用于抑制前列腺纤维化的前列消汤及其制备方法

1.本发明涉及中药技术领域，特别涉及一种用于抑制前列腺纤维化的前列消汤及其制备方法。


背景技术：

2.前列腺纤维化主要是由于长期慢性炎症刺激前列腺所造成，致使前列腺腺出现炎症浸润导致腺体纤维化，腺体纤维化样生成会引起膀胱颈口挛缩、狭窄，出现不同程度的进行性排尿困难、尿频、夜尿增多、尿不尽、尿线细等，表现为下尿路梗阻的症状，如果不能及时治疗可引起多种并发症。
3.现有技术中，治疗前列腺主要采用一些西药，传统治疗方案着重于下尿路症状改善，现有方案对腺体纤维化控制效果并不明确，对于较多并发症、年龄较大患者、长期服用西药出现不良反应等临床效果并不理想，传统中药具有副作用小、整体治疗的特点，市面上也有许多的中药，如常用的银花泌炎灵片，治疗效果并不是很显著，对于前列腺纤维化进展缺乏关注性的药物指导及意见。从临床实际、社会需求出发仍需要新的对治疗慢性前列腺炎具有良好临床治疗效果的中药组合物。
4.公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，该前列消汤在治疗慢性前列腺炎控制前列腺纤维化效果显著、疗效可靠、副作用小。
6.本发明的另一个目的在于提供用于抑制前列腺纤维化的前列消汤的制备方法。
7.为实现上述目的，本发明提供了一种用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，主要由主料和辅料制成；所述主料的原料包括：黄柏、苍术、苦杏仁、滑石、虎杖、金钱草、丹参、板蓝根、神曲、厚朴、细辛、芦根和甘草；所述辅料的原料包括：法半夏、通草、薏苡仁、藿香、酒苁蓉、干姜、麦冬、连翘和牛膝；其中，所述主料和辅料的重量百分比分别为4:1。
8.优选地，上述技术方案中，所述的用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，按重量份数计，所述主料的原料包括：黄柏5-15份、苍术5-15份、苦杏仁 1-11份、滑石15-25份、虎杖5-15份、金钱草10-20份、丹参10-20份、板蓝根10-20份、神曲5-15份、厚朴5-15份、细辛0.5-8份、芦根10-20份和甘草1-11份。
9.优选地，上述技术方案中，所述的用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，按重量份数计，所述主料的原料包括：黄柏10份、苍术10份、苦杏仁6份、滑石20份、虎杖10份、金钱草15份、丹参15份、板蓝根15份、神曲10 份、厚朴10份、细辛3份、芦根15份、甘草6份。
10.优选地，上述技术方案中，所述的用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，按重量份数计，所述辅料的原料包括：法半夏5-15份、通草1-11份、薏苡仁 10-20份、藿香10-20份、酒苁蓉5-15份、干姜5-15份、麦冬5-15份、连翘 5-15份、牛膝5-15份。
11.优选地，上述技术方案中，所述的用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，按重量份数计，所述辅料的原料包括：法半夏10份、通草6份、薏苡仁15 份、藿香15份、酒苁蓉10份、干姜10份、麦冬10份、连翘10份、牛膝 10份。
12.本技术还提供一种用于抑制前列腺纤维化的前列消汤的制备方法，包括以下步骤：
13.(1)准备主料及辅料：按重量配比称取主料的原料，将黄柏、苍术、苦杏仁、滑石、虎杖、金钱草、丹参、板蓝根、神曲、厚朴、细辛、芦根和甘草分别冲洗晾干备用；按重量配比称取辅料的原料：将法半夏、通草、薏苡仁、藿香、酒苁蓉、干姜、麦冬、连翘和牛膝分别冲洗晾干备用；
