一种稳定的他克莫司药物组合物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种稳定的他克莫司药物组合物及其制备方法。


背景技术：

2.他克莫司(tacrolimus)，又名fk506，是从链霉菌属中分离出的发酵产物，是一种大环内酯类抗生素，为一种强力的新型免疫抑制剂，主要通过抑制白介素-2(il-2)的释放，全面抑制t淋巴细胞的作用，较环孢素(csa)强100倍。近年来，作为肝、肾移植的一线用药，已在日本、美国等14个国家上市。临床实验表明，其在心、肺、肠、骨髓等移植中应用有很好的疗效。同时fk506在治疗特应性皮炎(ad)、系统性红斑狼疮(sle)、自身免疫性眼病等自身免疫性疾病中也发挥着积极的作用。
3.他克莫司，商品名为普乐可复，是日本藤泽公司(fujisawa)于1984年从tsukubaensis链霉菌(一种类似真菌的细菌，由tsukuba在土壤样本中发现)的发酵培养基中分离而得的一种大环内酯类强效免疫抑制剂。他克莫司的免疫抑制作用比环孢素a(csa)强10～100倍，因而大大降低了临床使用剂量，同时不良反应也明显降低。他克莫司是一种强效免疫抑制剂，主要用于预防和治疗患者器官移植后的排斥反应，具有与环孢霉素a相似而更加广泛的免疫抑制作用，但其效力比环孢霉素a高而毒副作用却更低。其作用机制可能与其抑制t淋巴细胞激活有关：他克莫司与t细胞质的fk-506结合蛋白fkbp-12、钙离子、钙调蛋白、钙调神经磷酸酶形成复合物，从而抑制钙调神经磷酸酶的活性。这一过程通过抑制t细胞核因子的去磷酸和核转位而抑制细胞因子如白介素-1和γ-干扰素等的基因转录，最终抑制细胞因子的产生和t淋巴细胞活化，形成免疫抑制。
4.目前市场上已有的以他克莫司为有效活性成份的药物制剂有注射液、胶囊和软膏三种。他克莫司注射剂和他克莫司胶囊剂用于预防肝脏或肾脏移植术后的移植物排斥反应及治疗肝脏或肾脏移植术后应用其他免疫抑制药物无法控制的移植物排斥反应；他克莫司软膏用于因潜在危险而不宜使用传统疗法或对传统疗法反应不充分或无法耐受传统疗法的中到重度特应性皮炎患者，作为短期或间歇性长期治疗药物。
5.虽然具有多种途径，但由于生物药效率低，许多他克莫司的药用制剂口服给药很难有效，这归因于药物的低溶出度和/或胃肠道的低吸收率，从而无法在短期内达到想要的血药浓度。此外，口服制剂不易对儿童、虚弱或无意识的患者实施给药。在临床上，他克莫司注射剂适用于不能接受口服给药或需要在短期内达到较高血药浓度、迅速起效的患者。因此，他克莫司注射剂在临床治疗上仍然是口服制剂无法代替的，但将他克莫司制成注射剂需要克服的问题是其在水中的不溶解性。
6.在一些公开了他克莫司注射剂组分的专利文献中，均未能提供一种体溶液稳定性好、有更高的有效性和安全性，制备方法简便，利于操作，有好的重现性，适合产业化的他克莫司注射制剂及其制备方法。
7.他克莫司口服胶囊，虽然在口服后完全吸收、生物利用度高、组织分布好、可透过
血脑屏障，但其具有明显的恶心、呕吐、乏力、便秘和轻度的骨髓抑制等副作用。由于恶心、呕吐等影响会造成药物吸收不全，通常需要在服药前先服用止吐药，给患者带来了极大的痛苦和经济负担。另外，手术后病人常不适用固体药物，再加上传统的临床用药习惯，他克莫司静脉注射剂将更适合病人临床使用，提高病人用药的顺应性。
8.美国专利us 6346537公开了一种药用组合物，该药用组合物含有他克莫司；表面活性剂；和固相载体如水溶性聚合物、糖和轻质无水硅酸。该发明中所述的组合物为固态分散体，他克莫司和表面活性剂被分散到固相载体中，随后去除有机溶剂。
9.虽然具有多种途径，但由于生物药效率低，许多他克莫司的药用制剂口服给药很难有效。这归因于药物的低溶出度和/或胃肠道的低吸收率。因此在短期内无法达到想要的血药浓度。此外，口服制剂不易对儿童、虚弱或无意识的患者实施给药。
10.因此，需要他克莫司制剂能够静脉内传递有效成分以迅速起效，其还需具有高生物药效率，并且适用于不能接受口服给药的患者。
11.然而，现有溶液组合物存在一些问题，大量使用表面活性剂，油性溶剂，有机溶剂等，该药物在长期贮存的过程中会产生沉淀，并且随着药物含量的降低和药物有关物质的增长，其药学稳定性将会下降。因此，传统的溶液组合物不适于用作人体注射用制剂。
12.韩国专利kr20060045210a公开了一种药用组合物，包含表面活性剂和无水有机溶剂，这限制了有机溶剂不耐受的使用人群，以及大量的有机溶剂必定带来安全使用风险。
