of microbiologyand molecular biology,20ed.,john wiley and sons,new york(1994)，和hale&marham,the harper collins dictionary of biology,harper perennial,ny(1991)为技术人员提供了本公开中使用的许多术语的通用词典。本公开不受本文公开的示例性方法和材料的限制，并且与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料可用于实践或测试本公开的实施方案。数值范围包括限定范围的数字。除非另有说明，否则任何核酸序列以5’至3’方向从左到右书写；氨基酸序列分别以氨基至羧基取向从左至右书写。本文提供的标题不是对本公开的多个方面或实施方案的限制。氨基酸在本文中使用氨基酸名称、三字母缩写或单字母缩写来提及。本文所用的术语“蛋白质”包括蛋白质、多肽和肽。本文所用的术语“氨基酸序列”与术语“多肽”和/或术语“蛋白质”同义。在一些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“肽”同义。在一些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“酶”同义。术语“蛋白质”和“多肽”在本文中可互换使用。在本公开和权利要求中，可以使用氨基酸残基的常规单字母和三字母代码。氨基酸的字母代码根据iupaciub生物化学命名联合委员会(jcbn)定义。还应当理解，由于遗传密码的简并性，多肽可以由多于一个核苷酸序列编码。术语的其它定义可以出现在整个说明书中。在更详细地描述示例性实施方案之前，应当理解，本公开不限于所描述的特别实施方案，并且因此可以改变。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特别实施方案的目的，并不旨在限制，因为本公开的范围将仅由所附权利要求限定。在本文中提供值的范围的情况下，应当理解，除非上下文另有明确规定，否则还具体公开了该范围的上限和下限之间的单位的十分之一的每个中间值。在所述范围内的任何所述值或中间值与所述范围内的任何其它所述值或中间值之间的每个更小范围都包含在本公开内。还应当理解，本文中由表述“从a至b”表示的任何数值范围意指从a延伸至b的数值范围(即，包括严格的端点a和b)。除此之外，术语“约”在本文中应理解为加或减(±)5％，优选±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％、±0.1％的与其一起使用的数字的数值。必须注意，除非上下文另有明确规定，否则如本文和所附权利要求中所用，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。因此，例如提及“肉毒梭菌神经毒素”包括多种此类候选物质，并且提及“肉毒梭菌神经毒素”包括提及一种或多种梭菌神经毒素及本领域技术人员已知的其等同物等。提供本文所讨论的出版物仅是因为它们在本技术的提交日之前的公开内容。本文中的任何内容都不应被解释为承认这些出版物构成所附权利要求的现有技术。附图简述现在将参考以下附图和实施例仅通过举例的方式描述本发明的实施方案。图1显示沿着外科手术切口的注射部位的示意图，其中注射了dysport、盐水或参考化合物exparel。图2显示用于运动活动的旷场测试的场地的示意图。图3显示围外科手术期施用皮内注射盐水、expare l(对照剂)或不同浓度的dysport(100、200和400u)对减轻外科手术后疼痛和焦虑的作用。进行von frey测定作为外科手术疼痛感知的量度，并且结果显示在(a)中。横切图的水平线(设定为26g)指示未感测到外科手术疼痛的基线(例如，阈值，高于该阈值，个体的外科手术后疼痛可以被认为是治疗的)。当机械灵敏度为0-15g时，疼痛可以定义为中度/重度，当在15-26g之间时，为轻度/中度，当高于26g时，为几乎没有/无疼痛。(b)中显示了猪在围外科手术期皮内施用exparel或dysport后接近其处理者所花费的时间(以秒计)。在围外科手术期施用exparel或dysport后对痛苦行为进行评分，并且显示在(c)中。图4显示在围外科手术期皮内注射盐水、exparel(对照剂)或不同浓度的dysport(100、200和400u)后，动物在5分钟内行走的平均组总行走距离(以米计)(a)和在旷场装置的中心区域中花费的平均时间百分比(b)。图5显示在外科手术前15天(a)、5天(b)或1天(c)时，盐水(对照)与bont/a(dysport)皮内施用的von frey测定。图6显示在外科手术前15天(a)、5天(b)或1天(c)皮内施用盐水或dysport(200u/猪)后猪接近其处理者的潜伏期(以秒计)。对于条形图(a-c)中的每个时间点(天)，左侧的条形图(较浅)显示dysport处理的结果，右侧的条形图(较深)显示盐水处理的结果。图7显示在外科手术前15天(a)、5天(b)或1天(c)皮内施用盐水或dysport后猪的痛苦行为评分。对于条形图(a-c)中的每个时间点(天)，左侧的条形图(较浅)显示dysport处理的结果，右侧的条形图(较深)显示盐水处理的结果。图8显示在外科手术前15天(a)、5天(b)或1天(c)皮内施用盐水或dysport后猪的总步行距离(以米计)。图9显示在外科手术前15天(a)、5天(b)或1天(c)皮内施用盐水或dysport后，在5分钟的时间期限内在旷场装置的中心区域中花费的时间的时程(单个值和中值)。图10显示当通过皮内(a)、皮下(b)或肌内(c)注射施用时，盐水对比bont/a(dysport)的von frey测定。对于测试的每种注射途径，每只猪施用总计200u的dysport。图11显示当通过皮内(a)、皮下(b)或肌内(c)注射施用盐水或bont/a(dysport)时，猪接近其处理者的潜伏期(以秒计)。对于测试的每种注射途径，每只猪施用总计200u的dysport。图12显示当通过皮内(a)、皮下(b)或肌内(c)注射施用盐水或bont/a(dysport)时猪的痛苦行为评分。对于测试的每种注射途径，每只猪施用总计200u的dysport。图13显示在皮内、皮下或肌内施用盐水或dysport后动物在旷场中在5分钟的时间期限内行走的总距离(以米计)的时程(个体值和平均值±sem)。图14显示在皮内、皮下或肌内施用盐水或dysport后在旷场装置的中心区域中花费的时间(百分比)的时程(个体值和平均值±sem)。图15显示具有小动脉周围的小神经(a)、竖毛肌中的神经末梢(b)和真皮中的中小型神经(c)的皮肤样品中snap-25的免疫组织化学染色。图16显示未处理时猪脊髓中裂解的snap-25的免疫组织化学染色(a)和用dysport处理的猪的同侧角(b)或对侧角(c)中裂解的snap-25染色。图17显示当未处理(a、c)或皮内注射dysport(b、d)施用时猪脊髓中降钙素基因相关肽(cgrp)和p物质的表达水平。图18显示当未处理或皮内注射dysport施用时，猪脊髓中iba1(a，b)和胶质纤维酸性蛋白(gfap)(c，d)的表达水平。图19显示在外科手术前15天皮内施用盐水(对照)或bont/a(dysport)或在外科手术当天(d1)皮内施用exparel以及当猪在左腿经受外科手术切口时的von frey测定(a)，相对于盐水组，使用单因素anova，然后进行tukey检验：*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001；****p<0.0001。dysport相对于exparel组，使用单因素anova，然后进行tukey检验：#p<0.05；##p<0.01；####p<0.0001。$$p<0.01：外科手术后时间点对比第-4天，使用配对t-检验)。(b)显示了在外科手术前15天皮内施用盐水(对照)或bont/a(dysport)皮内施用或在外科手术当天(d1)皮内施用exparel后，以及当猪在左腿中经受外科手术切口时，猪接近其处理者的潜伏期(以秒计)($$p<0.01：外科手术后时间点对比第-4天，使用配对t-检验。￡￡￡p<0.001：第-16天对比第-4天，使用配对t-检验。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，治疗组对比盐水组，使用单因素anova，随后tukey检验)。(c)显示了在外科手术前15天皮内施用盐水(对照)或bont/a(dysport)皮内施用或在外科手术当天(d1)皮内施用exparel后，以及当猪在左腿中经受外科手术切口时的猪的痛苦行为评分(*p<0.05；**p<0.01和***p<0.001，与盐水组对比，使用单因素anova，然后进行tukey检验。$$p<0.01，$p<0.05：外科手术后时间点对比第-4天，使用配对t-检验)。图20显示采集用于免疫组织化学染色的组织样品(福尔马林固定的石蜡包埋的组织)和从脊髓收集组织样品的特定区域的概括。图21显示在左腿具有外科手术切口的猪的皮肤(a)、肌肉(b)和背根神经节(c)中裂解的snap-25的免疫组织化学染色。图22显示在左腿外科手术切口(a)的猪的脊髓中腰椎l5-l6的同侧背角中裂解的snap-25染色和放大视图(b)。图23显示用于确定裂解的snap-25染色强度的分级标度。裂解的snap-25染色以1-3的等级分级，其中0级＝无裂解的snap-25染色，1级＝低强度裂解的snap-25染色，2级＝平均裂解的snap-25强度染色，3级＝高强度裂解的snap-25染色(a)。图23还显示脊髓的不同区域的染色强度的定量：腰椎l5-l6、l3-l4、l1-l2以及胸部和颈部区域。通过“h-评分”测量染色强度，并且通过阳性脊髓切片的％×背侧角中的染色强度计算(b)。图24提供了采集的组织样品中裂解的snap-25染色的存在、“阳性”或不存在、“阴性”的概括。序列表当在任何以下seq id no中指示初始met氨基酸残基或相应的初始密码子时，所述残基/密码子为任选的。seq id no：1-bont/a1，保藏号a5hzz9，氨基酸序列seq id no：2-bont/b1，保藏号b1inp5，氨基酸序列seq id no：3-bont/c1，保藏号p18640，氨基酸序列seq id no：4-bont/d，保藏号p19321，氨基酸序列seq id no：5-bont/e1，保藏号wp_003372387，氨基酸序列seq id no：6-bont/f1，保藏号q57236，氨基酸序列seq id no：7-bont/g，保藏号wp_039635782，氨基酸序列seq id no：8-bont/dc，保藏号bam65681，氨基酸序列seq id no：9-bont/f7，氨基酸序列seq id no：10-bont/abmy，氨基酸序列seq id no：11-bont/x，氨基酸序列(genbank:baq12790.1)seq id no：12(未修饰的bont/a的核苷酸序列)seq id no：13(未修饰的bont/a的多肽序列)seq id no：14(修饰的bont/a“cat-a”的核苷酸序列)seq id no：15(修饰的bont/a“cat-a”的多肽序列)seq id no：16(修饰的bont/a“cat-b”的核苷酸序列)seq id no：17(修饰的bont/a“cat-b”的多肽序列)seq id no：18(修饰的bont/a“cat-c”的核苷酸序列)seq　 id　 no：19　(修饰的bont/a“cat-c”的多肽序列)seq id no：20(修饰的bont/a“cat-d”的核苷酸序列)seq id no：21(修饰的bont/a“cat-d”的多肽序列)实施例材料和方法动物模型在以下研究中使用重11-13kg的雄性家猪。猪是研究外科手术后疼痛治疗的适合模型，因为猪皮肤在结构、厚度、神经支配、色素沉着、胶原和脂质组成、伤口愈合和免疫应答方面与人皮肤具有相似性。dysport的重构在含有500u的小瓶中提供dysport。对于给药，用盐水(0.9％nacl)重构500u的小瓶。随后根据测试剂量用盐水进行稀释，如下：2.5ml盐水用3ml注射器+21g针头抽取并且转移至dysport 500u小瓶；浓度为200u/ml＝400u/2ml；将小瓶轻轻涡旋直至材料溶解。将每个小瓶左右倾斜2-3次(以确保溶液均匀性)；使用连接到30g针头的2个1ml注射器向猪给药2ml。该溶液用于400u的给药。200u/2ml剂量的制备：如上所述重构dysport；使用3ml注射器和21g针头抽取2ml重构的dysport 500u；使用3ml注射器和21g针头抽取2ml盐水；使用vacutainer小瓶混合上述2种溶液；将混合溶液左右倾斜5-6次(以确保溶液均匀性)；使用连接到30g针头的2个1ml注射器向猪给药2ml。100u/2ml剂量的制备：如上所述重构dysport；使用3ml注射器和21g针头抽取2ml重构的dysport 500u；使用3ml注射器和21g针头抽取2ml盐水；使用vacutainer小瓶混合上述2种溶液；将混合溶液左右倾斜5-6次(以确保溶液均匀性)；使用3ml注射器和21g针头从vacutainer小瓶中抽取2ml制备的溶液；使用3ml注射器和21g针头抽取2ml盐水；使用新的vacutainer混合上述2种溶液；将混合溶液左右倾斜5-6次(以确保溶液均匀性)；使用连接到30g针头的2个1ml注射器向猪给药2ml。外科手术后疼痛的诱导用通过面罩递送的异氟烷/氧气混合物麻醉猪。使用septol和polydine(lodo-vit)溶液清洁切口区域。在左胁腹中朝向猪的尾端和脊柱线侧面3cm处(第1天)制作6-7cm长的皮肤切口，或在左腿中制作7cm长的皮肤切口。然后切割筋膜并且缩回肌肉(castel等人,characterization of a porcine model of post-operative pain,eur.j.pain.2014,18(4),496-505；通过引用并入本文)。然后用3-0vicryl线缝合皮下组织。使用连续缝合方法用3-0丝线缝合皮肤。在切口闭合和材料注射后，猪接受抗生素(marbocyl 10％)。切口区域覆盖有3％的syntomicine薄层。在外科手术和给药期间(约20分钟)将动物保持在麻醉下。外科手术后，将动物放回围栏进行恢复和观察。治疗dysport的围外科手术期皮内施用对于围外科手术期施用，在缝合左胁腹中形成的切口后立即注射动物。使用附接到1ml注射器的30g针头将dysport(测试项目)、盐水(阴性对照)或参考化合物exparel(阳性对照)通过皮内(或对于exparel皮下)注射并且注入切口周围的10个部位。以固定的给药体积和固定的给药水平注射每个部位。更详细地，注射(以2cm间隔)左胁腹中7cm水平切口/缝合线的每一侧的4个部位(例如8个部位)，左胁腹中切口/缝合线的每一端的部位也是如此(参见图1)。如下评估以下试验组： 组编号 治疗 动物数量 给药体积 每只动物的给药水平 1 盐水 6 200μl/注射部位 盐水 2 exparel 6 20ml 266mg 3 dysport 6 200μl/注射部位 100u 4 dysport 6 200μl/注射部位 200u 5 dysport 6 200μl/注射部位 400u dysport的皮内围外科手术期施用对于外科手术前注射，由于在切口前(在猪的左胁腹或左腿中)以2ml的固定总体积注射动物，所以首先将进一步切口的位置纹身。使用附接到1ml注射器的30g针头皮内注射dysport(测试项目)或盐水(阴性对照)并且注射到切口周围的10个部位。以固定的给药体积和固定的给药水平注射每个部位。在外科手术前15天、5天或1天进行施用。如下评估以下试验组(当在猪的左胁腹中进行切口时)：如下评估以下试验组(当在猪的左腿中进行切口时)：通过皮内、肌内或皮下途径施用dysport在切口前15天注射动物时，对进一步切口的位置进行纹身。使用附接到1ml注射器的30g针头注射dysport(测试项目)或盐水(阴性对照)并且注射到切口周围的10个部位。以固定的给药体积和固定的给药水平注射每个部位。通过皮内、皮下或肌内途径进行施用。如下评估以下试验组：von frey测定在第1天外科手术后1、2、4和6小时注射dysport/盐水后，在健康的未外科手术动物中进行von frey测定，并且每天一次持续10天。将von frey细丝(ugo basile,italy)施加到胁腹或腿部皮肤表面的切口线近侧～0.5cm处。随着细丝的克数增加，胁腹皮肤或腿部皮肤上的力增加。使用的最大力为60g。施加细丝直到动物从刺激中撤出。每根细丝施加3-5次。如果没有实现抽出，则施加更粗的细丝。如果实现抽出，则施加更细的细丝(更粗或更细是指更高/更大或更低/更小的克力)。通过交替细丝粗细，测定并且记录实现抽出反应所需的力。将von frey细丝的尺寸和力概述于下表中：选择标准：如果基线时的胁腹抽出力≥26g(优选60g)，则将动物包括在本研究中。外科手术后，如果胁腹抽出力≤10g，则认为存在疼痛(异常性疼痛)。如果动物不符合该标准，则将其从本研究中排除。由于外科手术前相对低的阈值(≤10g)，因此，一只动物被排除在本研究之外。如果基线时的腿抽出力≥13g，则将动物包括在研究中。外科手术后，如果腿抽出力≤2g，则认为存在疼痛(异常性疼痛)。如果动物不符合该标准，则将其从本研究中排除。临近时间测试在给药猪之前，进行临近时间(at)测试的研究人员第一次进入围栏。当有人进入其围栏时，猪的正常行为是远离入侵者移动然后接近人。猪与人越熟悉，感觉越舒适，它们接近所花费的时间越短。以秒为单位测量接近进入其围栏的研究人员的潜伏期(截止时间为120秒)。该测试在早晨、早晨喂养后至少1小时(上午6:30)在痛苦行为评分之前和习惯化期间进行。痛苦行为评分切口后，动物的行为发生变化。当接近时，动物离开研究人员进入其围栏，倾向于保护切口侧，有时使用发声。这是在这种类型的外科手术后观察到的主要现象，在极少数情况下，动物变得不安或显示出隔离行为。痛苦行为评分为0(正常)至7(非常痛苦)。痛苦行为分数测试在接近时间测试之后立即进行。在早晨期间在其围栏中监测动物的一般行为。痛苦行为评分还允许评估动物的总体健康状态。由对治疗不知情的观察者对动物的行为进行评分，其中总评分是下表中所示的所有部分的总和。行为评分的评估不是以特定顺序进行的，而是根据动物的总自发行为进行的。运动活力的旷场试验旷场是2.5m宽和4.7m长的矩形场所。场所的壁是光滑的并且高1.6m。在测试的早晨，将来自所有组的动物一次一只地单独引入旷场，持续5分钟(5)。使用cctv摄像机记录动物的运动活力，并且用anymaze软件(stoelting co.)分析。在围栏中进行的行为测试(即接近时间、痛苦行为和von frey)结束时进行旷场测试。在每个旷场试验之后，分析以下参数：总步行距离(m)和在区域中心(区域e，参见图2)花费的时间百分比。痛苦的动物和疼痛中的动物通常走得更接近围栏或旷场装置的壁。没有痛苦的动物不会犹豫进入旷场装置的中心。实施例1围外科手术期施用dysport在外科手术后提供延迟的镇痛和抗焦虑作用(在猪的左胁腹上切口)在缝合猪左胁腹上形成的切口后(即围外科手术期)立即向猪皮内注射施用盐水、exparel(266mg固定剂量)或不同浓度的dysport。通过von frey测定测量猪的机械敏感性，作为外科手术后疼痛治疗的评估。当与盐水处理组相比时，exparel显示持续1小时的镇痛作用，但之后未显示出有效的镇痛活性。施用400u的dysport在外科手术后2天诱导中度镇痛作用。当给猪施用200u或400u的dysport时，到外科手术后4天诱导更大的镇痛作用。所有测试的dysport浓度在外科手术后6天完全抑制外科手术后疼痛。这表明dysport为治疗外科手术后疼痛提供了有效且延长的镇痛作用。该数据示例在图3a中的条形图中。测量猪接近其处理者的潜伏期。在切口时给猪皮内注射施用盐水、exparel或不同浓度的dysport。到外科手术后2小时，所有治疗组均显示接近其处理者的延迟。到6小时，皮内施用200u或400u的dysport减少了猪接近其处理者所花费的时间，这些效果在外科手术后持续长达5天，表明外科手术后痛苦和焦虑样反应的潜在降低。用盐水或exparel处理的猪在接近其处理者方面没有显示任何改善，表明这些处理没有减少外科手术后痛苦和焦虑样反应。该数据示例在图3b中。测定猪的痛苦行为评分。与盐水和exparel处理组不同，施用100u、200u或400u的dysport的猪在外科手术后2天显示其痛苦行为评分降低。该数据示例在图3c中。旷场测试显示在外科手术前和外科手术后盐水处理后动物行走的总距离之间无差异。用exparel或dysport处理在给药后3天不影响总步行距离，表明外科手术后动物的运动功能没有变化。该数据示例在图4a中。用400u dysport处理的动物在旷场装置的中心花费更多时间，不过，这种差异在统计学上无显著性(参见图4b)。实施例2当在猪的左胁腹进行外科手术切口时dysport的外科手术前施用诱导更快的镇痛作用并且抑制外科手术后痛苦和焦虑样反应的出现由于围外科手术期施用dysport显示出诱导镇痛作用的延迟，因此测量了外科手术前施用dysport的镇痛和抗焦虑作用。在外科手术(在猪的左胁腹中切口)前15天(参见图5a)、5天(参见图5b)或1天(参见图5c)，给猪皮内注射施用盐水或200u的dysport。通过使用von frey测定，当在外科手术前15天施用dysport时，观察到最快的镇痛作用，其中外科手术后疼痛在外科手术后1天减少。相比之下，当在外科手术前5天施用dysport时，外科手术后疼痛在外科手术后5天减少。当在外科手术前15天或5天皮内注射施用dysport时，猪显示接近其处理者的时间减少(参见图6)。类似地，当在外科手术前15天或5天皮内注射施用dysport时，猪显示出降低的痛苦行为评分(参见图7)。在外科手术前1天施用dysport没有诱导有效的抗焦虑作用。这表明在外科手术前15天或5天外科手术前施用dysport完全防止了外科手术后痛苦和焦虑样反应的出现。治疗组(在外科手术前15天、5天或1天皮内注射dysport)均未显示其外科手术后总步行距离的差异(参见图8)，这表明肌肉活动不受影响并且没有毒素的全身扩散。在外科手术之前和之后，注射盐水的动物在旷场装置中心花费的时间百分比是相似的。在外科手术前15天用dysport处理的动物在旷场装置的中心花费更多的时间(参见图9a)。当在外科手术前5天或1天施用时，盐水和dysport处理的动物之间在中心区中花费的时间百分比无差异(参见图9b和图9c)。实施例3dysport的皮内施用提供了减轻外科手术后疼痛和抑制外科手术后焦虑的出现的有利途径评估外科手术前15天不同途径的200u dysport施用(皮内、皮下和肌内注射)在外科手术后诱导镇痛和抗焦虑作用的能力。令人惊奇的是，皮内施用提供了优于可选择途径的结果(实际上，通常观察到仅dysport皮内施用途径显示快速的镇痛作用(参见图10)。dysport施用的皮下和肌内途径对镇痛活性作用很小至没有作用。当在外科手术前15天皮内注射施用dysport时，猪显示出接近其处理者的时间减少和痛苦行为评分降低(参见图11和图12)。这表明皮内施用途径在缓解外科手术后疼痛和防止外科手术后痛苦和焦虑样反应的完全出现方面是有效的。在所有盐水组中，外科手术后记录的步行距离与外科手术前记录的步行距离相同。此外，用dysport处理及其施用途径(皮内、皮下或肌内途径)不影响外科手术后的总步行距离(参见图13)。注射盐水的动物在旷场装置中心花费的时间百分比在外科手术前后是相似的。在不同的施用途径之间，动物在旷场装置中心花费的时间百分比无差异(参见图14)。实施例4snap-25裂解发生在脊髓的同侧背角中在dysport注射远侧的位置为了评估dysport(皮内注射)的作用机制，对外科手术切口部位(猪的左胁腹)和脊髓处的组织样品进行免疫组织化学。在皮肤样品的神经中未检测到裂解的snap-25(参见图15)。出乎意料的是，在脊髓的同侧背角中可见裂解的snap-25(参见图16)，表明脊髓中的bont/a活性，并且可以通过脊髓中的中心效应提供外科手术后疼痛/焦虑控制。这也突出了dysport可以通过鞘内施用直接施用到脊髓中。通过免疫组织化学染色评估脊髓中参与疼痛调节的两种神经肽降钙素基因相关肽(cgrp)和p物质的表达水平。与未处理的相比，两种神经肽在用dysport处理的猪的脊髓中均未显示其表达水平的差异(参见图17)。与未处理的相比，小胶质细胞活化标志物iba1的表达水平在用dysport处理的猪的脊髓中降低(参见图18a、b)。类似地，与未处理的相比，用dysport处理的猪的脊髓中星形胶质细胞活化标志物gfap的表达水平降低(图18c、d)。实施例5当在猪的左腿中进行外科手术切口时dysport的外科手术前施用诱导快速镇痛作用并且抑制外科手术后痛苦和焦虑样反应的出现当对猪进行不同部位的外科手术切口(外科手术切口在左腿而不是左胁腹)时，测量外科手术前施用dysport的镇痛和抗焦虑作用。在外科手术前15天给猪皮内注射施用盐水或200u的dysport或在外科手术当天(第1天)向给猪施用exparel(参见图19a)(左腿的外科手术切口)。通过使用von frey测定，观察到快速镇痛作用，其中外科手术后疼痛在外科手术后1天减少，并且在第4天观察到机械性异常性疼痛的持久逆转。与施用盐水和exparel相比，当在外科手术前15天皮内注射施用dysport时，猪(左腿有缝合切口)显示接近其处理者的时间减少(参见图19b)。类似地，与施用盐水和exparel相比，当在外科手术前15天皮内注射施用dysport时，猪(左腿有缝合切口)显示出降低的痛苦行为评分(参见图19c)。这表明在外科手术(左腿切口)前15天外科手术前施用dysport完全防止了外科手术后痛苦和焦虑样反应的出现。总之，本试验为在外科手术前15天施用dysport时的快速镇痛和抗焦虑作用提供了进一步的支持。实施例6snap-25裂解发生在具有左腿外科手术切口的猪的脊髓的同侧背角中为了评估当在猪的不同部位皮内施用dysport时是否发生dysport的相同作用机制，对外科手术切口部位(猪的左腿)和脊髓的不同区域的组织样品进行免疫组织化学(参见图20)。在切开和注射dysport后5-7天采集的样品上，在皮肤样品的神经中未检测到裂解的snap-25(参见图21)。在脊髓的同侧背角中，特别是在腰椎区域l5-l6中可见裂解的snap-25(参见图22)，与在左胁腹进行外科手术切口的猪中的发现类似。这些发现指示脊髓中的bont/a活性，并且可以通过脊髓中的中心效应提供外科手术后疼痛/焦虑控制。当与在左胁腹进行外科手术切口的猪中裂解的snap-25染色相比时，裂解的snap-25染色在同侧背角中的定位是不同的。裂解的snap-25染色的强度以1-3的等级分级，其中0级＝无裂解的snap-25染色，1级＝低强度裂解的snap-25染色，2级＝平均裂解的snap-25强度染色，并且3级＝高强度裂解的snap-25染色(参见图23a)。基于所述分级系统，与对其左胁腹进行外科手术切口的猪相比，对其左腿进行外科手术切口的猪在同侧背角中具有更低强度的裂解的snap-25染色。定量裂解的snap-25染色的强度(参见图23b)。计算h-评分作为裂解的snap-25染色强度的量度。通过将阳性脊髓切片％乘以背角中的染色强度来计算h-评分。在用dysport处理(并且在左腿有外科手术切口)的猪中，与腰椎区域l3-l4和l1-l2以及脊髓的胸部和颈部区域(颈部区域具有裂解的snap-25染色的痕迹)相比，在腰椎区域l5-l6的脊髓中观察到裂解的snap-25的最高染色(指定2级的裂解的snap-25强度染色)。在盐水或exparel注射的猪中无裂解的snap-25染色的证据。将上述免疫组织化学染色概括在图24中，并且证实在脊髓的局部区域中观察到snap-25裂解。局部区域l5-l6、l3-l4和l1-l2以及脊髓的胸部和颈部区域测试为裂解的snap-25染色阳性，而其余的组织(包括皮肤，在注射部位)测试为裂解的snap-25染色阴性。上述说明书中提及的所有出版物均通过引用并入本文。在不脱离本发明的范围和精神的情况下，本发明的所述方法和系统的多种修饰和变化对于本领域技术人员将是显而易见的。尽管已经结合具体的优选实施方案描述了本发明，但是应当理解，所要求保护的本发明不应过度限于此类具体实施方案。实际上，对于生物化学和生物技术或相关领域的技术人员显而易见的用于实施本发明的所述模式的多种修饰旨在落入所附权利要求的范围内。                         序列表<110>  益普生生物制药有限公司<120>  治疗外科手术后疼痛的方法<130>  p61407wo<150>  gb2011055.7<151>  2020-07-17<160>  21<170>  patentin 版本 3.5<210>  1<211>  1296<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  1met pro phe val asn lys gln phe asn tyr lys asp pro val asn gly1               5                   10                  15val asp ile ala tyr ile lys ile pro asn ala gly gln met gln pro            20                  25                  30val lys ala phe lys ile his asn lys ile trp val ile pro glu arg        35                  40                  45asp thr phe thr asn pro glu glu gly asp leu asn pro pro pro glu    50                  55                  60ala lys gln val pro val ser tyr tyr asp ser thr tyr leu ser thr65                  70                  75                  80asp asn glu lys asp asn tyr leu lys gly val thr lys leu phe glu                85                  90                  95arg ile tyr ser thr asp leu gly arg met leu leu thr ser ile val            100                 105                 110arg gly ile pro phe trp gly gly ser thr ile asp thr glu leu lys        115                 120                 125val ile asp thr asn cys ile asn val ile gln pro asp gly ser tyr    130                 135                 140arg ser glu glu leu asn leu val ile ile gly pro ser ala asp ile145                 150                 155                 160ile gln phe glu cys lys ser phe gly his glu val leu asn leu thr                165                 170                 175arg asn gly tyr gly ser thr gln tyr ile arg phe ser pro asp phe            180                 185                 190thr phe gly phe glu glu ser leu glu val asp thr asn pro leu leu        195                 200                 205gly ala gly lys phe ala thr asp pro ala val thr leu ala his glu    210                 215                 220leu ile his ala gly his arg leu tyr gly ile ala ile asn pro asn225                 230                 235                 240arg val phe lys val asn thr asn ala tyr tyr glu met ser gly leu                245                 250                 255glu val ser phe glu glu leu arg thr phe gly gly his asp ala lys            260                 265                 270phe ile asp ser leu gln glu asn glu phe arg leu tyr tyr tyr asn        275                 280                 285lys phe lys asp ile ala ser thr leu asn lys ala lys ser ile val    290                 295                 300gly thr thr ala ser leu gln tyr met lys asn val phe lys glu lys305                 310                 315                 320tyr leu leu ser glu asp thr ser gly lys phe ser val asp lys leu                325                 330                 335lys phe asp lys leu tyr lys met leu thr glu ile tyr thr glu asp            340                 345                 350asn phe val lys phe phe lys val leu asn arg lys thr tyr leu asn        355                 360                 365phe asp lys ala val phe lys ile asn ile val pro lys val asn tyr    370                 375                 380thr ile tyr asp gly phe asn leu arg asn thr asn leu ala ala asn385                 390                 395                 400phe asn gly gln asn thr glu ile asn asn met asn phe thr lys leu                405                 410                 415lys asn phe thr gly leu phe glu phe tyr lys leu leu cys val arg            420                 425                 430gly ile ile thr ser lys thr lys ser leu asp lys gly tyr asn lys        435                 440                 445ala leu asn asp leu cys ile lys val asn asn trp asp leu phe phe    450                 455                 460ser pro ser glu asp asn phe thr asn asp leu asn lys gly glu glu465                 470                 475                 480ile thr ser asp thr asn ile glu ala ala glu glu asn ile ser leu                485                 490                 495asp leu ile gln gln tyr tyr leu thr phe asn phe asp asn glu pro            500                 505                 510glu asn ile ser ile glu asn leu ser ser asp ile ile gly gln leu        515                 520                 525glu leu met pro asn ile glu arg phe pro asn gly lys lys tyr glu    530                 535                 540leu asp lys tyr thr met phe his tyr leu arg ala gln glu phe glu545                 550                 555                 560his gly lys ser arg ile ala leu thr asn ser val asn glu ala leu                565                 570                 575leu asn pro ser arg val tyr thr phe phe ser ser asp tyr val lys            580                 585                 590lys val asn lys ala thr glu ala ala met phe leu gly trp val glu        595                 600                 605gln leu val tyr asp phe thr asp glu thr ser glu val ser thr thr    610                 615                 620asp lys ile ala asp ile thr ile ile ile pro tyr ile gly pro ala625                 630                 635                 640leu asn ile gly asn met leu tyr lys asp asp phe val gly ala leu                645                 650                 655ile phe ser gly ala val ile leu leu glu phe ile pro glu ile ala            660                 665                 670ile pro val leu gly thr phe ala leu val ser tyr ile ala asn lys        675                 680                 685val leu thr val gln thr ile asp asn ala leu ser lys arg asn glu    690                 695                 700lys trp asp glu val tyr lys tyr ile val thr asn trp leu ala lys705                 710                 715                 720val asn thr gln ile asp leu ile arg lys lys met lys glu ala leu                725                 730                 735glu asn gln ala glu ala thr lys ala ile ile asn tyr gln tyr asn            740                 745                 750gln tyr thr glu glu glu lys asn asn ile asn phe asn ile asp asp        755                 760                 765leu ser ser lys leu asn glu ser ile asn lys ala met ile asn ile    770                 775                 780asn lys phe leu asn gln cys ser val ser tyr leu met asn ser met785                 790                 795                 800ile pro tyr gly val lys arg leu glu asp phe asp ala ser leu lys                805                 810                 815asp ala leu leu lys tyr ile tyr asp asn arg gly thr leu ile gly            820                 825                 830gln val asp arg leu lys asp lys val asn asn thr leu ser thr asp        835                 840                 845ile pro phe gln leu ser lys tyr val asp asn gln arg leu leu ser    850                 855                 860thr phe thr glu tyr ile lys asn ile ile asn thr ser ile leu asn865                 870                 875                 880leu arg tyr glu ser asn his leu ile asp leu ser arg tyr ala ser                885                 890                 895lys ile asn ile gly ser lys val asn phe asp pro ile asp lys asn            900                 905                 910gln ile gln leu phe asn leu glu ser ser lys ile glu val ile leu        915                 920                 925lys asn ala ile val tyr asn ser met tyr glu asn phe ser thr ser    930                 935                 940phe trp ile arg ile pro lys tyr phe asn ser ile ser leu asn asn945                 950                 955                 960glu tyr thr ile ile asn cys met glu asn asn ser gly trp lys val                965                 970                 975ser leu asn tyr gly glu ile ile trp thr leu gln asp thr gln glu            980                 985                 990ile lys gln arg val val phe lys  tyr ser gln met ile  asn ile ser        995                 1000                 1005asp tyr  ile asn arg trp ile  phe val thr ile thr  asn asn arg    1010                 1015                 1020leu asn  asn ser lys ile tyr  ile asn gly arg leu  ile asp gln    1025                 1030                 1035lys pro  ile ser asn leu gly  asn ile his ala ser  asn asn ile    1040                 1045                 1050met phe  lys leu asp gly cys  arg asp thr his arg  tyr ile trp    1055                 1060                 1065ile lys  tyr phe asn leu phe  asp lys glu leu asn  glu lys glu    1070                 1075                 1080ile lys  asp leu tyr asp asn  gln ser asn ser gly  ile leu lys    1085                 1090                 1095asp phe  trp gly asp tyr leu  gln tyr asp lys pro  tyr tyr met    1100                 1105                 1110leu asn  leu tyr asp pro asn  lys tyr val asp val  asn asn val    1115                 1120                 1125gly ile  arg gly tyr met tyr  leu lys gly pro arg  gly ser val    1130                 1135                 1140met thr  thr asn ile tyr leu  asn ser ser leu tyr  arg gly thr    1145                 1150                 1155lys phe  ile ile lys lys tyr  ala ser gly asn lys  asp asn ile    1160                 1165                 1170val arg  asn asn asp arg val  tyr ile asn val val  val lys asn    1175                 1180                 1185lys glu  tyr arg leu ala thr  asn ala ser gln ala  gly val glu    1190                 1195                 1200lys ile  leu ser ala leu glu  ile pro asp val gly  asn leu ser    1205                 1210                 1215gln val  val val met lys ser  lys asn asp gln gly  ile thr asn    1220                 1225                 1230lys cys  lys met asn leu gln  asp asn asn gly asn  asp ile gly    1235                 1240                 1245phe ile  gly phe his gln phe  asn asn ile ala lys  leu val ala    1250                 1255                 1260ser asn  trp tyr asn arg gln  ile glu arg ser ser  arg thr leu    1265                 1270                 1275gly cys  ser trp glu phe ile  pro val asp asp gly  trp gly glu    1280                 1285                 1290arg pro  leu    1295<210>  2<211>  1291<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  2met pro val thr ile asn asn phe asn tyr asn asp pro ile asp asn1               5                   10                  15asn asn ile ile met met glu pro pro phe ala arg gly thr gly arg            20                  25                  30tyr tyr lys ala phe lys ile thr asp arg ile trp ile ile pro glu        35                  40                  45arg tyr thr phe gly tyr lys pro glu asp phe asn lys ser ser gly    50                  55                  60ile phe asn arg asp val cys glu tyr tyr asp pro asp tyr leu asn65                  70                  75                  80thr asn asp lys lys asn ile phe leu gln thr met ile lys leu phe                85                  90                  95asn arg ile lys ser lys pro leu gly glu lys leu leu glu met ile            100                 105                 110ile asn gly ile pro tyr leu gly asp arg arg val pro leu glu glu        115                 120                 125phe asn thr asn ile ala ser val thr val asn lys leu ile ser asn    130                 135                 140pro gly glu val glu arg lys lys gly ile phe ala asn leu ile ile145                 150                 155                 160phe gly pro gly pro val leu asn glu asn glu thr ile asp ile gly                165                 170                 175ile gln asn his phe ala ser arg glu gly phe gly gly ile met gln            180                 185                 190met lys phe cys pro glu tyr val ser val phe asn asn val gln glu        195                 200                 205asn lys gly ala ser ile phe asn arg arg gly tyr phe ser asp pro    