一种含海洋植物提取物的组合物及其应用

1.本发明属于抑菌领域，尤其涉及一种含海洋植物提取物的组合物及其应用。


背景技术：

2.我国海洋植物资源十分丰富，海洋中生存着多种多样的动植物和微生物，由于海洋高压、高盐等特殊环境，造成了海洋生物拥有与陆生生物不同的代谢途径，很多海洋植物所含成分都具有特异的化学结构及广泛的药理活性，如卤代萜类、多酚类、神经毒素、多糖和多肽类等，其主要药理作用包括抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、治疗心血管疾病以及免疫调节功能等，这些物质大多数具有良好的抗菌、抗病毒、抗炎抗氧化、抗肿瘤、治疗心血管疾病以及免疫调节功能等功效，临床开发应用前景广阔。
3.海洋植物具有丰富的营养价值，海洋植物具有如下营养特点：1.粗蛋白含量较高，并含有丰富的多种维生素和矿物质，有利于畜禽的繁育和生长发育。2.含有抗菌抑菌的活性物质。这些活性物质对霉菌、金色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌等都有抑制作用，同时又能提高畜禽的免疫力和抗病力。3.含有生物活性激素和促生长因子。能调节饲料中各种养分的平衡，促进营养物质的消化吸收，产生抗应激作用，可提高畜禽的生长速度和抗病能力。4.含有丰富的色素。海洋植物中含有藻黄素、胡萝卜素等物质；用于畜禽饲料中，可明显改进畜禽产品的品质，使畜禽的皮肤、肌肉颜色鲜艳。5.含碘量高、钙磷比例适中。用它来配制畜禽饲料，可使肉蛋奶的产品营养丰富，味道鲜美；蛋壳的厚度增加，蛋黄的颜色变成深黄色；特别是蛋黄中碘的含量较原来高出十几倍；脂肪结构也发生了变化，使胆固醇的含量降低。6.含有苯酚类化合物和晾胶、褐藻酸等物质。因含苯酚类化合物，有较强的抑菌防霉作用，是天然的饲料防霉剂，因含琼胶、褐藻酸和吸水性物质，是天然的饲料粘合剂和防潮剂，可吸收饲料中的水分。7.降血脂抗凝血作用褐藻淀粉经碘化而得的硫酸脂，可以代替肝素具有降血脂抗凝血，改善微循环系统的作用。
4.羊栖菜是一种海洋植物，属于藻类，主要分布在我国浙江、福建等地。羊栖菜提取物含丰富的多糖、食物纤维素、b族维生素、褐藻酸及人体必须的矿物质和微量元素，具有良好生物活性，但抑菌和抗氧化性能欠佳。因此，提高羊栖菜提取物的抗菌性能和抗氧化性能具有重要意义。