13.因此，临床上迫切需要研发一种稳定、安全能够满足施用治疗剂量药物的他克莫司注射剂。


技术实现要素：

14.本发明要解决的技术问题是克服现有技术中他克莫司制剂稳定性差的缺陷，提供一种稳定、安全能够满足施用治疗剂量药物的他克莫司注射剂。
15.为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
16.本发明主要目的是克服现有制剂的缺陷，提供一种质量稳定并且能够降低临床用药风险的他克莫司药物组合物，以及该组合物制备的方法。发明人通过研究发现将他克莫司进行微粉化后，可以提高其在水中的溶解度，所以将其微粉至粒径分布至d(90)≤10um，适量的聚乙二醇15羟基硬脂酸酯加入可以显著提高他克莫司在水中的溶解度，使其溶解度达到6.5mg/ml。同时对比不同的粒径分布对于莫司在水中的溶解度的影响。具体数据见表1。实验亦发现加入聚乙烯吡咯烷酮k12具有进一步增加克莫司在水中的溶解度的性能，稳定剂的加入使得溶液制备过程中的中间体有关物质和成品的有关物质远远低于现有专利中的实验数据。适量聚乙二醇15羟基硬脂酸酯、聚乙烯吡咯烷酮和稳定剂的加入能够使我们组合物在不使用聚山梨酯-80，乙醇等有机溶剂的情况下溶解治疗剂量的他克莫司并且增加制剂的稳定性。
17.表1不同粒径分布的他克莫司在聚乙二醇15羟基硬脂酸酯水溶液中的溶解度
18.粒径分布溶解度/mg/mld(90)≤10um6.5d(90)≤20um5.3d(90)≤30um4
19.本发明提供一种他克莫司注射液，活性成分包含他克莫司，溶液中还包括增溶剂、助溶剂、稳定剂、ph调节剂，所述增溶剂为聚乙二醇15羟基硬脂酸酯。
20.本发明的药物组合物，他克莫司与聚乙二醇15羟基硬脂酸酯重量比在1：1～1:10之间。在一个特别优选的方案中，本发明的他克莫司组合物包含重量比为大约1：5的他克莫司和聚乙二醇15羟基硬脂酸酯。
21.本发明的药物组合物，其中所述稳定剂选自氯化钠、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、偏重硫酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、碳酸氢钠、依地酸二钠、依地酸钠钙以上任意一种，或两种以上的组合；其中所述缓冲剂选自枸橼酸盐、乳酸盐、醋酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、磷酸盐之一或以上任意两种，或两种以上的组合；其中所述ph调节剂选自盐酸、氢氧化钠、硫酸、甲磺酸、苹果酸、马来酸、柠檬酸及其盐、磷酸及其盐、乳酸及其盐、酒石酸及其盐、琥珀酸及其盐之一，或以上任意两种，或两种以上的组合。
22.本发明的药物组合物，稳定剂优选氯化钠，缓冲剂优选枸橼酸钠，ph调节剂优选盐酸。
23.本领域技术人员可根据注射剂制备要求对助溶剂、稳定剂、缓冲剂、ph调节剂作出选择和调整。
24.在本发明的药物组合物制备过程中，加入至少一种水性稀释剂，所述水性稀释剂是从选自注射用水、生理盐水、5％的葡萄糖溶液或其混合物。
25.本发明还提供一种上述组合物的方法，具体包括以下步骤：
26.a)先将他克莫司溶解在增溶剂中，形成溶液1
27.b)将稳定剂和助溶剂溶解在适量注射用水中，形成溶液2
28.c)再将溶液2加入到溶液1中，加入缓冲剂或者不加，然后用ph调节剂调节ph，并将注射用水补足；
29.d)过滤上述的溶液；
30.e)将步骤d)过滤后溶液进行罐装，终端灭菌后，得到一种注射液制剂。
31.该制备方法中在温度控制在35～45℃条件下即可快速溶解他克莫司，加速了工艺制备过程，缩短了生产时间，提高了产能。
32.本发明所达到的有益效果是：
33.本发明通过加入聚乙二醇15羟基硬脂酸酯，改善了他克莫司在水中溶解度低，不易被水溶解的特点，通过调节聚乙烯吡咯烷酮与聚乙二醇15羟基硬脂酸酯的比例在提高他克莫司在水中溶解度的同时亦增加了他克莫司在水中的稳定性，可以在严苛温度条件下保持溶液长时间的澄清透明。
34.本发明的药物组合物，由于稳定剂的加入，进一步降低了他克莫司的降解速率，在终端灭菌后，仍能保持良好的稳定性。得到了更加稳定的他克莫司组合物，有利于其制备、储存和临床应用。
