用于评估肝脏疾病的试剂盒、试剂和方法与流程

本公开总地涉及肝病领域，并且更具体地涉及非酒精性脂肪肝(nafl)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)和肝纤维化的状态和进展的评估。

背景技术：

1、nafl通过肝细胞中甘油三酯的过量储存(脂肪变性)来定义，并且经常以由此引起的炎症、细胞气球样变性和损伤以及纤维化为特征。这方面的显著变化导致nash。非酒精性脂肪性肝病(nafld)可能进展为纤维化并最终发展为肝硬化，并且在一般人群中是终末期肝病的越来越重要的原因，并且也已经在感染hiv的人中进行了研究(1-6)。nafl/nash在hiv患者中具有更高的患病率，并且倾向于比在一般人群中进展更快。与随着hiv疾病严重程度增加而恶化的许多hiv相关的合并症相反，nafld可能更常见于体重增加的hiv患者，并且它与中心性肥胖相关。在感染hiv的人(people living with hiv,plwh)中，体重增加、腹部脂肪积累和内脏脂肪增加是常见的，并且即使使用更新的抗逆转录病毒药物也可见。

2、目前没有简单可靠的测定来监测患者的nafld/nash发展和进展。nash的存在是肝纤维化发展和进展的主要预测因子，并且肝纤维化的进展是不良肝相关临床结局的主要决定因素。因此，鉴定和监测nafld/nash和晚期纤维化具有重要的预后和疾病管理意义。

3、在肝酶丙氨酸氨基转移酶(alt)和天冬氨酸氨基转移酶(ast)水平增加的受试者中可能怀疑有nafld/nash，但这些标志物在其他肝脏病症中也上调。诸如超声、计算机断层摄影(ct)扫描、磁共振成像(mri)、超声弹性成像(use)、基于定量超声的技术、磁共振弹性成像(mre)和基于磁共振的脂肪定量技术的成像技术也用于检测肝脏中的脂肪，但它们通常无法检测肝脏炎症和/或纤维化。此外，这些技术需要专门的成像装置和放射科医师对图像的分析。肝活检仍然是nash诊断和分期的金标准，主要是由于缺乏可靠的非侵入性方法。然而，肝活检是昂贵的、主观的，并且与患者的风险相关。

4、因此，需要开发简单的、可靠的用于评估患者中nafld/nash和肝纤维化的状态和进展的非侵入性测定。

5、本说明书涉及许多文献，其内容通过引用整体并入本文。

6、公开内容概述

7、本公开总地涉及肝病领域，并且更具体地涉及非酒精性脂肪肝(nafl)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)和肝纤维化的状态和进展的评估。

8、在各个方面和实施方案中，本公开提供以下项目：

9、1.一种用于评估患者非酒精性脂肪肝病(nafld)随时间推移的严重程度的方法，所述方法包括

10、在第一时间点测量来自患者的生物样品中的血管内皮生长因子a(vegfa)、转化生长因子β1(tgfb1)和/或集落刺激因子1(csf1)的第一蛋白质水平；

11、在第二较晚时间点测量来自患者的相应生物样品中的vegfa、tgfb1和/或csf1的第二蛋白质水平；

12、其中在所述第一和第二时间点之间vegfa、tgfb1和/或csf1的第二蛋白质水平相对于第一蛋白质水平的降低指示患者中nafld严重程度已随时间消退；

13、其中在所述第一和第二时间点之间vegfa、tgfb1和/或csf1的第二蛋白质水平相对于第一蛋白质水平的增加指示患者中nafld严重程度已随时间进展；和

14、其中在所述第一和第二时间点之间vegfa、tgfb1和csf1的第二蛋白质水平相对于第一蛋白质水平没有变化指示患者中nafld严重程度随时间推移是稳定的。

15、2.项目1的方法，其中所述方法包括测量vegfa的蛋白质水平。

16、3.项目1或2的方法，其中所述方法包括测量tgfb1的蛋白质水平。

17、4.项目1至3任一项的方法，其中所述方法包括测量csf1的蛋白质水平。

18、5.项目1至4任一项的方法，其中nafld严重程度包括纤维化评分和/或nafld活动度评分(nafld activity score,nas)。

19、6.项目5的方法，其中nafld严重程度包括纤维化评分。

20、7.项目5或6的方法，其中nafld严重程度包括nas。

21、8.项目1至7任一项的方法，其中患者在所述第一时间点和所述第二时间点之间接受了针对nafld的治疗。

22、9.项目8的方法，其中治疗包括施用生长激素释放激素(ghrh)分子或其类似物。

23、10.项目9的方法，其中治疗包括施用反式-3-己烯酰基-ghrh(1-44)-nh2或其药学上可接受的盐。

24、11.项目1至10任一项的方法，其中生物样品是血液来源的样品。

25、12.项目11的方法，其中血液来源的样品是血浆。

26、13.项目1至12任一项的方法，其中测量vegfa的蛋白质水平包括使生物样品与特异性结合vegfa的抗体或其抗原结合片段接触，并测量vegfa与抗体或其抗原结合片段之间的复合物的量。

27、14.项目1至13任一项的方法，其中测量tgfb1的蛋白水平包括使生物样品与特异性结合tgfb1的抗体或其抗原结合片段接触，并测量tgfb1与抗体或其抗原结合片段之间的复合物的量。

