用于靶向CD28和PD-L1的多特异性抗体及其使用方法与流程

背景技术：

技术实现思路

1、在某些实施方案中，本文公开了多特异性抗体，其包含cd28结合结构域和pd-l1结合结构域，其中当所述cd28结合结构域是单链可变片段(scfv)时，所述pd-l1结合结构域不是scfv。在一些情况下，所述多特异性抗体是根据下式：

2、a-l-b(式i)

3、其中a包含所述cd28结合结构域；b包含所述pd-l1结合结构域；并且l包含连接a与b的接头。在一些情况下，所述cd28结合结构域包含单链可变片段、单结构域抗体、fab或fab'。在一些情况下，所述cd28结合结构域包含所述单链可变片段。在一些情况下，所述cd28结合结构域包含所述单结构域抗体。在一些情况下，所述cd28结合结构域包含所述fab或所述fab'。在一些情况下，所述pd-l1结合结构域包含单结构域抗体、fab或fab'。在一些情况下，所述pd-l1结合结构域包含所述fab或所述fab'。在一些情况下，所述pd-l1结合结构域包含所述fab或所述fab'，并且所述cd28结合结构域包含所述单链可变片段。在一些情况下，包含所述fab或所述fab'的所述pd-l1结合结构域包含fab重链多肽和fab轻链多肽，所述fab重链多肽包含fab重链可变结构域，所述fab轻链多肽包含fab轻链可变结构域。在一些情况下，包含所述单链可变片段的所述cd28结合结构域包含scfv重链可变结构域和scfv轻链可变结构域。在一些情况下，所述接头连接a的c末端与b的n末端。在一些情况下，所述接头连接a的n末端与b的c末端。在一些情况下，所述接头连接a的c末端与所述fab重链多肽的n末端。在一些情况下，所述接头连接a的n末端与所述fab重链多肽的c末端。在一些情况下，所述接头连接a的c末端与所述fab轻链多肽的n末端。在一些情况下，所述接头连接a的n末端与所述fab轻链多肽的c末端。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv重链可变结构域。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv重链可变结构域。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域的n末端。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv重链可变结构域的n末端。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv重链可变结构域的c末端。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域的n末端。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv重链可变结构域的n末端。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv重链可变结构域的c末端。在一些情况下，所述接头的长度是至少5个氨基酸。在一些情况下，所述接头的长度不超过30个氨基酸。在一些情况下，所述接头的长度是至少5个氨基酸且不超过30个氨基酸。在一些情况下，所述接头的长度是5个氨基酸。在一些情况下，所述接头的长度是15个氨基酸。在一些情况下，所述接头选自(g2s)n、(gs)n、(gsggs)n(seqid no:58)、(gggs)n(seq id no:59)、(ggggs)n(seq id no:60)和(gssggs)n(seq id no:61)，其中n是至少1的整数。在一些情况下，l具有包含(g2s)n(seq id no:233)的式，其中n是1至3的整数。在一些情况下，所述接头包含seq id no:18(ggggsggggsggggs)或seq id no:19(ggggs)的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv重链可变结构域包含互补决定区(cdr)：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其中所述scfv重链可变结构域的hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3包括：hc-cdr1：seq id no:1；hc-cdr2：seq id no:2；hc-cdr3：seq id no:3，并且其中所述cdr在所述hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些情况下，所述scfv轻链可变结构域包含互补决定区(cdr)：lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其中所述scfv轻链可变结构域的lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3包括：lc-cdr1：seq id no:4；lc-cdr2：seq id no:5；和lc-cdr3：seq id no:6，并且其中所述cdr在所述lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些情况下，所述fab重链可变结构域包含互补决定区(cdr)：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其中所述fab重链可变结构域的hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3包括：hc-cdr1：seq id no:10；hc-cdr2：seq id no:11；hc-cdr3：seq id no:12；hc-cdr1：seq id no:24；hc-cdr2：seq id no:25；hc-cdr3：seq id no:26；hc-cdr1：seq id no:27；hc-cdr2：seq id no:28；hc-cdr3：seq id no:29；或hc-cdr1：seqid no:30；hc-cdr2：seq id no:31；hc-cdr3：seq id no:32，并且其中所述cdr在所述hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些情况下，所述fab轻链可变结构域包含互补决定区(cdr)：lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其中所述fab轻链可变结构域的lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3包括：lc-cdr1：seq id no:13；lc-cdr2：seq id no:14；和lc-cdr3：seq id no:15；lc-cdr1：seq id no:33；lc-cdr2：seq id no:34；和lc-cdr3：seq id no:35；lc-cdr1：seq id no:36；lc-cdr2：seq id no:37；和lc-cdr3：seq idno:38；或lc-cdr1：seq id no:39；lc-cdr2：seq id no:40；和lc-cdr3：seq id no:41，并且其中所述cdr在所述lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些情况下，所述scfv重链可变结构域包含与根据seq id no:7的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv重链可变结构域包含seq id no:7的至少75个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv重链可变结构域包含seq id no:7的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv重链可变结构域包含seq id no:7的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seq id no:7的至少110个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。