一种珍珠粉水解液自组装脂质体及其制备方法

1.本发明涉及化妆品加工技术领域，具体涉及一种珍珠粉水解液自组装脂质体及其制备方法。


背景技术：

2.珍珠粉自古作为美颜佳品，具有提高人体免疫力，延缓衰老、祛斑美白，天然健康等优点，但作为一种粉体，它并不能很好的被人体所吸收，所以现阶段常用酸解和酶解的方式将珍珠粉中难溶的碳酸钙与蛋白质进行水解得到珍珠粉水解液，这种方式虽然便于使用，但水溶性的营养物质往往会被皮肤表面的油性脂质所阻隔，长期的暴露还会使其包含的活性物质被氧化，造成浪费。对此，可以通过一定的载体技术，如脂质体等将水解液进行包封来提高利用率。
3.脂质体作为一种具有双分子层的闭合囊泡，其独特的双空腔结构赋予它包覆多组分物质的能力，其制备方法主要包括薄膜分散法、有机溶剂注入法、复乳法、冻融法、化学梯度法等，其中薄膜分散法作为操作最简便的方法，广泛应用于脂质体的制备中，如中国专利cn1795874a公开了一种制备珍珠水解液脂质体的方法，它是通过氯仿将大豆卵磷脂和防腐剂溶解后利用旋蒸制得干膜，将溶于磷酸盐缓冲中的液珍珠水解液缓慢加入上述瓶中，经振荡、超声波后制备得到。这种方式虽然简单易行，但通常薄膜分散法制备得到的脂质体具有粒径偏大、粒度分布不均匀的弊端，导致皮肤渗透性能下降；且其制备过程中氯仿的使用使它的安全性也值得商榷，因此寻找一种操作相对简单，可重复性好，有机溶剂残留危害低的脂质体制备方法是目前化妆品行业的重要研究方向。