14.(2)煎煮：加入主料及辅料3-5倍的水，小火煎煮20-30分钟，过滤，得200～300ml的滤液。
15.优选地，上述技术方案中，所述前列消汤的使用方法为，一天两～三次，每次200ml，早晚饭后服用。
16.本发明用到的药物原料药物机理如下：
17.黄柏：味苦，性寒，肾、膀胱经；有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮的功效；用于湿热泻痢，黄疸尿赤，带下阴痒，热淋涩痛，脚气痿蹙，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮疡肿毒，湿疹湿疮。盐黄柏滋阴降火。用于阴虚火旺，盗汗骨蒸。
18.苍术：味辛、苦，性温。归脾、胃、肝经。燥湿健脾，祛风散寒，明目。主治：用于湿阻中焦，脘腹胀满，泄泻，水肿，脚气痿蹙，风湿痹痛，风寒感冒，夜盲，眼目昏涩。
19.苦杏仁：主治功能有降气止咳平喘，润肠通便。用于咳嗽气喘，胸满痰多，血虚津枯，肠燥便秘。
20.滑石：甘、淡，寒。归膀胱、肺、胃经，利尿通淋，清热解暑，祛湿敛疮。用于热淋，石淋，尿热涩痛，暑湿烦渴，湿热水泻；外治湿疹，湿疮，痱子。用于小便不利、淋沥涩痛等症，可配车前子、木通等品；用于湿热引起的水泻，可配合茯苓、薏苡仁、车前子等同用。对暑热病症可配合生甘草、鲜藿香、鲜佩兰等同用；治湿温胸闷、小便短赤，可配合生苡仁、通草，竹叶等同用。此外，本品外用还能清热收湿，用治湿疹、痱子等，可配石膏、炉甘石，枯矾等同用。
21.虎杖：微苦，微寒，归肝、胆、肺经，祛风利湿，散瘀定痛，止咳化痰。用于关节痹痛，湿热黄疸，经闭，症瘕，水火烫伤，跌扑损伤，痈肿疮毒，咳嗽痰多。
22.金钱草：味苦，酸，微寒。归肝，胆，肾，膀胱经。功能清热解毒，利尿排石，活血散淤。用于肝、胆结石，胆囊炎，黄疸性肝炎，泌尿系结石，水肿，跌打损伤，毒蛇咬伤，毒蕈及药物中毒。
23.丹参：味苦，微寒，归心、肝经，功效，活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈；功能用于胸痹心痛，脘腹胁痛，症瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮疡肿痛。
24.板蓝根：味苦，性寒。归心、胃经。清热解毒，凉血，利咽。主治外感发热，温病初起，咽喉肿痛，温毒发斑，痄腮，丹毒，痈肿疮毒。
25.神曲：甘、辛，温。归脾、胃经。健脾和胃，消食化积。用于饮食停滞，消化不良，脘腹胀满，食欲不振，呕吐泻痢。
26.厚朴：苦；辛；性温。脾经；胃经；大肠经。行气消积；燥湿除满；降逆平喘。食积气滞；
腹胀便秘；湿阻中焦，脘痞吐泻；痰壅气逆；胸满喘咳。
27.细辛：辛，温，归心、肺、肾经。解表散寒，祛风止痛，通窍，温肺化饮。风寒感冒，头痛，牙痛，风湿痹痛，鼻渊，肺寒咳嗽。
28.芦根：甘，寒。归肺经、胃经。清热生津，除烦，止呕，利尿。用于热病烦渴、胃热呕吐、肺热咳嗽、肺痈吐脓、热淋涩痛。
29.甘草：气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。
30.法半夏：辛，温。有毒。归脾、胃、肺经。燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结。用于湿痰咳嗽，风痰眩晕，痰厥头痛，呕吐反胃，胸脘痞闷，梅核气，瘿瘤痰核，痈疽肿毒。
31.通草：性味甘，平。归脾、肺、肾经。功能主治补气养阴，健脾，润肺，益肾。用于脾胃虚弱，体倦乏力，口干食少，肺虚燥咳，精血不足，内热消渴。
32.薏苡仁：味甘、淡，性凉、归脾、胃、肺经。有利水渗透湿，健脾止泻，除痹，排脓，解毒散结的作用。