28、15.项目1至14任一项的方法，其中测量csf1的蛋白质水平包括使生物样品与特异性结合csf1的抗体或其抗原结合片段接触，并测量csf1和抗体或其抗原结合片段之间的复合物的量。

29、16.项目13至15任一项的方法，其中抗体或其抗原结合片段与可检测部分缀合。

30、17.项目1至16任一项的方法，其中所述患者患有人类免疫缺陷病毒(hiv)感染。

31、18.一种用于评估受试者患有非酒精性脂肪肝病(nafld)的可能性的方法，所述方法包括测量来自受试者的生物样品中的血管内皮生长因子a(vegfa)、转化生长因子β1(tgfb1)和/或集落刺激因子1(csf1)的蛋白质水平，其中相对于相应的对照水平，样品中vegfa、tgfb1和/或csf1的水平较高指示受试者患有nafld的可能性增加。

32、19.项目18的方法，其中所述方法包括测量vegfa的蛋白质水平。

33、20.项目18或19的方法，其中所述方法包括测量tgfb1的蛋白质水平。

34、21.项目18至20任一项的方法，其中所述方法包括测量csf1的蛋白质水平。

35、22.项目18至21任一项的方法，其中nafld是非酒精性脂肪性肝炎(nash)。

36、23.项目18至22任一项的方法，其中nafld包括肝纤维化。

37、24.项目18至23任一项的方法，其中生物样品是血液来源的样品。

38、25.项目23的方法，其中血液来源的样品是血浆。

39、26.项目18至25任一项的方法，其中测量vegfa的蛋白质水平包括使生物样品与特异性结合vegfa的抗体或其抗原结合片段接触，并测量vegfa与抗体或其抗原结合片段之间的复合物的量。

40、27.项目18至26任一项的方法，其中测量tgfb1的蛋白质水平包括使生物样品与特异性结合tgfb1的抗体或其抗原结合片段接触，并测量tgfb1与抗体或其抗原结合片段之间的复合物的量。

41、28.项目18至27任一项的方法，其中测量csf1的蛋白质水平包括使生物样品与特异性结合csf1的抗体或其抗原结合片段接触，并测量csf1和抗体或其抗原结合片段之间的复合物的量。

42、29.项目26至28任一项的方法，其中抗体或其抗原结合片段与可检测部分缀合。

43、30.项目18至29任一项的方法，其中所述方法在来自被怀疑患有nafld的受试者的生物样品上进行。

44、31.项目30的方法，其中受试者具有升高水平的丙氨酸氨基转移酶(alt)和/或天冬氨酸氨基转移酶(ast)。

45、32.项目18至31任一项的方法，其中所述受试者患有人类免疫缺陷病毒(hiv)感染。

46、33.一种用于治疗非酒精性脂肪肝病(nafld)的方法，所述方法包括使用项目18至32任一项的方法鉴定患有nafld的可能性增加的受试者，并向受试者施用针对nafld的治疗。

47、34.项目33的方法，其中治疗包括施用生长激素释放激素(ghrh)或其类似物。

48、35.项目34的方法，其中治疗包括施用反式-3-己烯酰基-ghrh(1-44)-nh2或其药学上可接受的盐。

49、36.一种试剂盒，其用于(a)评估患者中非酒精性脂肪肝病(nafld)随时间推移的严重程度，和/或(b)评估受试者患有nafld的可能性，所述试剂盒包含用于测量生物样品中血管内皮生长因子a(vegfa)、转化生长因子β1(tgfb1)和/或集落刺激因子1(csf1)的蛋白质水平的试剂；以及用于将vegfa、tgfb1和/或csf1的蛋白质水平与nafld的严重程度和/或患有nafld的可能性相关联的说明书。

50、37.项目36的试剂盒，其中所述试剂盒包含(i)特异性结合vegfa的抗体或其抗原结合片段，(ii)特异性结合tgfb1的抗体或其抗原结合片段；(iii)特异性结合csf1的抗体或其抗原结合片段；或(iv)(i)至(iii)的任何组合。

51、38.项目37的试剂盒，其中抗体或其抗原结合片段与可检测部分缀合。

52、39.一种测定混合物，其包含(a)用于测量生物样品中血管内皮生长因子a(vegfa)、转化生长因子β1(tgfb1)和/或集落刺激因子1(csf1)的蛋白质水平的试剂；和(b)来自患有或被怀疑患有非酒精性脂肪肝病(nafld)的受试者的生物样品。

53、40.项目39的测定混合物，其中测定混合物包含(i)特异性结合vegfa的抗体或其抗原结合片段，(ii)特异性结合tgfb1的抗体或其抗原结合片段；(iii)特异性结合csf1的抗体或其抗原结合片段；或(iv)(i)至(iii)的任何组合。

54、41.项目40的测定混合物，其中测定混合物包含(i)至(iii)的任何组合。

55、42.项目40或41的测定混合物，其中抗体或其抗原结合片段与可检测部分缀合。

56、43.项目39至42任一项的测定混合物，其中生物样品是血液来源的样品。

57、44.项目43的测定混合物，其中血液来源的样品是血浆。

58、45.项目39至44任一项的测定混合物，其中生物样品来自患有nafld的受试者。

59、本公开的其他目的、优点和特征将在阅读以下仅通过示例的方式参考附图给出的其具体实施方案的非限制性描述时变得更加明显。

技术实现思路