在一些情况下，所述scfv重链可变结构域包含根据seq id no:7的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv轻链可变结构域包含与根据seq id no:8的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv轻链可变结构域包含seq id no:8的至少75个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv轻链可变结构域包含seq id no:8的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv轻链可变结构域包含seq id no:8的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seq id no:8的至少100个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。在一些情况下，所述scfv轻链可变结构域包含根据seq id no:8的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv包含与根据seq id no:9的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv包含seq id no:9的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv包含seq id no:9的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述scfv包含seq id no:9的至少210个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seq id no:9的至少210个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。在一些情况下，所述scfv包含根据seq id no:9的氨基酸序列。在一些情况下，所述fab重链多肽包含与根据seq id no:17、43、45或47的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述fab重链多肽包含seq id no:17、43、45或47的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述fab重链多肽包含seq id no:17、43、45或47的至少215个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述fab重链多肽包含seq idno:17的至少215个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seq id no:17、43、45或47的至少215个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。在一些情况下，所述fab重链多肽包含根据seq id no:17、43、45或47的氨基酸序列。在一些情况下，所述fab轻链多肽包含与根据seq id no:16、42、44或46的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述fab轻链多肽包含seq id no:16、42、44或46的至少175个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述fab轻链多肽包含seq id no:16、42、44或46的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述fab轻链多肽包含seq id no:16的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seq id no:16、42、44或46的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。在一些情况下，所述fab轻链多肽包含根据seq id no:16、42、44或46的氨基酸序列。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端，并且其中所述fab轻链多肽包含与根据seq id no:20的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且与所述scfv轻链可变结构域的c末端连接的所述fab重链多肽的氨基酸序列包含与根据seq id no:21的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端，并且其中所述fab轻链多肽包含seq id no:20的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与所述scfv轻链可变结构域的c末端连接的所述fab重链多肽的氨基酸序列包含seq id no:21的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端，并且其中所述fab轻链多肽包含seq id no:20的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seq id no:20的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性，并且与所述scfv轻链可变结构域的c末端连接的所述fab重链多肽的氨基酸序列包含seq id no:21的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seq id no:21的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。在一些情况下，所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端，并且其中所述fab轻链多肽包含根据seq id no:20的氨基酸序列，并且与所述scfv轻链可变结构域的c末端连接的所述fab重链多肽的氨基酸序列包含seq id no:21的氨基酸序列。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端，并且其中所述fab重链多肽包含与根据seq id no:23的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，并且与所述scfv轻链可变结构域的c末端连接的所述fab轻链多肽的氨基酸序列包含与根据seq id no:22的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端，并且其中所述fab重链多肽包含seq id no:23的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与所述scfv轻链可变结构域的c末端连接的所述fab轻链多肽的氨基酸序列包含seq id no:22的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端，并且其中所述fab重链多肽包含seq id no:23的至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seq id no:23的至少200个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性，并且与所述scfv轻链可变结构域的c末端连接的所述fab轻链多肽的氨基酸序列包含seq id no:22的至少450个连续氨基酸残基的氨基酸序列，并且与seqid no:22的至少450个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。在一些情况下，所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c末端，并且其中所述fab重链多肽包含根据seq id no:23的氨基酸序列，并且与所述scfv轻链可变结构域的c末端连接的所述fab轻链多肽的氨基酸序列包含seq id no:22的氨基酸序列。