33.藿香：辛，微温。归脾、胃、肺经。芳香化浊，和中止呕，发表解暑。用于湿浊中阻，脘痞呕吐，暑湿表证，湿温初起，发热倦怠，胸闷不舒，寒湿闭暑，腹痛吐泻，鼻渊头痛。
34.酒苁蓉：补肾生精，润肠通便。肉苁蓉是中医男科临床上常用的中药材，它味甘、咸，性温，归肾、大肠经，具有补肾阳、益精血、润肠道的作用，临床上常用于肾阳虚衰、精血不足引起的阳痿、遗精、尿浊、尿频、腰痛脚弱以及肠燥便秘。
35.干姜：味辛，性热。归脾、胃、肾、心、肺经。温中散寒，回阳通脉，温肺化饮。主治用于脘腹冷痛，呕吐泄泻，肢冷脉微，寒饮喘咳。
36.麦冬：甘、微苦，微寒。润肺清心、泻热生津、化痰止呕、治嗽行水。
37.连翘：苦，凉。入心、肝、胆经。清热，解毒，散结，消肿。治温热，丹毒，斑疹，痈疡肿毒，瘰疬，小便淋闭。
38.牛膝：植物的干燥根。苦、甘、酸，平。归肝、肾经。逐瘀通经，补肝肾，强筋骨，利尿通淋，引血下行。用于经闭，痛经，腰膝酸痛，筋骨无力，淋证，水肿，头痛，眩晕，牙痛，日疮，吐血，衄血。
39.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
40.(1)本发明用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，以主料为主，以辅料为辅，具体主料中以金钱草、苍术、苦杏仁清热利湿解毒为君药，加上辅料的通草、麦冬及牛膝，共奏清热利湿、通淋解毒消肿之效；以板蓝根、虎杖、丹参、连翘、法半夏加强君药清热利湿解毒，并能活血散瘀止痛，共为臣药；黄柏、神曲、薏苡仁、藿香、麦冬健脾和胃、益气扶正，防全方寒凉太过而脾胃为佐药；甘草清热解毒，调和诸药为使药，进一步地，通过辅料改善主料对脾胃的刺激，使患者更好的接受和有效吸收。
41.(2)本发明用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，能有效抑制前列腺纤维化，改善局部血液循环，有助炎症的消散。制备方法较为简便，便于大规模生产。
附图说明
[0042][0043]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本
发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
[0044]
图1为本技术前列消汤对照组、治疗组和正常组治疗后细胞因子比较结果；
[0045]
图2为本技术前列消汤对各组tgf-β1诱导prf细胞增殖情况(cck8 法)；
[0046]
图3为本技术前列消汤干预经tgf-β1刺激的各组prf细胞凋亡相关因子 bax、bcl-2、caspase-3蛋白的阳性表达区域；
[0047]
图4及图5为流式细胞术检测前列消汤干预经tgf-β1刺激的各组prf细胞凋亡率；
[0048]
图6为流式细胞术检测各组小鼠前列腺cd4+t细胞纯度；
[0049]
图7为western blot检测各组小鼠前列腺组织中il-6-jak2-stat3通路关键因子的蛋白表达水平；
[0050]
图8为western blot检测各组小鼠前列腺组织中凋亡相关因子的蛋白表达水平；
[0051]
图9为western blot检测各组小鼠前列腺组织中th17相关因子的蛋白表达水平。
具体实施方式
[0052]
下面结合具体实施例，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
[0053]
实施例1
[0054]
一种用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，主要包括主料和辅料制成；
[0055]