技术实现要素：

4.针对现有技术所存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种珍珠粉水解液自组装脂质体及其制备方法。本发明以乙醇作为溶剂，并利用卵磷脂、胆固醇和吐温-80等膜壁材料分子间的自组装制备得到了一种珍珠粉水解液脂质体，该法解决了现有脂质体制备过程存在的粒径不均一且涉及有害溶剂的困境。
5.为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
6.一种珍珠粉水解液自组装脂质体，所述脂质体的制备包括以下重量份数的原料：卵磷脂0.05-0.15份、胆固醇0.01-0.1份、吐温-800.05-0.15份、乙醇1.5-4份、珍珠粉水解液3-8份、防腐剂0.03-0.08份、香精0.05-0.15份；其中，所述珍珠粉水解液是由蛋白酶(购自阿拉丁试剂网站)和乳酸为原料制得。
7.进一步地，所述防腐剂的种类和用量符合《化妆品安全技术规范(2015年版)》中限定的物质，所述防腐剂为苯氧乙醇、甲基异噻唑啉酮、对羟基苯甲酸酯中的至少一种。
8.进一步地，所述香精的种类和用量也符合《化妆品安全技术规范(2015年版)》中限定的物质，所述香精包括玫瑰粉/液、茉莉粉/液、桂花粉/液等具有香味的一种或几种。
9.进一步地，按重量份数计，所述珍珠粉水解液的制备方法包括以下步骤：将1-2份
珍珠粉、0.2-0.8份蛋白酶和30份去离子水加入单颈烧瓶中形成混合液，于40℃水浴锅中搅拌4-6h后，升温至90～98℃使蛋白质失活后缓慢滴加入2-6份预热至液体形态的乳酸，滴加完毕后继续搅拌2-3h，最后用去离子水定容至单颈烧瓶中混合液的初始体积。
10.进一步地，所述珍珠粉水解液自组装脂质体是由以下重量份数的原料制备而成：卵磷脂0.08-0.1份、胆固醇0.01-0.07份、吐温-800.08-0.1份、乙醇2-5份、珍珠粉水解液4-5份、防腐剂0.04-0.05份、香精0.08-0.1份。
11.更进一步地，所述珍珠粉水解液自组装脂质体的制备方法为，按照各原料的重量份数，包括以下步骤：
12.1)粗脂质体制备：将卵磷脂、胆固醇、吐温-80、防腐剂于乙醇中完全溶解，然后逐滴缓慢滴加至含香精的珍珠粉水解液中，滴加完毕后在50-60℃水浴锅中搅拌水化0.5-2h；
13.2)超声细化：将步骤1)所得溶液在40℃条件下旋蒸除去乙醇，当液体体积恢复至珍珠粉水解液的体积后，在冰水浴中超声一段时间；
14.3)杂质去除：用截留分子量为500的透析袋在去离子水中透析除去未包覆的物质，当透析液用紫外可见光分光度测试其吸光度恒定不变时透析结束，密封后于4℃条件下避光储存，即制备完成。
15.步骤1)中，搅拌水化的温度为50-55℃，搅拌水化的时间为0.5-1h。
16.步骤2)中，超声功率为50-100w，超声时间为0.3-0.5h。
17.通过采用上述技术方案，本发明取得的有益效果是：
18.(1)本发明的乙醇注入法主要依靠膜壁材料分子间的自组装结合形成相应的脂质体，该法对比薄膜分散法、复乳法等具有操作相对简单，可重复性好，有机溶剂残留低的优点，制备得到的脂质体粒径小而均匀；
19.(2)本发明制备过程中使用乙醇溶解油相，未引入氯仿等毒害作用大的有机溶剂，安全有效，无毒副作用及全身不良反应。
附图说明
20.图1为本发明实施例1所得脂质体的透射电镜图和扫描电镜图测试结果；(a)投射电镜图；(b)扫描电镜图。
21.图2薄膜分散法制备得到的脂质体的显微镜图(对比例1)。
具体实施方式
22.下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于此。
23.实施例1
24.一种珍珠粉水解液脂质体，由以下质量的原料制备而成：卵磷脂100mg、胆固醇10mg、吐温-80100mg、乙醇3ml、珍珠粉水解液5ml、苯氧乙醇50mg、香精(香精为玫瑰粉)100mg。
25.上述珍珠粉水解液的制备方法如下：将1.5g珍珠粉、0.36g蛋白酶(购自阿拉丁试剂网站)、30g去离子水加入单颈烧瓶中，于40℃水浴锅中搅拌6h，升温至95℃使蛋白质失活后缓慢滴加入3ml预热至液体形态的乳酸(乳酸质量分数为95％)，滴加完毕后继续搅拌2h，最后用去离子水定容至33ml。
26.上述珍珠粉水解液脂质体的制备方法如下：按各原料的投料质量，将卵磷脂、胆固醇、吐温-80、防腐剂苯氧乙醇于3ml乙醇中溶解，然后逐滴缓慢滴入至5ml含0.1g香精的珍珠粉水解液(0.1g香精加入5ml珍珠粉水解液配制而成)中，滴加完毕后在50℃水浴锅中搅拌0.5h进行水化，随后将上述溶液在40℃条件下旋蒸除去乙醇，当溶液体积减小至5ml后，在冰水浴中超声0.3h进行细化(超声功率60w)，最后用截留分子量为500的透析袋在去离子水中透析除去未包覆的物质，当透析液用紫外可见光分光度测试其吸光度恒定不变时透析结束，密封后于4℃条件下避光储存，即制备完成。
27.实施例2
28.一种珍珠粉水解液脂质体，由以下质量的原料制备而成：卵磷脂100mg、胆固醇30mg、吐温-80100mg、乙醇3ml、珍珠粉水解液5ml、苯氧乙醇50mg、香精(香精为茉莉粉)100mg。
29.上述珍珠粉水解液的制备方法如下：将1.5g珍珠粉、0.36g蛋白酶(购自阿拉丁试剂网站)、30g去离子水加入单颈烧瓶中，于40℃水浴锅中搅拌6h，升温至95℃使蛋白质失活后缓慢滴加入3ml预热至液体形态的乳酸(乳酸质量分数为95％)，滴加完毕后继续搅拌2h，最后用去离子水定容至33ml。
