一类肠道菌在预防或治疗肾病综合征药物或生物制剂中的应用

本发明涉及临床医疗，尤其涉及一组肠道菌属的组合应用，或者这几个肠道菌属的单独应用，其在制备预防和/或治疗肾病综合征的药物或保健品中的应用。通过口服/肠道定植等方式预防和/或治疗肾病综合征，作为药品或者保健品的应用。

背景技术：

1、免疫介导肾病综合征是一种由免疫所介导的特殊的肾小球疾病，是世界范围内非糖尿病成人特发性综合征最常见的原因。免疫介导肾病综合征主要分为特发性免疫介导肾病综合征和继发性免疫介导肾病综合征两类，特发性免疫介导肾病综合征主要为肾脏局限性，约占80％的病例；继发性免疫介导肾病综合征与其他系统性疾病或暴露有关，约占20％的比例。作为一种肾脏特异性，自身免疫性的肾小球疾病，特发性免疫介导肾病综合征具有一些核心的病理学特征，主要包括肾小球基底膜大量的免疫复合物沉积、肾小球皱缩和肾小管间质损伤，因此常伴有尿蛋白增加，并伴有肾小球损伤。此外炎症的发生以及肠道菌群失调也是疾病发病过程中重要的病理表现。

2、肠道菌与宿主之间的相互关系近年来逐渐进入人们的视野，肠道稳态失衡与多种疾病的发生发展密切相关，比如肥胖、糖尿病、心血管疾病、肾病等，因此对于肠脑轴、肠心轴、肠骨轴，肠肾轴等都是目前的一个研究热点。目前已有多种临床证据表明慢性肾病中伴随着肠道菌群失调。肠肾轴理论阐述了肠道菌与慢性肾病之间的双向交流，慢性肾病影响肠道菌的稳态，失调的肠道菌会产生肾毒素代谢物加剧肾损伤。考虑到肠道菌及其代谢物在宿主中的重大作用，一些新疗法逐渐进入人们的视野，例如通过益生菌和益生元、粪菌移植等，纠正失调，改善疾病症状。其中粪菌移植(fecal microbiota transplantation,fmt)是将健康供体的粪便微生物注入受体的肠道，以重塑受体的肠道微生物组成，并带来健康益处。目前fmt已成功地用于治疗复发性艰难梭菌感染。以肠道菌定植或者增加特定肠道菌供给为疾病治疗提供了一种新的治疗方向。

技术实现思路

1、本发明的解决的技术问题是提供一组能够改善肾病综合征的肠道菌群菌属的应用，包括这些肠道菌群的单独应用和自由组合应用。主要目的是预防健康人群肾病综合征的发生，同时对于已经患有肾病综合征的病人来说，这些菌群的应用或者额外补充会起到改善肾病综合征进展的作用，包括降低尿蛋白、血中尿素、肌酐、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯等，同时改善肾脏病理损伤。

2、本发明通过对40例临床免疫介导肾病综合征患者和与之对应的41例健康人对照(年龄和性别均匹配)进行16s rrna肠道菌群测序与分析，通过多元线性回归方程，发现12种菌属的下调同免疫介导肾病综合征的发生显著相关，提示这些菌属可能对免疫介导肾病综合征的发生发展有保护作用。另外9种菌属同免疫介导肾病综合征的临床指标显著相关。将病人的粪便移植到无菌小鼠肠道内，证明了这些粪便可以诱导小鼠的肾脏损伤，血中尿素氮升高、尿蛋白出现，并伴有肠道紧密连接蛋白受损等现象。因此，为免疫介导肾病综合征病人增加这些菌群的补充为我们提供了一种预防与治疗免疫介导肾病综合征的办法，还可以改善预后。另外，利用这些肠道菌群在肠道内的丰度，可以构建随机森林分类器，用于判断免疫介导肾病综合征的发生以及免疫介导肾病综合征治疗的预后。