35.本发明通过加入稳定剂，本发明通过除菌过滤，终端灭菌，制得他克莫司注射液，增加克莫司注射液安全性的同时，实现了非肠道给药，可避免病人在服药前使用止吐药，减少了其临床应用时的副作用，增加了患者的顺应性，方便了临床用药。
36.本发明通过加入缓冲剂及ph调节剂，使他克莫司处在比较稳定的ph环境和适宜的缓冲体系中，减少了他克莫司的降解，提高了他克莫司的稳定性。
具体实施方式
37.以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
38.实施例
39.先将d(90)≤10um他克莫司溶解在增溶剂中，形成溶液1，将稳定剂和助溶剂溶解在适量注射用水中，形成溶液2再将溶液2加入到溶液1中，加入其他辅料，加入ph调节剂将溶液ph值调节至6.0～8.0。
40.加入注射用水至总体积，继续搅拌至溶液混合均匀。
41.将上述溶液进行过滤。
42.本发明的制备方法，还包括将过滤后得到的混合溶液进行终端灭菌，以得到他克莫司注射液。
43.实施例制备方法，包括如下步骤：
44.1)先将d(90)≤10um他克莫司溶解在增溶剂中(聚乙二醇15羟基硬脂酸酯，聚乙二醇，丙二醇中的一种，两种，或者三种的组合物)，形成溶液1；
45.2)将稳定剂(氯化钠、依地酸二钠、依地酸钠钙)和助溶剂(聚乙烯吡咯烷酮k12，聚乙烯吡咯烷酮k17)溶解在适量注射用水中，形成溶液2；
46.3)再将溶液2加入到溶液1中，加入缓冲剂(柠檬酸钠，酒石酸钠)或者不加，然后用ph调节剂调节ph，并将注射用水补足，制备过程中温度35～45℃；
47.4)过滤上述的溶液；
48.5)将步骤4)过滤后溶液进行罐装，终端灭菌后，得到一种注射液制剂。
49.表2，实施例处方1～13
[0050][0051]
表3，实施例处方14～26
[0052]
[0053][0054]
对比例1
[0055]
使用聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯的他克莫司注射液
[0056]
在1ml无水乙醇中溶解5mg的他克莫司和100mg的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯(solutolhs 15，basf公司)，随后用0.2μm的过滤器进行过滤，制成可用于注射的形式。
[0057]
对比试验1将实施例和对比例生理盐水稀释后，在不同温度条件下，对澄清度进行观察，结果见表3
[0058]
表4为实施例1～26与对照例1，澄清度对比结果。
[0059]
[0060][0061]
由表中结果可知，本发明中实施例1～26的他克莫司粉注射溶液的生理盐水稀释后的澄明度与对照例相比优势较为明显，尤其是实施例4、10、11在不同温度下的溶液出现浑浊的时候均较晚，说明这些实施例的溶液不但溶解度得到提升，更由于辅料的加入使得溶液形成了更为均一和稳定的体系，表明本发明中的他克莫司注射液溶液稳定性更好。
[0062]
对比试验2
[0063]
按照实施例1～26与对照例1处方配制相应的他克莫司注射液。以样品外观、含量、有关物质以及复溶后不溶性微粒为指标，将制得的注射液放置在60℃条件下，留样测定。分别考察10天后各指标变化情况，结果见表4。
[0064]
表5为实施例1～26处方与对照例处方考察结果
[0065][0066]
对比试验3
[0067]
按照实施例1～26与对照例处方配制相应的他克莫司注射液。以样品外观、含量、有关物质及复溶后不溶性微粒为指标，将制得的注射液放置在40
±
2℃/75％rh
±
5％条件下，留样测定。分别考察30天后各指标变化情况，结果见表5。
[0068]
表6为实施例1～26处方与对照例处方考察结果
[0069]
[0070][0071]
从表中结果可以看出，由实施例1～26处方制得的注射液时间与对照例处方的外观和复溶后的不溶性微粒相比无显著差异；实施例含量及有关物质无明显变化，明显优于对照例。因此可以说明本发明制得的他克莫司粉针制剂与对照里中的处方相比具有更好的稳定性。
[0072]
综合以上数据，我们意外的发现，他克莫司的稳定剂，在防止溶液不溶性微粒增大、有关物质增长中作用有着明显的作用。本发明的他克莫司药物组合物在溶液配制放置过程中比对照例稳定，并且在成品的稳定性放样中，在不溶性微粒和稳定性方面均有着明显的优势。
[0073]
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。