脂质纳米颗粒的改进工艺和配制的制作方法

背景技术：

1、包裹的信使rna(mrna)的脂质纳米颗粒递送正在变成越来越重要的用于治疗多种疾病的方法。然而，由于固有的稳定性和对温度的敏感性，mrna易降解。因此，保持脂质纳米颗粒中包裹的mrna的完整性以供短期和长期储存用于治疗用途是至关重要的。

技术实现思路

1、本发明尤其提供了用于制备包含包裹mrna的脂质纳米颗粒(mrna-lnp)的冻干组合物的改进工艺。本发明基于出人意料的发现，即以下每个步骤：1)添加抗坏血酸用于冻干工艺，2)在冻干工艺之前用缓冲液预处理mrna-lnp组合物以维持ph，以及3)将冻干组合物的温度(例如，在二级干燥步骤期间)升高并保持至高温(例如，15℃至30℃之间)可以单独和共同提高冻干后包裹在脂质纳米颗粒中的mrna的完整性，从而产生能够承受长期储存的高度稳定的冻干mrna-lnp组合物。另外，根据本发明的冻干工艺延长了冻干期间包裹在脂类纳米颗粒中的mrna的完整性，同时还保持mrna-lnp的大小、pdi和包裹效率。因此，在一方面，本发明提供了制备用于长期和短期储存的具有高mrna完整性的稳定冻干mrna的改进方法。

2、在一方面，本发明尤其提供了制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物的方法，所述方法包括以下步骤：(a)向包含一个或多个包裹具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒的水溶液中添加5mm与200mm之间的抗坏血酸，(b)冷冻所述水溶液以获得冷冻溶液。

3、在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少50％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少55％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少60％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少65％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少70％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少75％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少80％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少85％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少90％。在一些实施方案中，在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少95％。

4、在一些实施方案中，所述方法包括在步骤(a)之前从所述水溶液中去除柠檬酸的步骤。在一些实施方案中，所述去除柠檬酸的步骤包括在ph 6至ph 8的ph下洗涤包含柠檬酸和edta的水溶液。在一些实施方案中，所述去除柠檬酸的步骤包括在ph 6至ph8的ph下洗涤包含10mm柠檬酸和1mm edta的水溶液。在一些实施方案中，所述去除柠檬酸的步骤包括在ph 6至ph 8的ph下洗涤包含柠檬酸和edta的水溶液。在一些实施方案中，所述水溶液包含1mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含2mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含5mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含8mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含10mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含15mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含20mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含25mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含50mm的柠檬酸盐缓冲液。在一些实施方案中，所述水溶液包含0.1mm的edta。在一些实施方案中，所述水溶液包含0.5mm的edta。在一些实施方案中，所述水溶液包含1mm的edta。在一些实施方案中，所述水溶液包含2.5mm的edta。在一些实施方案中，所述水溶液包含5mm的edta。在一些实施方案中，所述水溶液包含7.5mm的edta。在一些实施方案中，所述水溶液包含10mm的edta。

5、在一些实施方案中，所述方法包括在步骤(c)之后，(d)将所述冻干组合物的温度升高并保持至15℃至30℃之间的温度的步骤。

6、在一些实施方案中，水溶液包含约1mm至500mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约5mm至200mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mm至100mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mm至50mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约20mm至50mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约20mm至30mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mm至30mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mm至20mm的抗坏血酸。

7、在一些实施方案中，水溶液包含约1mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约2mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约3mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约5mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约8mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约10mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约15mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约20mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约25mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约30mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约40mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约50mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约75mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约100mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约125mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约150mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约175mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约200mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约250mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约300mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约400mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，水溶液包含约500mm的抗坏血酸。

8、在一些实施方案中，干燥步骤进行长于5小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于10小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于15小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于20小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于30小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于50小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于75小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于100小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于110小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于120小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于130小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于140小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于150小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于160小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于170小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行长于200小时。

