PD-L1结合肽和肽复合物及其使用方法与流程

背景技术：

1、程序性死亡配体1(pd-l1)是一种结合程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)的跨膜蛋白，被认为在免疫抑制和t细胞失活中发挥作用。表达pd-l1的癌细胞可通过与宿主t细胞上的pd-1受体结合来逃避宿主免疫反应并使t细胞失活，从而防止宿主免疫系统破坏癌细胞。抗pd-l1抗体可能阻断pd-l1与pd-1的结合。然而，需要可用于靶向pd-l1的其它pd-l1结合剂。

技术实现思路

1、在多个方面，本公开提供了pd-l1结合肽，所述pd-l1结合肽包含第一pd-l1结合基序，所述第一pd-l1结合基序包含以下序列：(a)x1x2x3x4x5x6cx7x8x9c(seq id no:361)，其中x1是d、e、h、k、n、q、s、t、l、v、f、y或p；x2是g、e、q或f；x3是d或k；x4是g、v或p；x5是g、h、r、v、f、w或p；x6是a、d或k；x7是e、h、q、l或f；x8是d、e、r、s、t、m、l或f；并且x9是g、a、d、e、h、k、r、m、l或p；或(b)x1fx2vfx2clx3x3c(seq id no:363)，其中x1是k或p；x2独立地是d或k；并且x3独立地是任何非半胱氨酸氨基酸。

2、在一些方面，pd-l1结合肽包含至少六个半胱氨酸残基。在一些方面，至少六个半胱氨酸残基位于氨基酸位置n、n+4、n+14、n+28、n+38和n+42处，其中n对应于至少六个半胱氨酸残基的第一个半胱氨酸残基的位置。在一些方面，氨基酸位置n对应于氨基酸位置4，使得至少六个半胱氨酸氨基酸残基位于氨基酸位置4、8、18、32、42和46处。

3、在一些方面，pd-l1结合肽还包含连接至少六个半胱氨酸残基的至少三个二硫键。在一些方面，至少三个二硫键将：至少六个半胱氨酸残基的第一个半胱氨酸残基连接到至少六个半胱氨酸残基的第六个半胱氨酸残基、至少六个半胱氨酸残基的第二个半胱氨酸残基连接到至少六个半胱氨酸残基的第五个半胱氨酸残基、至少六个半胱氨酸残基的第三个半胱氨酸残基连接到至少六个半胱氨酸残基的第四个半胱氨酸残基。在一些方面，第一个半胱氨酸残基在氨基酸位置n处，第二个半胱氨酸残基在氨基酸位置n+4处，第三个半胱氨酸残基在氨基酸位置n+14处，第四个半胱氨酸残基在氨基酸位置n+28处，第五个半胱氨酸残基在氨基酸位置n+38处，并且第六个半胱氨酸残基在氨基酸位置n+42处。在一些方面，第一个半胱氨酸残基在氨基酸位置4处，第二个半胱氨酸残基在氨基酸位置8处，第三个半胱氨酸残基在氨基酸位置18处，第四个半胱氨酸残基在氨基酸位置32处，第五个半胱氨酸残基在氨基酸位置42处，并且第六个半胱氨酸残基在氨基酸位置46处。

4、在一些方面，pd-l1结合肽还包含第一α螺旋，所述第一α螺旋包含残基n至n+20，其中n对应于第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，pd-l1结合肽还包含第二α螺旋，所述第二α螺旋包含残基n+34至n+44，其中n对应于第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，第二α螺旋包含残基n+29至n+44。

5、在一些方面，第一pd-l1结合基序的n端氨基酸残基位于氨基酸残基位置n+32处，其中n对应于第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，第一pd-l1结合基序的c端氨基酸残基位于氨基酸位置n+42处，其中n对应于第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，第一pd-l1结合基序包含kfdvfkcldhc(seq id no:365)的序列。

