小檗碱的新用途的制作方法

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及小檗碱的新用途。


背景技术：

2.三氧化二砷(as2o3)是中药砒霜的有效成分，最早由张亭栋教授明确其对急性早幼粒细胞白血病(apl)有完全缓解作用(陈士奎.我国开创的中西医结合科研及其启示(九)—张亭栋教授等与中药砒霜治疗急性早幼粒细胞白血病的中西医结合研究[j].中国中西医结合杂志,2017,37(11):1292-1296.)，但在治疗过程中发现as2o3具有肝、肾毒性作用，从而限制了as2o3的临床应用。
[0003]
目前，治疗as2o3所致肾毒性与肝毒性的药物主要分为抗氧化类药物和抑制细胞凋亡类药物。as2o3治疗apl效果良好，迫切需要寻找治疗as2o3所致肾毒性与肝毒性的药物，为as2o3提供更大的用药窗口。
[0004]
小檗碱(berberine)，亦称黄连素，是一类在小檗科植物中大量存在的异喹啉类生物碱化合物，该化合物的结构如下式所示：
[0005][0006]
已有的研究表明，小檗碱具有多种药理作用，包括抗炎、抗肿瘤、心脏保护以及免疫抑制等。公布号为cn 107823205 a的发明专利，公开了小檗碱可以直接靶向bcr-abl蛋白，降解ph+耐药细胞株和不耐药细胞株中bcr-abl蛋白。进一步研究bcr-abl蛋白降解机制还发现小檗碱可以靶向结合bc r-abl蛋白，并通过自噬途径降解bcr-abl蛋白。并且在小动物水平，小檗碱也可以抑制t315i肿瘤生长，为传统的中药小檗碱找到了新的靶点，也为ph+all治疗找到了一种可能的治疗方案。但截止目前，尚未见有小檗碱治疗三氧化二砷所致肾毒性和/或肝毒性的相关报道。