9、在一些实施方案中，干燥步骤进行约10至300小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行约50至200小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行约100至150小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行约120小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行约130小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行约140小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行约150小时。在一些实施方案中，干燥步骤进行约160小时。

10、在一些实施方案中，将冻干组合物在5℃与40℃之间的温度下保持长于1小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在5℃与40℃之间的温度下保持长于2小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在5℃与40℃之间的温度下保持长于3小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在5℃与40℃之间的温度下保持长于4小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在5℃与40℃之间的温度下保持长于5小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在5℃与40℃之间的温度下保持长于7小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在5℃与40℃之间的温度下保持长于10小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在5℃与40℃之间的温度下保持长于15小时。

11、在一些实施方案中，将冻干组合物在10℃与30℃之间的温度下保持长于1小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在10℃与30℃之间的温度下保持长于2小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在10℃与30℃之间的温度下保持长于3小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在10℃与30℃之间的温度下保持长于4小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在10℃与30℃之间的温度下保持长于5小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在10℃与30℃之间的温度下保持长于7小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在10℃与30℃之间的温度下保持长于10小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在10℃与30℃之间的温度下保持长于15小时。

12、在一些实施方案中，将冻干组合物在20℃与30℃之间的温度下保持长于1小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在20℃与30℃之间的温度下保持长于2小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在20℃与30℃之间的温度下保持长于3小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在20℃与30℃之间的温度下保持长于4小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在20℃与30℃之间的温度下保持长于5小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在20℃与30℃之间的温度下保持长于7小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在20℃与30℃之间的温度下保持长于10小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在20℃与30℃之间的温度下保持长于15小时。

13、在一些实施方案中，将冻干组合物在约20℃的温度下保持长于1小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在约20℃的温度下保持长于2小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在约20℃的温度下保持长于3小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在约20℃的温度下保持长于4小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在约20℃的温度下保持长于5小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在约20℃的温度下保持长于7小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在约20℃的温度下保持长于10小时。在一些实施方案中，将冻干组合物在约20℃的温度下保持长于15小时。

14、在一些实施方案中，初始mrna完整性高于40％并且重构后的mrna完整性仍高于40％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于45％并且重构后的mrna完整性仍高于45％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于50％并且重构后的mrna完整性仍高于50％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于55％并且重构后的mrna完整性仍高于55％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于60％并且重构后的mrna完整性仍高于60％。

15、在一些实施方案中，初始mrna完整性高于40％并且重构后的mrna完整性高于30％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于45％并且重构后的mrna完整性高于35％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于50％并且重构后的mrna完整性高于40％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于55％并且重构后的mrna完整性高于45％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于60％并且重构后的mrna完整性高于50％。在一些实施方案中，初始mrna完整性高于65％并且重构后的mrna完整性高于55％。

16、

17、在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于一个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于80％。

18、在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于两个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于80％。

19、在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于三个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于80％。

20、在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。在一些实施方案中，在2℃与8℃之间的温度下储存长于五个月后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于80％。

21、在一些实施方案中，在室温(例如，15℃与25℃之间)下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三天后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。

22、在一些实施方案中，在室温(例如，15℃与25℃之间)下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于一周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。

23、在一些实施方案中，在室温(例如，15℃与25℃之间)下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于两周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。

24、在一些实施方案中，在室温(例如，15℃与25℃之间)下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于三周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。

25、在一些实施方案中，在室温(例如，15℃与25℃之间)下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于四周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。

26、在一些实施方案中，在室温(例如，15℃与25℃之间)下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，在15℃与25℃之间的温度下储存长于五周后，所述冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。

27、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加5mm和200mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少50％。

28、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加10mm和30mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少50％。

29、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加约20mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少50％。

30、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加5mm和200mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少60％。

31、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加10mm和30mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少60％。

32、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加约20mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少60％。

33、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加5mm和200mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少45％。

34、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加10mm和30mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少45％。

35、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加约20mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少45％。

36、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加5mm和200mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少40％。

37、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加10mm和30mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少40％。