4、在某些实施方案中，本文公开了药物组合物，其包含：本文所述的多特异性抗体；和药学上可接受的赋形剂。

5、在某些实施方案中，本文公开了分离的重组核酸分子，其编码本文所述的多特异性抗体的多肽。

6、在某些实施方案中，本文公开了治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用本文所述的多特异性抗体或本文所述的药物组合物。在一些情况下，所述多特异性抗体作为单一药剂疗法施用于所述对象。在一些情况下，所述多特异性抗体不作为与第二治疗剂的治疗方案的一部分施用。在一些情况下，所述多特异性抗体不作为与包含肿瘤结合结构域的第二治疗剂的治疗方案的一部分施用。在一些情况下，所述多特异性抗体不作为与包含抗cd19抗体的第二治疗剂的治疗方案的一部分施用。在一些情况下，所述多特异性抗体不作为与包含抗体的第二治疗剂的治疗方案的一部分施用，所述抗体具有抗cd19结合结构域和抗cd3结合结构域。在一些情况下，所述多特异性抗体诱导t细胞介导的对肿瘤细胞的细胞毒性。在一些情况下，与施用所述多特异性抗体之前从所述对象获取的癌症的基线测量相比，向所述对象施用所述多特异性抗体足以减少或消除癌症。在一些情况下，所述减少是至少约1倍、5倍、10倍、20倍、40倍、60倍、80倍或高达约100倍。在一些情况下，所述癌症是恶性血液病。在一些情况下，所述癌症是白血病或淋巴瘤。在一些情况下，所述癌症是淋巴瘤，并且其中所述淋巴瘤是b细胞淋巴瘤。在一些情况下，所述癌症是实体瘤。在一些情况下，所述实体瘤表达pd-l1。在一些情况下，所述实体瘤是肉瘤、乳腺癌、肺癌或癌。在一些情况下，所述实体瘤是肺癌，并且其中所述肺癌是非小细胞肺癌。本文公开了治疗有需要的对象的癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用包含cd28结合结构域和pd-l1结合结构域的多特异性抗体，其中包含所述cd28结合结构域和所述pd-l1结合结构域的所述多特异性抗体不作为与另一种多特异性抗体的治疗方案的一部分施用，所述另一种多特异性抗体靶向不同于pd-l1或cd28的癌症抗原。在一些实施方案中，包含所述cd28结合结构域和所述pd-l1结合结构域的所述多特异性抗体作为单一药剂疗法施用于所述对象。在一些实施方案中，包含所述cd28结合结构域和所述pd-l1结合结构域的所述多特异性抗体包含igg框架、iga框架、ige框架或igm框架。在一些实施方案中，所述cd28结合结构域包含单链可变片段、单结构域抗体、fab或fab'。在一些实施方案中，所述pd-l1结合结构域包含单链可变片段、单结构域抗体、fab或fab'。在一些实施方案中，所述pd-l1结合结构域包含单链可变片段，并且所述cd28结合结构域包含单链可变片段。在一些实施方案中，所述cd28结合结构域包含抗cd28轻链多肽。在一些实施方案中，所述抗cd28轻链多肽包含igg1、igg2、igg3或igg4轻链的可变结构域。在一些实施方案中，所述cd28结合结构域包含抗cd28重链多肽。在一些实施方案中，所述抗cd28重链多肽包含igg1、igg2、igg3或igg4重链的可变结构域。在一些实施方案中，所述pd-l1结合结构域包含抗pd-l1轻链多肽。在一些实施方案中，所述抗pd-l1轻链多肽包含igg1、igg2、igg3或igg4轻链的可变结构域。在一些实施方案中，所述pd-l1结合结构域包含抗pd-l1重链多肽。在一些实施方案中，所述抗pd-l1重链多肽包含igg1、igg2、igg3或igg4重链的可变结构域。在一些实施方案中，所述多特异性抗体还包含可结晶片段(fc)区。在一些实施方案中，所述fc区包含igg ch2结构域和igg ch3结构域。在一些实施方案中，所述fc区包括异二聚体fc区。在一些实施方案中，所述fc区包含至少一个增加所述多特异性抗体的半衰期的氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述fc区包含至少一个调控其与fc受体的相互作用的氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述fc区包含至少一个增加所述fc区与fc受体的结合的氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述fc区包含至少一个降低所述fc区的糖基化的氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述修饰是氨基酸取代、缺失或添加。