6、在一些方面，pd-l1结合肽还包含第二pd-l1结合基序，所述第二pd-l1结合基序包含以下序列：(a)cx1x2x3cx4x5x6x7x8x9x10x11x12c(seq id no:360)，其中x1是k、r或v；x2是e、q、s、m、l或v；x3是d、e、h、k、r、n、q、s或y；x4是d、m或v；x5是a、k、r、q、s或t；x6是a、d、e、h、q、s、t、m、i、l、v或w；x7是a、e、r、q、s、t、w或p；x8是a、e、k、r、n、q、t、m、i、l、v或w；x9是g、a、e、k、n、t或y；x10是g、a、d、e、h、k、r、n、q、s、t、m、i、l、v、w、y或p；x11是d、k、r、n、l或v；并且x12是g、a、d、t、l、w或p；或(b)ckvx1cvx1x1x1x1x2x3kx1c(seq id no:362)，其中x1独立地是任何非半胱氨酸氨基酸；x2是m、i、l或v；并且x3是y、a、h、k、r、n、q、s或t。在一些方面，第二pd-l1结合基序的n端氨基酸残基位于氨基酸残基位置n处，其中n对应于第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，第一pd-l1结合基序的c端氨基酸残基位于氨基酸位置n+14处，其中n对应于第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，第二pd-l1结合基序包含ckvhcvkewmagkac(seq id no:364)的序列。

7、在一些方面，pd-l1结合肽包含seq id no:358或seq id no:359的序列。在一些方面，pd-l1结合肽包含与seq id no:1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％序列同一性的序列。在一些方面，pd-l1结合肽包含与seq id no:2具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％序列同一性的序列。在一些方面，pd-l1结合肽包含与seq id no:3具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％序列同一性的序列。在一些方面，pd-l1结合肽包含与seq id no:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％序列同一性的序列。

8、在多个方面，本公开提供了一种pd-l1结合肽，所述pd-l1结合肽包含位于氨基酸位置n、n+4、n+14、n+28、n+38和n+42处的至少六个半胱氨酸残基，其中n对应于至少六个半胱氨酸残基的第一个半胱氨酸残基的位置，并且与seq id no:57或seq id no:59具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％序列同一性。

9、在多个方面，本公开提供了一种pd-l1结合肽，所述pd-l1结合肽包含位于氨基酸位置n、n+11、n+17、n+21、n+31、n+38、n+40或n+44处的至少八个半胱氨酸残基，其中n对应于至少六个半胱氨酸残基的第一个半胱氨酸残基的位置，并且与seq id no:58具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％序列同一性。

10、在多个方面，本公开提供了一种pd-l1结合肽，所述pd-l1结合肽包含与seq idno:1-seq id no:118、seq id no:435、seq id no:436、seq id no:437或seq id no:554-seq id no:567中的任一者具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％或100％序列同一性的序列。

11、在一些方面，pd-l1结合肽包含seq id no:1-seq id no:118、seq id no:435、seqid no:436、seq id no:437或seq id no:554-seq id no:567中的任一者的序列。

12、在一些方面，pd-l1结合肽能够以不大于100nm、不大于50nm、不大于1nm、不大于500pm、不大于300pm、不大于250pm或不大于200pm的平衡解离常数(kd)结合于pd-l1。在一些方面，pd-l1结合肽能够以不大于1nm的平衡解离常数(kd)结合于pd-l1。在一些方面，pd-l1结合肽能够以相差不超过1.5倍、不超过2倍、不超过5倍或不超过10倍的平衡解离常数(kd)结合于人pd-l1和食蟹猴pd-l1。

13、在一些方面，pd-l1结合肽包含至少43个、至少44个、至少45个、至少46个、至少47个、至少48个或至少49个氨基酸残基。

14、如权利要求1-29中任一项所述的pd-l1结合肽，其中所述pd-l1结合肽包含43至51个氨基酸残基。在一些方面，pd-l1结合肽包含不多于50个氨基酸残基。在一些方面，pd-l1结合肽包含43至49个氨基酸残基。

