包含靶向癌症的CAR-T细胞的组合疗法及使用其治疗癌症的方法与流程

本公开涉及肿瘤免疫治疗领域，特别是恶性神经胶质瘤car-t疗法。关于序列表的声明与本申请相关联的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且在本文中通过引用并入说明书中。包含序列表的文本文件名为118180-0600_st25.txt.，文本文件约28kb，创建于2020年9月8日，通过efs-web以电子方式提交。

背景技术：

1、使用工程化以表达免疫受体的t细胞的新疗法已经为包括癌症和自身免疫性疾病在内的一系列顽固性疾病带来了有前途的免疫疗法。

2、癌症是对人类健康的显著威胁，导致了生活质量下降，并经常导致死亡。就所需的资源和人力而言，对于国家、地区和地方卫生保健组织来治疗和预防各种形式的癌症的负担是巨大的。人类对抗疾病的主要武器之一是功能正常的免疫系统。抗原(包括突变抗原)是破坏肿瘤的强有力的靶点，例如在小鼠中，靶向这些抗原的肿瘤浸润淋巴细胞可以导致患者的持久肿瘤消退。

3、高亲和力白细胞介素-13受体α2(il13rα2)在多形性胶质母细胞瘤(gbm)和其他肿瘤类型中选择性地高频率表达。靶向这种肿瘤特异性受体的一种途径利用与细胞毒性分子结合的同源配体il-13。然而，这种途径缺乏特异性，因为il-13的低亲和力受体il-13rα1在非癌组织中广泛表达。人表皮生长因子受体2(her2)是几种类型癌症中有效的癌症靶点，最显著的是乳腺癌，但最近确定了her也在高达80％的gbm中表达，但不在正常出生后的神经元或神经胶质中表达。

4、许多人类癌症缺乏可预测地存在于癌组织上或癌组织中并且能够作为免疫细胞(例如t细胞)的有效缓解靶点的特异性抗原。每种癌细胞类型都含有一组导致不同的肿瘤特异性抗原的独特的突变。尽管技术水平有所进步，但鉴定有效的独特抗原和分离合适的t细胞受体以转导自体t细胞以用于过继免疫疗法仍然是困难的。然而，利用具有嵌合抗原受体(car)和双特异性t细胞接合蛋白(bite)的过继t细胞免疫疗法的成功主要受限于肿瘤性血液病。许多因素使得过继免疫疗法难以治疗实体瘤，主要归因于对t细胞不利的肿瘤微环境。

5、因此，需要确定用于治疗实体瘤(特别是gbm)的过继免疫疗法。本公开解决了这种需要。

技术实现思路

1、在一些方面，本公开大体涉及一种治疗对象的多形性胶质母细胞瘤(gbm)的方法，包括向患有gbm的对象施用(i)表达嵌合抗原受体(car)的细胞群，和(ii)溶瘤病毒。在一些方面，表达car的细胞群和溶瘤病毒是同时施用的。在一些方面，表达car的细胞群和溶瘤病毒是按顺序施用的。在一些方面，首先施用表达car的细胞群，然后施用溶瘤病毒。在一些方面，首先施用溶瘤病毒，然后施用表达car的细胞群。在一些方面，对象先前经历了移除原发性gbm肿瘤和/或转移性肿瘤的手术。

2、在一些方面，表达car的细胞群包含t细胞。在一些方面，t细胞是中枢记忆t细胞。在一些方面，表达car的细胞群包含nk细胞。

3、在一些方面，car包含结合结构域、间隔结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和cd3ζ信号传导结构域。在一些方面，car选择性地结合il-13rα2。在一些方面，结合结构域包含seq id no：1。在一些方面，间隔结构域包含igg4 fc结构域。在一些方面，igg4fc结构域包含seq id no：2、seq id no：3、seq id no：4或seq id no：5。

4、在一些方面，跨膜结构域包含cd4跨膜结构域。在一些方面，cd4跨膜结构域包含malivlggvaglllfiglgiff(seq id no：6)。在一些方面，跨膜结构域包含cd8跨膜结构域。在一些方面，或cd8跨膜结构域包含iyiwaplagtcgvlllslvit(seq id no：11)、iyiwaplagtcgvlllslvitly(seq id no：12)或iyiwaplagtcgvlllslvitlyc(seq id no：13)。在一些方面，共刺激结构域包含4-1bb共刺激结构域。在一些方面，4-1bb共刺激结构域包含seq id no：7。在一些方面，car包含seq id no：8或seq id no：14。

5、在一些方面，表达car的细胞群还表达选择标签。在一些方面，选择标签是截短的cd19序列(cd19t)或截短的表皮生长因子受体序列(egfrt)。在一些方面，cd19t或egfrt序列通过t2a间隔序列与car分离。

6、在一些方面，溶瘤病毒是基因工程的1型单纯疱疹病毒(hsv-1)。在一些方面，溶瘤病毒具有复制能力。在一些方面，从溶瘤病毒的基因组中删除icp34.5基因，并且将编码人巨细胞病毒(hcmv)irs1基因的基因引入溶瘤病毒的基因组中。在一些方面，溶瘤病毒是c134。