按重量份数计，所述主料的原料包括：所述主料的原料包括：黄柏5份、苍术5份、苦杏仁1份、滑石15份、虎杖5份、金钱草10份、丹参10份、板蓝根10份、神曲5份、厚朴5份、细辛0.5份、芦根10份和甘草1份。
[0056]
按重量份数计，所述辅料的原料包括：所述辅料的原料包括：法半夏5 份、通草1份、薏苡仁10份、藿香10份、酒苁蓉5份、干姜5份、麦冬5 份、连5份、牛膝5份，其中，所述主料和辅料的重量百分比分别为4:1。
[0057]
一种用于抑制前列腺纤维化的前列消汤的制备方法，包括以下步骤：
[0058]
(1)准备主料及辅料：按重量配比称取主料的原料，将黄柏、苍术、苦杏仁、滑石、虎杖、金钱草、丹参、板蓝根、神曲、厚朴、细辛、芦根和甘草分别冲洗晾干备用；按重量配比称取辅料的原料：将法半夏、通草、薏苡仁、藿香、酒苁蓉、干姜、麦冬、连翘和牛膝分别冲洗晾干备用；
[0059]
(2)煎煮：加入主料及辅料3-5倍的水，小火煎煮20-30分钟，过滤，得200～300ml的滤液。
[0060]
本发明用于抑制前列腺纤维化的前列消汤，使用方法为，一天两～三次，每次200ml，早晚饭后服用。28d为一个疗程。
[0061]
实施例2
[0062]
本实施例与实施例1的制备方法基本相同，不同在于用于抑制前列腺纤维化的前列消汤中主料和辅料的原料组分不同。
[0063]
按重量份数计，所述主料的原料包括：黄柏10份、苍术10份、苦杏仁6 份、滑石20份、虎杖10份、金钱草15份、丹参15份、板蓝根15份、神曲 10份、厚朴10份、细辛3份、芦根15份、甘草6份。
[0064]
按重量份数计，所述辅料的原料包括：法半夏10、通草6、薏苡仁15、藿香15、酒苁蓉10、干姜10、麦冬10、连翘10、牛膝10，其中，所述主料和辅料的重量百分比分别为4:1。
[0065]
实施例3
[0066]
本实施例与实施例1的制备方法基本相同，不同在于用于抑制前列腺纤维化的前列消汤中主料和辅料的原料组分不同。
[0067]
按重量份数计，所述主料的原料包括：黄柏15份、苍术15份、苦杏仁 11份、滑石25份、虎杖15份、金钱草20份、丹参20份、板蓝根20份、神曲15份、厚朴15份、细辛8份、芦根20份和甘草11份。
[0068]
按重量份数计，所述辅料的原料包括：法半夏15份、通草11份、薏苡仁20份、藿香20份、酒苁蓉15份、干姜15份、麦冬15份、连翘15份、牛膝15份，其中，所述主料和辅料的重量百分比分别为4:1。
[0069]
实施例4
[0070]
本实施例与实施例1的制备方法基本相同，不同在于用于抑制前列腺纤维化的前列消汤中主料和辅料的原料组分不同。
[0071]
按重量份数计，所述主料的原料包括：黄柏7份、苍术7份、苦杏仁3 份、滑石17份、虎杖7份、金钱草13份、丹参13份、板蓝根13份、神曲7 份、厚朴7份、细辛1.5份、芦根13份和甘草3份。
[0072]
按重量份数计，所述辅料的原料包括：法半夏7份、通草3份、薏苡仁 13份、藿香13份、酒苁蓉7份、干姜7份、麦冬7份、连翘7份、牛膝7份，其中，所述主料和辅料的重量百分比分别为4:1。
[0073]
实施例5
[0074]
本实施例与实施例1的制备方法基本相同，不同在于用于抑制前列腺纤维化的前列消汤中主料和辅料的原料组分不同。
[0075]
按重量份数计，所述主料的原料包括：黄柏12份、苍术12份、苦杏仁8 份、滑石22份、虎杖12份、金钱草17份、丹参10-20份、板蓝根17份、神曲12份、厚朴12份、细辛5份、芦根17份和甘草8份。
[0076]
按重量份数计，所述辅料的原料包括：法半夏12份、通草8份、薏苡仁 17份、藿香17份、酒苁蓉12份、干姜12份、麦冬12份、连翘12份、牛膝 12份。
[0077]
为了证明本发明前列消汤的有效性，本技术人做了大量的临床研究和基础研究，具体如下：
[0078]