210                 215                 220ala leu ile leu met his glu leu ile his val leu his gly leu tyr225                 230                 235                 240gly ile lys val asp asp leu pro ile val pro asn glu lys lys phe                245                 250                 255phe met gln ser thr asp ala ile gln ala glu glu leu tyr thr phe            260                 265                 270gly gly gln asp pro ser ile ile thr pro ser thr asp lys ser ile        275                 280                 285tyr asp lys val leu gln asn phe arg gly ile val asp arg leu asn    290                 295                 300lys val leu val cys ile ser asp pro asn ile asn ile asn ile tyr305                 310                 315                 320lys asn lys phe lys asp lys tyr lys phe val glu asp ser glu gly                325                 330                 335lys tyr ser ile asp val glu ser phe asp lys leu tyr lys ser leu            340                 345                 350met phe gly phe thr glu thr asn ile ala glu asn tyr lys ile lys        355                 360                 365thr arg ala ser tyr phe ser asp ser leu pro pro val lys ile lys    370                 375                 380asn leu leu asp asn glu ile tyr thr ile glu glu gly phe asn ile385                 390                 395                 400ser asp lys asp met glu lys glu tyr arg gly gln asn lys ala ile                405                 410                 415asn lys gln ala tyr glu glu ile ser lys glu his leu ala val tyr            420                 425                 430lys ile gln met cys lys ser val lys ala pro gly ile cys ile asp        435                 440                 445val asp asn glu asp leu phe phe ile ala asp lys asn ser phe ser    450                 455                 460asp asp leu ser lys asn glu arg ile glu tyr asn thr gln ser asn465                 470                 475                 480tyr ile glu asn asp phe pro ile asn glu leu ile leu asp thr asp                485                 490                 495leu ile ser lys ile glu leu pro ser glu asn thr glu ser leu thr            500                 505                 510asp phe asn val asp val pro val tyr glu lys gln pro ala ile lys        515                 520                 525lys ile phe thr asp glu asn thr ile phe gln tyr leu tyr ser gln    530                 535                 540thr phe pro leu asp ile arg asp ile ser leu thr ser ser phe asp545                 550                 555                 560asp ala leu leu phe ser asn lys val tyr ser phe phe ser met asp                565                 570                 575tyr ile lys thr ala asn lys val val glu ala gly leu phe ala gly            580                 585                 590trp val lys gln ile val asn asp phe val ile glu ala asn lys ser        595                 600                 605asn thr met asp lys ile ala asp ile ser leu ile val pro tyr ile    610                 615                 620gly leu ala leu asn val gly asn glu thr ala lys gly asn phe glu625                 630                 635                 640asn ala phe glu ile ala gly ala ser ile leu leu glu phe ile pro                645                 650                 655glu leu leu ile pro val val gly ala phe leu leu glu ser tyr ile            660                 665                 670asp asn lys asn lys ile ile lys thr ile asp asn ala leu thr lys        675                 680                 685arg asn glu lys trp ser asp met tyr gly leu ile val ala gln trp    690                 695                 700leu ser thr val asn thr gln phe tyr thr ile lys glu gly met tyr705                 710                 715                 720lys ala leu asn tyr gln ala gln ala leu glu glu ile ile lys tyr                725                 730                 735arg tyr asn ile tyr ser glu lys glu lys ser asn ile asn ile asp            740                 745                 750phe asn asp ile asn ser lys leu asn glu gly ile asn gln ala ile        755                 760                 765asp asn ile asn asn phe ile asn gly cys ser val ser tyr leu met    770                 775                 780lys lys met ile pro leu ala val glu lys leu leu asp phe asp asn785                 790                 795                 800thr leu lys lys asn leu leu asn tyr ile asp glu asn lys leu tyr                805                 810                 815leu ile gly ser ala glu tyr glu lys ser lys val asn lys tyr leu            820                 825                 830lys thr ile met pro phe asp leu ser ile tyr thr asn asp thr ile        835                 840                 845leu ile glu met phe asn lys tyr asn ser glu ile leu asn asn ile    850                 855                 860ile leu asn leu arg tyr lys asp asn asn leu ile asp leu ser gly865                 870                 875                 880tyr gly ala lys val glu val tyr asp gly val glu leu asn asp lys                885                 890                 895asn gln phe lys leu thr ser ser ala asn ser lys ile arg val thr            900                 905                 910gln asn gln asn ile ile phe asn ser val phe leu asp phe ser val        915                 920                 925ser phe trp ile arg ile pro lys tyr lys asn asp gly ile gln asn    930                 935                 940tyr ile his asn glu tyr thr ile ile asn cys met lys asn asn ser945                 950                 955                 960gly trp lys ile ser ile arg gly asn arg ile ile trp thr leu ile                965                 970                 975asp ile asn gly lys thr lys ser val phe phe glu tyr asn ile arg            980                 985                 990glu asp ile ser glu tyr ile asn  arg trp phe phe val  thr ile thr        995                 1000                 1005asn asn  leu asn asn ala lys  ile tyr ile asn gly  lys leu glu    1010                 1015                 1020ser asn  thr asp ile lys asp  ile arg glu val ile  ala asn gly    1025                 1030                 1035glu ile  ile phe lys leu asp  gly asp ile asp arg  thr gln phe    1040                 1045                 1050ile trp  met lys tyr phe ser  ile phe asn thr glu  leu ser gln    1055                 1060                 1065ser asn  ile glu glu arg tyr  lys ile gln ser tyr  ser glu tyr    1070                 1075                 1080leu lys  asp phe trp gly asn  pro leu met tyr asn  lys glu tyr    1085                 1090                 1095tyr met  phe asn ala gly asn  lys asn ser tyr ile  lys leu lys    1100                 1105                 1110lys asp  ser pro val gly glu  ile leu thr arg ser  lys tyr asn    1115                 1120                 1125gln asn  ser lys tyr ile asn  tyr arg asp leu tyr  ile gly glu    1130                 1135                 1140lys phe  ile ile arg arg lys  ser asn ser gln ser  ile asn asp    1145                 1150                 1155asp ile  val arg lys glu asp  tyr ile tyr leu asp  phe phe asn    1160                 1165                 1170leu asn  gln glu trp arg val  tyr thr tyr lys tyr  phe lys lys    1175                 1180                 1185glu glu  glu lys leu phe leu  ala pro ile ser asp  ser asp glu    1190                 1195                 1200phe tyr  asn thr ile gln ile  lys glu tyr asp glu  gln pro thr    1205                 1210                 1215tyr ser  cys gln leu leu phe  lys lys asp glu glu  ser thr asp    1220                 1225                 1230glu ile  gly leu ile gly ile  his arg phe tyr glu  ser gly ile    1235                 1240                 1245val phe  glu glu tyr lys asp  tyr phe cys ile ser  lys trp tyr    1250                 1255                 1260leu lys  glu val lys arg lys  pro tyr asn leu lys  leu gly cys    1265                 1270                 1275asn trp  gln phe ile pro lys  asp glu gly trp thr  glu    1280                 1285                 1290<210>  3<211>  1291<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  3met pro ile thr ile asn asn phe asn tyr ser asp pro val asp asn1               5                   10                  15lys asn ile leu tyr leu asp thr his leu asn thr leu ala asn glu            20                  25                  30pro glu lys ala phe arg ile thr gly asn ile trp val ile pro asp        35                  40                  45arg phe ser arg asn ser asn pro asn leu asn lys pro pro arg val    50                  55                  60thr ser pro lys ser gly tyr tyr asp pro asn tyr leu ser thr asp65                  70                  75                  80ser asp lys asp pro phe leu lys glu ile ile lys leu phe lys arg                85                  90                  95ile asn ser arg glu ile gly glu glu leu ile tyr arg leu ser thr            100                 105                 110asp ile pro phe pro gly asn asn asn thr pro ile asn thr phe asp        115                 120                 125phe asp val asp phe asn ser val asp val lys thr arg gln gly asn    130                 135                 140asn trp val lys thr gly ser ile asn pro ser val ile ile thr gly145                 150                 155                 160pro arg glu asn ile ile asp pro glu thr ser thr phe lys leu thr                165                 170                 175asn asn thr phe ala ala gln glu gly phe gly ala leu ser ile ile            180                 185                 190ser ile ser pro arg phe met leu thr tyr ser asn ala thr asn asp        195                 200                 205val gly glu gly arg phe ser lys ser glu phe cys met asp pro ile    210                 215                 220leu ile leu met his glu leu asn his ala met his asn leu tyr gly225                 230                 235                 240ile ala ile pro asn asp gln thr ile ser ser val thr ser asn ile                245                 250                 255phe tyr ser gln tyr asn val lys leu glu tyr ala glu ile tyr ala            260                 265                 270phe gly gly pro thr ile asp leu ile pro lys ser ala arg lys tyr        275                 280                 285phe glu glu lys ala leu asp tyr tyr arg ser ile ala lys arg leu    290                 295                 300asn ser ile thr thr ala asn pro ser ser phe asn lys tyr ile gly305                 310                 315                 320glu tyr lys gln lys leu ile arg lys tyr arg phe val val glu ser                325                 330                 335ser gly glu val thr val asn arg asn lys phe val glu leu tyr asn            340                 345                 350glu leu thr gln ile phe thr glu phe asn tyr ala lys ile tyr asn        355                 360                 365val gln asn arg lys ile tyr leu ser asn val tyr thr pro val thr    370                 375                 380ala asn ile leu asp asp asn val tyr asp ile gln asn gly phe asn385                 390                 395                 400ile pro lys ser asn leu asn val leu phe met gly gln asn leu ser                405                 410                 415arg asn pro ala leu arg lys val asn pro glu asn met leu tyr leu            420                 425                 430phe thr lys phe cys his lys ala ile asp gly arg ser leu tyr asn        435                 440                 445lys thr leu asp cys arg glu leu leu val lys asn thr asp leu pro    450                 455                 460phe ile gly asp ile ser asp val lys thr asp ile phe leu arg lys465                 470                 475                 480asp ile asn glu glu thr glu val ile tyr tyr pro asp asn val ser                485                 490                 495val asp gln val ile leu ser lys asn thr ser glu his gly gln leu            500                 505                 510asp leu leu tyr pro ser ile asp ser glu ser glu ile leu pro gly        515                 520                 525glu asn gln val phe tyr asp asn arg thr gln asn val asp tyr leu    530                 535                 540asn ser tyr tyr tyr leu glu ser gln lys leu ser asp asn val glu545                 550                 555                 560asp phe thr phe thr arg ser ile glu glu ala leu asp asn ser ala                565                 570                 575lys val tyr thr tyr phe pro thr leu ala asn lys val asn ala gly            580                 585                 590val gln gly gly leu phe leu met trp ala asn asp val val glu asp        595                 600                 605phe thr thr asn ile leu arg lys asp thr leu asp lys ile ser asp    610                 615                 620val ser ala ile ile pro tyr ile gly pro ala leu asn ile ser asn625                 630                 635                 640ser val arg arg gly asn phe thr glu ala phe ala val thr gly val                645                 650                 655thr ile leu leu glu ala phe pro glu phe thr ile pro ala leu gly            660                 665                 670ala phe val ile tyr ser lys val gln glu arg asn glu ile ile lys        675                 680                 685thr ile asp asn cys leu glu gln arg ile lys arg trp lys asp ser    690                 695                 700tyr glu trp met met gly thr trp leu ser arg ile ile thr gln phe705                 710                 715                 720asn asn ile ser tyr gln met tyr asp ser leu asn tyr gln ala gly                725                 730                 735ala ile lys ala lys ile asp leu glu tyr lys lys tyr ser gly ser            740                 745                 750asp lys glu asn ile lys ser gln val glu asn leu lys asn ser leu        755                 760                 765asp val lys ile ser glu ala met asn asn ile asn lys phe ile arg    770                 775                 780glu cys ser val thr tyr leu phe lys asn met leu pro lys val ile785                 790                 795                 800asp glu leu asn glu phe asp arg asn thr lys ala lys leu ile asn                805                 810                 815leu ile asp ser his asn ile ile leu val gly glu val asp lys leu            820                 825                 830lys ala lys val asn asn ser phe gln asn thr ile pro phe asn ile        835                 840                 845phe ser tyr thr asn asn ser leu leu lys asp ile ile asn glu tyr    850                 855                 860phe asn asn ile asn asp ser lys ile leu ser leu gln asn arg lys865                 870                 875                 880asn thr leu val asp thr ser gly tyr asn ala glu val ser glu glu                885                 890                 895gly asp val gln leu asn pro ile phe pro phe asp phe lys leu gly            900                 905                 910ser ser gly glu asp arg gly lys val ile val thr gln asn glu asn        915                 920                 925ile val tyr asn ser met tyr glu ser phe ser ile ser phe trp ile    930                 935                 940arg ile asn lys trp val ser asn leu pro gly tyr thr ile ile asp945                 950                 955                 960ser val lys asn asn ser gly trp ser ile gly ile ile ser asn phe                965                 970                 975leu val phe thr leu lys gln asn glu asp ser glu gln ser ile asn            980                 985                 990phe ser tyr asp ile ser asn asn  ala pro gly tyr asn  lys trp phe        995                 1000                 1005phe val  thr val thr asn asn  met met gly asn met  lys ile tyr    1010                 1015                 1020ile asn  gly lys leu ile asp  thr ile lys val lys  glu leu thr    1025                 1030                 1035gly ile  asn phe ser lys thr  ile thr phe glu ile  asn lys ile    1040                 1045                 1050pro asp  thr gly leu ile thr  ser asp ser asp asn  ile asn met    1055                 1060                 1065trp ile  arg asp phe tyr ile  phe ala lys glu leu  asp gly lys    1070                 1075                 1080asp ile  asn ile leu phe asn  ser leu gln tyr thr  asn val val    1085                 1090                 1095lys asp  tyr trp gly asn asp  leu arg tyr asn lys  glu tyr tyr    1100                 1105                 1110met val  asn ile asp tyr leu  asn arg tyr met tyr  ala asn ser    1115                 1120                 1125arg gln  ile val phe asn thr  arg arg asn asn asn  asp phe asn    1130                 1135                 1140glu gly  tyr lys ile ile ile  lys arg ile arg gly  asn thr asn    1145                 1150                 1155asp thr  arg val arg gly gly  asp ile leu tyr phe  asp met thr    1160                 1165                 1170ile asn  asn lys ala tyr asn  leu phe met lys asn  glu thr met    1175                 1180                 1185tyr ala  asp asn his ser thr  glu asp ile tyr ala  ile gly leu    1190                 1195                 1200arg glu  gln thr lys asp ile  asn asp asn ile ile  phe gln ile    1205                 1210                 1215gln pro  met asn asn thr tyr  tyr tyr ala ser gln  ile phe lys    1220                 1225                 1230ser asn  phe asn gly glu asn  ile ser gly ile cys  ser ile gly    1235                 1240                 1245thr tyr  arg phe arg leu gly  gly asp trp tyr arg  his asn tyr    1250                 1255                 1260leu val  pro thr val lys gln  gly asn tyr ala ser  leu leu glu    1265                 1270                 1275ser thr  ser thr his trp gly  phe val pro val ser  glu    1280                 1285                 1290<210>  4<211>  1276<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  4met thr trp pro val lys asp phe asn tyr ser asp pro val asn asp1               5                   10                  15asn asp ile leu tyr leu arg ile pro gln asn lys leu ile thr thr            20                  25                  30pro val lys ala phe met ile thr gln asn ile trp val ile pro glu        35                  40                  45arg phe ser ser asp thr asn pro ser leu ser lys pro pro arg pro    50                  55                  60thr ser lys tyr gln ser tyr tyr asp pro ser tyr leu ser thr asp65                  70                  75                  80glu gln lys asp thr phe leu lys gly ile ile lys leu phe lys arg                85                  90                  95ile asn glu arg asp ile gly lys lys leu ile asn tyr leu val val            100                 105                 110gly ser pro phe met gly asp ser ser thr pro glu asp thr phe asp        115                 120                 125phe thr arg his thr thr asn ile ala val glu lys phe glu asn gly    130                 135                 140ser trp lys val thr asn ile ile thr pro ser val leu ile phe gly145                 150                 155                 160pro leu pro asn ile leu asp tyr thr ala ser leu thr leu gln gly                165                 170                 175gln gln ser asn pro ser phe glu gly phe gly thr leu ser ile leu            180                 185                 190lys val ala pro glu phe leu leu thr phe ser asp val thr ser asn        195                 200                 205gln ser ser ala val leu gly lys ser ile phe cys met asp pro val    210                 215                 220ile ala leu met his glu leu thr his ser leu his gln leu tyr gly225                 230                 235                 240ile asn ile pro ser asp lys arg ile arg pro gln val ser glu gly                245                 250                 255phe phe ser gln asp gly pro asn val gln phe glu glu leu tyr thr            260                 265                 270phe gly gly leu asp val glu ile ile pro gln ile glu arg ser gln        275                 280                 285leu arg glu lys ala leu gly his tyr lys asp ile ala lys arg leu    290                 295                 300asn asn ile asn lys thr ile pro ser ser trp ile ser asn ile asp305                 310                 315                 320lys tyr lys lys ile phe ser glu lys tyr asn phe asp lys asp asn                325                 330                 335thr gly asn phe val val asn ile asp lys phe asn ser leu tyr ser            340                 345                 350asp leu thr asn val met ser glu val val tyr ser ser gln tyr asn        355                 360                 365val lys asn arg thr his tyr phe ser arg his tyr leu pro val phe    370                 375                 380ala asn ile leu asp asp asn ile tyr thr ile arg asp gly phe asn385                 390                 395                 400leu thr asn lys gly phe asn ile glu asn ser gly gln asn ile glu                405                 410                 415arg asn pro ala leu gln lys leu ser ser glu ser val val asp leu            420                 425                 430phe thr lys val cys leu arg leu thr lys asn ser arg asp asp ser        435                 440                 445thr cys ile lys val lys asn asn arg leu pro tyr val ala asp lys    450                 455                 460asp ser ile ser gln glu ile phe glu asn lys ile ile thr asp glu465                 470                 475                 480thr asn val gln asn tyr ser asp lys phe ser leu asp glu ser ile                485                 490                 495leu asp gly gln val pro ile asn pro glu ile val asp pro leu leu            500                 505                 510pro asn val asn met glu pro leu asn leu pro gly glu glu ile val        515                 520                 525phe tyr asp asp ile thr lys tyr val asp tyr leu asn ser tyr tyr    530                 535                 540tyr leu glu ser gln lys leu ser asn asn val glu asn ile thr leu545                 550                 555                 560thr thr ser val glu glu ala leu gly tyr ser asn lys ile tyr thr                565                 570                 575phe leu pro ser leu ala glu lys val asn lys gly val gln ala gly            580                 585                 590leu phe leu asn trp ala asn glu val val glu asp phe thr thr asn        595                 600                 605ile met lys lys asp thr leu asp lys ile ser asp val ser val ile    610                 615                 620ile pro tyr ile gly pro ala leu asn ile gly asn ser ala leu arg625                 630                 635                 640gly asn phe asn gln ala phe ala thr ala gly val ala phe leu leu                645                 650                 655glu gly phe pro glu phe thr ile pro ala leu gly val phe thr phe            660                 665                 670tyr ser ser ile gln glu arg glu lys ile ile lys thr ile glu asn        675                 680                 685cys leu glu gln arg val lys arg trp lys asp ser tyr gln trp met    690                 695                 700val ser asn trp leu ser arg ile thr thr gln phe asn his ile asn705                 710                 715                 720tyr gln met tyr asp ser leu ser tyr gln ala asp ala ile lys ala                725                 730                 735lys ile asp leu glu tyr lys lys tyr ser gly ser asp lys glu asn            740                 745                 750ile lys ser gln val glu asn leu lys asn ser leu asp val lys ile        755                 760                 765ser glu ala met asn asn ile asn lys phe ile arg glu cys ser val    770                 775                 780thr tyr leu phe lys asn met leu pro lys val ile asp glu leu asn785                 790                 795                 800lys phe asp leu arg thr lys thr glu leu ile asn leu ile asp ser                805                 810                 815his asn ile ile leu val gly glu val asp arg leu lys ala lys val            820                 825                 