3、为解决本发明的技术问题，本发明提供了如下技术方案：

4、本发明技术方案是提供了一类肠道菌群在制备预防或治疗肾病综合征药物或生物制剂中的应用，其特征在于，所述的肠道菌包括bacteroides、faecalibacterium、agathobacter、dialister、roseburia、parabacteroides、alistipes、lachnospira、paraprevotella、butyricicoccus、barnesiella、parasutterella、sutterella、lachnoclostridium、fusobacterium、collinsella、bifidobacterium、akkermansia,flavonifractor、lactobacillus、streptococcus、phascolarctobacterium，所述的肠道菌群包括上述肠道菌的一种或者多种的组合。

5、相比于健康人，所述的肠道菌bacteroides，faecalibacterium，agathobacter，dialister，roseburia，parabacteroides，alistipes，lachnospira，paraprevotella，butyricicoccus，barnesiella，parasutterella，sutterella，lachnoclostridium，fusobacterium，collinsella，bifidobacterium，akkermansia,flavonifractor,lactobacillus,streptococcus，phascolarctobacterium在免疫介导肾病综合征病人肠道内相对丰度显著改变，参与了免疫介导肾病综合征的发生和疾病进展。

6、所述肠道菌faecalibacterium，agathobacter，dialister，roseburia，parabacteroides，alistipes，lachnospira，paraprevotella，butyricicoccus，barnesiella，sutterella，bacteroides的降低，可以显著增加免疫介导肾病综合征的发病率。

7、所述肠道菌collinsella与舒张压(dbp)成负相关，collinsella与bifidobacterium与收缩压(sbp)成负相关，提示这两种肠道菌的减少有可能导致免疫介导肾病综合征病人的血压升高。

8、所述肠道菌fusobacterium的相对丰度与低密度脂蛋白胆固醇成负相关，而肠道菌parabacteroides，akkermansia，flavonifractor,bacteroides,alistipes,roseburia,lactobacillus和streptococcus同高密度脂蛋白胆固醇成正相关，上述肠道菌在肠道内的降低同免疫介导肾病综合征病人的脂代谢异常相关。

9、肠道菌属parabacteroides与akkermansia在肠道内的相对丰度同肾脏组织活检中igg在肾小球上的沉积成负相关；phascolarctobacterium同病人外周血中iga的浓度呈负相关；上述肠道菌在肠道内的降低，与免疫介导肾病综合征患者免疫状态相关，即这些菌的降低有可能导致机体免疫过度激活。

10、肠道菌属乳酸菌lactobacillus在肾病综合征患者肠道内的降低，相对丰度同外周血中白细胞与中性粒细胞的数量成负相关，提示肠道乳酸菌与免疫介导肾病综合征患者基础免疫状态显著相关，肠道内乳酸菌相对丰度的降低可能会升高病人外周血中中性粒细胞和白细胞的数量。

11、通过将免疫介导肾病综合征病人粪菌移植入无菌小鼠，可以诱导小鼠肾病综合征的发生，加重肾脏损伤和肾脏炎症状态；所述的人粪菌包括如下21种菌属：bacteroides，faecalibacterium，agathobacter，dialister，roseburia，parabacteroides，alistipes，lachnospira，paraprevotella，butyricicoccus，barnesiella，parasutterella，sutterella，lachnoclostridium，fusobacterium，collinsella，bifidobacterium，akkermansia，flavonifractor,lactobacillus,streptococcus，phascolarctobacterium.

12、通过尾静脉注射阿霉素诱导形成大鼠肾病综合征模型，口服灌胃乳酸杆菌、双歧杆菌和阿克曼氏菌(akk菌)显著改善了阿霉素诱导的肾病综合征的尿蛋白。

13、所述生物制剂包括活菌制剂、灭活菌制剂、活菌培养物提取物制剂。

14、所述的肾病综合征包括免疫导致的肾病综合征、肾毒性药物导致的肾病综合征、iga肾炎肾病综合征。

15、所述免疫介导肾病综合征是指临床诊断为免疫介导肾病综合征，，患者肾脏病理检测出现igg或iga或补体c3免疫复合物在肾小球中沉积；临床出现大量蛋白尿、低蛋白血症、水肿、高脂血症为其临床特点的一组症候群，所述的各类自身免疫性疾病导致的肾病综合征。