15、在一些方面，pd-l1结合肽还包含半衰期调节剂。在一些方面，半衰期调节剂选自由以下组成的组：聚合物、聚乙二醇(peg)、羟乙基淀粉、聚乙烯醇、水溶性聚合物、两性离子水溶性聚合物、水溶性聚(氨基酸)、脯氨酸、丙氨酸和丝氨酸的水溶性聚合物、含有甘氨酸、谷氨酸和丝氨酸的水溶性聚合物、fc区、脂肪酸、棕榈酸、白蛋白和结合于白蛋白的分子。在一些方面，半衰期调节剂是白蛋白结合肽。在一些方面，半衰期调节剂是fc结构域。在一些方面，半衰期调节剂是聚乙二醇。在一些方面，半衰期调节剂是脂肪酸。

16、在多个方面，本公开提供了包含与活性剂复合的pd-l1结合肽的肽复合物，其中所述pd-l1结合肽包含：位于氨基酸位置n、n+4、n+14、n+28、n+38和n+42处的至少六个半胱氨酸残基，其中n对应于至少六个半胱氨酸残基的第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置；至少三个二硫键，所述二硫键将第一个半胱氨酸残基连接到至少六个半胱氨酸残基的第六个半胱氨酸残基、至少六个半胱氨酸残基的第二个半胱氨酸残基连接到至少六个半胱氨酸残基的第五个半胱氨酸残基、至少六个半胱氨酸残基的第三个半胱氨酸残基连接到至少六个半胱氨酸残基的第四个半胱氨酸残基。

17、在一些方面，氨基酸位置n对应于氨基酸位置4，使得至少六个半胱氨酸氨基酸残基位于氨基酸位置4、8、18、32、42和46处。在一些方面，pd-l1结合肽还包含第一α螺旋，所述第一α螺旋包含残基n至n+20，其中n对应于第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，pd-l1结合肽还包含第二α螺旋，所述第二α螺旋包含残基n+34至n+44，其中n对应于第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，第二α螺旋包含残基n+29至n+44。

18、在一些方面，pd-l1结合肽包含第一pd-l1结合基序，所述第一pd-l1结合基序包含以下序列：(a)x1x2x3x4x5x6cx7x8x9c(seq id no:361)，其中x1是d、e、h、k、n、q、s、t、l、v、f、y或p；x2是g、e、q或f；x3是d或k；x4是g、v或p；x5是g、h、r、v、f、w或p；x6是a、d或k；x7是e、h、q、l或f；x8是d、e、r、s、t、m、l或f；并且x9是g、a、d、e、h、k、r、m、l或p；或(b)x1fx2vfx2clx3x3c(seqid no:363)，其中x1是k或p；x2独立地是d或k；并且x3独立地是任何非半胱氨酸氨基酸。在一些方面，第一pd-l1结合基序的n端氨基酸残基位于氨基酸残基位置n+32处。在一些方面，第一pd-l1结合基序的c端氨基酸残基位于氨基酸位置n+42处。在一些方面，第一pd-l1结合基序包含kfdvfkcldhc(seq id no:365)的序列。