830asn glu ser phe glu asn thr met pro phe asn ile phe ser tyr thr        835                 840                 845asn asn ser leu leu lys asp ile ile asn glu tyr phe asn ser ile    850                 855                 860asn asp ser lys ile leu ser leu gln asn lys lys asn ala leu val865                 870                 875                 880asp thr ser gly tyr asn ala glu val arg val gly asp asn val gln                885                 890                 895leu asn thr ile tyr thr asn asp phe lys leu ser ser ser gly asp            900                 905                 910lys ile ile val asn leu asn asn asn ile leu tyr ser ala ile tyr        915                 920                 925glu asn ser ser val ser phe trp ile lys ile ser lys asp leu thr    930                 935                 940asn ser his asn glu tyr thr ile ile asn ser ile glu gln asn ser945                 950                 955                 960gly trp lys leu cys ile arg asn gly asn ile glu trp ile leu gln                965                 970                 975asp val asn arg lys tyr lys ser leu ile phe asp tyr ser glu ser            980                 985                 990leu ser his thr gly tyr thr asn  lys trp phe phe val  thr ile thr        995                 1000                 1005asn asn  ile met gly tyr met  lys leu tyr ile asn  gly glu leu    1010                 1015                 1020lys gln  ser gln lys ile glu  asp leu asp glu val  lys leu asp    1025                 1030                 1035lys thr  ile val phe gly ile  asp glu asn ile asp  glu asn gln    1040                 1045                 1050met leu  trp ile arg asp phe  asn ile phe ser lys  glu leu ser    1055                 1060                 1065asn glu  asp ile asn ile val  tyr glu gly gln ile  leu arg asn    1070                 1075                 1080val ile  lys asp tyr trp gly  asn pro leu lys phe  asp thr glu    1085                 1090                 1095tyr tyr  ile ile asn asp asn  tyr ile asp arg tyr  ile ala pro    1100                 1105                 1110glu ser  asn val leu val leu  val gln tyr pro asp  arg ser lys    1115                 1120                 1125leu tyr  thr gly asn pro ile  thr ile lys ser val  ser asp lys    1130                 1135                 1140asn pro  tyr ser arg ile leu  asn gly asp asn ile  ile leu his    1145                 1150                 1155met leu  tyr asn ser arg lys  tyr met ile ile arg  asp thr asp    1160                 1165                 1170thr ile  tyr ala thr gln gly  gly glu cys ser gln  asn cys val    1175                 1180                 1185tyr ala  leu lys leu gln ser  asn leu gly asn tyr  gly ile gly    1190                 1195                 1200ile phe  ser ile lys asn ile  val ser lys asn lys  tyr cys ser    1205                 1210                 1215gln ile  phe ser ser phe arg  glu asn thr met leu  leu ala asp    1220                 1225                 1230ile tyr  lys pro trp arg phe  ser phe lys asn ala  tyr thr pro    1235                 1240                 1245val ala  val thr asn tyr glu  thr lys leu leu ser  thr ser ser    1250                 1255                 1260phe trp  lys phe ile ser arg  asp pro gly trp val  glu    1265                 1270                 1275<210>  5<211>  1252<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  5met pro lys ile asn ser phe asn tyr asn asp pro val asn asp arg1               5                   10                  15thr ile leu tyr ile lys pro gly gly cys gln glu phe tyr lys ser            20                  25                  30phe asn ile met lys asn ile trp ile ile pro glu arg asn val ile        35                  40                  45gly thr thr pro gln asp phe his pro pro thr ser leu lys asn gly    50                  55                  60asp ser ser tyr tyr asp pro asn tyr leu gln ser asp glu glu lys65                  70                  75                  80asp arg phe leu lys ile val thr lys ile phe asn arg ile asn asn                85                  90                  95asn leu ser gly gly ile leu leu glu glu leu ser lys ala asn pro            100                 105                 110tyr leu gly asn asp asn thr pro asp asn gln phe his ile gly asp        115                 120                 125ala ser ala val glu ile lys phe ser asn gly ser gln asp ile leu    130                 135                 140leu pro asn val ile ile met gly ala glu pro asp leu phe glu thr145                 150                 155                 160asn ser ser asn ile ser leu arg asn asn tyr met pro ser asn his                165                 170                 175gly phe gly ser ile ala ile val thr phe ser pro glu tyr ser phe            180                 185                 190arg phe asn asp asn ser met asn glu phe ile gln asp pro ala leu        195                 200                 205thr leu met his glu leu ile his ser leu his gly leu tyr gly ala    210                 215                 220lys gly ile thr thr lys tyr thr ile thr gln lys gln asn pro leu225                 230                 235                 240ile thr asn ile arg gly thr asn ile glu glu phe leu thr phe gly                245                 250                 255gly thr asp leu asn ile ile thr ser ala gln ser asn asp ile tyr            260                 265                 270thr asn leu leu ala asp tyr lys lys ile ala ser lys leu ser lys        275                 280                 285val gln val ser asn pro leu leu asn pro tyr lys asp val phe glu    290                 295                 300ala lys tyr gly leu asp lys asp ala ser gly ile tyr ser val asn305                 310                 315                 320ile asn lys phe asn asp ile phe lys lys leu tyr ser phe thr glu                325                 330                 335phe asp leu ala thr lys phe gln val lys cys arg gln thr tyr ile            340                 345                 350gly gln tyr lys tyr phe lys leu ser asn leu leu asn asp ser ile        355                 360                 365tyr asn ile ser glu gly tyr asn ile asn asn leu lys val asn phe    370                 375                 380arg gly gln asn ala asn leu asn pro arg ile ile thr pro ile thr385                 390                 395                 400gly arg gly leu val lys lys ile ile arg phe cys lys asn ile val                405                 410                 415ser val lys gly ile arg lys ser ile cys ile glu ile asn asn gly            420                 425                 430glu leu phe phe val ala ser glu asn ser tyr asn asp asp asn ile        435                 440                 445asn thr pro lys glu ile asp asp thr val thr ser asn asn asn tyr    450                 455                 460glu asn asp leu asp gln val ile leu asn phe asn ser glu ser ala465                 470                 475                 480pro gly leu ser asp glu lys leu asn leu thr ile gln asn asp ala                485                 490                 495tyr ile pro lys tyr asp ser asn gly thr ser asp ile glu gln his            500                 505                 510asp val asn glu leu asn val phe phe tyr leu asp ala gln lys val        515                 520                 525pro glu gly glu asn asn val asn leu thr ser ser ile asp thr ala    530                 535                 540leu leu glu gln pro lys ile tyr thr phe phe ser ser glu phe ile545                 550                 555                 560asn asn val asn lys pro val gln ala ala leu phe val ser trp ile                565                 570                 575gln gln val leu val asp phe thr thr glu ala asn gln lys ser thr            580                 585                 590val asp lys ile ala asp ile ser ile val val pro tyr ile gly leu        595                 600                 605ala leu asn ile gly asn glu ala gln lys gly asn phe lys asp ala    610                 615                 620leu glu leu leu gly ala gly ile leu leu glu phe glu pro glu leu625                 630                 635                 640leu ile pro thr ile leu val phe thr ile lys ser phe leu gly ser                645                 650                 655ser asp asn lys asn lys val ile lys ala ile asn asn ala leu lys            660                 665                 670glu arg asp glu lys trp lys glu val tyr ser phe ile val ser asn        675                 680                 685trp met thr lys ile asn thr gln phe asn lys arg lys glu gln met    690                 695                 700tyr gln ala leu gln asn gln val asn ala ile lys thr ile ile glu705                 710                 715                 720ser lys tyr asn ser tyr thr leu glu glu lys asn glu leu thr asn                725                 730                 735lys tyr asp ile lys gln ile glu asn glu leu asn gln lys val ser            740                 745                 750ile ala met asn asn ile asp arg phe leu thr glu ser ser ile ser        755                 760                 765tyr leu met lys leu ile asn glu val lys ile asn lys leu arg glu    770                 775                 780tyr asp glu asn val lys thr tyr leu leu asn tyr ile ile gln his785                 790                 795                 800gly ser ile leu gly glu ser gln gln glu leu asn ser met val thr                805                 810                 815asp thr leu asn asn ser ile pro phe lys leu ser ser tyr thr asp            820                 825                 830asp lys ile leu ile ser tyr phe asn lys phe phe lys arg ile lys        835                 840                 845ser ser ser val leu asn met arg tyr lys asn asp lys tyr val asp    850                 855                 860thr ser gly tyr asp ser asn ile asn ile asn gly asp val tyr lys865                 870                 875                 880tyr pro thr asn lys asn gln phe gly ile tyr asn asp lys leu ser                885                 890                 895glu val asn ile ser gln asn asp tyr ile ile tyr asp asn lys tyr            900                 905                 910lys asn phe ser ile ser phe trp val arg ile pro asn tyr asp asn        915                 920                 925lys ile val asn val asn asn glu tyr thr ile ile asn cys met arg    930                 935                 940asp asn asn ser gly trp lys val ser leu asn his asn glu ile ile945                 950                 955                 960trp thr leu gln asp asn ala gly ile asn gln lys leu ala phe asn                965                 970                 975tyr gly asn ala asn gly ile ser asp tyr ile asn lys trp ile phe            980                 985                 990val thr ile thr asn asp arg leu  gly asp ser lys leu  tyr ile asn        995                 1000                 1005gly asn  leu ile asp gln lys  ser ile leu asn leu  gly asn ile    1010                 1015                 1020his val  ser asp asn ile leu  phe lys ile val asn  cys ser tyr    1025                 1030                 1035thr arg  tyr ile gly ile arg  tyr phe asn ile phe  asp lys glu    1040                 1045                 1050leu asp  glu thr glu ile gln  thr leu tyr ser asn  glu pro asn    1055                 1060                 1065thr asn  ile leu lys asp phe  trp gly asn tyr leu  leu tyr asp    1070                 1075                 1080lys glu  tyr tyr leu leu asn  val leu lys pro asn  asn phe ile    1085                 1090                 1095asp arg  arg lys asp ser thr  leu ser ile asn asn  ile arg ser    1100                 1105                 1110thr ile  leu leu ala asn arg  leu tyr ser gly ile  lys val lys    1115                 1120                 1125ile gln  arg val asn asn ser  ser thr asn asp asn  leu val arg    1130                 1135                 1140lys asn  asp gln val tyr ile  asn phe val ala ser  lys thr his    1145                 1150                 1155leu phe  pro leu tyr ala asp  thr ala thr thr asn  lys glu lys    1160                 1165                 1170thr ile  lys ile ser ser ser  gly asn arg phe asn  gln val val    1175                 1180                 1185val met  asn ser val gly asn  asn cys thr met asn  phe lys asn    1190                 1195                 1200asn asn  gly asn asn ile gly  leu leu gly phe lys  ala asp thr    1205                 1210                 1215val val  ala ser thr trp tyr  tyr thr his met arg  asp his thr    1220                 1225                 1230asn ser  asn gly cys phe trp  asn phe ile ser glu  glu his gly    1235                 1240                 1245trp gln  glu lys    1250<210>  6<211>  1278<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  6met pro val val ile asn ser phe asn tyr asn asp pro val asn asp1               5                   10                  15asp thr ile leu tyr met gln ile pro tyr glu glu lys ser lys lys            20                  25                  30tyr tyr lys ala phe glu ile met arg asn val trp ile ile pro glu        35                  40                  45arg asn thr ile gly thr asp pro ser asp phe asp pro pro ala ser    50                  55                  60leu glu asn gly ser ser ala tyr tyr asp pro asn tyr leu thr thr65                  70                  75                  80asp ala glu lys asp arg tyr leu lys thr thr ile lys leu phe lys                85                  90                  95arg ile asn ser asn pro ala gly glu val leu leu gln glu ile ser            100                 105                 110tyr ala lys pro tyr leu gly asn glu his thr pro ile asn glu phe        115                 120                 125his pro val thr arg thr thr ser val asn ile lys ser ser thr asn    130                 135                 140val lys ser ser ile ile leu asn leu leu val leu gly ala gly pro145                 150                 155                 160asp ile phe glu asn ser ser tyr pro val arg lys leu met asp ser                165                 170                 175gly gly val tyr asp pro ser asn asp gly phe gly ser ile asn ile            180                 185                 190val thr phe ser pro glu tyr glu tyr thr phe asn asp ile ser gly        195                 200                 205gly tyr asn ser ser thr glu ser phe ile ala asp pro ala ile ser    210                 215                 220leu ala his glu leu ile his ala leu his gly leu tyr gly ala arg225                 230                 235                 240gly val thr tyr lys glu thr ile lys val lys gln ala pro leu met                245                 250                 255ile ala glu lys pro ile arg leu glu glu phe leu thr phe gly gly            260                 265                 270gln asp leu asn ile ile thr ser ala met lys glu lys ile tyr asn        275                 280                 285asn leu leu ala asn tyr glu lys ile ala thr arg leu ser arg val    290                 295                 300asn ser ala pro pro glu tyr asp ile asn glu tyr lys asp tyr phe305                 310                 315                 320gln trp lys tyr gly leu asp lys asn ala asp gly ser tyr thr val                325                 330                 335asn glu asn lys phe asn glu ile tyr lys lys leu tyr ser phe thr            340                 345                 350glu ile asp leu ala asn lys phe lys val lys cys arg asn thr tyr        355                 360                 365phe ile lys tyr gly phe leu lys val pro asn leu leu asp asp asp    370                 375                 380ile tyr thr val ser glu gly phe asn ile gly asn leu ala val asn385                 390                 395                 400asn arg gly gln asn ile lys leu asn pro lys ile ile asp ser ile                405                 410                 415pro asp lys gly leu val glu lys ile val lys phe cys lys ser val            420                 425                 430ile pro arg lys gly thr lys ala pro pro arg leu cys ile arg val        435                 440                 445asn asn arg glu leu phe phe val ala ser glu ser ser tyr asn glu    450                 455                 460asn asp ile asn thr pro lys glu ile asp asp thr thr asn leu asn465                 470                 475                 480asn asn tyr arg asn asn leu asp glu val ile leu asp tyr asn ser                485                 490                 495glu thr ile pro gln ile ser asn gln thr leu asn thr leu val gln            500                 505                 510asp asp ser tyr val pro arg tyr asp ser asn gly thr ser glu ile        515                 520                 525glu glu his asn val val asp leu asn val phe phe tyr leu his ala    530                 535                 540gln lys val pro glu gly glu thr asn ile ser leu thr ser ser ile545                 550                 555                 560asp thr ala leu ser glu glu ser gln val tyr thr phe phe ser ser                565                 570                 575glu phe ile asn thr ile asn lys pro val his ala ala leu phe ile            580                 585                 590ser trp ile asn gln val ile arg asp phe thr thr glu ala thr gln        595                 600                 605lys ser thr phe asp lys ile ala asp ile ser leu val val pro tyr    610                 615                 620val gly leu ala leu asn ile gly asn glu val gln lys glu asn phe625                 630                 635                 640lys glu ala phe glu leu leu gly ala gly ile leu leu glu phe val                645                 650                 655pro glu leu leu ile pro thr ile leu val phe thr ile lys ser phe            660                 665                 670ile gly ser ser glu asn lys asn lys ile ile lys ala ile asn asn        675                 680                 685ser leu met glu arg glu thr lys trp lys glu ile tyr ser trp ile    690                 695                 700val ser asn trp leu thr arg ile asn thr gln phe asn lys arg lys705                 710                 715                 720glu gln met tyr gln ala leu gln asn gln val asp ala ile lys thr                725                 730                 735val ile glu tyr lys tyr asn asn tyr thr ser asp glu arg asn arg            740                 745                 750leu glu ser glu tyr asn ile asn asn ile arg glu glu leu asn lys        755                 760                 765lys val ser leu ala met glu asn ile glu arg phe ile thr glu ser    770                 775                 780ser ile phe tyr leu met lys leu ile asn glu ala lys val ser lys785                 790                 795                 800leu arg glu tyr asp glu gly val lys glu tyr leu leu asp tyr ile                805                 810                 815ser glu his arg ser ile leu gly asn ser val gln glu leu asn asp            820                 825                 830leu val thr ser thr leu asn asn ser ile pro phe glu leu ser ser        835                 840                 845tyr thr asn asp lys ile leu ile leu tyr phe asn lys leu tyr lys    850                 855                 860lys ile lys asp asn ser ile leu asp met arg tyr glu asn asn lys865                 870                 875                 880phe ile asp ile ser gly tyr gly ser asn ile ser ile asn gly asp                885                 890                 895val tyr ile tyr ser thr asn arg asn gln phe gly ile tyr ser ser            900                 905                 910lys pro ser glu val asn ile ala gln asn asn asp ile ile tyr asn        915                 920                 925gly arg tyr gln asn phe ser ile ser phe trp val arg ile pro lys    930                 935                 940tyr phe asn lys val asn leu asn asn glu tyr thr ile ile asp cys945                 950                 955                 960ile arg asn asn asn ser gly trp lys ile ser leu asn tyr asn lys                965                 970                 975ile ile trp thr leu gln asp thr ala gly asn asn gln lys leu val            980                 985                 990phe asn tyr thr gln met ile ser  ile ser asp tyr ile  asn lys trp        995                 1000                 1005ile phe  val thr ile thr asn  asn arg leu gly asn  ser arg ile    1010                 1015                 1020tyr ile  asn gly asn leu ile  asp glu lys ser ile  ser asn leu    1025                 1030                 1035gly asp  ile his val ser asp  asn ile leu phe lys  ile val gly    1040                 1045                 1050cys asn  asp thr arg tyr val  gly ile arg tyr phe  lys val phe    1055                 1060                 1065asp thr  glu leu gly lys thr  glu ile glu thr leu  tyr ser asp    1070                 1075                 1080glu pro  asp pro ser ile leu  lys asp phe trp gly  asn tyr leu    1085                 1090                 1095leu tyr  asn lys arg tyr tyr  leu leu asn leu leu  arg thr asp    1100                 1105                 1110lys ser  ile thr gln asn ser  asn phe leu asn ile  asn gln gln    1115                 1120                 1125arg gly  val tyr gln lys pro  asn ile phe ser asn  thr arg leu    1130                 1135                 1140tyr thr  gly val glu val ile  ile arg lys asn gly  ser thr asp    1145                 1150                 1155ile ser  asn thr asp asn phe  val arg lys asn asp  leu ala tyr    1160                 1165                 1170ile asn  val val asp arg asp  val glu tyr arg leu  tyr ala asp    1175                 1180                 1185ile ser  ile ala lys pro glu  lys ile ile lys leu  ile arg thr    1190                 1195                 1200ser asn  ser asn asn ser leu  gly gln ile ile val  met asp ser    1205                 1210                 1215ile gly  asn asn cys thr met  asn phe gln asn asn  asn gly gly    1220                 1225                 1230asn ile  gly leu leu gly phe  his ser asn asn leu  val ala ser    1235                 1240                 1245ser trp  tyr tyr asn asn ile  arg lys asn thr ser  ser asn gly    1250                 1255                 1260cys phe  trp ser phe ile ser  lys glu his gly trp  gln glu asn    1265                 1270                 1275<210>  7<211>  1297<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  7met pro val asn ile lys asn phe asn tyr asn asp pro ile asn asn1               5                   10                  15asp asp ile ile met met glu pro phe asn asp pro gly pro gly thr            20                  25                  30tyr tyr lys ala phe arg ile ile asp arg ile trp ile val pro glu        35                  40                  45arg phe thr tyr gly phe gln pro asp gln phe asn ala ser thr gly    50                  55                  60val phe ser lys asp val tyr glu tyr tyr asp pro thr tyr leu lys65                  70                  75                  80thr asp ala glu lys asp lys phe leu lys thr met ile lys leu phe                85                  90                  95asn arg ile asn ser lys pro ser gly gln arg leu leu asp met ile            100                 105                 110val asp ala ile pro tyr leu gly asn ala ser thr pro pro asp lys        115                 120                 125phe ala ala asn val ala asn val ser ile asn lys lys ile ile gln    130                 135                 140pro gly ala glu asp gln ile lys gly leu met thr asn leu ile ile145                 150                 155                 160phe gly pro gly pro val leu ser asp asn phe thr asp ser met ile                165                 170                 175met asn gly his ser pro ile ser glu gly phe gly ala arg met met            180                 185                 190ile arg phe cys pro ser cys leu asn val phe asn asn val gln glu        195                 200                 205asn lys asp thr ser