第一、临床研究
[0079]
1、观察对象：
[0080]
选择80列ⅲa型(湿热挟瘀型)慢性前列腺炎(cp)的临床患者，分成两组，两组年龄、性别、体重、病情比较，差异无显著性意义(均p＞0.05)；
[0081]
2、用药和观察结果
[0082]
对照组：口服银花泌炎灵片；
[0083]
治疗组：采用实施例2；
[0084]
以上两组都是28d为一疗程，疗程结束后评价两组患者疗效、nih-cpsi评分、il-17a、foxp3因子的表达，结果如下：
[0085]
(1)经治疗后，治疗组临床疗效为86.49％，对照组疗效为71.05％，经秩和检验p《0.05，差异有统计学意义；证候疗效治疗组为89.19％，对照组为73.68％，经秩和检验p《0.05，差异有统计学意义，表明治疗组的前列消汤在疗效比较上优于对照组的银花泌炎灵片，具体见如下表1及表2：
[0086]
表1两组治疗后疗效比较
[0087][0088]
注：经z检验，p＜0.05
[0089]
表2两组治疗后证候疗效比较
[0090][0091]
注：经z检验，p＜0.05
[0092]
(2)治疗后两组前列腺按摩液白细胞情况：治疗后，两组均能降低wbc，两组白细胞不同时间两次检测平均值差异有统计学意义(p《0.05)；治疗组在患者wbc计数的减低情况上较银花泌炎灵片更佳，差异有统计学意义 (p《0.05)，具体见表3：
[0093]
表3治疗后两组患者白细胞变化情况
[0094][0095]
注：经z检验，与治疗前比较*＜0.05，
△
＜0.05。
[0096]
(3)nih-cpsi评分及中医证候积分情况，两组治疗后的nih-cpsi评分和中医证候积分比较上，两组组内治疗前后比较，差异有统计学意义(p《0.05)；治疗组在和银花泌炎灵片治疗后比较中，差异有统计学意义(p《0.05)。表明在对于湿热挟瘀型cp患者的治疗中，治疗组的前列消汤的症状改善情况优于对照组，具体见表4：
[0097]
表4治疗后两组症状评分和中医证候积分比较
[0098][0099]
注：与治疗前相比*《0.05，
△
《0.05。
[0100]
(4)治疗后两组病情严重程度比较：治疗后两组在病情严重程度的比较上显示，两组差异有统计学意义(p＜0.05)，表明治疗组的前列消汤在缓解病情程度上的效果优于对照组，具体见表5：
[0101]
表5治疗后两组病情严重程度比较
[0102][0103]
注：经z检验，治疗前两组比较p＜0.05。
[0104]
(5)治疗后两组il-17a和foxp3水平情况：经治疗后，两组与治疗前相比均能有效降低il-17a水平，提升foxp3水平，差异有统计学意义(p ＜0.05)。在foxp3的提升比较上，前列消汤组与银花泌炎灵片组有统计学差异(p＜0.05)，表明前列消汤能更好的提升foxp3的水平；在il-17a降低的比较上，治疗组的前列消汤与银花泌炎灵片组差异有统计学意义(p＜0.05)，说明治疗组的前列消汤较银花泌炎灵片在对患者eps中il-17a含量的影响上更有效果，具体见表6：
[0105]
表6治疗后两组il-17a和foxp3水平比较
[0106][0107]
注：与治疗前相比*《0.05，
△
《0.05。
[0108]
(6)请参见图1，治疗后两组和正常组il-17a和foxp3水平情况：经治疗后，治疗组和正常组在foxp3水平比较上差异无统计学意义(p》0.05)，对照组和正常组在foxp3水平比较上差异有统计学意义(p＜0.05)，表明服用治疗组前列消汤后foxp3表达水平较银花泌炎灵组的提升，差异有统计学意义，更接近正常组；治疗组和正常组在il-17a水平比较上差异无统计学意义(p》0.05)，对照组和正常组在il-17a水平比较上差异有统计学意义(p ＜0.05)，表明服用前列消后在降低il-17a水平上较银花泌炎灵组有效，更接近正常组。