38、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加约20mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少40％。

39、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加5mm和200mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少75％。

40、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加10mm和30mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少75％。

41、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加约20mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少75％。

42、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加5mm和200mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少80％。

43、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加10mm和30mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少80％。

44、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加约20mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少85％。

45、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加5mm和200mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少90％。

46、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加10mm和30mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少90％。

47、在一些实施方案中，通过向水溶液中添加约20mm的抗坏血酸来制备包含一个或多个包裹mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物，所述水溶液具有包裹经测量具有初始mrna完整性的mrna的脂质纳米颗粒，并且在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存6个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少90％。

48、在一些实施方案中，通过毛细管电泳(ce)来测定mrna完整性。在一些实施方案中，通过凝胶电泳来测定mrna完整性。在一些实施方案中，通过微流体装置来测定mrna完整性。在一些实施方案中，通过rt-qpcr来测定mrna完整性。在一些实施方案中，通过毛细管凝胶电泳(cge)来测定mrna完整性。在一些实施方案中，通过毛细管区带电泳(cze)来测定mrna完整性。在一些实施方案中，通过毛细管胶束电动毛细管色谱(mekc)来测定mrna完整性。在一些实施方案中，通过毛细管等电聚焦(cief)来测定mrna完整性。在一些实施方案中，通过毛细管电色谱(cec)测定mrna完整性。

49、在一些实施方案中，干燥步骤在低于冰点的温度下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在0℃与-100℃之间的温度下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在-10℃与-50℃之间的温度下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在-20℃与-30℃之间的温度下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约-30℃的温度下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约-25℃的温度下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约-20℃的温度下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约-15℃的温度下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约-10℃的温度下进行。

50、在一些实施方案中，干燥步骤在低于4580mtorr(4.58torr)的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在0mtorr与300mtorr之间的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在10mtorr与200mtorr之间的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在20mtorr与60mtorr之间的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约100mtorr的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约80mtorr的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约60mtorr的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约50mtorr的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约40mtorr的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约30mtorr的压力下进行。在一些实施方案中，干燥步骤在约20mtorr的压力下进行。

51、在一些实施方案中，在步骤(d)(例如，二级干燥步骤)中将所述冻干组合物的温度升高并且保持在0℃与40℃之间的温度。在一些实施方案中，在步骤(d)中，将所述冻干组合物的温度升高并且保持在5℃与30℃之间的温度。在一些实施方案中，在步骤(d)中，将所述冻干组合物的温度升高并且保持在20℃与30℃之间的温度。在一些实施方案中，在步骤(d)中，将所述冻干组合物的温度升高并且保持在约10℃的温度。在一些实施方案中，在步骤(d)中，将所述冻干组合物的温度升高并且保持在约15℃的温度。在一些实施方案中，在步骤(d)中，将所述冻干组合物的温度升高并且保持在约20℃的温度。在一些实施方案中，在步骤(d)中，将所述冻干组合物的温度升高并且保持在约25℃的温度。在一些实施方案中，在步骤(d)中，将所述冻干组合物的温度升高并且保持在约30℃的温度。在一些实施方案中，在步骤(d)中，将所述冻干组合物的温度升高并且保持在约35℃的温度。

52、在一些实施方案中，水溶液包含冻干保护剂。在一些实施方案中，水溶液包含(游离)碳水化合物，如葡萄糖、果糖、半乳糖、山梨糖、甘露糖及其组合。在一些实施方案中，水溶液包含二糖，如乳糖、麦芽糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖及其组合。在一些实施方案中，水溶液包含多糖，如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、右旋糖酐、糊精、纤维素、淀粉及其组合。在一些实施方案中，水溶液包含糖醇，如甘油、甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨糖醇、吡喃糖基山梨糖醇、肌醇及其组合。在一些实施方案中，水溶液包含乳糖。在一些实施方案中，水溶液包含乳糖甘露糖。在一些实施方案中，水溶液包含乳糖。在一些实施方案中，水溶液包含甘露糖醇。在一些实施方案中，水溶液包含蔗糖。在一些实施方案中，水溶液包含海藻糖。