ile phe ser arg arg ala tyr phe ala asp pro    210                 215                 220ala leu thr leu met his glu leu ile his val leu his gly leu tyr225                 230                 235                 240gly ile lys ile ser asn leu pro ile thr pro asn thr lys glu phe                245                 250                 255phe met gln his ser asp pro val gln ala glu glu leu tyr thr phe            260                 265                 270gly gly his asp pro ser val ile ser pro ser thr asp met asn ile        275                 280                 285tyr asn lys ala leu gln asn phe gln asp ile ala asn arg leu asn    290                 295                 300ile val ser ser ala gln gly ser gly ile asp ile ser leu tyr lys305                 310                 315                 320gln ile tyr lys asn lys tyr asp phe val glu asp pro asn gly lys                325                 330                 335tyr ser val asp lys asp lys phe asp lys leu tyr lys ala leu met            340                 345                 350phe gly phe thr glu thr asn leu ala gly glu tyr gly ile lys thr        355                 360                 365arg tyr ser tyr phe ser glu tyr leu pro pro ile lys thr glu lys    370                 375                 380leu leu asp asn thr ile tyr thr gln asn glu gly phe asn ile ala385                 390                 395                 400ser lys asn leu lys thr glu phe asn gly gln asn lys ala val asn                405                 410                 415lys glu ala tyr glu glu ile ser leu glu his leu val ile tyr arg            420                 425                 430ile ala met cys lys pro val met tyr lys asn thr gly lys ser glu        435                 440                 445gln cys ile ile val asn asn glu asp leu phe phe ile ala asn lys    450                 455                 460asp ser phe ser lys asp leu ala lys ala glu thr ile ala tyr asn465                 470                 475                 480thr gln asn asn thr ile glu asn asn phe ser ile asp gln leu ile                485                 490                 495leu asp asn asp leu ser ser gly ile asp leu pro asn glu asn thr            500                 505                 510glu pro phe thr asn phe asp asp ile asp ile pro val tyr ile lys        515                 520                 525gln ser ala leu lys lys ile phe val asp gly asp ser leu phe glu    530                 535                 540tyr leu his ala gln thr phe pro ser asn ile glu asn leu gln leu545                 550                 555                 560thr asn ser leu asn asp ala leu arg asn asn asn lys val tyr thr                565                 570                 575phe phe ser thr asn leu val glu lys ala asn thr val val gly ala            580                 585                 590ser leu phe val asn trp val lys gly val ile asp asp phe thr ser        595                 600                 605glu ser thr gln lys ser thr ile asp lys val ser asp val ser ile    610                 615                 620ile ile pro tyr ile gly pro ala leu asn val gly asn glu thr ala625                 630                 635                 640lys glu asn phe lys asn ala phe glu ile gly gly ala ala ile leu                645                 650                 655met glu phe ile pro glu leu ile val pro ile val gly phe phe thr            660                 665                 670leu glu ser tyr val gly asn lys gly his ile ile met thr ile ser        675                 680                 685asn ala leu lys lys arg asp gln lys trp thr asp met tyr gly leu    690                 695                 700ile val ser gln trp leu ser thr val asn thr gln phe tyr thr ile705                 710                 715                 720lys glu arg met tyr asn ala leu asn asn gln ser gln ala ile glu                725                 730                 735lys ile ile glu asp gln tyr asn arg tyr ser glu glu asp lys met            740                 745                 750asn ile asn ile asp phe asn asp ile asp phe lys leu asn gln ser        755                 760                 765ile asn leu ala ile asn asn ile asp asp phe ile asn gln cys ser    770                 775                 780ile ser tyr leu met asn arg met ile pro leu ala val lys lys leu785                 790                 795                 800lys asp phe asp asp asn leu lys arg asp leu leu glu tyr ile asp                805                 810                 815thr asn glu leu tyr leu leu asp glu val asn ile leu lys ser lys            820                 825                 830val asn arg his leu lys asp ser ile pro phe asp leu ser leu tyr        835                 840                 845thr lys asp thr ile leu ile gln val phe asn asn tyr ile ser asn    850                 855                 860ile ser ser asn ala ile leu ser leu ser tyr arg gly gly arg leu865                 870                 875                 880ile asp ser ser gly tyr gly ala thr met asn val gly ser asp val                885                 890                 895ile phe asn asp ile gly asn gly gln phe lys leu asn asn ser glu            900                 905                 910asn ser asn ile thr ala his gln ser lys phe val val tyr asp ser        915                 920                 925met phe asp asn phe ser ile asn phe trp val arg thr pro lys tyr    930                 935                 940asn asn asn asp ile gln thr tyr leu gln asn glu tyr thr ile ile945                 950                 955                 960ser cys ile lys asn asp ser gly trp lys val ser ile lys gly asn                965                 970                 975arg ile ile trp thr leu ile asp val asn ala lys ser lys ser ile            980                 985                 990phe phe glu tyr ser ile lys asp  asn ile ser asp tyr  ile asn lys        995                 1000                 1005trp phe  ser ile thr ile thr  asn asp arg leu gly  asn ala asn    1010                 1015                 1020ile tyr  ile asn gly ser leu  lys lys ser glu lys  ile leu asn    1025                 1030                 1035leu asp  arg ile asn ser ser  asn asp ile asp phe  lys leu ile    1040                 1045                 1050asn cys  thr asp thr thr lys  phe val trp ile lys  asp phe asn    1055                 1060                 1065ile phe  gly arg glu leu asn  ala thr glu val ser  ser leu tyr    1070                 1075                 1080trp ile  gln ser ser thr asn  thr leu lys asp phe  trp gly asn    1085                 1090                 1095pro leu  arg tyr asp thr gln  tyr tyr leu phe asn  gln gly met    1100                 1105                 1110gln asn  ile tyr ile lys tyr  phe ser lys ala ser  met gly glu    1115                 1120                 1125thr ala  pro arg thr asn phe  asn asn ala ala ile  asn tyr gln    1130                 1135                 1140asn leu  tyr leu gly leu arg  phe ile ile lys lys  ala ser asn    1145                 1150                 1155ser arg  asn ile asn asn asp  asn ile val arg glu  gly asp tyr    1160                 1165                 1170ile tyr  leu asn ile asp asn  ile ser asp glu ser  tyr arg val    1175                 1180                 1185tyr val  leu val asn ser lys  glu ile gln thr gln  leu phe leu    1190                 1195                 1200ala pro  ile asn asp asp pro  thr phe tyr asp val  leu gln ile    1205                 1210                 1215lys lys  tyr tyr glu lys thr  thr tyr asn cys gln  ile leu cys    1220                 1225                 1230glu lys  asp thr lys thr phe  gly leu phe gly ile  gly lys phe    1235                 1240                 1245val lys  asp tyr gly tyr val  trp asp thr tyr asp  asn tyr phe    1250                 1255                 1260cys ile  ser gln trp tyr leu  arg arg ile ser glu  asn ile asn    1265                 1270                 1275lys leu  arg leu gly cys asn  trp gln phe ile pro  val asp glu    1280                 1285                 1290gly trp  thr glu    1295<210>  8<211>  1285<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  8met thr trp pro val lys asp phe asn tyr ser asp pro val asn asp1               5                   10                  15asn asp ile leu tyr leu arg ile pro gln asn lys leu ile thr thr            20                  25                  30pro val lys ala phe met ile thr gln asn ile trp val ile pro glu        35                  40                  45arg phe ser ser asp thr asn pro ser leu ser lys pro pro arg pro    50                  55                  60thr ser lys tyr gln ser tyr tyr asp pro ser tyr leu ser thr asp65                  70                  75                  80glu gln lys asp thr phe leu lys gly ile ile lys leu phe lys arg                85                  90                  95ile asn glu arg asp ile gly lys lys leu ile asn tyr leu val val            100                 105                 110gly ser pro phe met gly asp ser ser thr pro glu asp thr phe asp        115                 120                 125phe thr arg his thr thr asn ile ala val glu lys phe glu asn gly    130                 135                 140ser trp lys val thr asn ile ile thr pro ser val leu ile phe gly145                 150                 155                 160pro leu pro asn ile leu asp tyr thr ala ser leu thr leu gln gly                165                 170                 175gln gln ser asn pro ser phe glu gly phe gly thr leu ser ile leu            180                 185                 190lys val ala pro glu phe leu leu thr phe ser asp val thr ser asn        195                 200                 205gln ser ser ala val leu gly lys ser ile phe cys met asp pro val    210                 215                 220ile ala leu met his glu leu thr his ser leu his gln leu tyr gly225                 230                 235                 240ile asn ile pro ser asp lys arg ile arg pro gln val ser glu gly                245                 250                 255phe phe ser gln asp gly pro asn val gln phe glu glu leu tyr thr            260                 265                 270phe gly gly ser asp val glu ile ile pro gln ile glu arg leu gln        275                 280                 285leu arg glu lys ala leu gly his tyr lys asp ile ala lys arg leu    290                 295                 300asn asn ile asn lys thr ile pro ser ser trp ser ser asn ile asp305                 310                 315                 320lys tyr lys lys ile phe ser glu lys tyr asn phe asp lys asp asn                325                 330                 335thr gly asn phe val val asn ile asp lys phe asn ser leu tyr ser            340                 345                 350asp leu thr asn val met ser glu val val tyr ser ser gln tyr asn        355                 360                 365val lys asn arg thr his tyr phe ser lys his tyr leu pro val phe    370                 375                 380ala asn ile leu asp asp asn ile tyr thr ile ile asn gly phe asn385                 390                 395                 400leu thr thr lys gly phe asn ile glu asn ser gly gln asn ile glu                405                 410                 415arg asn pro ala leu gln lys leu ser ser glu ser val val asp leu            420                 425                 430phe thr lys val cys leu arg leu thr arg asn ser arg asp asp ser        435                 440                 445thr cys ile gln val lys asn asn thr leu pro tyr val ala asp lys    450                 455                 460asp ser ile ser gln glu ile phe glu ser gln ile ile thr asp glu465                 470                 475                 480thr asn val glu asn tyr ser asp asn phe ser leu asp glu ser ile                485                 490                 495leu asp ala lys val pro thr asn pro glu ala val asp pro leu leu            500                 505                 510pro asn val asn met glu pro leu asn val pro gly glu glu glu val        515                 520                 525phe tyr asp asp ile thr lys asp val asp tyr leu asn ser tyr tyr    530                 535                 540tyr leu glu ala gln lys leu ser asn asn val glu asn ile thr leu545                 550                 555                 560thr thr ser val glu glu ala leu gly tyr ser asn lys ile tyr thr                565                 570                 575phe leu pro ser leu ala glu lys val asn lys gly val gln ala gly            580                 585                 590leu phe leu asn trp ala asn glu val val glu asp phe thr thr asn        595                 600                 605ile met lys lys asp thr leu asp lys ile ser asp val ser ala ile    610                 615                 620ile pro tyr ile gly pro ala leu asn ile gly asn ser ala leu arg625                 630                 635                 640gly asn phe lys gln ala phe ala thr ala gly val ala phe leu leu                645                 650                 655glu gly phe pro glu phe thr ile pro ala leu gly val phe thr phe            660                 665                 670tyr ser ser ile gln glu arg glu lys ile ile lys thr ile glu asn        675                 680                 685cys leu glu gln arg val lys arg trp lys asp ser tyr gln trp met    690                 695                 700val ser asn trp leu ser arg ile thr thr gln phe asn his ile ser705                 710                 715                 720tyr gln met tyr asp ser leu ser tyr gln ala asp ala ile lys ala                725                 730                 735lys ile asp leu glu tyr lys lys tyr ser gly ser asp lys glu asn            740                 745                 750ile lys ser gln val glu asn leu lys asn ser leu asp val lys ile        755                 760                 765ser glu ala met asn asn ile asn lys phe ile arg glu cys ser val    770                 775                 780thr tyr leu phe lys asn met leu pro lys val ile asp glu leu asn785                 790                 795                 800lys phe asp leu lys thr lys thr glu leu ile asn leu ile asp ser                805                 810                 815his asn ile ile leu val gly glu val asp arg leu lys ala lys val            820                 825                 830asn glu ser phe glu asn thr ile pro phe asn ile phe ser tyr thr        835                 840                 845asn asn ser leu leu lys asp met ile asn glu tyr phe asn ser ile    850                 855                 860asn asp ser lys ile leu ser leu gln asn lys lys asn thr leu met865                 870                 875                 880asp thr ser gly tyr asn ala glu val arg val glu gly asn val gln                885                 890                 895leu asn pro ile phe pro phe asp phe lys leu gly ser ser gly asp            900                 905                 910asp arg gly lys val ile val thr gln asn glu asn ile val tyr asn        915                 920                 925ala met tyr glu ser phe ser ile ser phe trp ile arg ile asn lys    930                 935                 940trp val ser asn leu pro gly tyr thr ile ile asp ser val lys asn945                 950                 955                 960asn ser gly trp ser ile gly ile ile ser asn phe leu val phe thr                965                 970                 975leu lys gln asn glu asn ser glu gln asp ile asn phe ser tyr asp            980                 985                 990ile ser lys asn ala ala gly tyr  asn lys trp phe phe  val thr ile        995                 1000                 1005thr thr  asn met met gly asn  met met ile tyr ile  asn gly lys    1010                 1015                 1020leu ile  asp thr ile lys val  lys glu leu thr gly  ile asn phe    1025                 1030                 1035ser lys  thr ile thr phe gln  met asn lys ile pro  asn thr gly    1040                 1045                 1050leu ile  thr ser asp ser asp  asn ile asn met trp  ile arg asp    1055                 1060                 1065phe tyr  ile phe ala lys glu  leu asp asp lys asp  ile asn ile    1070                 1075                 1080leu phe  asn ser leu gln tyr  thr asn val val lys  asp tyr trp    1085                 1090                 1095gly asn  asp leu arg tyr asp  lys glu tyr tyr met  ile asn val    1100                 1105                 1110asn tyr  met asn arg tyr met  ser lys lys gly asn  gly ile val    1115                 1120                 1125phe asn  thr arg lys asn asn  asn asp phe asn glu  gly tyr lys    1130                 1135                 1140ile ile  ile lys arg ile ile  gly asn thr asn asp  thr arg val    1145                 1150                 1155arg gly  glu asn val leu tyr  phe asn thr thr ile  asp asn lys    1160                 1165                 1170gln tyr  ser leu gly met tyr  lys pro ser arg asn  leu gly thr    1175                 1180                 1185asp leu  val pro leu gly ala  leu asp gln pro met  asp glu ile    1190                 1195                 1200arg lys  tyr gly ser phe ile  ile gln pro cys asn  thr phe asp    1205                 1210                 1215tyr tyr  ala ser gln leu phe  leu ser ser asn ala  thr thr asn    1220                 1225                 1230arg ile  gly ile leu ser ile  gly ser tyr ser phe  lys leu gly    1235                 1240                 1245asp asp  tyr trp phe asn his  glu tyr leu ile pro  val ile lys    1250                 1255                 1260ile glu  his tyr ala ser leu  leu glu ser thr ser  thr his trp    1265                 1270                 1275val phe  val pro ala ser glu    1280                 1285<210>  9<211>  1268<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  9met pro val asn ile asn asn phe asn tyr asn asp pro ile asn asn1               5                   10                  15thr thr ile leu tyr met lys met pro tyr tyr glu asp ser asn lys            20                  25                  30tyr tyr lys ala phe glu ile met asp asn val trp ile ile pro glu        35                  40                  45arg asn ile ile gly lys lys pro ser asp phe tyr pro pro ile ser    50                  55                  60leu asp ser gly ser ser ala tyr tyr asp pro asn tyr leu thr thr65                  70                  75                  80asp ala glu lys asp arg phe leu lys thr val ile lys leu phe asn                85                  90                  95arg ile asn ser asn pro ala gly gln val leu leu glu glu ile lys            100                 105                 110asn gly lys pro tyr leu gly asn asp his thr ala val asn glu phe        115                 120                 125cys ala asn asn arg ser thr ser val glu ile lys glu ser lys gly    130                 135                 140thr thr asp ser met leu leu asn leu val ile leu gly pro gly pro145                 150                 155                 160asn ile leu glu cys ser thr phe pro val arg ile phe pro asn asn                165                 170                 175ile ala tyr asp pro ser glu lys gly phe gly ser ile gln leu met            180                 185                 190ser phe ser thr glu tyr glu tyr ala phe asn asp asn thr asp leu        195                 200                 205phe ile ala asp pro ala ile ser leu ala his glu leu ile his val    210                 215                 220leu his gly leu tyr gly ala lys gly val thr asn lys lys val ile225                 230                 235                 240glu val asp gln gly ala leu met ala ala glu lys asp ile lys ile                245                 250                 255glu glu phe ile thr phe gly gly gln asp leu asn ile ile thr asn            260                 265                 270ser thr asn gln lys ile tyr asp asn leu leu ser asn tyr thr ala        275                 280                 285ile ala ser arg leu ser gln val asn ile asn asn ser ala leu asn    290                 295                 300thr thr tyr tyr lys asn phe phe gln trp lys tyr gly leu asp gln305                 310                 315                 320asp ser asn gly asn tyr thr val asn ile ser lys phe asn ala ile                325                 330                 335tyr lys lys leu phe ser phe thr glu cys asp leu ala gln lys phe            340                 345                 350gln val lys asn arg ser asn tyr leu phe his phe lys pro phe arg        355                 360                 365leu leu asp leu leu asp asp asn ile tyr ser ile ser glu gly phe    370                 375                 380asn ile gly ser leu arg val asn asn asn gly gln asn ile asn leu385                 390                 395                 400asn ser arg ile val gly pro ile pro asp asn gly leu val glu arg                405                 410                 415phe val gly leu cys lys ser ile val ser lys lys gly thr lys asn            420                 425                 430ser leu cys ile lys val asn asn arg asp leu phe phe val ala ser        435                 440                 445glu ser ser tyr asn glu asn gly ile asn ser pro lys glu ile asp    450                 455                 460asp thr thr ile thr asn asn asn tyr lys lys asn leu asp glu val465                 470                 475                 480ile leu asp tyr asn ser asp ala ile pro asn leu ser ser arg leu                485                 490                 495leu asn thr thr ala gln asn asp ser tyr val pro lys tyr asp ser            500                 505                 510asn gly thr ser glu ile lys glu tyr thr val asp lys leu asn val        515                 520                 525phe phe tyr leu tyr ala gln lys ala pro glu gly glu ser ala ile    530                 535                 540ser leu thr ser ser val asn thr ala leu leu asp ala ser lys val545                 550                 555                 560tyr thr phe phe ser ser asp phe ile asn thr val asn lys pro val                565                 570                 575gln ala ala leu phe ile ser trp ile gln gln val ile asn asp phe            580                 585                 590thr thr glu ala thr gln lys ser thr ile asp lys ile ala asp ile        595                 600                 605ser leu val val pro tyr val gly leu ala leu asn ile gly asn glu    610                 615                 620val gln lys gly asn phe lys glu ala ile glu leu leu gly ala gly625                 630                 635                 640ile leu leu glu phe val pro glu leu leu ile pro thr ile leu val                645                 650                 655phe thr ile lys ser phe ile asn ser asp asp ser lys asn lys ile            660                 665                 670ile lys ala ile asn asn ala leu arg glu arg glu leu lys trp lys        675                 680                 685glu val tyr ser trp ile val ser asn trp leu thr arg ile asn thr    690                 695                 700gln phe asn lys arg lys glu gln met tyr gln ala leu gln asn gln705                 710                 715                 720val asp gly ile lys lys ile ile glu tyr lys tyr asn asn tyr thr                725                 730                 735leu asp glu lys asn arg leu lys ala glu tyr asn ile tyr ser ile            740                 745                 750lys glu glu leu asn lys lys val ser leu ala met gln asn ile asp        755                 760                 765arg phe leu thr glu ser ser ile ser tyr leu met lys leu ile asn    770                 775                 780glu ala lys ile asn lys leu ser glu tyr asp lys arg val asn gln785                 790                 795                 800tyr leu leu asn tyr ile leu glu asn ser ser thr leu gly thr ser                805                 810                 815ser val gln glu leu asn asn leu val ser asn thr leu asn asn ser            