技术实现要素：

[0007]
本发明要解决的技术问题是提供小檗碱在制药中的新用途。
[0008]
本发明的技术方案为：小檗碱在制备治疗三氧化二砷所致毒性药物中的应用。
[0009]
进一步的，本发明的技术方案是小檗碱在制备治疗三氧化二砷所致肾毒性和/或肝毒性药物中的应用。
[0010]
在一个具体的实验例中，所述三氧化二砷所致毒性是在三氧化二砷用量小于或等于40mg
·
kg-1
所致的毒性。
[0011]
本发明还提供一种治疗三氧化二砷所致毒性的药物组合物，含有治疗上有效剂量
的小檗碱。所述药物的剂型为药学上可接受的剂型，如片剂、针剂、颗粒剂、丸剂或胶囊剂等现有常规剂型。
[0012]
申请人的实验结果表明，小檗碱作为活性成分(唯一或不唯一)，其低、中、高剂量组均能对三氧化二砷所致毒性产生保护作用(结果具有显著性)，因此，小檗碱具有显著降低三氧化二砷所致毒性的作用，可用于制备治疗三氧化二砷所致毒性的药物。
附图说明
[0013]
图1为肾组织he染色切片观察结果图；其中，(a)为空白组，(b)为模型组，(c)为阳药组，(d)为小檗碱低剂量组，(e)为小檗碱中剂量组，(f)为小檗碱高剂量组。
[0014]
图2为肝组织he染色切片观察结果图；其中，(a)为空白组，(b)为模型组，(c)为阳药组，(d)为小檗碱低剂量组，(e)为小檗碱中剂量组，(f)为小檗碱高剂量组。
具体实施方式
[0015]
下面结合实验及附图进一步说明小檗碱对三氧化二砷所致毒性产生的保护作用。
[0016]
1实验材料
[0017]
1.1药物
[0018]
小檗碱(shanghai macklin biochemical co.,ltd.，批号c10682786)；2，3-二巯基丙磺酸钠(shanghai macklin biochemical co.,ltd.，批号c12504631)；信石(江西中医药大学标本馆)；
[0019]
1.2动物
[0020]
清洁级雄性sd大鼠48只，体质量(180
±
20)g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物许可证号scxk(湘)2019-0004，饲养环境20～26℃，湿度50％～60％，喂以大鼠标准饲料，自由饮水。
[0021]
1.3试剂
[0022]
4％多聚甲醛通用型组织固定液(beijing labgic technology co.,ltd.)；羧甲基纤维素钠(国家集团化学试剂有限公司，批号f20100126)；生理盐水(江西科伦药业有限公司，批号c19051503)；超氧化物歧化酶(sod)、过氧化氢酶(cat)、内生肌酐清除率(ccr)、丙二醛(mda)、谷草转氨酶(ast)、谷丙转氨酶(alt)、尿素氮(bun)、肌酐(cr)试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20211122)。
[0023]
2实验方法
[0024]
2.1.1动物分组与剂量
[0025]
sd大鼠48只，随机分为6组，每组8只，分别为空白组(10ml
·
kg-1 0.5％羧甲基纤维素钠溶液)，模型组(40mg
·
kg-1
as2o3)，阳药组(25mg
·
kg-1 2,3-二巯基丙磺酸钠)，小檗碱低、中、高剂量(50mg
·
kg-1
、100mg
·
kg-1
、200mg
·
kg-1
)，一天一次，连续给药10天。给药前称量体重。
[0026]
2.1.2一般体征观察
[0027]
自给药第一天起直至给药结束，每天观察大鼠状态，每天同一时间给大鼠称重并记录。
[0028]
2.1.3大鼠生物样品采集
[0029]
第10天给药后将大鼠置于代谢笼，禁食不禁水，收集24h内尿液，记录尿量，存于-20℃冰箱冷冻保存；腹主动脉取血，收集的血液静置2h析出血清后，于4℃以3000r
·
min-1
离心15min，取上清，置于-20℃冰箱冻存；取肝、肾，去除结缔组织，左肾和肝左叶放入组织固定液，以供病理组织学检查；称重右肾重量，右肾和肝脏右叶部分迅速置于液氮中，后冻存于-80℃冰箱中，供测试试剂盒。
[0030]
各组实验结束后大鼠体重与第一天给药前的体重差值即为体重的变化值。肾脏系数(％)＝肾脏重量(g)/体重(g)
×
100％。
[0031]
剪取部分右肾和肝脏右叶，置于离心管中称重，记录重量，按重量(g):体积(ml)＝1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，匀浆，取上清，按试剂盒操作说明书，检测肝、肾组织中sod活性及mda、cat含量。按试剂盒操作说明书，检测血肌酐(scr)、尿肌酐(cr)、尿素氮(bun)、谷草转氨酶(ast)、谷丙转氨酶(alt)。
[0032]
2.1.4病理形态变化
[0033]
取置于组织固定液内固定的肝脏及肾脏组织标本，选取厚度均匀部分，制作切片，光学显微镜下镜检拍照，观察肝脏及肾脏病理形态学变化。
[0034]
2.1.5统计学分析
[0035]
采用spss 21.0软件，数据以表示，组间比较采用单因素方差分析(one-way anova)，p＜0.05有统计学意义。
[0036]
3实验结果
[0037]
3.1大鼠一般体征观察
[0038]