在一些实施方案中，所述修饰是氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至少一个降低所述fc区的糖基化的氨基酸修饰包括在对应于人igg1的位置n297的位置处的氨基酸取代，其中所述编号是根据kabat的eu索引。在一些实施方案中，所述fc区是非岩藻糖基化的(afucosylated)。在一些实施方案中，所述抗cd28轻链多肽包含互补决定区(cdr)：lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其中所述抗cd28轻链多肽的lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3包括：lc-cdr1：seq id no:4；lc-cdr2：seq id no:5；和lc-cdr3：seq id no:6，并且其中所述cdr在所述lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述抗cd28重链多肽包含互补决定区(cdr)：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其中所述抗cd28重链多肽的hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3包括：hc-cdr1：seq id no:1；hc-cdr2：seq id no:2；hc-cdr3：seq id no:3，并且其中所述cdr在所述hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述抗pd-l1轻链多肽包含互补决定区(cdr)：lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其中所述抗pd-l1轻链多肽的lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3包括：lc-cdr1：seq id no:13；lc-cdr2：seq id no:14；和lc-cdr3：seq id no:15；lc-cdr1：seq id no:33；lc-cdr2：seq id no:34；和lc-cdr3：seq idno:35；lc-cdr1：seq id no:36；lc-cdr2：seq id no:37；和lc-cdr3：seq id no:38；或lc-cdr1：seq id no:39；lc-cdr2：seq id no:40；和lc-cdr3：seq id no:41；并且其中所述cdr在所述lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述抗pd-l1重链多肽包含互补决定区(cdr)：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其中所述抗pd-l1重链多肽的hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3包括：hc-cdr1：seq id no:10；hc-cdr2：seq id no:11；hc-cdr3：seq id no:12；hc-cdr1：seq id no:24；hc-cdr2：seq id no:25；hc-cdr3：seq id no:26；hc-cdr1：seq id no:27；hc-cdr2：seq id no:28；hc-cdr3：seq idno:29；或hc-cdr1：seq id no:30；hc-cdr2：seq id no:31；hc-cdr3：seq id no:32，并且其中所述cdr在所述hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3中的至少一个中包含0-2个氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述多特异性抗体诱导t细胞介导的对肿瘤细胞的细胞毒性。在一些实施方案中，与施用所述多特异性抗体之前从所述对象获取的癌症的基线测量相比，向所述对象施用所述多特异性抗体足以减少或消除癌症。在一些实施方案中，所述减少是至少约1倍、5倍、10倍、20倍、40倍、60倍、80倍或高达约100倍。在一些实施方案中，所述癌症是恶性血液病。在一些实施方案中，所述癌症是白血病或淋巴瘤。在一些实施方案中，所述癌症是淋巴瘤，并且其中所述淋巴瘤是b细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤。在一些实施方案中，所述实体瘤表达pd-l1。在一些实施方案中，所述实体瘤是肉瘤、乳腺癌、肺癌或癌。在一些实施方案中，所述实体瘤是肺癌，并且其中所述肺癌是非小细胞肺癌。