820                 825                 830ile pro phe glu leu ser glu tyr thr asn asp lys ile leu ile ser        835                 840                 845tyr phe asn arg phe tyr lys arg ile ile asp ser ser ile leu asn    850                 855                 860met lys tyr glu asn asn arg phe ile asp ser ser gly tyr gly ser865                 870                 875                 880asn ile ser ile asn gly asp ile tyr ile tyr ser thr asn arg asn                885                 890                 895gln phe gly ile tyr ser ser arg leu ser glu val asn ile thr gln            900                 905                 910asn asn thr ile ile tyr asn ser arg tyr gln asn phe ser val ser        915                 920                 925phe trp val arg ile pro lys tyr asn asn leu lys asn leu asn asn    930                 935                 940glu tyr thr ile ile asn cys met arg asn asn asn ser gly trp lys945                 950                 955                 960ile ser leu asn tyr asn asn ile ile trp thr leu gln asp thr thr                965                 970                 975gly asn asn gln lys leu val phe asn tyr thr gln met ile asp ile            980                 985                 990ser asp tyr ile asn lys trp thr  phe val thr ile thr  asn asn arg        995                 1000                 1005leu gly  his ser lys leu tyr  ile asn gly asn leu  thr asp gln    1010                 1015                 1020lys ser  ile leu asn leu gly  asn ile his val asp  asp asn ile    1025                 1030                 1035leu phe  lys ile val gly cys  asn asp thr arg tyr  val gly ile    1040                 1045                 1050arg tyr  phe lys ile phe asn  met glu leu asp lys  thr glu ile    1055                 1060                 1065glu thr  leu tyr his ser glu  pro asp ser thr ile  leu lys asp    1070                 1075                 1080phe trp  gly asn tyr leu leu  tyr asn lys lys tyr  tyr leu leu    1085                 1090                 1095asn leu  leu lys pro asn met  ser val thr lys asn  ser asp ile    1100                 1105                 1110leu asn  ile asn arg gln arg  gly ile tyr ser lys  thr asn ile    1115                 1120                 1125phe ser  asn ala arg leu tyr  thr gly val glu val  ile ile arg    1130                 1135                 1140lys val  gly ser thr asp thr  ser asn thr asp asn  phe val arg    1145                 1150                 1155lys asn  asp thr val tyr ile  asn val val asp gly  asn ser glu    1160                 1165                 1170tyr gln  leu tyr ala asp val  ser thr ser ala val  glu lys thr    1175                 1180                 1185ile lys  leu arg arg ile ser  asn ser asn tyr asn  ser asn gln    1190                 1195                 1200met ile  ile met asp ser ile  gly asp asn cys thr  met asn phe    1205                 1210                 1215lys thr  asn asn gly asn asp  ile gly leu leu gly  phe his leu    1220                 1225                 1230asn asn  leu val ala ser ser  trp tyr tyr lys asn  ile arg asn    1235                 1240                 1245asn thr  arg asn asn gly cys  phe trp ser phe ile  ser lys glu    1250                 1255                 1260his gly  trp gln glu    1265<210>  10<211>  1304<212>  prt<213>  人工序列<220><223>  bont/abmy, 氨基酸序列<400>  10met pro phe val asn lys gln phe asn tyr lys asp pro val asn gly1               5                   10                  15val asp ile ala tyr ile lys ile pro asn ala gly gln met gln pro            20                  25                  30val lys ala phe lys ile his asn lys ile trp val ile pro glu arg        35                  40                  45asp thr phe thr asn pro glu glu gly asp leu asn pro pro pro glu    50                  55                  60ala lys gln val pro val ser tyr tyr asp ser thr tyr leu ser thr65                  70                  75                  80asp asn glu lys asp asn tyr leu lys gly val thr lys leu phe glu                85                  90                  95arg ile tyr ser thr asp leu gly arg met leu leu thr ser ile val            100                 105                 110arg gly ile pro phe trp gly gly ser thr ile asp thr glu leu lys        115                 120                 125val ile asp thr asn cys ile asn val ile gln pro asp gly ser tyr    130                 135                 140arg ser glu glu leu asn leu val ile ile gly pro ser ala asp ile145                 150                 155                 160ile gln phe glu cys lys ser phe gly his glu val leu asn leu thr                165                 170                 175arg asn gly tyr gly ser thr gln tyr ile arg phe ser pro asp phe            180                 185                 190thr phe gly phe glu glu ser leu glu val asp thr asn pro leu leu        195                 200                 205gly ala gly lys phe ala thr asp pro ala val thr leu ala his glu    210                 215                 220leu ile his ala gly his arg leu tyr gly ile ala ile asn pro asn225                 230                 235                 240arg val phe lys val asn thr asn ala tyr tyr glu met ser gly leu                245                 250                 255glu val ser phe glu glu leu arg thr phe gly gly his asp ala lys            260                 265                 270phe ile asp ser leu gln glu asn glu phe arg leu tyr tyr tyr asn        275                 280                 285lys phe lys asp ile ala ser thr leu asn lys ala lys ser ile val    290                 295                 300gly thr thr ala ser leu gln tyr met lys asn val phe lys glu lys305                 310                 315                 320tyr leu leu ser glu asp thr ser gly lys phe ser val asp lys leu                325                 330                 335lys phe asp lys leu tyr lys met leu thr glu ile tyr thr glu asp            340                 345                 350asn phe val lys phe phe lys val leu asn arg lys thr tyr leu asn        355                 360                 365phe asp lys ala val phe lys ile asn ile val pro lys val asn tyr    370                 375                 380thr ile tyr asp gly phe asn leu arg asn thr asn leu ala ala asn385                 390                 395                 400phe asn gly gln asn thr glu ile asn asn met asn phe thr lys leu                405                 410                 415lys asn phe thr gly leu phe glu phe tyr lys leu leu cys val arg            420                 425                 430gly ile ile thr ser lys thr lys ser leu asp lys gly tyr asn lys        435                 440                 445ala leu asn asp leu cys ile lys val asn asn trp asp leu phe phe    450                 455                 460ser pro ser glu asp asn phe thr asn asp leu asn lys gly glu glu465                 470                 475                 480ile thr ser asp thr asn ile glu ala ala glu glu asn ile ser leu                485                 490                 495asp leu ile gln gln tyr tyr leu thr phe asn phe asp asn glu pro            500                 505                 510glu asn ile ser ile glu asn leu ser ser asp ile ile gly gln leu        515                 520                 525glu leu met pro asn ile glu arg phe pro asn gly lys lys tyr glu    530                 535                 540leu asp lys tyr thr met phe his tyr leu arg ala gln glu phe glu545                 550                 555                 560his gly lys ser arg ile ala leu thr asn ser val asn glu ala leu                565                 570                 575leu asn pro ser arg val tyr thr phe phe ser ser asp tyr val lys            580                 585                 590lys val asn lys ala thr glu ala ala met phe leu gly trp val glu        595                 600                 605gln leu val tyr asp phe thr asp glu thr ser glu val ser thr thr    610                 615                 620asp lys ile ala asp ile thr ile ile ile pro tyr ile gly pro ala625                 630                 635                 640leu asn ile gly asn met leu tyr lys asp asp phe val gly ala leu                645                 650                 655ile phe ser gly ala val ile leu leu glu phe ile pro glu ile ala            660                 665                 670ile pro val leu gly thr phe ala leu val ser tyr ile ala asn lys        675                 680                 685val leu thr val gln thr ile asp asn ala leu ser lys arg asn glu    690                 695                 700lys trp asp glu val tyr lys tyr ile val thr asn trp leu ala lys705                 710                 715                 720val asn thr gln ile asp leu ile arg lys lys met lys glu ala leu                725                 730                 735glu asn gln ala glu ala thr lys ala ile ile asn tyr gln tyr asn            740                 745                 750gln tyr thr glu glu glu lys asn asn ile asn phe asn ile asp asp        755                 760                 765leu ser ser lys leu asn glu ser ile asn lys ala met ile asn ile    770                 775                 780asn lys phe leu asn gln cys ser val ser tyr leu met asn ser met785                 790                 795                 800ile pro tyr gly val lys arg leu glu asp phe asp ala ser leu lys                805                 810                 815asp ala leu leu lys tyr ile tyr asp asn arg gly thr leu ile gly            820                 825                 830gln val asp arg leu lys asp lys val asn asn thr leu ser thr asp        835                 840                 845ile pro phe gln leu ser lys tyr val asp asn gln arg leu leu ser    850                 855                 860thr phe thr glu tyr ile lys asn ile leu asn asn ile ile leu asn865                 870                 875                 880leu arg tyr lys asp asn asn leu ile asp leu ser gly tyr gly ala                885                 890                 895lys val glu val tyr asp gly val glu leu asn asp lys asn gln phe            900                 905                 910lys leu thr ser ser ala asn ser lys ile arg val thr gln asn gln        915                 920                 925asn ile ile phe asn ser val phe leu asp phe ser val ser phe trp    930                 935                 940ile arg ile pro lys tyr lys asn asp gly ile gln asn tyr ile his945                 950                 955                 960asn glu tyr thr ile ile asn cys met lys asn asn ser gly trp lys                965                 970                 975ile ser ile arg gly asn arg ile ile trp thr leu ile asp ile asn            980                 985                 990gly lys thr lys ser val phe phe  glu tyr asn ile arg  glu asp ile        995                 1000                 1005ser glu  tyr ile asn arg trp  phe phe val thr ile  thr asn asn    1010                 1015                 1020leu asn  asn ala lys ile tyr  ile asn gly lys leu  glu ser asn    1025                 1030                 1035thr asp  ile lys asp ile arg  glu val ile ala asn  gly glu ile    1040                 1045                 1050ile phe  lys leu asp gly asp  ile asp arg thr gln  phe ile trp    1055                 1060                 1065met lys  tyr phe ser ile phe  asn thr glu leu ser  gln ser asn    1070                 1075                 1080ile glu  glu arg tyr lys ile  gln ser tyr ser glu  tyr leu lys    1085                 1090                 1095asp phe  trp gly asn pro leu  met tyr asn lys glu  tyr tyr met    1100                 1105                 1110phe asn  ala gly asn lys asn  ser tyr ile lys leu  lys lys asp    1115                 1120                 1125ser pro  val gly glu ile leu  thr arg ser lys tyr  asn gln asn    1130                 1135                 1140ser lys  tyr ile asn tyr arg  asp leu tyr ile gly  glu lys phe    1145                 1150                 1155ile ile  arg arg lys ser asn  ser gln ser ile asn  asp asp ile    1160                 1165                 1170val arg  lys glu asp tyr ile  tyr leu asp phe phe  asn leu asn    1175                 1180                 1185gln glu  trp arg val tyr thr  tyr lys tyr phe lys  lys glu glu    1190                 1195                 1200met lys  leu phe leu ala pro  ile tyr asp ser asp  glu phe tyr    1205                 1210                 1215asn thr  ile gln ile lys glu  tyr asp glu gln pro  thr tyr ser    1220                 1225                 1230cys gln  leu leu phe lys lys  asp glu glu ser thr  asp glu ile    1235                 1240                 1245gly leu  ile gly ile his arg  phe tyr glu ser gly  ile val phe    1250                 1255                 1260glu glu  tyr lys asp tyr phe  cys ile ser lys trp  tyr leu lys    1265                 1270                 1275glu val  lys arg lys pro tyr  asn leu lys leu gly  cys asn trp    1280                 1285                 1290gln phe  ile pro lys asp glu  gly trp thr glu    1295                 1300<210>  11<211>  1306<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  11met lys leu glu ile asn lys phe asn tyr asn asp pro ile asp gly1               5                   10                  15ile asn val ile thr met arg pro pro arg his ser asp lys ile asn            20                  25                  30lys gly lys gly pro phe lys ala phe gln val ile lys asn ile trp        35                  40                  45ile val pro glu arg tyr asn phe thr asn asn thr asn asp leu asn    50                  55                  60ile pro ser glu pro ile met glu ala asp ala ile tyr asn pro asn65                  70                  75                  80tyr leu asn thr pro ser glu lys asp glu phe leu gln gly val ile                85                  90                  95lys val leu glu arg ile lys ser lys pro glu gly glu lys leu leu            100                 105                 110glu leu ile ser ser ser ile pro leu pro leu val ser asn gly ala        115                 120                 125leu thr leu ser asp asn glu thr ile ala tyr gln glu asn asn asn    130                 135                 140ile val ser asn leu gln ala asn leu val ile tyr gly pro gly pro145                 150                 155                 160asp ile ala asn asn ala thr tyr gly leu tyr ser thr pro ile ser                165                 170                 175asn gly glu gly thr leu ser glu val ser phe ser pro phe tyr leu            180                 185                 190lys pro phe asp glu ser tyr gly asn tyr arg ser leu val asn ile        195                 200                 205val asn lys phe val lys arg glu phe ala pro asp pro ala ser thr    210                 215                 220leu met his glu leu val his val thr his asn leu tyr gly ile ser225                 230                 235                 240asn arg asn phe tyr tyr asn phe asp thr gly lys ile glu thr ser                245                 250                 255arg gln gln asn ser leu ile phe glu glu leu leu thr phe gly gly            260                 265                 270ile asp ser lys ala ile ser ser leu ile ile lys lys ile ile glu        275                 280                 285thr ala lys asn asn tyr thr thr leu ile ser glu arg leu asn thr    290                 295                 300val thr val glu asn asp leu leu lys tyr ile lys asn lys ile pro305                 310                 315                 320val gln gly arg leu gly asn phe lys leu asp thr ala glu phe glu                325                 330                 335lys lys leu asn thr ile leu phe val leu asn glu ser asn leu ala            340                 345                 350gln arg phe ser ile leu val arg lys his tyr leu lys glu arg pro        355                 360                 365ile asp pro ile tyr val asn ile leu asp asp asn ser tyr ser thr    370                 375                 380leu glu gly phe asn ile ser ser gln gly ser asn asp phe gln gly385                 390                 395                 400gln leu leu glu ser ser tyr phe glu lys ile glu ser asn ala leu                405                 410                 415arg ala phe ile lys ile cys pro arg asn gly leu leu tyr asn ala            420                 425                 430ile tyr arg asn ser lys asn tyr leu asn asn ile asp leu glu asp        435                 440                 445lys lys thr thr ser lys thr asn val ser tyr pro cys ser leu leu    450                 455                 460asn gly cys ile glu val glu asn lys asp leu phe leu ile ser asn465                 470                 475                 480lys asp ser leu asn asp ile asn leu ser glu glu lys ile lys pro                485                 490                 495glu thr thr val phe phe lys asp lys leu pro pro gln asp ile thr            500                 505                 510leu ser asn tyr asp phe thr glu ala asn ser ile pro ser ile ser        515                 520                 525gln gln asn ile leu glu arg asn glu glu leu tyr glu pro ile arg    530                 535                 540asn ser leu phe glu ile lys thr ile tyr val asp lys leu thr thr545                 550                 555                 560phe his phe leu glu ala gln asn ile asp glu ser ile asp ser ser                565                 570                 575lys ile arg val glu leu thr asp ser val asp glu ala leu ser asn            580                 585                 590pro asn lys val tyr ser pro phe lys asn met ser asn thr ile asn        595                 600                 605ser ile glu thr gly ile thr ser thr tyr ile phe tyr gln trp leu    610                 615                 620arg ser ile val lys asp phe ser asp glu thr gly lys ile asp val625                 630                 635                 640ile asp lys ser ser asp thr leu ala ile val pro tyr ile gly pro                645                 650                 655leu leu asn ile gly asn asp ile arg his gly asp phe val gly ala            660                 665                 670ile glu leu ala gly ile thr ala leu leu glu tyr val pro glu phe        675                 680                 685thr ile pro ile leu val gly leu glu val ile gly gly glu leu ala    690                 695                 700arg glu gln val glu ala ile val asn asn ala leu asp lys arg asp705                 710                 715                 720gln lys trp ala glu val tyr asn ile thr lys ala gln trp trp gly                725                 730                 735thr ile his leu gln ile asn thr arg leu ala his thr tyr lys ala            740                 745                 750leu ser arg gln ala asn ala ile lys met asn met glu phe gln leu        755                 760                 765ala asn tyr lys gly asn ile asp asp lys ala lys ile lys asn ala    770                 775                 780ile ser glu thr glu ile leu leu asn lys ser val glu gln ala met785                 790                 795                 800lys asn thr glu lys phe met ile lys leu ser asn ser tyr leu thr                805                 810                 815lys glu met ile pro lys val gln asp asn leu lys asn phe asp leu            820                 825                 830glu thr lys lys thr leu asp lys phe ile lys glu lys glu asp ile        835                 840                 845leu gly thr asn leu ser ser ser leu arg arg lys val ser ile arg    850                 855                 860leu asn lys asn ile ala phe asp ile asn asp ile pro phe ser glu865                 870                 875                 880phe asp asp leu ile asn gln tyr lys asn glu ile glu asp tyr glu                885                 890                 895val leu asn leu gly ala glu asp gly lys ile lys asp leu ser gly            900                 905                 910thr thr ser asp ile asn ile gly ser asp ile glu leu ala asp gly        915                 920                 925arg glu asn lys ala ile lys ile lys gly ser glu asn ser thr ile    930                 935                 940lys ile ala met asn lys tyr leu arg phe ser ala thr asp asn phe945                 950                 955                 960ser ile ser phe trp ile lys his pro lys pro thr asn leu leu asn                965                 970                 975asn gly ile glu tyr thr leu val glu asn phe asn gln arg gly trp            980                 985                 990lys ile ser ile gln asp ser lys  leu ile trp tyr leu  arg asp his        995                 1000                 1005asn asn  ser ile lys ile val  thr pro asp tyr ile  ala phe asn    1010                 1015                 1020gly trp  asn leu ile thr ile  thr asn asn arg ser  lys gly ser    1025                 1030                 1035ile val  tyr val asn gly ser  lys ile glu glu lys  asp ile ser    1040                 1045                 1050ser ile  trp asn thr glu val  asp asp pro ile ile  phe arg leu    1055                 1060                 1065lys asn  asn arg asp thr gln  ala phe thr leu leu  asp gln phe    1070                 1075                 1080ser ile  tyr arg lys glu leu  asn gln asn glu val  val lys leu    1085                 1090                 1095tyr asn  tyr tyr phe asn ser  asn tyr ile arg asp  ile trp gly    1100                 1105                 1110asn pro  leu gln tyr asn lys  lys tyr tyr leu gln  thr gln asp    1115                 1120                 1125lys pro  gly lys gly leu ile  arg glu tyr trp ser  ser phe gly    1130                 1135                 1140tyr asp  tyr val ile leu ser  asp ser lys thr ile  thr phe pro    1145                 1150                 1155asn asn  ile arg tyr gly ala  leu tyr asn gly ser  lys val leu    1160                 1165                 1170ile lys  asn ser lys lys leu  asp gly leu val arg  asn lys asp    1175                 1180                 1185phe ile  gln leu glu ile asp  gly tyr asn met gly  ile ser ala    1190                 1195                 1200asp arg  phe asn glu asp thr  asn tyr ile gly thr  thr tyr gly    1205                 1210                 1215thr thr  his asp leu thr thr  asp phe glu ile ile  gln arg gln    1220                 1225                 1230glu lys  tyr arg asn tyr cys  gln leu lys thr pro  tyr asn ile    1235                 1240                 1245phe his  lys ser gly leu met  ser thr glu thr ser  lys pro thr    1250                 1255                 1260phe his  asp tyr arg asp trp  val tyr ser ser ala  trp tyr phe    1265                 1270                 1275gln asn  tyr glu asn leu asn  leu arg lys his thr  lys thr asn    1280                 1285                 1290trp tyr  phe ile pro lys asp  glu gly trp asp glu  asp    1295                 1300                 1305<210>  12<211>  3888<212>  dna<213>  肉毒梭菌<400>  12atgccattcg tcaacaagca attcaactac aaagacccag tcaacggcgt cgacatcgca      60tacatcaaga ttccgaacgc cggtcaaatg cagccggtta aggcttttaa gatccacaac     120aagatttggg ttatcccgga gcgtgacacc ttcacgaacc cggaagaagg cgatctgaac     180ccgccaccgg aagcgaagca agtccctgtc agctactacg attcgacgta cctgagcacg     240gataacgaaa aagataacta cctgaaaggt gtgaccaagc tgttcgaacg tatctacagc     300acggatctgg gtcgcatgct gctgactagc attgttcgcg gtatcccgtt ctggggtggt     360agcacgattg acaccgaact gaaggttatc gacactaact gcattaacgt tattcaaccg     420gatggtagct atcgtagcga agagctgaat ctggtcatca ttggcccgag cgcagacatt     480atccaattcg agtgcaagag ctttggtcac gaggttctga atctgacccg caatggctat     540ggtagcaccc agtacattcg tttttcgccg gattttacct tcggctttga agagagcctg     600gaggttgata ccaatccgtt gctgggtgcg ggcaaattcg ctaccgatcc ggctgtcacg     660ctggcccatg aactgatcca cgcaggccac cgcctgtacg gcattgccat caacccaaac     720cgtgtgttca aggttaatac gaatgcatac tacgagatga gcggcctgga agtcagcttc     780gaagaactgc gcaccttcgg tggccatgac gctaaattca ttgacagctt