19、在一些方面，pd-l1结合肽还包含第二pd-l1结合基序，所述第二pd-l1结合基序包含以下序列：(a)cx1x2x3cx4x5x6x7x8x9x10x11x12c(seq id no:360)，其中x1是k、r或v；x2是e、q、s、m、l或v；x3是d、e、h、k、r、n、q、s或y；x4是d、m或v；x5是a、k、r、q、s或t；x6是a、d、e、h、q、s、t、m、i、l、v或w；x7是a、e、r、q、s、t、w或p；x8是a、e、k、r、n、q、t、m、i、l、v或w；x9是g、a、e、k、n、t或y；x10是g、a、d、e、h、k、r、n、q、s、t、m、i、l、v、w、y或p；x11是d、k、r、n、l或v；并且x12是g、a、d、t、l、w或p；或(b)ckvx1cvx1x1x1x1x2x3kx1c(seq id no:362)，其中x1独立地是任何非半胱氨酸氨基酸；x2是m、i、l或v；并且x3是y、a、h、k、r、n、q、s或t。在一些方面，第二pd-l1结合基序的n端氨基酸残基位于氨基酸残基位置n处。在一些方面，第一pd-l1结合基序的c端氨基酸残基位于氨基酸位置n+14处。在一些方面，第二pd-l1结合基序包含ckvhcvkewmagkac(seq idno:364)的序列。在一些方面，氨基酸位置n对应于pd-l1结合肽的氨基酸位置4，使得至少六个半胱氨酸氨基酸残基位于pd-l1结合肽的氨基酸位置4、8、18、32、42和46处。

20、在一些方面，pd-l1结合肽能够以不大于100nm、不大于50nm、不大于30nm、不大于20nm、不大于1nm、不大于500pm、不大于300pm、不大于250pm或不大于200pm的平衡解离常数(kd)结合于pd-l1。在一些方面，pd-l1结合肽包含至少43个、至少44个、至少45个、至少46个、至少47个、至少48个或至少49个氨基酸残基。在一些方面，pd-l1结合肽包含43至51个氨基酸残基。在一些方面，pd-l1结合肽包含43至49个氨基酸残基。

21、在多个方面，本公开提供了一种肽复合物，所述肽复合物包含与活性剂复合的本文所述的任何pd-l1结合肽。

22、在一些方面，活性剂包含免疫细胞靶向剂。在一些方面，免疫细胞靶向剂是免疫细胞靶向肽。在一些方面，免疫细胞靶向剂包含单链可变片段(scfv)、半胱氨酸致密肽、高亲合性多聚体、孔尼兹结构域、亲和体、阿德耐汀蛋白(adnectin)、纳米菲丁蛋白(nanofittin)、菲诺体(fynomer)、β-发夹、订书肽、双环肽、抗体、抗体片段、蛋白质、肽、肽片段、结合结构域、小分子或能够结合于免疫细胞的纳米抗体。在一些方面，免疫细胞靶向剂能够结合t细胞、b细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、成纤维细胞、调节性t细胞、调节性免疫细胞、神经干细胞或间充质干细胞。在一些方面，免疫细胞靶向剂能够结合t细胞。在一些方面，免疫细胞靶向剂能够结合调节性t细胞。在一些方面，免疫细胞靶向剂能够结合cd3、4-1bb、cd28、cd137、cd89、cd16、cd25、cd13、cd29、cd44、cd71、cd73、cd90、cd105、cd166、cd27、gitr、tigit、lag3、tcr、cd40l、ox40、pd-1、ctla-4或stro-1。在一些方面，免疫细胞靶向剂能够结合cd3。在一些方面，免疫细胞靶向剂能够结合cd25。在一些方面，免疫细胞靶向剂能够结合4-1bb。在一些方面，免疫细胞靶向剂能够结合cd28。在一些方面，免疫细胞靶向剂包含与seq id no:122或seq id no:442-seq id no:491中的任一者具有至少90％序列同一性的序列。