53、在一些实施方案中，水溶液的ph低于9.0。在一些实施方案中，水溶液的ph低于8.5。在一些实施方案中，水溶液的ph低于8.0。在一些实施方案中，水溶液的ph低于7.8。在一些实施方案中，水溶液的ph低于7.5。在一些实施方案中，水溶液的ph低于7.3。在一些实施方案中，水溶液的ph低于7.0。在一些实施方案中，水溶液的ph低于6.8。在一些实施方案中，水溶液的ph低于6.5。在一些实施方案中，水溶液的ph低于6.3。在一些实施方案中，水溶液的ph低于6.2。在一些实施方案中，水溶液的ph低于6.0。在一些实施方案中，水溶液的ph低于5.8。在一些实施方案中，水溶液的ph低于5.5。在一些实施方案中，水溶液的ph低于5.2。在一些实施方案中，水溶液的ph低于5.0。在一些实施方案中，水溶液的ph低于4.8。在一些实施方案中，水溶液的ph低于4.5。在一些实施方案中，水溶液的ph低于4.3。在一些实施方案中，水溶液的ph低于4.0。在一些实施方案中，水溶液的ph低于3.8。在一些实施方案中，水溶液的ph范围在3.0与7.5之间。在一些实施方案中，水溶液的ph范围在4.0与7.0之间。在一些实施方案中，水溶液的ph范围在4.5与6.5之间。

54、在一方面，本发明尤其提供了包含一个或多个包裹通过本发明的方法制备的mrna的脂质纳米颗粒的稳定冻干组合物。

55、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和5mm与200mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少40％。

56、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和10mm与30mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少40％。

57、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和约20mm的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少40％。

58、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和5mm与200mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少45％。

59、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和10mm与30mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少45％。

60、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和约20mm的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少45％。

61、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和5mm与200mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少50％。

62、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和10mm与30mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少50％。

63、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和约20mm的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少50％。

64、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和5mm与200mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少60％。

65、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和10mm与30mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少60％。

66、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和约20mm的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在15至25℃的温度下储存四周后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少60％。

67、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和5mm与200mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少75％。

68、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和10mm与30mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少75％。

69、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和约20mm的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少75％。

70、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和5mm与200mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少80％。

71、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和10mm与30mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少80％。

72、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和约20mm的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少80％。

73、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和5mm与200mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少85％。

74、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和10mm与30mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少85％。

75、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和约20mm的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少85％。

76、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和5mm与200mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少90％。

77、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和10mm与30mm之间的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少90％。

78、在一方面，本发明提供了稳定冻干组合物，所述稳定冻干组合物包含一个或多个包裹mrna和约20mm的抗坏血酸的脂质纳米颗粒，其中在将所述冻干组合物在2至8℃的温度下储存六个月后重构所述冻干组合物时，重构后的mrna完整性是初始mrna完整性的至少90％。

79、在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于20％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于30％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于40％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于45％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于50％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于55％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于60％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于65％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于70％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于75％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于80％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于85％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于90％。在一些实施方案中，稳定冻干组合物的mrna完整性是约或高于95％。

80、在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于5mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于4mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于3mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于2mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于1mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于0.5mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于0.3mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于0.2mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于0.1mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含少于0.05mm的柠檬酸盐。在一些实施方案中，稳定冻干组合物基本上不包含残留的柠檬酸盐。

81、在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约1mm至500mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约5mm至200mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约10mm至100mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约10mm至50mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约20mm至50mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约20mm至30mm的抗坏血酸。

82、在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约1mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约2mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约3mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约5mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约8mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约10mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约15mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约20mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约25mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约30mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约40mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约50mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约75mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约100mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约125mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约150mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约175mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约200mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约250mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约300mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约400mm的抗坏血酸。在一些实施方案中，稳定冻干组合物包含约500mm的抗坏血酸。