gcaagagaat     840gagttccgtc tgtactacta taacaaattc aaagacattg caagcacgtt gaacaaggcc     900aaaagcatcg ttggtactac cgcgtcgttg cagtatatga agaatgtgtt taaagagaag     960tacctgctgt ccgaggatac ctccggcaag tttagcgttg ataagctgaa gtttgacaaa    1020ctgtacaaga tgctgaccga gatttacacc gaggacaact ttgtgaaatt cttcaaagtg    1080ttgaatcgta aaacctatct gaattttgac aaagcggttt tcaagattaa catcgtgccg    1140aaggtgaact acaccatcta tgacggtttt aacctgcgta acaccaacct ggcggcgaac    1200tttaacggtc agaatacgga aatcaacaac atgaatttca cgaagttgaa gaacttcacg    1260ggtctgttcg agttctataa gctgctgtgc gtgcgcggta tcatcaccag caaaaccaaa    1320agcctggaca aaggctacaa caaggcgctg aatgacctgt gcattaaggt aaacaattgg    1380gatctgttct tttcgccatc cgaagataat tttaccaacg acctgaacaa gggtgaagaa    1440atcaccagcg atacgaatat tgaagcagcg gaagagaata tcagcctgga tctgatccag    1500cagtactatc tgacctttaa cttcgacaat gaaccggaga acattagcat tgagaatctg    1560agcagcgaca ttatcggtca gctggaactg atgccgaata tcgaacgttt cccgaacggc    1620aaaaagtacg agctggacaa gtacactatg ttccattacc tgcgtgcaca ggagtttgaa    1680cacggtaaaa gccgtatcgc gctgaccaac agcgttaacg aggccctgct gaacccgagc    1740cgtgtctata ccttcttcag cagcgactat gttaagaaag tgaacaaagc cactgaggcc    1800gcgatgttcc tgggctgggt ggaacagctg gtatatgact tcacggacga gacgagcgaa    1860gtgagcacta ccgacaaaat tgctgatatt accatcatta tcccgtatat tggtccggca    1920ctgaacattg gcaacatgct gtacaaagac gattttgtgg gtgccctgat cttctccggt    1980gccgtgattc tgctggagtt cattccggag attgcgatcc cggtgttggg taccttcgcg    2040ctggtgtcct acatcgcgaa taaggttctg acggttcaga ccatcgataa cgcgctgtcg    2100aaacgtaatg aaaaatggga cgaggtttac aaatacattg ttacgaattg gctggcgaaa    2160gtcaataccc agatcgacct gatccgtaag aaaatgaaag aggcgctgga gaatcaggcg    2220gaggccacca aagcaattat caactaccaa tacaaccagt acacggaaga agagaagaat    2280aacattaact tcaatatcga tgatttgagc agcaagctga atgaatctat caacaaagcg    2340atgatcaata tcaacaagtt tttgaatcag tgtagcgttt cgtacctgat gaatagcatg    2400attccgtatg gcgtcaaacg tctggaggac ttcgacgcca gcctgaaaga tgcgttgctg    2460aaatacattt acgacaatcg tggtacgctg attggccaag ttgaccgctt gaaagacaaa    2520gttaacaata ccctgagcac cgacatccca tttcaactga gcaagtatgt tgataatcaa    2580cgtctgttga gcactttcac cgagtatatc aaaaacatca tcaatactag cattctgaac    2640ctgcgttacg agagcaatca tctgattgat ctgagccgtt atgcaagcaa gatcaacatc    2700ggtagcaagg tcaattttga cccgatcgat aagaaccaga tccagctgtt taatctggaa    2760tcgagcaaaa ttgaggttat cctgaaaaac gccattgtct acaactccat gtacgagaat    2820ttctccacca gcttctggat tcgcatcccg aaatacttca acagcattag cctgaacaac    2880gagtatacta tcatcaactg tatggagaac aacagcggtt ggaaggtgtc tctgaactat    2940ggtgagatca tttggacctt gcaggacacc caagagatca agcagcgcgt cgtgttcaag    3000tactctcaaa tgatcaacat ttccgattac attaatcgtt ggatcttcgt gaccattacg    3060aataaccgtc tgaataacag caagatttac atcaatggtc gcttgatcga tcagaaaccg    3120attagcaacc tgggtaatat ccacgcaagc aacaacatta tgttcaaatt ggacggttgc    3180cgcgataccc atcgttatat ctggatcaag tatttcaacc tgtttgataa agaactgaat    3240gagaaggaga tcaaagattt gtatgacaac caatctaaca gcggcatttt gaaggacttc    3300tggggcgatt atctgcaata cgataagccg tactatatgc tgaacctgta tgatccgaac    3360aaatatgtgg atgtcaataa tgtgggtatt cgtggttaca tgtatttgaa gggtccgcgt    3420ggcagcgtta tgacgaccaa catttacctg aactctagcc tgtaccgtgg tacgaaattc    3480atcattaaga aatatgccag cggcaacaaa gataacattg tgcgtaataa cgatcgtgtc    3540tacatcaacg tggtcgtgaa gaataaagag taccgtctgg cgaccaacgc ttcgcaggcg    3600ggtgttgaga aaattctgag cgcgttggag atccctgatg tcggtaatct gagccaagtc    3660gtggttatga agagcaagaa cgaccagggt atcactaaca agtgcaagat gaacctgcaa    3720gacaacaatg gtaacgacat cggctttatt ggtttccacc agttcaacaa tattgctaaa    3780ctggtagcga gcaattggta caatcgtcag attgagcgca gcagccgtac tttgggctgt    3840agctgggagt ttatcccggt cgatgatggt tggggcgaac gtccgctg                 3888<210>  13<211>  1296<212>  prt<213>  肉毒梭菌<400>  13met pro phe val asn lys gln phe asn tyr lys asp pro val asn gly1               5                   10                  15val asp ile ala tyr ile lys ile pro asn ala gly gln met gln pro            20                  25                  30val lys ala phe lys ile his asn lys ile trp val ile pro glu arg        35                  40                  45asp thr phe thr asn pro glu glu gly asp leu asn pro pro pro glu    50                  55                  60ala lys gln val pro val ser tyr tyr asp ser thr tyr leu ser thr65                  70                  75                  80asp asn glu lys asp asn tyr leu lys gly val thr lys leu phe glu                85                  90                  95arg ile tyr ser thr asp leu gly arg met leu leu thr ser ile val            100                 105                 110arg gly ile pro phe trp gly gly ser thr ile asp thr glu leu lys        115                 120                 125val ile asp thr asn cys ile asn val ile gln pro asp gly ser tyr    130                 135                 140arg ser glu glu leu asn leu val ile ile gly pro ser ala asp ile145                 150                 155                 160ile gln phe glu cys lys ser phe gly his glu val leu asn leu thr                165                 170                 175arg asn gly tyr gly ser thr gln tyr ile arg phe ser pro asp phe            180                 185                 190thr phe gly phe glu glu ser leu glu val asp thr asn pro leu leu        195                 200                 205gly ala gly lys phe ala thr asp pro ala val thr leu ala his glu    210                 215                 220leu ile his ala gly his arg leu tyr gly ile ala ile asn pro asn225                 230                 235                 240arg val phe lys val asn thr asn ala tyr tyr glu met ser gly leu                245                 250                 255glu val ser phe glu glu leu arg thr phe gly gly his asp ala lys            260                 265                 270phe ile asp ser leu gln glu asn glu phe arg leu tyr tyr tyr asn        275                 280                 285lys phe lys asp ile ala ser thr leu asn lys ala lys ser ile val    290                 295                 300gly thr thr ala ser leu gln tyr met lys asn val phe lys glu lys305                 310                 315                 320tyr leu leu ser glu asp thr ser gly lys phe ser val asp lys leu                325                 330                 335lys phe asp lys leu tyr lys met leu thr glu ile tyr thr glu asp            340                 345                 350asn phe val lys phe phe lys val leu asn arg lys thr tyr leu asn        355                 360                 365phe asp lys ala val phe lys ile asn ile val pro lys val asn tyr    370                 375                 380thr ile tyr asp gly phe asn leu arg asn thr asn leu ala ala asn385                 390                 395                 400phe asn gly gln asn thr glu ile asn asn met asn phe thr lys leu                405                 410                 415lys asn phe thr gly leu phe glu phe tyr lys leu leu cys val arg            420                 425                 430gly ile ile thr ser lys thr lys ser leu asp lys gly tyr asn lys        435                 440                 445ala leu asn asp leu cys ile lys val asn asn trp asp leu phe phe    450                 455                 460ser pro ser glu asp asn phe thr asn asp leu asn lys gly glu glu465                 470                 475                 480ile thr ser asp thr asn ile glu ala ala glu glu asn ile ser leu                485                 490                 495asp leu ile gln gln tyr tyr leu thr phe asn phe asp asn glu pro            500                 505                 510glu asn ile ser ile glu asn leu ser ser asp ile ile gly gln leu        515                 520                 525glu leu met pro asn ile glu arg phe pro asn gly lys lys tyr glu    530                 535                 540leu asp lys tyr thr met phe his tyr leu arg ala gln glu phe glu545                 550                 555                 560his gly lys ser arg ile ala leu thr asn ser val asn glu ala leu                565                 570                 575leu asn pro ser arg val tyr thr phe phe ser ser asp tyr val lys            580                 585                 590lys val asn lys ala thr glu ala ala met phe leu gly trp val glu        595                 600                 605gln leu val tyr asp phe thr asp glu thr ser glu val ser thr thr    610                 615                 620asp lys ile ala asp ile thr ile ile ile pro tyr ile gly pro ala625                 630                 635                 640leu asn ile gly asn met leu tyr lys asp asp phe val gly ala leu                645                 650                 655ile phe ser gly ala val ile leu leu glu phe ile pro glu ile ala            660                 665                 670ile pro val leu gly thr phe ala leu val ser tyr ile ala asn lys        675                 680                 685val leu thr val gln thr ile asp asn ala leu ser lys arg asn glu    690                 695                 700lys trp asp glu val tyr lys tyr ile val thr asn trp leu ala lys705                 710                 715                 720val asn thr gln ile asp leu ile arg lys lys met lys glu ala leu                725                 730                 735glu asn gln ala glu ala thr lys ala ile ile asn tyr gln tyr asn            740                 745                 750gln tyr thr glu glu glu lys asn asn ile asn phe asn ile asp asp        755                 760                 765leu ser ser lys leu asn glu ser ile asn lys ala met ile asn ile    770                 775                 780asn lys phe leu asn gln cys ser val ser tyr leu met asn ser met785                 790                 795                 800ile pro tyr gly val lys arg leu glu asp phe asp ala ser leu lys                805                 810                 815asp ala leu leu lys tyr ile tyr asp asn arg gly thr leu ile gly            820                 825                 830gln val asp arg leu lys asp lys val asn asn thr leu ser thr asp        835                 840                 845ile pro phe gln leu ser lys tyr val asp asn gln arg leu leu ser    850                 855                 860thr phe thr glu tyr ile lys asn ile ile asn thr ser ile leu asn865                 870                 875                 880leu arg tyr glu ser asn his leu ile asp leu ser arg tyr ala ser                885                 890                 895lys ile asn ile gly ser lys val asn phe asp pro ile asp lys asn            900                 905                 910gln ile gln leu phe asn leu glu ser ser lys ile glu val ile leu        915                 920                 925lys asn ala ile val tyr asn ser met tyr glu asn phe ser thr ser    930                 935                 940phe trp ile arg ile pro lys tyr phe asn ser ile ser leu asn asn945                 950                 955                 960glu tyr thr ile ile asn cys met glu asn asn ser gly trp lys val                965                 970                 975ser leu asn tyr gly glu ile ile trp thr leu gln asp thr gln glu            980                 985                 990ile lys gln arg val val phe lys  tyr ser gln met ile  asn ile ser        995                 1000                 1005asp tyr  ile asn arg trp ile  phe val thr ile thr  asn asn arg    1010                 1015                 1020leu asn  asn ser lys ile tyr  ile asn gly arg leu  ile asp gln    1025                 1030                 1035lys pro  ile ser asn leu gly  asn ile his ala ser  asn asn ile    1040                 1045                 1050met phe  lys leu asp gly cys  arg asp thr his arg  tyr ile trp    1055                 1060                 1065ile lys  tyr phe asn leu phe  asp lys glu leu asn  glu lys glu    1070                 1075                 1080ile lys  asp leu tyr asp asn  gln ser asn ser gly  ile leu lys    1085                 1090                 1095asp phe  trp gly asp tyr leu  gln tyr asp lys pro  tyr tyr met    1100                 1105                 1110leu asn  leu tyr asp pro asn  lys tyr val asp val  asn asn val    1115                 1120                 1125gly ile  arg gly tyr met tyr  leu lys gly pro arg  gly ser val    1130                 1135                 1140met thr  thr asn ile tyr leu  asn ser ser leu tyr  arg gly thr    1145                 1150                 1155lys phe  ile ile lys lys tyr  ala ser gly asn lys  asp asn ile    1160                 1165                 1170val arg  asn asn asp arg val  tyr ile asn val val  val lys asn    1175                 1180                 1185lys glu  tyr arg leu ala thr  asn ala ser gln ala  gly val glu    1190                 1195                 1200lys ile  leu ser ala leu glu  ile pro asp val gly  asn leu ser    1205                 1210                 1215gln val  val val met lys ser  lys asn asp gln gly  ile thr asn    1220                 1225                 1230lys cys  lys met asn leu gln  asp asn asn gly asn  asp ile gly    1235                 1240                 1245phe ile  gly phe his gln phe  asn asn ile ala lys  leu val ala    1250                 1255                 1260ser asn  trp tyr asn arg gln  ile glu arg ser ser  arg thr leu    1265                 1270                 1275gly cys  ser trp glu phe ile  pro val asp asp gly  trp gly glu    1280                 1285                 1290arg pro  leu    1295<210>  14<211>  3888<212>  dna<213>  人工序列<220><223>  修饰的bont/a "cat-a"的核苷酸序列<400>  14atgccattcg tcaacaagca attcaactac aaagacccag tcaacggcgt cgacatcgca      60tacatcaaga ttccgaacgc cggtcaaatg cagccggtta aggcttttaa gatccacaac     120aagatttggg ttatcccgga gcgtgacacc ttcacgaacc cggaagaagg cgatctgaac     180ccgccaccgg aagcgaagca agtccctgtc agctactacg attcgacgta cctgagcacg     240gataacgaaa aagataacta cctgaaaggt gtgaccaagc tgttcgaacg tatctacagc     300acggatctgg gtcgcatgct gctgactagc attgttcgcg gtatcccgtt ctggggtggt     360agcacgattg acaccgaact gaaggttatc gacactaact gcattaacgt tattcaaccg     420gatggtagct atcgtagcga agagctgaat ctggtcatca ttggcccgag cgcagacatt     480atccaattcg agtgcaagag ctttggtcac gaggttctga atctgacccg caatggctat     540ggtagcaccc agtacattcg tttttcgccg gattttacct tcggctttga agagagcctg     600gaggttgata ccaatccgtt gctgggtgcg ggcaaattcg ctaccgatcc ggctgtcacg     660ctggcccatg aactgatcca cgcaggccac cgcctgtacg gcattgccat caacccaaac     720cgtgtgttca aggttaatac gaatgcatac tacgagatga gcggcctgga agtcagcttc     780gaagaactgc gcaccttcgg tggccatgac gctaaattca ttgacagctt gcaagagaat     840gagttccgtc tgtactacta taacaaattc aaagacattg caagcacgtt gaacaaggcc     900aaaagcatcg ttggtactac cgcgtcgttg cagtatatga agaatgtgtt taaagagaag     960tacctgctgt ccgaggatac ctccggcaag tttagcgttg ataagctgaa gtttgacaaa    1020ctgtacaaga tgctgaccga gatttacacc gaggacaact ttgtgaaatt cttcaaagtg    1080ttgaatcgta aaacctatct gaattttgac aaagcggttt tcaagattaa catcgtgccg    1140aaggtgaact acaccatcta tgacggtttt aacctgcgta acaccaacct ggcggcgaac    1200tttaacggtc agaatacgga aatcaacaac atgaatttca cgaagttgaa gaacttcacg    1260ggtctgttcg agttctataa gctgctgtgc gtgcgcggta tcatcaccag caaaaccaaa    1320agcctggaca aaggctacaa caaggcgctg aatgacctgt gcattaaggt aaacaattgg    1380gatctgttct tttcgccatc cgaagataat tttaccaacg acctgaacaa gggtgaagaa    1440atcaccagcg atacgaatat tgaagcagcg gaagagaata tcagcctgga tctgatccag    1500cagtactatc tgacctttaa cttcgacaat gaaccggaga acattagcat tgagaatctg    1560agcagcgaca ttatcggtca gctggaactg atgccgaata tcgaacgttt cccgaacggc    1620aaaaagtacg agctggacaa gtacactatg ttccattacc tgcgtgcaca ggagtttgaa    1680cacggtaaaa gccgtatcgc gctgaccaac agcgttaacg aggccctgct gaacccgagc    1740cgtgtctata ccttcttcag cagcgactat gttaagaaag tgaacaaagc cactgaggcc    1800gcgatgttcc tgggctgggt ggaacagctg gtatatgact tcacggacga gacgagcgaa    1860gtgagcacta ccgacaaaat tgctgatatt accatcatta tcccgtatat tggtccggca    1920ctgaacattg gcaacatgct gtacaaagac gattttgtgg gtgccctgat cttctccggt    1980gccgtgattc tgctggagtt cattccggag attgcgatcc cggtgttggg taccttcgcg    2040ctggtgtcct acatcgcgaa taaggttctg acggttcaga ccatcgataa cgcgctgtcg    2100aaacgtaatg aaaaatggga cgaggtttac aaatacattg ttacgaattg gctggcgaaa    2160gtcaataccc agatcgacct gatccgtaag aaaatgaaag aggcgctgga gaatcaggcg    2220gaggccacca aagcaattat caactaccaa tacaaccagt acacggaaga agagaagaat    2280aacattaact tcaatatcga tgatttgagc agcaagctga atgaatctat caacaaagcg    2340atgatcaata tcaacaagtt tttgaatcag tgtagcgttt cgtacctgat gaatagcatg    2400attccgtatg gcgtcaaacg tctggaggac ttcgacgcca gcctgaaaga tgcgttgctg    2460aaatacattt acgacaatcg tggtacgctg attggccaag ttgaccgctt gaaagacaaa    2520gttaacaata ccctgagcac cgacatccca tttcaactga gcaagtatgt tgataatcaa    2580cgtctgttga gcactttcac cgagtatatc aaaaacatca tcaatactag cattctgaac    2640ctgcgttacg agagcaagca tctgattgat ctgagccgtt atgctagcaa gatcaacatc    2700ggtagcaagg tcaattttga cccgatcgat aagaaccaga tccagctgtt taatctggaa    2760tcgagcaaaa ttgaggttat cctgaaaaag gccattgtct acaactccat gtacgagaat    2820ttctccacca gcttctggat tcgcatcccg aaatacttca acaagattag cctgaacaac    2880gagtatacta tcatcaactg tatggagaac aacagcggtt ggaaggtgtc tctgaactat    2940ggtgagatca tttggacctt gcaggacacc aaagagatca agcagcgcgt cgtgttcaag    3000tactctcaaa tgatcaacat ttccgattac attaatcgtt ggatcttcgt gaccattacg    3060aataaccgtc tgaataagag caagatttac atcaatggtc gcttgatcga tcagaaaccg    3120attagcaacc tgggtaatat ccacgcaagc aacaagatta tgttcaaatt ggacggttgc    3180cgcgataccc atcgttatat ctggatcaag tatttcaacc tgtttgataa agaactgaat    3240gagaaggaga tcaaagattt gtatgacaac caatctaaca gcggcatttt gaaggacttc    3300tggggcgatt atctgcaata cgataagccg tactatatgc tgaacctgta tgatccgaac    3360aaatatgtgg atgtcaataa tgtgggtatt cgtggttaca tgtatttgaa gggtccgcgt    3420ggcagcgtta tgacgaccaa catttacctg aactctagcc tgtaccgtgg tacgaaattc    3480atcattaaga aatatgccag cggcaacaaa gataacattg tgcgtaataa cgatcgtgtc    3540tacatcaacg tggtcgtgaa gaataaagag taccgtctgg cgaccaacgc ttcgcaggcg    3600ggtgttgaga aaattctgag cgcgttggag atccctgatg tcggtaatct gagccaagtc    3660gtggttatga agagcaagaa cgacaagggt atcactaaca agtgcaagat gaacctgcaa    3720gacaacaatg gtaacgacat cggctttatt ggtttccacc agttcaacaa tattgctaaa    3780ctggtagcga gcaattggta caatcgtcag attgagcgca gcagccgtac tttgggctgt    3840agctgggagt ttatcccggt cgatgatggt tggggcgaac gtccgctg                 3888<210>  15<211>  1296<212>  prt<213>  人工序列<220><223>  修饰的bont/a "cat-a"的多肽序列<400>  15met pro phe val asn lys gln phe asn tyr lys asp pro val asn gly1               5                   10                  15val asp ile ala tyr ile lys ile pro asn ala gly gln met gln pro            20                  25                  30val lys ala phe lys ile his asn lys ile trp val ile pro glu arg        35                  40                  45asp thr phe thr asn pro glu glu gly asp leu asn pro pro pro glu    50                  55                  60ala lys gln val pro val ser tyr tyr asp ser thr tyr leu ser thr65                  70                  75                  80asp asn glu lys asp asn tyr leu lys gly val thr lys leu phe glu                85                  90                  95arg ile tyr ser thr asp leu gly arg met leu leu thr ser ile val            100                 105                 110arg gly ile pro phe trp gly gly ser thr ile asp thr glu leu lys        115                 120                 125val ile asp thr asn cys ile asn val ile gln pro asp gly ser tyr    130                 135                 140arg ser glu glu leu asn leu val ile ile gly pro ser ala asp ile145                 150                 155                 160ile gln phe glu cys lys ser phe gly his glu val leu asn leu thr                165                 170                 175arg asn gly tyr gly ser thr gln tyr ile arg phe ser pro asp phe            180                 185                 190thr phe gly phe glu glu ser leu glu val asp thr asn pro leu leu        195                 200                 205gly ala gly lys phe ala thr asp pro ala val thr leu ala his glu    210                 215                 220leu ile his ala gly his arg leu tyr gly ile ala ile asn pro asn225                 230                 235                 240arg val phe lys val asn thr asn ala tyr tyr glu met ser gly leu                245                 250                 255glu val ser phe glu glu leu arg thr phe gly gly his asp ala lys            260                 265                 270phe ile asp ser leu gln glu asn glu phe arg leu tyr tyr tyr asn        275                 280                 285lys phe lys asp ile ala ser thr leu asn lys ala lys ser ile val    290                 295                 300gly thr thr ala ser leu gln tyr met lys asn val phe lys glu lys305                 310                 315                 320tyr leu leu ser glu asp thr ser gly lys phe ser val asp lys leu                325                 330                 335lys phe asp lys leu tyr lys met leu thr glu ile tyr thr glu asp            340                 345                 350asn phe val lys phe phe lys val leu asn arg lys thr tyr leu asn        355                 360                 365phe asp lys ala val phe lys ile asn ile val pro lys val asn tyr    370                 375                 380thr ile tyr asp gly phe asn leu arg asn thr asn leu ala ala asn385                 390                 395                 400phe asn gly gln asn thr glu ile asn asn met asn phe thr lys leu                405                 410                 415lys asn phe thr gly leu phe glu phe tyr lys leu leu cys val arg            420                 425                 430gly ile ile thr ser lys thr lys ser leu asp lys gly tyr asn lys        435                 440                 445ala leu asn asp leu cys ile lys val asn asn trp asp leu phe phe    450                 455                 460ser pro ser glu asp asn phe thr asn asp leu asn lys gly glu glu465                 470                 475                 480ile thr ser asp thr asn ile glu ala ala glu glu asn ile ser leu                485                 490                 495asp leu ile gln gln tyr tyr leu thr phe asn phe asp asn glu pro            500                 505                 510glu asn ile ser ile glu asn leu ser ser asp ile ile gly gln leu        515                 520                 525glu leu met pro asn ile glu arg phe pro asn gly lys lys tyr glu    530                 535                 540leu asp lys tyr thr met phe his tyr leu arg ala gln glu phe glu545                 550                 555                 560his gly lys ser arg ile ala leu thr asn ser val asn glu ala leu                565                 570                 575leu asn pro ser arg val tyr thr phe phe ser ser asp tyr val lys            580                 585                 590lys val asn lys ala thr glu ala ala met phe leu gly trp val glu        595                 600                 605gln leu val tyr asp phe thr asp glu thr ser glu val ser thr thr    610                 615                 620asp lys ile ala asp ile thr ile ile ile pro tyr ile gly pro ala625                 630                 635                 640leu asn ile gly asn met leu tyr lys asp asp phe val gly ala leu                645                 650                 655ile phe ser gly ala val ile leu leu glu phe ile pro glu ile ala            660                 665                 670ile pro val leu gly thr phe ala leu val ser tyr ile ala asn lys        675                 680                 685val leu thr val gln thr ile asp asn ala leu ser lys arg asn glu    690                 695                 700lys trp asp glu val tyr lys tyr ile val thr asn trp leu ala lys705                 710                 715                 720val asn thr gln ile asp leu ile arg lys lys met lys glu ala leu                725                 730                 735glu asn gln ala glu ala thr lys ala ile ile asn tyr gln tyr asn            