23、在一些方面，免疫细胞靶向剂与第一异二聚化结构域融合并且pd-l1结合肽与第二异二聚化结构域融合。在一些方面，第一异二聚化结构域与第二异二聚化结构域复合形成异二聚体。在一些方面，第一异二聚化结构域、第二二聚化结构域或两者包含fc结构域。在一些方面，第一异二聚化结构域、第二二聚化结构域或两者包含seq id no:124-seq idno:153中的任一者的序列。在一些方面，第一异二聚化结构域包含seq id no:124、seq idno:126、seq id no:128、seq id no:130、seq id no:132、seq id no:134、seq id no:136、seq id no:138、seq id no:140、seq id no:142、seq id no:144、seq id no:146、seq idno:148、seq id no:150或seq id no:152中的任一者的序列并且第二异二聚化结构域包含seq id no:125、seq id no:127、seq id no:129、seq id no:131、seq id no:133、seq idno:135、seq id no:137、seq id no:139、seq id no:141、seq id no:143、seq id no:145、seq id no:147、seq id no:149、seq id no:151或seq id no:153中的任一者的序列。在一些方面，第一异二聚化结构域包含表3中提供的异二聚化对的链1。在一些方面，第二异二聚化结构域包含表3中提供的异二聚化对的链2。在一些方面，第二异二聚化结构域包含seqid no:124、seq id no:126、seq id no:128、seq id no:130、seq id no:132、seq id no:134、seq id no:136、seq id no:138、seq id no:140、seq id no:142、seq id no:144、seqid no:146、seq id no:148、seq id no:150或seq id no:152中的任一者的序列并且第一异二聚化结构域包含seq id no:125、seq id no:127、seq id no:129、seq id no:131、seqid no:133、seq id no:135、seq id no:137、seq id no:139、seq id no:141、seq id no:143、seq id no:145、seq id no:147、seq id no:149、seq id no:151或seq id no:153中的任一者的序列。在一些方面，第一异二聚化结构域包含表3中提供的异二聚化对的链2。在一些方面，第二异二聚化结构域包含表3中提供的异二聚化对的链1。在一些方面，肽复合物包含与seq id no:119或seq id no:120具有至少90％序列同一性的序列。在一些方面，肽复合物包含与seq id no:123具有至少90％序列同一性的序列。

24、在一些方面，免疫细胞靶向剂和pd-l1结合肽与同二聚化结构域融合。在一些方面，免疫细胞靶向剂和pd-l1结合肽形成单一多肽链。在一些方面，肽复合物包含与seq idno:121或seq id no:438-seq id no:441中的任一者具有至少90％序列同一性的序列。

25、在一些方面，免疫细胞靶向剂经由接头连接到pd-l1结合肽。在一些方面，接头包含肽接头。在一些方面，接头包含小分子接头。在一些方面，接头包含fc结构域。在一些方面，肽复合物还包含白蛋白结合结构域、聚乙二醇或两者。

26、在一些方面，活性剂包含跨膜结构域、胞质内结构域或它们的组合。在一些方面，活性剂包含嵌合抗原受体。在一些方面，肽复合物还包含t细胞。

27、在一些方面，活性剂包含治疗剂、可检测剂或它们的组合。在一些方面，可检测剂包含荧光团、近红外染料、造影剂、纳米颗粒、含有金属的纳米颗粒、金属螯合物、x射线造影剂、pet剂、放射性核素或放射性核素螯合剂。在一些方面，治疗剂包含抗癌剂、化疗剂、放疗剂、消炎剂、促炎细胞因子、寡核苷酸、免疫肿瘤剂或它们的组合。在一些方面，活性剂包含放射性同位素。在一些方面，放射性同位素包含α发射体、β发射体、正电子发射体、γ发射体、金属、锕、镅、铋、镉、铯、钴、铕、钆、铱、铅、镥、锰、钯、钋、镭、钌、钐、锶、锝、铊和钇。在一些实施方案中，金属是锕、铋、铅、镭、锶、钐、钇、锕-225、铅-212、11c或14c、13n、18f、67ga、68ga、64cu、67cu、89zr、177lu、铟-111、锝-99m、钇-90、碘-131、碘-123或砹-211。