[0109]
第二、疗效作用机理研究
[0110]
为进一步证实本技术前列消汤治疗慢性前列腺炎的临床疗效及抑制纤维化作用机理，为临床应用提供理论依据，开展了具体的细胞实验和动物实验：
[0111]
一、细胞实验
[0112]
1.细胞实验分组
[0113]
空白组：prf+dmem完全培养基
[0114]
模型组：prf+dmem完全培养基(含5ng/ml tgf-β1)
[0115]
溶剂组：prf+dmem完全培养基(含5ng/ml tgf-β1)+pbs
[0116]
前列消汤低剂量组：prf+dmem完全培养基(含5ng/mltgf-β1)+实施例2低剂量前列消汤稀释液
[0117]
前列消汤中剂量组：prf+dmem完全培养基(含5ng/ml tgf-β1)+实施例2中剂量前列消汤稀释液
[0118]
前列消汤高剂量组：prf+dmem完全培养基(含5ng/ml tgf-β1)+实施例2高剂量前列消汤稀释液
[0119]
2.实验方法
[0120]
体外培养eap小鼠前列腺成纤维细胞(prf)，采用c57bl/6小鼠制备前列消汤含药血清，根据细胞毒性实验结果，以5％、10％、20％的含药血清分别作为低、中、高剂量组进行干预实验；采用"前列腺蛋白提纯液+弗氏完全佐剂"建立eap小鼠模型，无菌条件下取出前列腺组织，分离培养prf,采用差速贴壁法纯化prf，免疫荧光法检测prf纯度，纯度达90％以上即以5ng/mltgf-β1浓度的培养液刺激进行建模；取建模后对数生长期的prf随机分为空
白组，模型组，溶剂组，前列消汤低、中、高剂量组，每组6个复孔；干预培养24h后，采用cck8法检测各组prf增殖情况，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，免疫组化法检测凋亡通路相关蛋白bax、bcl-2及caspase-3的表达。
[0121]
(1)前列腺cd4+t细胞的磁珠分选
[0122]
将取得的标本反复剪碎成约0.5cm大小的碎块，加入含1mm edta和 1mmdtt的pbs中，37℃振摇1h以去除上皮细胞和血管等组织。将剩余组织加入0.25％胰酶于37℃孵箱中反复消化，用含10％fbs的dmem终止消化。1000r离心5min，弃上清，用含20％fbs的dmem重悬沉淀制成细胞悬液，200目网筛过滤2次获得单细胞悬液。免疫磁珠阳性分选法(按试剂盒说明书操作)分选出cd4+t细胞。
[0123]
(2)cck8法检测各组小鼠前列腺cd4+t细胞活性
[0124]
①
将分选所得各组细胞接种于96孔板，每孔加入100ul，铺板使待测细胞密度至5000个细胞/孔，设5个复孔/组；
[0125]
②
5％co2，37℃培养至细胞贴壁；
[0126]
③
每孔加入10ul试剂盒中7sea-cell counting kit溶液，同步设调零孔；
[0127]
④
继续培养2h；
[0128]
⑤
用酶标仪检测450nm处的吸光值(od)，计算细胞存活率。
[0129]
(3)流式细胞术检测各组小鼠前列腺cd4+t细胞纯度
[0130]
①
将分选的各组小鼠前列腺cd4+t细胞制备为5*105个/管的细胞悬液反应管；
[0131]
②
室温孵育抗体cd3-fitc和cd4-pe，15min；预冷pbs 1ml洗2次；
[0132]
③
预冷pbs 1ml重悬，上机。
[0133]
结果如下：
[0134]