740                 745                 750gln tyr thr glu glu glu lys asn asn ile asn phe asn ile asp asp        755                 760                 765leu ser ser lys leu asn glu ser ile asn lys ala met ile asn ile    770                 775                 780asn lys phe leu asn gln cys ser val ser tyr leu met asn ser met785                 790                 795                 800ile pro tyr gly val lys arg leu glu asp phe asp ala ser leu lys                805                 810                 815asp ala leu leu lys tyr ile tyr asp asn arg gly thr leu ile gly            820                 825                 830gln val asp arg leu lys asp lys val asn asn thr leu ser thr asp        835                 840                 845ile pro phe gln leu ser lys tyr val asp asn gln arg leu leu ser    850                 855                 860thr phe thr glu tyr ile lys asn ile ile asn thr ser ile leu asn865                 870                 875                 880leu arg tyr glu ser lys his leu ile asp leu ser arg tyr ala ser                885                 890                 895lys ile asn ile gly ser lys val asn phe asp pro ile asp lys asn            900                 905                 910gln ile gln leu phe asn leu glu ser ser lys ile glu val ile leu        915                 920                 925lys lys ala ile val tyr asn ser met tyr glu asn phe ser thr ser    930                 935                 940phe trp ile arg ile pro lys tyr phe asn lys ile ser leu asn asn945                 950                 955                 960glu tyr thr ile ile asn cys met glu asn asn ser gly trp lys val                965                 970                 975ser leu asn tyr gly glu ile ile trp thr leu gln asp thr lys glu            980                 985                 990ile lys gln arg val val phe lys  tyr ser gln met ile  asn ile ser        995                 1000                 1005asp tyr  ile asn arg trp ile  phe val thr ile thr  asn asn arg    1010                 1015                 1020leu asn  lys ser lys ile tyr  ile asn gly arg leu  ile asp gln    1025                 1030                 1035lys pro  ile ser asn leu gly  asn ile his ala ser  asn lys ile    1040                 1045                 1050met phe  lys leu asp gly cys  arg asp thr his arg  tyr ile trp    1055                 1060                 1065ile lys  tyr phe asn leu phe  asp lys glu leu asn  glu lys glu    1070                 1075                 1080ile lys  asp leu tyr asp asn  gln ser asn ser gly  ile leu lys    1085                 1090                 1095asp phe  trp gly asp tyr leu  gln tyr asp lys pro  tyr tyr met    1100                 1105                 1110leu asn  leu tyr asp pro asn  lys tyr val asp val  asn asn val    1115                 1120                 1125gly ile  arg gly tyr met tyr  leu lys gly pro arg  gly ser val    1130                 1135                 1140met thr  thr asn ile tyr leu  asn ser ser leu tyr  arg gly thr    1145                 1150                 1155lys phe  ile ile lys lys tyr  ala ser gly asn lys  asp asn ile    1160                 1165                 1170val arg  asn asn asp arg val  tyr ile asn val val  val lys asn    1175                 1180                 1185lys glu  tyr arg leu ala thr  asn ala ser gln ala  gly val glu    1190                 1195                 1200lys ile  leu ser ala leu glu  ile pro asp val gly  asn leu ser    1205                 1210                 1215gln val  val val met lys ser  lys asn asp lys gly  ile thr asn    1220                 1225                 1230lys cys  lys met asn leu gln  asp asn asn gly asn  asp ile gly    1235                 1240                 1245phe ile  gly phe his gln phe  asn asn ile ala lys  leu val ala    1250                 1255                 1260ser asn  trp tyr asn arg gln  ile glu arg ser ser  arg thr leu    1265                 1270                 1275gly cys  ser trp glu phe ile  pro val asp asp gly  trp gly glu    1280                 1285                 1290arg pro  leu    1295<210>  16<211>  3888<212>  dna<213>  人工序列<220><223>  修饰的bont/a "cat-b"的核苷酸序列<400>  16atgccattcg tcaacaagca attcaactac aaagacccag tcaacggcgt cgacatcgca      60tacatcaaga ttccgaacgc cggtcaaatg cagccggtta aggcttttaa gatccacaac     120aagatttggg ttatcccgga gcgtgacacc ttcacgaacc cggaagaagg cgatctgaac     180ccgccaccgg aagcgaagca agtccctgtc agctactacg attcgacgta cctgagcacg     240gataacgaaa aagataacta cctgaaaggt gtgaccaagc tgttcgaacg tatctacagc     300acggatctgg gtcgcatgct gctgactagc attgttcgcg gtatcccgtt ctggggtggt     360agcacgattg acaccgaact gaaggttatc gacactaact gcattaacgt tattcaaccg     420gatggtagct atcgtagcga agagctgaat ctggtcatca ttggcccgag cgcagacatt     480atccaattcg agtgcaagag ctttggtcac gaggttctga atctgacccg caatggctat     540ggtagcaccc agtacattcg tttttcgccg gattttacct tcggctttga agagagcctg     600gaggttgata ccaatccgtt gctgggtgcg ggcaaattcg ctaccgatcc ggctgtcacg     660ctggcccatg aactgatcca cgcaggccac cgcctgtacg gcattgccat caacccaaac     720cgtgtgttca aggttaatac gaatgcatac tacgagatga gcggcctgga agtcagcttc     780gaagaactgc gcaccttcgg tggccatgac gctaaattca ttgacagctt gcaagagaat     840gagttccgtc tgtactacta taacaaattc aaagacattg caagcacgtt gaacaaggcc     900aaaagcatcg ttggtactac cgcgtcgttg cagtatatga agaatgtgtt taaagagaag     960tacctgctgt ccgaggatac ctccggcaag tttagcgttg ataagctgaa gtttgacaaa    1020ctgtacaaga tgctgaccga gatttacacc gaggacaact ttgtgaaatt cttcaaagtg    1080ttgaatcgta aaacctatct gaattttgac aaagcggttt tcaagattaa catcgtgccg    1140aaggtgaact acaccatcta tgacggtttt aacctgcgta acaccaacct ggcggcgaac    1200tttaacggtc agaatacgga aatcaacaac atgaatttca cgaagttgaa gaacttcacg    1260ggtctgttcg agttctataa gctgctgtgc gtgcgcggta tcatcaccag caaaaccaaa    1320agcctggaca aaggctacaa caaggcgctg aatgacctgt gcattaaggt aaacaattgg    1380gatctgttct tttcgccatc cgaagataat tttaccaacg acctgaacaa gggtgaagaa    1440atcaccagcg atacgaatat tgaagcagcg gaagagaata tcagcctgga tctgatccag    1500cagtactatc tgacctttaa cttcgacaat gaaccggaga acattagcat tgagaatctg    1560agcagcgaca ttatcggtca gctggaactg atgccgaata tcgaacgttt cccgaacggc    1620aaaaagtacg agctggacaa gtacactatg ttccattacc tgcgtgcaca ggagtttgaa    1680cacggtaaaa gccgtatcgc gctgaccaac agcgttaacg aggccctgct gaacccgagc    1740cgtgtctata ccttcttcag cagcgactat gttaagaaag tgaacaaagc cactgaggcc    1800gcgatgttcc tgggctgggt ggaacagctg gtatatgact tcacggacga gacgagcgaa    1860gtgagcacta ccgacaaaat tgctgatatt accatcatta tcccgtatat tggtccggca    1920ctgaacattg gcaacatgct gtacaaagac gattttgtgg gtgccctgat cttctccggt    1980gccgtgattc tgctggagtt cattccggag attgcgatcc cggtgttggg taccttcgcg    2040ctggtgtcct acatcgcgaa taaggttctg acggttcaga ccatcgataa cgcgctgtcg    2100aaacgtaatg aaaaatggga cgaggtttac aaatacattg ttacgaattg gctggcgaaa    2160gtcaataccc agatcgacct gatccgtaag aaaatgaaag aggcgctgga gaatcaggcg    2220gaggccacca aagcaattat caactaccaa tacaaccagt acacggaaga agagaagaat    2280aacattaact tcaatatcga tgatttgagc agcaagctga atgaatctat caacaaagcg    2340atgatcaata tcaacaagtt tttgaatcag tgtagcgttt cgtacctgat gaatagcatg    2400attccgtatg gcgtcaaacg tctggaggac ttcgacgcca gcctgaaaga tgcgttgctg    2460aaatacattt acgacaatcg tggtacgctg attggccaag ttgaccgctt gaaagacaaa    2520gttaacaata ccctgagcac cgacatccca tttcaactga gcaagtatgt tgataatcaa    2580cgtctgttga gcactttcac cgagtatatc aaaaacatca tcaatactag cattctgaac    2640ctgcgttacg agagcaatca tctgattgat ctgagccgtt atgctagcaa gatcaacatc    2700ggtagcaagg tcaattttga cccgatcgat aagaaccaga tccagctgtt taatctggaa    2760tcgagcaaaa ttgaggttat cctgaaaaag gccattgtct acaactccat gtacgagaat    2820ttctccacca gcttctggat tcgcatcccg aaatacttca agaagattag cctgaacaac    2880gagtatacta tcatcaactg tatggagaac aacagcggtt ggaaggtgtc tctgaactat    2940ggtgagatca tttggacctt gcaggacacc aaagagatca agcagcgcgt cgtgttcaag    3000tactctcaaa tgatcaacat ttccgattac attaatcgtt ggatcttcgt gaccattacg    3060aataaccgtc tgaataagag caagatttac atcaatggtc gcttgatcga tcagaaaccg    3120attagcaacc tgggtaatat ccacgcaagc aacaagatta tgttcaaatt ggacggttgc    3180cgcgataccc atcgttatat ctggatcaag tatttcaacc tgtttgataa agaactgaat    3240gagaaggaga tcaaagattt gtatgacaac caatctaaca gcggcatttt gaaggacttc    3300tggggcgatt atctgcaata cgataagccg tactatatgc tgaacctgta tgatccgaac    3360aaatatgtgg atgtcaataa tgtgggtatt cgtggttaca tgtatttgaa gggtccgcgt    3420ggcagcgtta tgacgaccaa catttacctg aactctagcc tgtaccgtgg tacgaaattc    3480atcattaaga aatatgccag cggcaacaaa gataacattg tgcgtaataa cgatcgtgtc    3540tacatcaacg tggtcgtgaa gaataaagag taccgtctgg cgaccaacgc ttcgcaggcg    3600ggtgttgaga aaattctgag cgcgttggag atccctgatg tcggtaatct gagccaagtc    3660gtggttatga agagcaagaa cgacaagggt atcactaaca agtgcaagat gaacctgcaa    3720gacaacaatg gtaacgacat cggctttatt ggtttccacc agttcaacaa tattgctaaa    3780ctggtagcga gcaattggta caatcgtcag attgagcgca gcagccgtac tttgggctgt    3840agctgggagt ttatcccggt cgatgatggt tggggcgaac gtccgctg                 3888<210>  17<211>  1296<212>  prt<213>  人工序列<220><223>  修饰的bont/a "cat-b"的多肽序列<400>  17met pro phe val asn lys gln phe asn tyr lys asp pro val asn gly1               5                   10                  15val asp ile ala tyr ile lys ile pro asn ala gly gln met gln pro            20                  25                  30val lys ala phe lys ile his asn lys ile trp val ile pro glu arg        35                  40                  45asp thr phe thr asn pro glu glu gly asp leu asn pro pro pro glu    50                  55                  60ala lys gln val pro val ser tyr tyr asp ser thr tyr leu ser thr65                  70                  75                  80asp asn glu lys asp asn tyr leu lys gly val thr lys leu phe glu                85                  90                  95arg ile tyr ser thr asp leu gly arg met leu leu thr ser ile val            100                 105                 110arg gly ile pro phe trp gly gly ser thr ile asp thr glu leu lys        115                 120                 125val ile asp thr asn cys ile asn val ile gln pro asp gly ser tyr    130                 135                 140arg ser glu glu leu asn leu val ile ile gly pro ser ala asp ile145                 150                 155                 160ile gln phe glu cys lys ser phe gly his glu val leu asn leu thr                165                 170                 175arg asn gly tyr gly ser thr gln tyr ile arg phe ser pro asp phe            180                 185                 190thr phe gly phe glu glu ser leu glu val asp thr asn pro leu leu        195                 200                 205gly ala gly lys phe ala thr asp pro ala val thr leu ala his glu    210                 215                 220leu ile his ala gly his arg leu tyr gly ile ala ile asn pro asn225                 230                 235                 240arg val phe lys val asn thr asn ala tyr tyr glu met ser gly leu                245                 250                 255glu val ser phe glu glu leu arg thr phe gly gly his asp ala lys            260                 265                 270phe ile asp ser leu gln glu asn glu phe arg leu tyr tyr tyr asn        275                 280                 285lys phe lys asp ile ala ser thr leu asn lys ala lys ser ile val    290                 295                 300gly thr thr ala ser leu gln tyr met lys asn val phe lys glu lys305                 310                 315                 320tyr leu leu ser glu asp thr ser gly lys phe ser val asp lys leu                325                 330                 335lys phe asp lys leu tyr lys met leu thr glu ile tyr thr glu asp            340                 345                 350asn phe val lys phe phe lys val leu asn arg lys thr tyr leu asn        355                 360                 365phe asp lys ala val phe lys ile asn ile val pro lys val asn tyr    370                 375                 380thr ile tyr asp gly phe asn leu arg asn thr asn leu ala ala asn385                 390                 395                 400phe asn gly gln asn thr glu ile asn asn met asn phe thr lys leu                405                 410                 415lys asn phe thr gly leu phe glu phe tyr lys leu leu cys val arg            420                 425                 430gly ile ile thr ser lys thr lys ser leu asp lys gly tyr asn lys        435                 440                 445ala leu asn asp leu cys ile lys val asn asn trp asp leu phe phe    450                 455                 460ser pro ser glu asp asn phe thr asn asp leu asn lys gly glu glu465                 470                 475                 480ile thr ser asp thr asn ile glu ala ala glu glu asn ile ser leu                485                 490                 495asp leu ile gln gln tyr tyr leu thr phe asn phe asp asn glu pro            500                 505                 510glu asn ile ser ile glu asn leu ser ser asp ile ile gly gln leu        515                 520                 525glu leu met pro asn ile glu arg phe pro asn gly lys lys tyr glu    530                 535                 540leu asp lys tyr thr met phe his tyr leu arg ala gln glu phe glu545                 550                 555                 560his gly lys ser arg ile ala leu thr asn ser val asn glu ala leu                565                 570                 575leu asn pro ser arg val tyr thr phe phe ser ser asp tyr val lys            580                 585                 590lys val asn lys ala thr glu ala ala met phe leu gly trp val glu        595                 600                 605gln leu val tyr asp phe thr asp glu thr ser glu val ser thr thr    610                 615                 620asp lys ile ala asp ile thr ile ile ile pro tyr ile gly pro ala625                 630                 635                 640leu asn ile gly asn met leu tyr lys asp asp phe val gly ala leu                645                 650                 655ile phe ser gly ala val ile leu leu glu phe ile pro glu ile ala            660                 665                 670ile pro val leu gly thr phe ala leu val ser tyr ile ala asn lys        675                 680                 685val leu thr val gln thr ile asp asn ala leu ser lys arg asn glu    690                 695                 700lys trp asp glu val tyr lys tyr ile val thr asn trp leu ala lys705                 710                 715                 720val asn thr gln ile asp leu ile arg lys lys met lys glu ala leu                725                 730                 735glu asn gln ala glu ala thr lys ala ile ile asn tyr gln tyr asn            740                 745                 750gln tyr thr glu glu glu lys asn asn ile asn phe asn ile asp asp        755                 760                 765leu ser ser lys leu asn glu ser ile asn lys ala met ile asn ile    770                 775                 780asn lys phe leu asn gln cys ser val ser tyr leu met asn ser met785                 790                 795                 800ile pro tyr gly val lys arg leu glu asp phe asp ala ser leu lys                805                 810                 815asp ala leu leu lys tyr ile tyr asp asn arg gly thr leu ile gly            820                 825                 830gln val asp arg leu lys asp lys val asn asn thr leu ser thr asp        835                 840                 845ile pro phe gln leu ser lys tyr val asp asn gln arg leu leu ser    850                 855                 860thr phe thr glu tyr ile lys asn ile ile asn thr ser ile leu asn865                 870                 875                 880leu arg tyr glu ser asn his leu ile asp leu ser arg tyr ala ser                885                 890                 895lys ile asn ile gly ser lys val asn phe asp pro ile asp lys asn            900                 905                 910gln ile gln leu phe asn leu glu ser ser lys ile glu val ile leu        915                 920                 925lys lys ala ile val tyr asn ser met tyr glu asn phe ser thr ser    930                 935                 940phe trp ile arg ile pro lys tyr phe lys lys ile ser leu asn asn945                 950                 955                 960glu tyr thr ile ile asn cys met glu asn asn ser gly trp lys val                965                 970                 975ser leu asn tyr gly glu ile ile trp thr leu gln asp thr lys glu            980                 985                 990ile lys gln arg val val phe lys  tyr ser gln met ile  asn ile ser        995                 1000                 1005asp tyr  ile asn arg trp ile  phe val thr ile thr  asn asn arg    1010                 1015                 1020leu asn  lys ser lys ile tyr  ile asn gly arg leu  ile asp gln    1025                 1030                 1035lys pro  ile ser asn leu gly  asn ile his ala ser  asn lys ile    1040                 1045                 1050met phe  lys leu asp gly cys  arg asp thr his arg  tyr ile trp    1055                 1060                 1065ile lys  tyr phe asn leu phe  asp lys glu leu asn  glu lys glu    1070                 1075                 1080ile lys  asp leu tyr asp asn  gln ser asn ser gly  ile leu lys    1085                 1090                 1095asp phe  trp gly asp tyr leu  gln tyr asp lys pro  tyr tyr met    1100                 1105                 1110leu asn  leu tyr asp pro asn  lys tyr val asp val  asn asn val    1115                 1120                 1125gly ile  arg gly tyr met tyr  leu lys gly pro arg  gly ser val    1130                 1135                 1140met thr  thr asn ile tyr leu  asn ser ser leu tyr  arg gly thr    1145                 1150                 1155lys phe  ile ile lys lys tyr  ala ser gly asn lys  asp asn ile    1160                 1165                 1170val arg  asn asn asp arg val  tyr ile asn val val  val lys asn    1175                 1180                 1185lys glu  tyr arg leu ala thr  asn ala ser gln ala  gly val glu    1190                 1195                 1200lys ile  leu ser ala leu glu  ile pro asp val gly  asn leu ser    1205                 1210                 1215gln val  val val met lys ser  lys asn asp lys gly  ile thr asn    1220                 1225                 1230lys cys  lys met asn leu gln  asp asn asn gly asn  asp ile gly    1235                 1240                 1245phe ile  gly phe his gln phe  asn asn ile ala lys  leu val ala    1250                 1255                 1260ser asn  trp tyr asn arg gln  ile glu arg ser ser  arg thr leu    1265                 1270                 1275gly cys  ser trp glu phe ile  pro val asp asp gly  trp gly glu    1280                 1285                 1290arg pro  leu    1295<210>  18<211>  3888<212>  dna<213>  人工序列<220><223>  修饰的bont/a "cat-c"的核苷酸序列<400>  18atgccattcg tcaacaagca attcaactac aaagacccag tcaacggcgt cgacatcgca      60tacatcaaga ttccgaacgc cggtcaaatg cagccggtta aggcttttaa gatccacaac     120aagatttggg ttatcccgga gcgtgacacc ttcacgaacc cggaagaagg cgatctgaac     180ccgccaccgg aagcgaagca agtccctgtc agctactacg attcgacgta cctgagcacg     240gataacgaaa aagataacta cctgaaaggt gtgaccaagc tgttcgaacg tatctacagc     300acggatctgg gtcgcatgct gctgactagc attgttcgcg gtatcccgtt ctggggtggt     360agcacgattg acaccgaact gaaggttatc gacactaact gcattaacgt tattcaaccg     420gatggtagct atcgtagcga agagctgaat ctggtcatca ttggcccgag cgcagacatt     480atccaattcg agtgcaagag ctttggtcac gaggttctga atctgacccg caatggctat     540ggtagcaccc agtacattcg tttttcgccg gattttacct tcggctttga agagagcctg     600gaggttgata ccaatccgtt gctgggtgcg ggcaaattcg ctaccgatcc ggctgtcacg     660ctggcccatg aactgatcca cgcaggccac cgcctgtacg gcattgccat caacccaaac     720cgtgtgttca aggttaatac gaatgcatac tacgagatga gcggcctgga agtcagcttc     780gaagaactgc gcaccttcgg tggccatgac gctaaattca ttgacagctt gcaagagaat     840gagttccgtc tgtactacta taacaaattc aaagacattg caagcacgtt gaacaaggcc     900aaaagcatcg ttggtactac cgcgtcgttg cagtatatga agaatgtgtt taaagagaag     960tacctgctgt ccgaggatac ctccggcaag tttagcgttg ataagctgaa gtttgacaaa    1020ctgtacaaga tgctgaccga gatttacacc gaggacaact ttgtgaaatt cttcaaagtg    1080ttgaatcgta aaacctatct gaattttgac aaagcggttt tcaagattaa catcgtgccg    1140aaggtgaact acaccatcta tgacggtttt aacctgcgta acaccaacct ggcggcgaac    1200tttaacggtc agaatacgga aatcaacaac atgaatttca cgaagttgaa gaacttcacg    1260ggtctgttcg agttctataa gctgctgtgc gtgcgcggta tcatcaccag caaaaccaaa    1320agcctggaca aaggctacaa caaggcgctg aatgacctgt gcattaaggt aaacaattgg    1380gatctgttct tttcgccatc cgaagataat tttaccaacg acctgaacaa gggtgaagaa    1440atcaccagcg atacgaatat tgaagcagcg gaagagaata tcagcctgga tctgatccag    1500cagtactatc tgacctttaa cttcgacaat gaaccggaga acattagcat tgagaatctg    1560agcagcgaca ttatcggtca gctggaactg atgccgaata tcgaacgttt cccgaacggc    1620aaaaagtacg agctggacaa gtacactatg ttccattacc tgcgtgcaca ggagtttgaa    1680cacggtaaaa gccgtatcgc gctgaccaac agcgttaacg aggccctgct gaacccgagc    1740cgtgtctata ccttcttcag cagcgactat gttaagaaag tgaacaaagc cactgaggcc    1800gcgatgttcc tgggctgggt ggaacagctg gtatatgact tcacggacga gacgagcgaa    1860gtgagcacta ccgacaaaat tgctgatatt accatcatta tcccgtatat tggtccggca    1920ctgaacattg gcaacatgct gtacaaagac gattttgtgg gtgccctgat cttctccggt    1980gccgtgattc tgctggagtt cattccggag attgcgatcc cggtgttggg taccttcgcg    2040ctggtgtcct acatcgcgaa taaggttctg acggttcaga ccatcgataa cgcgctgtcg    2100aaacgtaatg aaaaatggga cgaggtttac aaatacattg ttacgaattg gctggcgaaa    2160gtcaataccc agatcgacct gatccgtaag aaaatgaaag aggcgctgga gaatcaggcg    2220gaggccacca aagcaattat caactaccaa tacaaccagt acacggaaga agagaagaat    2280aacattaact tcaatatcga tgatttgagc agcaagctga atgaatctat caacaaagcg    2340atgatcaata tcaacaagtt tttgaatcag tgtagcgttt cgtacctgat gaatagcatg    2400attccgtatg gcgtcaaacg tctggaggac ttcgacgcca gcctgaaaga tgcgttgctg    2460aaatacattt acgacaatcg tggtacgctg attggccaag ttgaccgctt gaaagacaaa    2520gttaacaata ccctgagcac cgacatccca tttcaactga gcaagtatgt tgataatcaa    2580cgtctgttga gcactttcac cgagtatatc aaaaacatca tcaatactag cattctgaac    2640ctgcgttacg agagcaatca tctgattgat ctgagccgtt atgctagcaa gatcaacatc    2700ggtagcaagg tcaattttga cccgatcgat aagaaccaga tccagctgtt taatctggaa    2760tcgagcaaaa ttgaggttat cctgaaaaag gccattgtct acaactccat gtacgagaat    2820ttctccacca gcttctggat tcgcatcccg aaatacttca acaagattag cctgaacaac    2880gagtatacta tcatcaactg tatggagaac aacagcggtt ggaaggtgtc tctgaactat    2940ggtgagatca tttggacctt gcaggacacc aaagagatca agcagcgcgt cgtgttcaag    3000tactctcaaa tgatcaacat ttccgattac attaatcgtt ggatcttcgt gaccattacg    3060aataaccgtc tgaagaagag caagatttac atcaatggtc gcttgatcga tcagaaaccg    3120attagcaacc tgggtaatat ccacgcaagc aacaagatta tgttcaaatt ggacggttgc    3180cgcgataccc atcgttatat ctggatcaag tatttcaacc tgtttgataa agaactgaat    3240gagaaggaga tcaaagattt gtatgacaac caatctaaca gcggcatttt gaaggacttc    3300tggggcgatt atctgcaata cgataagccg tactatatgc tgaacctgta tgatccgaac    3360aaatatgtgg atgtcaataa tgtgggtatt cgtggttaca tgtatttgaa gggtccgcgt    3420ggcagcgtta tgacgaccaa catttacctg aactctagcc tgtaccgtgg tacgaaattc    3480atcattaaga aatatgccag cggcaacaaa gataacattg tgcgtaataa cgatcgtgtc    3540tacatcaacg tggtcgtgaa gaataaagag taccgtctgg cgaccaacgc ttcgcaggcg    3600ggtgttgaga aaattctgag cgcgttggag atccctgatg tcggtaatct gagccaagtc    3660gtggttatga agagcaagaa cgacaagggt atcactaaca agtgcaagat gaacctgcaa    3720gacaacaatg gtaacgacat cggctttatt ggtttccacc agttcaacaa tattgctaaa    3780ctggtagcga gcaattggta caatcgtcag attgagcgca gcagccgtac tttgggctgt    3840agctgggagt ttatcccggt cgatgatggt tggggcgaac gtccgctg                 3888<210>  19<211>  1296<212>  prt<213>  人工序列<220><223>  修饰的bont/a "cat-c"的多肽序列<400>  19met pro phe val asn lys gln phe asn tyr lys asp pro val asn gly1               5                   10                  15val asp ile ala tyr ile lys ile pro asn ala gly gln met gln pro            20                  25                  30val lys ala phe lys ile his asn lys ile trp val ile pro glu arg        