28、在一些方面，寡核苷酸包含dna、rna、反义寡核苷酸、适体、mirna、sirna、选择性剪接调节剂、mrna结合序列、mirna结合序列、sirna结合序列、rnaseh1结合寡核苷酸、risc结合寡核苷酸、聚腺苷酸化调节剂或它们的组合。在一些方面，寡核苷酸包含seq id no:366-seq id no:396、seq id no:492-seq id no:545或seq id no:552中的任一者的序列。在一些方面，寡核苷酸结合包含seq id no:397-seq id no:430或seq id no:546-seq id no:549中的任一者的靶序列。在一些方面，肽复合物在人血清中孵育后保持完整。在一些方面、至少5％-10％、至少10％-20％、至少20％-30％、至少30％-40％、至少40％-50％、至少50％-60％、至少60％-70％、至少70％-80％、至少80％-90％或至少90％-100％在人血清中孵育后保持完整。在一些方面，pd-l1结合肽在与寡核苷酸复合时对pd-l1的平衡解离常数(kd)不大于10nm、5nm、1nm、800pm、600pm、500pm、400pm、300pm、250pm或200pm。在一些方面，pd-l1结合肽在ph 5.5、6.0或6.5下对pd-l1的亲和力比在ph 7.4下的亲和力低。

29、在一些方面，消炎剂包含消炎细胞因子、类固醇、糖皮质激素、皮质类固醇、细胞因子抑制剂、rorγ抑制剂、jak抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂或非类固醇消炎药。在一些方面，抗癌剂包含抗肿瘤剂、细胞毒性剂、酪氨酸激酶抑制剂、mtor抑制剂、类视黄醇、微管聚合抑制剂、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体或抗癌抗体。在一些方面，促炎细胞因子包含tnfα、il-2、il-6、il-12、il-15、il-21或ifnγ。在一些方面，治疗剂包含溶瘤病毒载体。

30、在一些方面，肽复合物还包含半衰期调节剂。在一些方面，半衰期调节剂选自由以下组成的组：聚合物、聚乙二醇(peg)、羟乙基淀粉、聚乙烯醇、水溶性聚合物、两性离子水溶性聚合物、水溶性聚(氨基酸)、脯氨酸、丙氨酸和丝氨酸的水溶性聚合物、含有甘氨酸、谷氨酸和丝氨酸的水溶性聚合物、fc区、脂肪酸、棕榈酸和结合于白蛋白的分子。在一些方面，结合于白蛋白的分子是血清白蛋白结合肽。

31、在一些方面，肽复合物还包含细胞穿透肽。在一些方面，细胞穿透肽包含seq idno:249-seq id no:341中的任一者的序列。

32、在多个方面，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本文所述的任何pd-l1结合肽，或本文所述的任何肽复合物，以及药学上可接受的载体。

33、在多个方面，本公开提供了一种抑制受试者中的pd-l1的方法，所述方法包括：向所述受试者施用包含pd-l1结合肽的组合物，所述pd-l1结合肽包含至少六个半胱氨酸残基，和连接所述至少六个半胱氨酸残基的至少三个二硫键；使所述pd-l1结合肽结合于pd-l1阳性细胞上的pd-l1；以及抑制所述pd-l1。

34、在一些方面，至少六个半胱氨酸残基位于氨基酸位置n、n+4、n+14、n+28、n+38和n+42处，其中n对应于至少六个半胱氨酸残基的第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，氨基酸位置n对应于氨基酸位置4，使得至少六个半胱氨酸氨基酸残基位于氨基酸位置4、8、18、32、42和46处。

35、在多个方面，本公开提供了一种抑制受试者中的pd-l1的方法，所述方法包括：向所述受试者施用包含本文所述的任何pd-l1结合肽的组合物；使所述pd-l1结合肽结合于pd-l1阳性细胞上的pd-l1；以及抑制所述pd-l1。

36、在一些方面，抑制pd-l1包括抑制pd-1与pd-l1结合。在一些方面，所述方法还包括减少免疫抑制、减少t细胞耗竭、恢复免疫功能或它们的组合。在一些方面，所述方法还包括治疗受试者的疾患。在一些方面，疾患是癌症，并且其中pd-l1阳性细胞是癌细胞。在一些方面，治疗癌症包括增强针对癌细胞的免疫反应。