7、在一些方面，表达car的细胞群是中枢记忆t细胞，并且car包含seq id no：8或seqid no：14，并且其中溶瘤病毒是c134。在一些方面，表达car的细胞群和溶瘤病毒通过相同的施用途径施用。在一些方面，表达car的细胞群和溶瘤病毒通过不同的施用途径施用。

8、在一些方面，施用的途径选自脑室内、肿瘤内、鞘内和进入切除的肿瘤腔。在一些方面，表达car的细胞群和溶瘤病毒被直接施用到对象的中枢神经系统(cns)中。

9、本文描述和要求保护的发明具有许多属性和实施方案，包括但不限于在发明简述和以下附图说明和详细说明中阐述或描述或引用的属性和实施方案。其并不旨在包括所有，并且本文所描述和要求保护的发明并不局限于或受该发明简述中确定的特征或实施方案的限制，该发明简述仅出于说明而非限制的目的而被包括。其他的实施方案可以在下面的详细说明中公开。

1.一种治疗对象的多形性胶质母细胞瘤(gbm)的方法，其包含向患有gbm的对象施用(i)表达嵌合抗原受体(car)的细胞群，和(ii)溶瘤病毒。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达car的细胞群和所述溶瘤病毒是同时施用的。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达car的细胞群和所述溶瘤病毒是按顺序施用的。

4.根据权利要求3所述的方法，其中首先施用表达car的细胞群，然后施用溶瘤病毒。

5.根据权利要求3所述的方法，其中首先施用溶瘤病毒，然后施用表达car的细胞群。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述对象先前经历了移除原发性gbm肿瘤和/或转移性肿瘤的手术。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中表达car的细胞群包含t细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述t细胞是中枢记忆t细胞。

9.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中表达car的细胞群包含nk细胞。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述car包含结合结构域、间隔结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和cd3ζ信号传导结构域。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述car选择性地结合il-13rα2或her2。

12.根据权利要求10或11中任一项所述的方法，其中所述结合结构域包含gpvppstalrylieelvnitqnqkaplcngsmvwsinltagmycaaleslinvsgcsaiekt qrmlsgfcphkvsagqfsslhvrdtkievaqfvkdlllhlkklfregrfn(seq id no:1)或

13.根据权利要求10-12中任一项所述的方法，其中所述间隔结构域包含igg4 fc结构域。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述igg4 fc结构域包含

15.根据权利要求10-14中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域包含cd4跨膜结构域或cd8跨膜结构域。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述cd4跨膜结构域包含malivlggvaglllfiglgiff(seq id no：6)或其中所述cd8跨膜结构域包含iyiwaplagtcgvlllslvit(seq id no：11)、iyiwaplagtcgvlllslvitly(seq id no：12)或iyiwaplagtcgvlllslvitlyc(seq id no：13)。

17.根据权利要求10-16中任一项所述的方法，其中所述共刺激结构域包含4-1bb共刺激结构域。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述4-1bb共刺激结构域包含krgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcel(seq id no：7)。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述car包含gpvppstalrylieelvnitqnqkaplcngsmvwsinltagmycaaleslinvsgcsaiektqrmlsgfcphkvsagqfsslhvrdtkievaqfvkdlllhlkklfregrfneskygppcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfqstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgkmalivlggvaglllfiglgiffkrgrkkllyifkqpfmrpvqttqeedgcscrfpeeeeggcelgggrvkfsrsadapayqqgqnqlynelnlgrreeydvldkrrgrdpemggkprrknpqeglynelqkdkmaeayseigmkgerrrgkghdglyqglstatkdtydalhmqalppr(seq id no:8)；或

20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中表达car的细胞群还表达选择标签。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述选择标签是截短的cd 19序列(cd19t)或截短的表皮生长因子受体序列(egfrt)，并且任选地，其中所述cd19t或egfrt通过t2a间隔序列与所述car分离。

22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述溶瘤病毒是基因工程的1型单纯疱疹病毒(hsv-1)。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述溶瘤病毒具有复制能力。

24.根据权利要求22或23所述的方法，其中从所述溶瘤病毒的基因组中删除icp34.5基因，并且将编码人巨细胞病毒(hcmv)irs1基因的基因引入所述溶瘤病毒的基因组中。

25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述溶瘤病毒是c134。

26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述表达car的细胞群是中枢记忆t细胞，并且所述car包含seq id no：8或seq id no：14，并且其中所述溶瘤病毒是c134。

27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中表达car的细胞群和溶瘤病毒通过相同的施用途径施用。

28.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中表达car的细胞群和溶瘤病毒通过不同的施用途径施用。

29.根据权利要求27或28所述的方法，其中所述施用途径选自脑室内、肿瘤内、鞘内和进入切除的肿瘤腔。

30.根据权利要求1-29中任一项所述的方法，其中将表达car的细胞群和溶瘤病毒直接施用到对象的中枢神经系统(cns)中。