35                  40                  45asp thr phe thr asn pro glu glu gly asp leu asn pro pro pro glu    50                  55                  60ala lys gln val pro val ser tyr tyr asp ser thr tyr leu ser thr65                  70                  75                  80asp asn glu lys asp asn tyr leu lys gly val thr lys leu phe glu                85                  90                  95arg ile tyr ser thr asp leu gly arg met leu leu thr ser ile val            100                 105                 110arg gly ile pro phe trp gly gly ser thr ile asp thr glu leu lys        115                 120                 125val ile asp thr asn cys ile asn val ile gln pro asp gly ser tyr    130                 135                 140arg ser glu glu leu asn leu val ile ile gly pro ser ala asp ile145                 150                 155                 160ile gln phe glu cys lys ser phe gly his glu val leu asn leu thr                165                 170                 175arg asn gly tyr gly ser thr gln tyr ile arg phe ser pro asp phe            180                 185                 190thr phe gly phe glu glu ser leu glu val asp thr asn pro leu leu        195                 200                 205gly ala gly lys phe ala thr asp pro ala val thr leu ala his glu    210                 215                 220leu ile his ala gly his arg leu tyr gly ile ala ile asn pro asn225                 230                 235                 240arg val phe lys val asn thr asn ala tyr tyr glu met ser gly leu                245                 250                 255glu val ser phe glu glu leu arg thr phe gly gly his asp ala lys            260                 265                 270phe ile asp ser leu gln glu asn glu phe arg leu tyr tyr tyr asn        275                 280                 285lys phe lys asp ile ala ser thr leu asn lys ala lys ser ile val    290                 295                 300gly thr thr ala ser leu gln tyr met lys asn val phe lys glu lys305                 310                 315                 320tyr leu leu ser glu asp thr ser gly lys phe ser val asp lys leu                325                 330                 335lys phe asp lys leu tyr lys met leu thr glu ile tyr thr glu asp            340                 345                 350asn phe val lys phe phe lys val leu asn arg lys thr tyr leu asn        355                 360                 365phe asp lys ala val phe lys ile asn ile val pro lys val asn tyr    370                 375                 380thr ile tyr asp gly phe asn leu arg asn thr asn leu ala ala asn385                 390                 395                 400phe asn gly gln asn thr glu ile asn asn met asn phe thr lys leu                405                 410                 415lys asn phe thr gly leu phe glu phe tyr lys leu leu cys val arg            420                 425                 430gly ile ile thr ser lys thr lys ser leu asp lys gly tyr asn lys        435                 440                 445ala leu asn asp leu cys ile lys val asn asn trp asp leu phe phe    450                 455                 460ser pro ser glu asp asn phe thr asn asp leu asn lys gly glu glu465                 470                 475                 480ile thr ser asp thr asn ile glu ala ala glu glu asn ile ser leu                485                 490                 495asp leu ile gln gln tyr tyr leu thr phe asn phe asp asn glu pro            500                 505                 510glu asn ile ser ile glu asn leu ser ser asp ile ile gly gln leu        515                 520                 525glu leu met pro asn ile glu arg phe pro asn gly lys lys tyr glu    530                 535                 540leu asp lys tyr thr met phe his tyr leu arg ala gln glu phe glu545                 550                 555                 560his gly lys ser arg ile ala leu thr asn ser val asn glu ala leu                565                 570                 575leu asn pro ser arg val tyr thr phe phe ser ser asp tyr val lys            580                 585                 590lys val asn lys ala thr glu ala ala met phe leu gly trp val glu        595                 600                 605gln leu val tyr asp phe thr asp glu thr ser glu val ser thr thr    610                 615                 620asp lys ile ala asp ile thr ile ile ile pro tyr ile gly pro ala625                 630                 635                 640leu asn ile gly asn met leu tyr lys asp asp phe val gly ala leu                645                 650                 655ile phe ser gly ala val ile leu leu glu phe ile pro glu ile ala            660                 665                 670ile pro val leu gly thr phe ala leu val ser tyr ile ala asn lys        675                 680                 685val leu thr val gln thr ile asp asn ala leu ser lys arg asn glu    690                 695                 700lys trp asp glu val tyr lys tyr ile val thr asn trp leu ala lys705                 710                 715                 720val asn thr gln ile asp leu ile arg lys lys met lys glu ala leu                725                 730                 735glu asn gln ala glu ala thr lys ala ile ile asn tyr gln tyr asn            740                 745                 750gln tyr thr glu glu glu lys asn asn ile asn phe asn ile asp asp        755                 760                 765leu ser ser lys leu asn glu ser ile asn lys ala met ile asn ile    770                 775                 780asn lys phe leu asn gln cys ser val ser tyr leu met asn ser met785                 790                 795                 800ile pro tyr gly val lys arg leu glu asp phe asp ala ser leu lys                805                 810                 815asp ala leu leu lys tyr ile tyr asp asn arg gly thr leu ile gly            820                 825                 830gln val asp arg leu lys asp lys val asn asn thr leu ser thr asp        835                 840                 845ile pro phe gln leu ser lys tyr val asp asn gln arg leu leu ser    850                 855                 860thr phe thr glu tyr ile lys asn ile ile asn thr ser ile leu asn865                 870                 875                 880leu arg tyr glu ser asn his leu ile asp leu ser arg tyr ala ser                885                 890                 895lys ile asn ile gly ser lys val asn phe asp pro ile asp lys asn            900                 905                 910gln ile gln leu phe asn leu glu ser ser lys ile glu val ile leu        915                 920                 925lys lys ala ile val tyr asn ser met tyr glu asn phe ser thr ser    930                 935                 940phe trp ile arg ile pro lys tyr phe asn lys ile ser leu asn asn945                 950                 955                 960glu tyr thr ile ile asn cys met glu asn asn ser gly trp lys val                965                 970                 975ser leu asn tyr gly glu ile ile trp thr leu gln asp thr lys glu            980                 985                 990ile lys gln arg val val phe lys  tyr ser gln met ile  asn ile ser        995                 1000                 1005asp tyr  ile asn arg trp ile  phe val thr ile thr  asn asn arg    1010                 1015                 1020leu lys  lys ser lys ile tyr  ile asn gly arg leu  ile asp gln    1025                 1030                 1035lys pro  ile ser asn leu gly  asn ile his ala ser  asn lys ile    1040                 1045                 1050met phe  lys leu asp gly cys  arg asp thr his arg  tyr ile trp    1055                 1060                 1065ile lys  tyr phe asn leu phe  asp lys glu leu asn  glu lys glu    1070                 1075                 1080ile lys  asp leu tyr asp asn  gln ser asn ser gly  ile leu lys    1085                 1090                 1095asp phe  trp gly asp tyr leu  gln tyr asp lys pro  tyr tyr met    1100                 1105                 1110leu asn  leu tyr asp pro asn  lys tyr val asp val  asn asn val    1115                 1120                 1125gly ile  arg gly tyr met tyr  leu lys gly pro arg  gly ser val    1130                 1135                 1140met thr  thr asn ile tyr leu  asn ser ser leu tyr  arg gly thr    1145                 1150                 1155lys phe  ile ile lys lys tyr  ala ser gly asn lys  asp asn ile    1160                 1165                 1170val arg  asn asn asp arg val  tyr ile asn val val  val lys asn    1175                 1180                 1185lys glu  tyr arg leu ala thr  asn ala ser gln ala  gly val glu    1190                 1195                 1200lys ile  leu ser ala leu glu  ile pro asp val gly  asn leu ser    1205                 1210                 1215gln val  val val met lys ser  lys asn asp lys gly  ile thr asn    1220                 1225                 1230lys cys  lys met asn leu gln  asp asn asn gly asn  asp ile gly    1235                 1240                 1245phe ile  gly phe his gln phe  asn asn ile ala lys  leu val ala    1250                 1255                 1260ser asn  trp tyr asn arg gln  ile glu arg ser ser  arg thr leu    1265                 1270                 1275gly cys  ser trp glu phe ile  pro val asp asp gly  trp gly glu    1280                 1285                 1290arg pro  leu    1295<210>  20<211>  3888<212>  dna<213>  人工序列<220><223>  修饰的bont/a "cat-d"的核苷酸序列<400>  20atgccattcg tcaacaagca attcaactac aaagacccag tcaacggcgt cgacatcgca      60tacatcaaga ttccgaacgc cggtcaaatg cagccggtta aggcttttaa gatccacaac     120aagatttggg ttatcccgga gcgtgacacc ttcacgaacc cggaagaagg cgatctgaac     180ccgccaccgg aagcgaagca agtccctgtc agctactacg attcgacgta cctgagcacg     240gataacgaaa aagataacta cctgaaaggt gtgaccaagc tgttcgaacg tatctacagc     300acggatctgg gtcgcatgct gctgactagc attgttcgcg gtatcccgtt ctggggtggt     360agcacgattg acaccgaact gaaggttatc gacactaact gcattaacgt tattcaaccg     420gatggtagct atcgtagcga agagctgaat ctggtcatca ttggcccgag cgcagacatt     480atccaattcg agtgcaagag ctttggtcac gaggttctga atctgacccg caatggctat     540ggtagcaccc agtacattcg tttttcgccg gattttacct tcggctttga agagagcctg     600gaggttgata ccaatccgtt gctgggtgcg ggcaaattcg ctaccgatcc ggctgtcacg     660ctggcccatg aactgatcca cgcaggccac cgcctgtacg gcattgccat caacccaaac     720cgtgtgttca aggttaatac gaatgcatac tacgagatga gcggcctgga agtcagcttc     780gaagaactgc gcaccttcgg tggccatgac gctaaattca ttgacagctt gcaagagaat     840gagttccgtc tgtactacta taacaaattc aaagacattg caagcacgtt gaacaaggcc     900aaaagcatcg ttggtactac cgcgtcgttg cagtatatga agaatgtgtt taaagagaag     960tacctgctgt ccgaggatac ctccggcaag tttagcgttg ataagctgaa gtttgacaaa    1020ctgtacaaga tgctgaccga gatttacacc gaggacaact ttgtgaaatt cttcaaagtg    1080ttgaatcgta aaacctatct gaattttgac aaagcggttt tcaagattaa catcgtgccg    1140aaggtgaact acaccatcta tgacggtttt aacctgcgta acaccaacct ggcggcgaac    1200tttaacggtc agaatacgga aatcaacaac atgaatttca cgaagttgaa gaacttcacg    1260ggtctgttcg agttctataa gctgctgtgc gtgcgcggta tcatcaccag caaaaccaaa    1320agcctggaca aaggctacaa caaggcgctg aatgacctgt gcattaaggt aaacaattgg    1380gatctgttct tttcgccatc cgaagataat tttaccaacg acctgaacaa gggtgaagaa    1440atcaccagcg atacgaatat tgaagcagcg gaagagaata tcagcctgga tctgatccag    1500cagtactatc tgacctttaa cttcgacaat gaaccggaga acattagcat tgagaatctg    1560agcagcgaca ttatcggtca gctggaactg atgccgaata tcgaacgttt cccgaacggc    1620aaaaagtacg agctggacaa gtacactatg ttccattacc tgcgtgcaca ggagtttgaa    1680cacggtaaaa gccgtatcgc gctgaccaac agcgttaacg aggccctgct gaacccgagc    1740cgtgtctata ccttcttcag cagcgactat gttaagaaag tgaacaaagc cactgaggcc    1800gcgatgttcc tgggctgggt ggaacagctg gtatatgact tcacggacga gacgagcgaa    1860gtgagcacta ccgacaaaat tgctgatatt accatcatta tcccgtatat tggtccggca    1920ctgaacattg gcaacatgct gtacaaagac gattttgtgg gtgccctgat cttctccggt    1980gccgtgattc tgctggagtt cattccggag attgcgatcc cggtgttggg taccttcgcg    2040ctggtgtcct acatcgcgaa taaggttctg acggttcaga ccatcgataa cgcgctgtcg    2100aaacgtaatg aaaaatggga cgaggtttac aaatacattg ttacgaattg gctggcgaaa    2160gtcaataccc agatcgacct gatccgtaag aaaatgaaag aggcgctgga gaatcaggcg    2220gaggccacca aagcaattat caactaccaa tacaaccagt acacggaaga agagaagaat    2280aacattaact tcaatatcga tgatttgagc agcaagctga atgaatctat caacaaagcg    2340atgatcaata tcaacaagtt tttgaatcag tgtagcgttt cgtacctgat gaatagcatg    2400attccgtatg gcgtcaaacg tctggaggac ttcgacgcca gcctgaaaga tgcgttgctg    2460aaatacattt acgacaatcg tggtacgctg attggccaag ttgaccgctt gaaagacaaa    2520gttaacaata ccctgagcac cgacatccca tttcaactga gcaagtatgt tgataatcaa    2580cgtctgttga gcactttcac cgagtatatc aaaaacatca tcaatactag cattctgaac    2640ctgcgttacg agagcaatca tctgattgat ctgagccgtt atgcaagcaa gatcaacatc    2700ggtagcaagg tcaattttga cccgatcgat aagaaccaga tccagctgtt taatctggaa    2760tcgagcaaaa ttgaggttat cctgaaaaac gccattgtct acaactccat gtacgagaat    2820ttctccacca gcttctggat tcgcatcccg aaatacttca acagcattag cctgaacaac    2880gagtatacta tcatcaactg tatggagaac aacagcggtt ggaaggtgtc tctgaactat    2940ggtgagatca tttggacctt gcaggacacc caagagatca agcagcgcgt cgtgttcaag    3000tactctcaaa tgatcaacat ttccgattac attaatcgtt ggatcttcgt gaccattacg    3060aataaccgtc tgaataacag caagatttac atcaatggtc gcttgatcga tcagaaaccg    3120attagcaacc tgggtaatat ccacgcaagc aacaacatta tgttcaaatt ggacggttgc    3180cgcgataccc atcgttatat ctggatcaag tatttcaacc tgtttgataa agaactgaat    3240gagaaggaga tcaaagattt gtatgacaac caatctaaca gcggcatttt gaaggacttc    3300tggggcgatt atctgcaata cgataagccg tactatatgc tgaacctgta tgatccgaac    3360aaatatgtgg atgtcaataa tgtgggtatt cgtggttaca tgtatttgaa gggtccgcgt    3420ggcagcgtta tgacgaccaa catttacctg aactctagcc tgtaccgtgg tacgaaattc    3480atcattaaga aatatgccag cggcaacaaa gataacattg tgcgtaataa cgatcgtgtc    3540tacatcaacg tggtcgtgaa gcgtaaagag taccgtctgg cgaccaacgc ttcgcaggcg    3600ggtgttgaga aaattctgag cgcgttggag atccctcgtg tccgtcgtct gagccaagtc    3660gtggttatga agagcaagaa cgaccagggt atcactaaca agtgcaagat gaacctgcaa    3720gaccgtcgtg gtaacgacat cggctttatt ggtttccacc agttcaacaa tattgctaaa    3780ctggtagcga gcaattggta caatcgtcag attgagcgcc gtagccgtcg tttgggctgt    3840agctgggagt ttatcccggt cgatgatggt tggggcgaac gtccgctg                 3888<210>  21<211>  1296<212>  prt<213>  人工序列<220><223>  修饰的bont/a "cat-d"的多肽序列<400>  21met pro phe val asn lys gln phe asn tyr lys asp pro val asn gly1               5                   10                  15val asp ile ala tyr ile lys ile pro asn ala gly gln met gln pro            20                  25                  30val lys ala phe lys ile his asn lys ile trp val ile pro glu arg        35                  40                  45asp thr phe thr asn pro glu glu gly asp leu asn pro pro pro glu    50                  55                  60ala lys gln val pro val ser tyr tyr asp ser thr tyr leu ser thr65                  70                  75                  80asp asn glu lys asp asn tyr leu lys gly val thr lys leu phe glu                85                  90                  95arg ile tyr ser thr asp leu gly arg met leu leu thr ser ile val            100                 105                 110arg gly ile pro phe trp gly gly ser thr ile asp thr glu leu lys        115                 120                 125val ile asp thr asn cys ile asn val ile gln pro asp gly ser tyr    130                 135                 140arg ser glu glu leu asn leu val ile ile gly pro ser ala asp ile145                 150                 155                 160ile gln phe glu cys lys ser phe gly his glu val leu asn leu thr                165                 170                 175arg asn gly tyr gly ser thr gln tyr ile arg phe ser pro asp phe            180                 185                 190thr phe gly phe glu glu ser leu glu val asp thr asn pro leu leu        195                 200                 205gly ala gly lys phe ala thr asp pro ala val thr leu ala his glu    210                 215                 220leu ile his ala gly his arg leu tyr gly ile ala ile asn pro asn225                 230                 235                 240arg val phe lys val asn thr asn ala tyr tyr glu met ser gly leu                245                 250                 255glu val ser phe glu glu leu arg thr phe gly gly his asp ala lys            260                 265                 270phe ile asp ser leu gln glu asn glu phe arg leu tyr tyr tyr asn        275                 280                 285lys phe lys asp ile ala ser thr leu asn lys ala lys ser ile val    290                 295                 300gly thr thr ala ser leu gln tyr met lys asn val phe lys glu lys305                 310                 315                 320tyr leu leu ser glu asp thr ser gly lys phe ser val asp lys leu                325                 330                 335lys phe asp lys leu tyr lys met leu thr glu ile tyr thr glu asp            340                 345                 350asn phe val lys phe phe lys val leu asn arg lys thr tyr leu asn        355                 360                 365phe asp lys ala val phe lys ile asn ile val pro lys val asn tyr    370                 375                 380thr ile tyr asp gly phe asn leu arg asn thr asn leu ala ala asn385                 390                 395                 400phe asn gly gln asn thr glu ile asn asn met asn phe thr lys leu                405                 410                 415lys asn phe thr gly leu phe glu phe tyr lys leu leu cys val arg            420                 425                 430gly ile ile thr ser lys thr lys ser leu asp lys gly tyr asn lys        435                 440                 445ala leu asn asp leu cys ile lys val asn asn trp asp leu phe phe    450                 455                 460ser pro ser glu asp asn phe thr asn asp leu asn lys gly glu glu465                 470                 475                 480ile thr ser asp thr asn ile glu ala ala glu glu asn ile ser leu                485                 490                 495asp leu ile gln gln tyr tyr leu thr phe asn phe asp asn glu pro            500                 505                 510glu asn ile ser ile glu asn leu ser ser asp ile ile gly gln leu        515                 520                 525glu leu met pro asn ile glu arg phe pro asn gly lys lys tyr glu    530                 535                 540leu asp lys tyr thr met phe his tyr leu arg ala gln glu phe glu545                 550                 555                 560his gly lys ser arg ile ala leu thr asn ser val asn glu ala leu                565                 570                 575leu asn pro ser arg val tyr thr phe phe ser ser asp tyr val lys            580                 585                 590lys val asn lys ala thr glu ala ala met phe leu gly trp val glu        595                 600                 605gln leu val tyr asp phe thr asp glu thr ser glu val ser thr thr    610                 615                 620asp lys ile ala asp ile thr ile ile ile pro tyr ile gly pro ala625                 630                 635                 640leu asn ile gly asn met leu tyr lys asp asp phe val gly ala leu                645                 650                 655ile phe ser gly ala val ile leu leu glu phe ile pro glu ile ala            660                 665                 670ile pro val leu gly thr phe ala leu val ser tyr ile ala asn lys        675                 680                 685val leu thr val gln thr ile asp asn ala leu ser lys arg asn glu    690                 695                 700lys trp asp glu val tyr lys tyr ile val thr asn trp leu ala lys705                 710                 715                 720val asn thr gln ile asp leu ile arg lys lys met lys glu ala leu                725                 730                 735glu asn gln ala glu ala thr lys ala ile ile asn tyr gln tyr asn            740                 745                 750gln tyr thr glu glu glu lys asn asn ile asn phe asn ile asp asp        755                 760                 765leu ser ser lys leu asn glu ser ile asn lys ala met ile asn ile    770                 775                 780asn lys phe leu asn gln cys ser val ser tyr leu met asn ser met785                 790                 795                 800ile pro tyr gly val lys arg leu glu asp phe asp ala ser leu lys                805                 810                 815asp ala leu leu lys tyr ile tyr asp asn arg gly thr leu ile gly            820                 825                 830gln val asp arg leu lys asp lys val asn asn thr leu ser thr asp        835                 840                 845ile pro phe gln leu ser lys tyr val asp asn gln arg leu leu ser    850                 855                 860thr phe thr glu tyr ile lys asn ile ile asn thr ser ile leu asn865                 870                 875                 880leu arg tyr glu ser asn his leu ile asp leu ser arg tyr ala ser                885                 890                 895lys ile asn ile gly ser lys val asn phe asp pro ile asp lys asn            900                 905                 910gln ile gln leu phe asn leu glu ser ser lys ile glu val ile leu        915                 920                 925lys asn ala ile val tyr asn ser met tyr glu asn phe ser thr ser    930                 935                 940phe trp ile arg ile pro lys tyr phe asn ser ile ser leu asn asn945                 950                 955                 960glu tyr thr ile ile asn cys met glu asn asn ser gly trp lys val                965                 970                 975ser leu asn tyr gly glu ile ile trp thr leu gln asp thr gln glu            980                 985                 990ile lys gln arg val val phe lys  tyr ser gln met ile  asn ile ser        995                 1000                 1005asp tyr  ile asn arg trp ile  phe val thr ile thr  asn asn arg    1010                 1015                 1020leu asn  asn ser lys ile tyr  ile asn gly arg leu  ile asp gln    1025                 1030                 1035lys pro  ile ser asn leu gly  asn ile his ala ser  asn asn ile    1040                 1045                 1050met phe  lys leu asp gly cys  arg asp thr his arg  tyr ile trp    1055                 1060                 1065ile lys  tyr phe asn leu phe  asp lys glu leu asn  glu lys glu    1070                 1075                 1080ile lys  asp leu tyr asp asn  gln ser asn ser gly  ile leu lys    1085                 1090                 1095asp phe  trp gly asp tyr leu  gln tyr asp lys pro  tyr tyr met    1100                 1105                 1110leu asn  leu tyr asp pro asn  lys tyr val asp val  asn asn val    1115                 1120                 1125gly ile  arg gly tyr met tyr  leu lys gly pro arg  gly ser val    1130                 1135                 1140met thr  thr asn ile tyr leu  asn ser ser leu tyr  arg gly thr    1145                 1150                 1155lys phe  ile ile lys lys tyr  ala ser gly asn lys  asp asn ile    1160                 1165                 1170val arg  asn asn asp arg val  tyr ile asn val val  val lys arg    1175                 1180                 1185lys glu  tyr arg leu ala thr  asn ala ser gln ala  gly val glu    1190                 1195                 1200lys ile  leu ser ala leu glu  ile pro arg val arg  arg leu ser    1205                 1210                 1215gln val  val val met lys ser  lys asn asp gln gly  ile thr asn    1220                 1225                 1230lys cys  lys met asn leu gln  asp arg arg gly asn  asp ile gly    1235                 1240                 1245phe ile  gly phe his gln phe  asn asn ile ala lys  leu val ala    1250                 1255                 1260ser asn  trp tyr asn arg gln  ile glu arg arg ser  arg arg leu    1265                 1270                 1275gly cys  ser trp glu phe ile  pro val asp asp gly  trp gly glu    1280                 1285                 1290arg pro  leu    1295

背景技术：

技术实现思路