37、在多个方面，本公开提供了一种将活性剂递送到受试者的pd-l1阳性细胞的方法，所述方法包括：向所述受试者施用包含与活性剂复合的pd-l1结合肽的肽复合物，所述pd-l1结合肽包含至少六个半胱氨酸残基，和连接至少六个半胱氨酸残基的至少三个二硫键；使所述pd-l1结合肽结合于pd-l1阳性细胞；以及将所述活性剂递送到所述pd-l1阳性细胞。

38、在一些方面，至少六个半胱氨酸残基位于氨基酸位置n、n+4、n+14、n+28、n+38和n+42处，其中n对应于至少六个半胱氨酸残基的第一个半胱氨酸残基的氨基酸位置。在一些方面，氨基酸位置n对应于氨基酸位置4，使得至少六个半胱氨酸氨基酸残基位于氨基酸位置4、8、18、32、42和46处。

39、在多个方面，本公开提供了一种将活性剂递送到受试者的pd-l1阳性细胞的方法，所述方法包括：向所述受试者施用肽复合物包含与活性剂复合的本文所述的任何pd-l1结合肽，或如权利要求39-107中任一项所述的肽复合物；使所述pd-l1结合肽结合于pd-l1阳性细胞；并且将所述活性剂递送到所述pd-l1阳性细胞。

40、在一些方面，活性剂包含抗癌剂、化疗剂、放疗剂或促炎细胞因子。在一些方面，活性剂包含寡核苷酸。在一些方面，肽复合物在人血清中孵育后保持完整。在一些方面，pd-l1结合肽在与所述寡核苷酸复合时以不大于10nm、5nm、1nm、800pm、600pm、500pm、400pm、300pm、250pm或200pm的平衡解离常数(kd)结合于pd-l1。

41、在一些方面，所述方法还包括在递送到pd-l1阳性细胞后使寡核苷酸结合于靶序列。在一些方面，所述方法还包括调节靶序列的选择性剪接、指示靶序列的聚腺苷酸化位点的位置、抑制靶序列的翻译、抑制靶序列与二级靶序列的结合、将risc募集到靶序列、将rnaseh1募集到靶序列、诱导靶序列的裂解或在寡核苷酸结合于靶序列后调节靶序列。在一些方面，活性剂包含消炎细胞因子、类固醇、糖皮质激素、皮质类固醇或非类固醇消炎药。在一些方面，活性剂包含免疫细胞靶向剂。

42、在一些方面，所述方法还包括使免疫细胞靶向剂结合于免疫细胞以及将免疫细胞募集到pd-l1阳性细胞。在一些方面，将免疫细胞募集到pd-l1阳性细胞包括形成免疫突触。在一些方面，免疫突触的宽度为3nm至25nm、5nm至20nm或10nm至15nm。在一些方面，免疫突触的宽度不大于3nm、不大于5nm、不大于8nm、不大于10nm、不大于13nm、不大于15nm、不大于18nm、不大于20nm、不大于23nm、不大于25nm、不大于30nm、不大于35nm、不大于40nm、不大于45nm或不超过50nm。

43、在一些方面，免疫细胞包含t细胞、b细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、成纤维细胞、调节性t细胞、调节性免疫细胞、神经干细胞或间充质干细胞。在一些方面，免疫细胞靶向剂结合cd3、4-1bb、cd28、cd137、cd89、cd16、cd25、cd13、cd29、cd44、cd71、cd73、cd90、cd105、cd166、cd27、gitr、tigit、lag3、tcr、cd40l、ox40、pd-1、ctla-4或stro-1。在一些方面，免疫细胞靶向剂结合cd3。在一些方面，免疫细胞靶向剂结合cd25。在一些方面，免疫细胞靶向剂结合4-1bb。在一些方面，免疫细胞靶向剂结合cd28。