(1)检测本技术前列消汤对各组tgf-β1诱导prf细胞增殖情况： tgf-β1刺激过的模型组、溶剂组和前列消汤组与空白组比较，prf细胞增殖明显(p《0.05)；前列消汤低、中、高剂量组与溶剂组比较，前列消汤中剂量组及高剂量组有明显差异(p《0.05)，前列消汤低剂量组无明显差异(p＞0.05)。计算溶剂组与前列消汤低、中、高剂量组细胞活力和细胞抑制率，结果请参见附图2，附图2中显示与溶剂组比较，前列消汤低、中、高剂量组细胞增殖均受到抑制，且前列消汤剂量与细胞抑制率呈正相关。
[0135]
(2)免疫组化法检测前列消汤干预经tgf-β1刺激的各组prf细胞bax、 bcl-2、caspase-3凋亡因子表达的影响：检测前列消汤干预经tgf-β1刺激的各组prf细胞凋亡相关因子表达结果显示，bax、bcl-2、caspase-3蛋白的阳性表达区域被染成棕黄色或棕褐色，且主要存在于胞浆中，请参照图3，结果显示促凋亡蛋白bax、caspase-3在模型组和溶剂组表达量比较空白组无显著差异(p＞0.05)，在前列消汤组低、中、高剂量组中的表达量均比空白组、模型组和溶剂组更高，差异有统计学意义(p《0.05)；抑凋亡蛋白bcl-2在模型组和溶剂组的表达量比较空白组无明显差异(p＞0.05)，在前列消汤组低、中、高剂量组中的表达量均比空白组、模型组和溶剂组更低，差异有统计学意义 (p《0.05)，具体请参照表7：
[0136]
表7各组bax、bcl-2、caspase-3蛋白表达的aod值(n＝5)
[0137][0138]
注：与空白组比较，
*
p＜0.05；与溶剂组比较，
#
p＜0.05
[0139]
(3)流式细胞术检测前列消汤干预经tgf-β1刺激的各组prf细胞凋亡率：请参阅图4及图5，结果显示，模型组和溶剂组与空白组比较，prf细胞凋亡率无显著差异(p＞0.05)。前列消汤低、中、高剂量组与溶剂组比较，凋亡率均有显著差异(p＜0.05)，且前列消汤浓度越高，凋亡率越高，具体见图 4及图5所示。
[0140]
(4)cck8法检测结果显示将分选所得小鼠前列腺cd4+t细胞活性为均在94％以上，符合实验要求，具体参见表8：
[0141]
表8 cck8法检测各组小鼠前列腺cd4+t细胞活性结果
[0142][0143]
(5)流式细胞术检测结果显示：各组小鼠前列腺cd4+阳性表达率均高于 90％，符合实验要求，请具体参见表9和图6：
[0144]
表9 cck8法检测各组小鼠前列腺cd4+t细胞纯度
[0145][0146]
二、动物实验方法
[0147]
1.制作前列腺蛋白提纯液
[0148]
取240～300g，2～3月龄的雄性wistar种大鼠20只，处死后在无菌条件下剥取前列腺组织，加入含0.5％tritonx-100生理盐水溶液，在冰水浴上用玻璃匀浆器使之成匀浆。10000rmp离心10min，取上清液，双缩脲法检测上清液蛋白浓度，用0.1m ph7.2的pbs缓冲液稀释到2mg/ml，置于-80℃冰箱备用。
[0149]
2.免疫造模法和中医证候多因素造模法
[0150]
取16～21g、7～8周龄雄性c57bl/6小鼠120只，随机抽取30只有空白组，其余为造模组。空白组组小鼠多点皮下及腹腔注射生理盐水0.5ml,后 30天重复注射1次；造模组小鼠用前列腺组织蛋白提纯液0.5ml多点皮下注射，后30天重复注射1次，2次免疫后30天完成造模。造模期间两组均自由饮水摄食，空白组常规饲养；造模组以高脂饲料(普通饲料+胆固醇25g/kg +猪脂100g/kg+蛋黄粉80g/kg)喂养，饮水方面单日予以普通纯净水1000ml+56 度米酒50ml、双日予以20％蜂蜜饮料，每日10时～15时放入人工气候箱中 (温度35℃，湿度95％)。
[0151]
3分组及干预措施
[0152]
称取各组小鼠体质量，取平均数，用药剂量根据丁虹主编的《实验药理学》(科学出版社)人和小鼠剂量换算公式计算换算，按以下表10的方法对各组小鼠分别进行干预，连续干预4周，处理动物。