模型组大鼠体重增长最少，相比于模型组，给药组体重增加较多(**p＜0.01)，且低剂量组增加最少，高剂量组增加最多，结果如表1所示，表1中bl表示小檗碱低剂量组，bm表示小檗碱中剂量组，bh表示小檗碱高剂量组(以下各表中出现的bl、bm和bh均表示相同的意思)。
[0039]
表1大鼠体重变化
[0040][0041][0042]
##
与空白组相比p＜0.01，
*
与模型组相比p＜0.05，
**
与模型组相比p＜0.01
[0043]
3.2生化指标结果
[0044]
肾，测定尿液中尿肌酐(cr)，血清中尿素氮、血肌酐，组织中cat、sod、mda活性和总蛋白含量。结果显示，模型组的mda、bun、scr高于空白组、阳药组和小檗碱组，sod、cat、肾脏系数、内生肌酐清除率低于空白组、阳药组和小檗碱组，提示小檗碱对as2o3所致肾毒性有保护作用，结果如表2和表3所示。
[0045]
表2肾脏中ccr、sod、cat、scr、mda、bun的变化
[0046][0047]
##
与空白组相比p＜0.01，
*
与模型组相比p＜0.05，
**
与模型组相比p＜0.01
[0048]
表3尿素氮浓度和肾脏系数的变化
[0049][0050]
##
与空白组相比p＜0.01，
*
与模型组相比p＜0.05，
**
与模型组相比p＜0.01
[0051]
肝，测定血清中ast、alt，组织中cat、sod、mda活性和总蛋白含量。结果显示，模型组的mda、alt、ast高于空白组、阳药组和小檗碱组，sod、cat低于空白组、阳药组和小檗碱组，提示小檗碱对as2o3所致肝毒性有保护作用，结果如表4所示。
[0052]
表4肝脏中ast、mda、sod、cat和alt的变化
[0053][0054][0055]
##
与空白组相比p＜0.01，
*
与模型组相比p＜0.05，
**
与模型组相比p＜0.01
[0056]
3.3组织病理学结果
[0057]
图1为肾组织he染色切片观察结果图；其中，(a)为空白组，(b)为模型组，(c)为阳药组，(d)为小檗碱低剂量组，(e)为小檗碱中剂量组，(f)为小檗碱高剂量组。
[0058]
空白组肾组织整体结构基本正常，肾小球结构清晰未见明显萎缩坏死等变性，图1(a)中，箭头1所指为肾小球，组织肾小管上皮细胞未见明显水肿脱落坏死，肾小管未见明显扩张管型等变性，箭头2所指为肾小管，组织未见明显炎症细胞浸润。模型组肾组织整体结构异常，组织可见少量肾小球明显分叶(见图1(b)箭头3)，组织可见部分肾小管上皮细胞疏松水肿脱落(见图1(b)箭头4)，组织肾小管刷状缘脱落(见图1(b)箭头5)，组织可见明显炎
症细胞浸润(见图1(b)箭头6)。如图1(c)所示，阳药组肾组织整体结构基本正常，肾小球结构清晰未见明显萎缩坏死等变性，肾小球分叶不明显(见图1(c)箭头3)，组织肾小管上皮细胞未见明显水肿脱落坏死，肾小管未见明显扩张管型等变性，组织未见明显炎症细胞浸润。如图1(d)所示，小檗碱低剂量组肾组织整体结构相比模型组有所改善，肾小球分叶(见图1(d)箭头3)，组织肾小管上皮细胞水肿脱落坏死不明显，肾小管未见明显扩张管型等变性，组织未见明显炎症细胞浸润(见图1(d)箭头6)。如图1(e)所示，小檗碱中剂量组肾组织整体结构基本正常，肾小球结构清晰未见明显萎缩坏死等变性，肾小球分叶改善(见图1(e)箭头3)，组织肾小管上皮细胞未见明显水肿脱落坏死，肾小管未见明显扩张管型等变性，组织未见明显炎症细胞浸润(见图1(e)箭头6)。如图1(f)所示，小檗碱高剂量组肾组织整体结构基本正常，肾小球结构清晰未见明显萎缩坏死等变性，肾小球分叶不明显(见图1(f)箭头3)，组织肾小管上皮细胞未见明显水肿脱落坏死，肾小管未见明显扩张管型等变性，组织未见明显炎症细胞浸润。
[0059]
图2为肝组织he染色切片观察结果图；其中，(a)为空白组，(b)为模型组，(c)为阳药组，(d)为小檗碱低剂量组，(e)为小檗碱中剂量组，(f)为小檗碱高剂量组。
[0060]
空白组肝组织整体结构基本正常，肝细胞结构饱满，中央静脉清晰可见，肝窦沿着中央静脉呈放射状排列(见图2(a)箭头7)，箭头8所指为肝窦巨噬细胞，组织未见明显炎症细胞浸润。模型组肝组织整体结构轻度异常，组织肝细胞结构饱满，未见肝细胞明显疏松水肿，组织可见少量肝细胞轻微脂肪变性(见图2(b)中箭头9)，组织肝窦可见明显充血扩张(见图2(b)中箭头10)，组织可见少量炎症细胞浸润(见图2(b)中箭头11)。如图2(c)所示，阳药组肝组织整体结构基本正常，肝细胞结构饱满，中央静脉清晰可见，肝窦沿着中央静脉呈放射状排列(见图2(c)中箭头7)，组织未见明显炎症细胞浸润。如图2(d)所示，小檗碱低剂量组肝组织整体结构基本正常，肝细胞结构饱满，未见肝细胞明显疏松水肿，组织未见明显炎症细胞浸润(见图2(d)中箭头11)。如图2(e)所示，小檗碱中剂量组肝组织整体结构基本正常，肝细胞结构饱满，未见肝细胞明显疏松水肿，肝窦沿着中央静脉呈放射状排列(见图2(e)中箭头7),脂肪变性改善(见图2(e)中箭头9)，组织未见明显炎症细胞浸润。如图2(f)所示，小檗碱高剂量组肝组织整体结构基本正常，组织肝细胞结构饱满，未见肝细胞明显疏松水肿，组织肝细胞脂肪变性改善，组织肝窦未见明显充血扩张(见图2(f)中箭头7)，组织未见明显炎症细胞浸润。
[0061]
上述实验结果显示，小檗碱作为活性成分，其低、中、高剂量组对三氧化二砷所致的肾和/或肝毒性均具有显著的保护作用，可用于制备治疗三氧化二砷所致毒性的药物。