44、在一些方面，所述方法还包括在免疫细胞递送到pd-l1阳性细胞后杀死pd-l1阳性细胞。在一些方面，所述方法还包括在免疫细胞递送到pd-l1阳性细胞后抑制pd-l1阳性细胞。在一些方面，免疫细胞靶向剂包含单链可变片段(scfv)、半胱氨酸致密肽、高亲合性多聚体、孔尼兹结构域、亲和体、阿德耐汀蛋白、纳米菲丁蛋白、菲诺体、β-发夹、订书肽、双环肽、抗体、抗体片段、蛋白质、肽、肽片段、结合结构域、小分子或纳米抗体。

45、在一些方面，免疫细胞靶向剂与第一异二聚化结构域融合并且pd-l1结合肽与第二异二聚化结构域融合。在一些方面，第一异二聚化结构域与第二异二聚化结构域复合形成异二聚体。在一些方面，第一异二聚化结构域、第二二聚化结构域或两者包含fc结构域。

46、在一些方面，免疫细胞靶向剂经由接头连接到pd-l1结合肽。在一些方面，免疫细胞靶向剂经由fc结构域连接到pd-l1结合肽。在一些方面，免疫细胞靶向剂和pd-l1结合肽形成单一多肽链。

47、在一些方面，肽复合物包含嵌合抗原受体。在一些方面，活性剂包含跨膜结构域、胞质内结构域或它们的组合。在一些方面，肽复合物还包含t细胞。在一些方面，所述方法还包括将t细胞递送到pd-l1阳性细胞。在一些方面，所述方法还包括杀死pd-l1阳性细胞。

48、在一些方面，所述方法还包括治疗受试者的疾患。在一些方面，疾患是癌症。在一些方面，pd-l1阳性细胞是癌细胞。在一些方面，癌症包含黑色素瘤、皮肤癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肾癌、食道癌、口腔癌、肝细胞癌、卵巢癌、宫颈癌、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、头颈癌、淋巴瘤、膀胱癌、肝癌、胃癌、胃部癌症、乳腺癌、三阴性乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、默克尔细胞癌、间皮瘤、脑癌或表达pd-l1的癌症。在一些方面，脑癌包含成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、原发性脑癌、转移性脑癌、表达pdl1的癌症或转移性脑癌。

49、在一些方面，疾患是高血糖症、1型糖尿病或2型糖尿病。在一些方面，pd-l1阳性细胞包含胰腺β细胞。在一些方面，免疫细胞是调节性t细胞，并且其中调节性t细胞募集到胰腺β细胞保护胰腺β细胞，并且预防受试者的高血糖症、1型糖尿病或2型糖尿病、减轻它们的作用、减少它们的症状、减缓它们的发作，从而治疗高血糖症、1型糖尿病或2型糖尿病。

50、在一些方面，疾患是自身免疫性或炎性病症。在一些方面，pd-l1阳性细胞包含胰腺β细胞。在一些方面，免疫细胞包含调节性t细胞或间充质干细胞。在一些方面，免疫细胞靶向剂结合cd25、cd13、cd29、cd44、cd71、cd73、cd90、cd105、cd166或stro-1。在一些方面，在募集到pd-l1阳性细胞后，免疫细胞抑制自身免疫性或炎性反应，从而治疗自身免疫性或炎性病症。在一些方面，自身免疫性或炎性病症包含类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、缺血再灌注损伤、结肠炎、牛皮癣、狼疮、炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、多发性硬化、1型糖尿病、2型糖尿病或神经炎症。

51、在一些方面，pd-l1结合肽以不大于100nm、不大于50nm、不大于1nm、不大于500pm、不大于300pm、不大于250pm或不大于200pm的平衡解离常数(kd)结合于pd-l1。

52、以引用的方式并入

53、本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请都以引用的方式并入本文，引用的程度就好像已特定地和单独地指出将每个单独的出版物、专利或专利申请以引用的方式并入一样。