[0153]
表10药物分组及干预方式
[0154][0155]
4.指标检测与实验结果
[0156]
4.1western blot检测各组小鼠前列腺组织中il-6-jak2-stat3通路关键因子的蛋白表达水，结果请参见表11和图7：
[0157]
表11 il-6-jak2-stat3通路关键因子/β-actin蛋白的相对表达量
[0158][0159]
与control组比较，**p＜0.01；与eap组比较，
##
p＜0.01，
#
p＜0.05。
[0160]
4.2 western blot检测各组小鼠前列腺组织中凋亡相关因子的蛋白表达水平，具体结果请参见表12和图8：
[0161]
表12凋亡相关因子/β-actin蛋白的相对表达量
[0162][0163]
与control组比较，**p＜0.01；与eap组比较，
##
p＜0.01。
[0164]
4.3 western blot检测各组小鼠前列腺组织中th17相关因子的蛋白表达水平，具体结果请参见表13和图9：
[0165]
表13 th17相关因子/β-actin蛋白的相对表达量
[0166][0167][0168]
与control组比较，**p＜0.01；与eap组比较，
##
p＜0.01。
[0169]
4.4 real-time pcr检测各组小鼠前列腺组织中il-6-jak2-stat3通路关键因子的mrna表达水平，具体结果请参见表14：
[0170]
表14 il-6-jak2-stat3通路关键因子/β-actin mrna的相对表达量
[0171][0172]
与control组比较，**p＜0.01；与eap组比较，
##
p＜0.01。
[0173]
4.5real-time pcr检测各组小鼠前列腺组织中凋亡相关因子的mrna表达水平，具体结果请参见表15：
[0174]
表15凋亡相关因子/β-actin mrna的相对表达量
[0175][0176]
与control组比较，**p＜0.01；与eap组比较，
##
p＜0.01。
[0177]
4.6 real-time pcr检测各组小鼠前列腺组织中th17相关因子的mrna 表达水平，具体结果请参见表16：
[0178]
表16 th17相关因子/β-actin mrna的相对表达量
[0179][0180]
与control组比较，**p＜0.01；与eap组比较，
##
p＜0.01。
[0181]
第三、对比研究
[0182]
1、观察对象：
[0183]
选择120列ⅲa型(湿热挟瘀型)慢性前列腺炎(cp)的临床患者，分成两组，两组年龄、性别、体重、病情比较，差异无显著性意义(均p＞0.05)；
[0184]
2、用药和观察结果
[0185]
对照组1：本实施例与实施例2的制备方法基本相同，不同在于主料和辅料的原料组分不同。
[0186]
主料的原料缺少侧黄柏、苦杏仁、滑石、细辛、芦根；
[0187]
辅料的原料缺少法半夏、通草、薏苡仁、藿香；
[0188]
对照组2：本实施例与实施例2的制备方法基本相同，不同在于无辅料；
[0189]
治疗组：采用实施例2；
[0190]
以上三组都是28d为一疗程，疗程结束后观察治疗疗效，治疗组临床疗效为86.49％，对照组1的疗效为69.23％，对照组2的疗效为76.23％，差异有统计学意义，表明治疗组的前列消汤在疗效比较上优于对照组1和对照组2，具体见表17：
[0191]
表17三组治疗后疗效比较
[0192][0193]
以上说明，在本技术中，原料药的选择非常重要，如果缺少其中一或多个原料，其治疗效果都会显著下降。
[0194]
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。