16、发明详述：

17、第一方面，本发明提供了一种与免疫介导肾病综合征发病相关的菌群，包括以下12种肠道微生物，相比于正常人群，这些菌属在免疫介导肾病综合征病人的粪便与肠道中均显著降低：faecalibacterium，agathobacter，dialister，roseburia，parabacteroides，alistipes，lachnospira，paraprevotella，butyricicoccus，barnesiella，sutterella，bacteroides。本发明中，所述免疫介导肾病综合征是指临床经病理和生化指标诊断为免疫介导肾病综合征的患者。

18、第二方面，本发明提供了与肾功能降低显著相关的肠道菌群，包括lachnoclostridium与fusobacterium。本发明中，所述肾功能降低是指血中尿素氮、血肌酐，尿中白蛋白等显著增加。

19、第三方面，本发明提供了与免疫介导肾病综合征病人血压相关的肠道菌群，包括collinsella与bifidobacterium。其中所述血压包括临床常用指标收缩压(sbp)与舒张压(dbp)。

20、第四方面，本发明提供了与免疫介导肾病综合征病人血脂异常相关的肠道菌群，包括parabacteroides，akkermansia，flavonifractor,bacteroides,alistipes，roseburia,lactobacillus,and streptococcus。本发明中所指血脂异常是指病人外周血中甘油三酯与低密度脂蛋白胆固醇升高，高密度脂蛋白降低的临床指征。

21、第五方面，本发明提供了与免疫介导肾病综合征患者免疫过度激活相关的肠道菌群，包括parabacteroides，lactobacillus与akkermansia，本发明中的免疫过度激活是指肾脏组织活检证实igg在肾小球上沉积显著增加，病人外周血中iga的含量、中性粒细胞数量、白细胞总数上升。

22、第六方面，本发明提供所述与免疫介导肾病综合征发病与进展相关的肠道菌群，所述与肾功能降低相关肠道菌群、所述与血压异常增高相关肠道菌群、所述与血脂异常相关肠道菌群、所述与免疫系统过度激活相关肠道菌群的以下任一应用：

23、1)用于免疫介导肾病综合征诊断及预后的生物标志物；

24、2)用于评价免疫介导肾病综合征患者肾功能、血脂异常、免疫过度激活、血压异常预测及预后评估；

25、3)用于制备预防与预测免疫介导肾病综合征发生与进展的试剂、试剂盒或系统；

26、4)

27、第七方面，本发明提供所述与免疫介导肾病综合征发病与进展相关的肠道菌群，所述与肾功能降低相关肠道菌群、所述与血压异常增高相关肠道菌群、所述与血脂异常相关肠道菌群、所述与免疫系统过度激活相关肠道菌群用于预防或治疗免疫介导肾病综合征的生物制剂重点应用；

28、优选地，所述生物制剂包括但不限于活菌制剂、灭活菌制剂、活菌培养物提取物制剂等。

29、第八方面，本发明提供用于检测所述与免疫介导肾病综合征发病与进展相关的肠道菌群，所述与肾功能降低相关肠道菌群、所述与血压异常增高相关肠道菌群、所述与血脂异常相关肠道菌群、所述与免疫系统过度激活相关肠道菌群的引物(如16srdna检测引物)和/或探针。

30、本发明的有益效果是：

31、1)本发明首次发现与免疫介导肾病综合征发病与进展密切相关的肠道菌群，这种作用是与菌群参与了肠道粘膜保护与尿毒素物质代谢相关；

32、2)本发明首次发现了与免疫介导肾病综合征病人血脂异常、血压异常、免疫过度激活、肾功能下降相关的特异肠道菌群，并且粪菌移植无菌小鼠试验证实了临床上发现的这些预测结果。

33、3)本发明提供了一种通过肠道菌群标志物进行免疫介导肾病综合征病人发现与预后判断的生物标志物。样本采集便捷，检测快速，不会造成机体损伤，为临床判断病情进展提供了依据。

34、4)本发明提供了一种可以通过增加特定菌群的肠道内供给，以达到预防和治疗免疫介导肾病综合征的生物学方法。