30.上述珍珠粉水解液脂质体的制备方法如下：按各原料的投料质量，将卵磷脂、胆固醇、吐温-80、防腐剂苯氧乙醇于3ml乙醇中溶解，然后逐滴缓慢滴入至5ml含0.1g香精的珍珠粉水解液(0.1g香精加入5ml珍珠粉水解液配制而成)中，滴加完毕后在50℃水浴锅中搅拌0.5h进行水化，随后将上述溶液在40℃条件下旋蒸除去乙醇，当溶液体积减小至5ml后，在冰水浴中超声0.3h进行细化(超声功率60w)，最后用截留分子量为500的透析袋在去离子水中透析除去未包覆的物质，当透析液用紫外可见光分光度测试其吸光度恒定不变时透析结束，密封后于4℃条件下避光储存，即制备完成。
31.实施例3
32.一种珍珠粉水解液脂质体，由以下质量的原料制备而成：卵磷脂100mg、胆固醇50mg、吐温-80100mg、乙醇3ml、珍珠粉水解液5ml、苯氧乙醇50mg、香精(香精为桂花粉)100mg。
33.上述珍珠粉水解液的制备方法如下：将1.5g珍珠粉、0.36g蛋白酶(购自阿拉丁试剂网站)、30g去离子水加入单颈烧瓶中，于40℃水浴锅中搅拌6h，升温至95℃使蛋白质失活后缓慢滴加入3ml预热至液体形态的乳酸(乳酸质量分数为95％)，滴加完毕后继续搅拌2h，最后用去离子水定容至33ml。
34.上述珍珠粉水解液脂质体的制备方法如下：按各原料的投料质量，将卵磷脂、胆固醇、吐温-80、防腐剂苯氧乙醇于3ml乙醇中溶解，然后逐滴缓慢滴入至5ml含0.1g香精的珍珠粉水解液(0.1g香精加入5ml珍珠粉水解液配制而成)中，滴加完毕后在50℃水浴锅中搅拌0.5h进行水化，随后将上述溶液在40℃条件下旋蒸除去乙醇，当溶液体积减小至5ml后，在冰水浴中超声0.3h进行细化(超声功率60w)，最后用截留分子量为500的透析袋在去离子水中透析除去未包覆的物质，当透析液用紫外可见光分光度测试其吸光度恒定不变时透析结束，密封后于4℃条件下避光储存，即制备完成。
35.实施例4
36.一种珍珠粉水解液脂质体，由以下质量的原料制备而成：卵磷脂100mg、胆固醇
70mg、吐温-80100mg、乙醇3ml、珍珠粉水解液5ml、苯氧乙醇50mg、香精(香精为玫瑰粉)100mg。
37.上述珍珠粉水解液的制备方法如下：将1.5g珍珠粉、0.36g蛋白酶(购自阿拉丁试剂网站)、30g去离子水加入单颈烧瓶中，于40℃水浴锅中搅拌6h，升温至95℃使蛋白质失活后缓慢滴加入3ml预热至液体形态的乳酸(乳酸质量分数为95％)，滴加完毕后继续搅拌2h，最后用去离子水定容至33ml。
38.上述珍珠粉水解液脂质体的制备方法如下：按各原料的投料质量，将卵磷脂、胆固醇、吐温-80、防腐剂苯氧乙醇于3ml乙醇中溶解，然后逐滴缓慢滴入至5ml含0.1g香精的珍珠粉水解液(0.1g香精加入5ml珍珠粉水解液配制而成)中，滴加完毕后在50℃水浴锅中搅拌0.5h进行水化，随后将上述溶液在40℃条件下旋蒸除去乙醇，当溶液体积减小至5ml后，在冰水浴中超声0.3h进行细化(超声功率60w)，最后用截留分子量为500的透析袋在去离子水中透析除去未包覆的物质，当透析液用紫外可见光分光度测试其吸光度恒定不变时透析结束，密封后于4℃条件下避光储存，即制备完成。
39.对比例1
40.薄膜分散法：将卵磷脂100mg、胆固醇70mg、吐温-80100mg、苯氧乙醇50mg溶于3ml乙醚中，在100w超声中分散至澄清透明后倒入圆底烧瓶中，在40℃旋蒸中缓慢除去乙醚，当圆底烧瓶内部形成一层均匀薄膜后加入5ml含0.1g香精的珍珠粉水解液(0.1g香精加入5ml珍珠粉水解液配制而成，香精为玫瑰粉)，在冰水浴中超声0.3h进行细化(超声功率60w)，最后用截留分子量为500的透析袋在去离子水中透析除去未包覆的物质，当透析液用紫外可见光分光度测试其吸光度恒定不变时透析结束，即得相应的脂质体。
41.其中，对比例1中珍珠粉水解液的制备方法重复实施例1中。
42.性能测试：
43.(1)微观形貌
44.取适量的样品滴加在铜网上，待样品自然晾干后用荷兰philips-fei公司的tecnaig2f30s-twin型透射电子显微镜，观察脂质体样品的微观形貌。本发明实施例1所得脂质体的透射电镜图和扫描电镜图测试结果见图1，其中图1中的a图为脂质体的透射电镜图，b图为相应的扫描电镜图，由图1可知乙醇注入法制得的脂质体呈球形且没有明显的破裂或粘连，粒径大约在200nm左右。
45.取适量样品滴在干净的载玻片上，盖上盖玻片后使用nt2003熔点偏光图像分析仪，在不使用偏振片的情况下观察脂质体样品的微观形貌，结果如图2所示，薄膜分散法(对比例1)制备得到的脂质体粒径偏大且大小分布极不均匀，在实际应用时大粒径脂质体更容易被皮肤所阻隔，从而造成利用率低下。
46.(2)粒径、粒径分布及zeta电位
47.在比色管中装入适量用去离子水稀释后的脂质体(7mg/ml)悬浮液，待溶液稳定后使用brookhaveomni型zeta电位及粒度分析仪测定样品的粒径、粒径分布及zeta电位，每个样品测定3次，取平均值。
48.表1各实施例实验结果
[0049][0050]
由表1可知，乙醇注入法制得的脂质体外侧带负电，粒径分布在200-400nm左右，其直径随胆固醇添加量的增加而变大。
[0051]
(3)长期稳定性
[0052]
对实施例1-4制得的脂质体分别进行长期稳定性性能测试，测试方法为：将4℃下避光密封存储的脂质体每隔一段存储时间进行测试，测试的存储时间分别为1、4、7和10天，测试时将脂质体用去离子水稀释成7mg/ml的悬浮液，加入特定比色管中待溶液稳定后，使用brookhaveomni型zeta电位及粒度分析仪测定样品的粒径、粒径分布及zeta电位，每个样品测定3次，取平均值。测试结果见表2中。
[0053]
表2各实施例实验结果
[0054][0055]
由表2可知，该法制得的脂质体在10天内形貌及zeta电位基本可以维持不变。
[0056]
本说明书所述的内容仅仅是对发明构思实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式。