技术实现要素：

5.针对上述现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种含海洋植物提取物的组合物，所述含海洋植物提取物的组合物包括如下质量含量：羊栖菜提取物10-30％、积雪草提取物5-15％、茵陈蒿提取物5-15％、黑大豆提取物10-30％。通过复配特定比例的羊栖菜提取物、积雪草提取物、茵陈蒿提取物和黑大豆提取物，各组分间具有协同增效作用，能够显著提高抗菌性能和抗氧化性能，达到快速和长效抑菌功效。该含海洋植物提取物的组合物可应用于化妆品中，具有用量低、安全无刺激等优点。
6.本发明的目的在于提供一种含海洋植物提取物的组合物，所述含海洋植物提取物
的组合物包括如下质量含量：羊栖菜提取物10-30％、积雪草提取物5-15％、茵陈蒿提取物5-15％、黑大豆提取物10-30％。
7.羊栖菜是一种海洋植物，属于藻类，别名鹿角尖、海菜芽、羊奶子、海大麦等。圆子纲，马尾藻科。羊栖菜营养成分丰富。鲜羊栖菜中含水量约为83.16％，在干基中成分主要包括蛋白质、碳水化合物、灰分以及纤维等，分别占15％、46％、30％、7％，是一种脂肪和热量较低的天然食品，具有较高营养价值，既可以做蔬菜，也可以入药。羊栖菜提取物含丰富的多糖、食物纤维素、b族维生素、褐藻酸及人体必须的矿物质和微量元素，能促进细胞生长发育，具有抑菌和抗氧化作用。
8.积雪草，多年生草本，茎匍匐，细长，节上生根。积雪草提取物含有积雪草酸和羟基积雪草酸，对金黄色葡萄球菌具有抑制作用，同时还具有明显的抗氧化作用。
9.茵陈蒿是菊科，蒿属半灌木状草本植物，植株有浓烈的香气。茵陈蒿提取物含挥发油成分、维生素类、矿物质类成分和萜类化合物，具有抗炎抗菌和抗氧化作用，可抑制皮肤细胞内的各种自由基活性，减轻皮肤老化程度恢复皮肤活力和抗炎抗菌的皮肤舒缓作用。
10.黑大豆为豆科植物的成熟种子，是传统中药淡豆豉的主要原料。黑大豆提取物含有大豆异黄酮、花色苷和单宁等生物活性成分，具有缓解更年期综合征、抗氧化、保护心血管、抗癌、抗菌和抗病毒等多种生物活性。
11.发明人在实验过程中发现，通过复配特定比例的羊栖菜提取物、积雪草提取物、茵陈蒿提取物和黑大豆提取物制得的组合物，各组分间具有协同增效抗菌和抗氧化作用，可能的原因是羊栖菜提取物、积雪草提取物、茵陈蒿提取物和黑大豆提取物中均含有羟基化合物，羟基化合物间存在氢键作用，各活性组分间相互协调、相互促进，具有良好的协同增效作用。
12.优选地，所述含海洋植物提取物的组合物包括如下质量含量：羊栖菜提取物20％、积雪草提取物10％、茵陈蒿提取物10％、黑大豆提取物20％。
13.优选地，所述羊栖菜提取物的提取工艺如下：
14.将干燥并粉碎的羊栖菜，用溶剂回流提取，离心，上清液浓缩，得羊栖菜提取物。
15.优选地，所述溶剂选自乙醇、甲醇中的一种或两种。
16.优选地，所述积雪草提取物的提取工艺如下：
17.将干燥的积雪草和去离子水混合，浸泡、加热煮沸，分离出药液，向药渣中加入去离子水，加热煮沸，将两次煮沸后的药液合并，过滤、离心，上清液浓缩，得积雪草提取物。
18.优选地，所述茵陈蒿提取物的提取工艺如下：
19.将干燥并过筛后的茵陈蒿粉末与萃取液混合，浸提、超声萃取、脱色、过滤、浓缩，得茵陈蒿提取物。
20.优选地，所述萃取液选自体积比为1:9的水与乙醇混合溶剂；所述浸提的温度为60-70℃。
21.优选地，所述黑大豆提取物的提取工艺如下：
22.将干燥并过筛后的黑大豆粉末与萃取液混合，浸提、调节ph值，超声萃取、过滤，脱色、过滤、滤液浓缩，得茵陈蒿提取物。
23.优选地，所述萃取液选自体积比为2:8的水与丁二醇混合溶剂；所述浸提的温度为40-50℃；所述ph值为4.0-5.0。
24.优选地，所述含海洋植物提取物的组合物包括质量含量为10-70％的溶剂。
25.优选地，所述溶剂选自乙醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、1,2-戊二醇、1,5-戊二醇、异戊二醇、1,2-己二醇、1,6-己二醇、水、甘油中的一种或多种。
26.本发明另一目的在于提供一种含海洋植物提取物的组合物的制备方法，包括如下步骤：
27.将羊栖菜提取物10-30％、积雪草提取物5-15％、茵陈蒿提取物5-15％、黑大豆提取物10-30％和溶剂10-70％混合搅拌，升温至45-55℃，降温分装即可。
28.本发明另一目的在于提供上述含海洋植物提取物的组合物在制备化妆品中的应用，所述化妆品含有上述含海洋植物提取物的组合物。
29.优选地，所述化妆品选自面膜液、乳液、膏霜、精华液、原液、洁面乳、粉底液、粉底霜、遮瑕霜中的任意一种。
30.优选地，所述含海洋植物提取物的组合物在化妆品中的质量百分比为0.1-0.5％。
31.优选地，所述含海洋植物提取物的组合物在化妆品中的质量百分比为0.5％。
32.相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
33.(1)本发明提供的含海洋植物提取物的组合物的各组分均来源于天然植物，安全无刺激，各活性组分间相互协调、相互促进，具有良好的协同增效作用。
34.(2)本发明通过复配特定比例的羊栖菜提取物、积雪草提取物、茵陈蒿提取物和黑大豆提取物，能够显著提高组合物的抗菌性能和抗氧化性能，达到快速和长效抑菌功效。
35.(3)本发明所制备得到的含海洋植物提取物的组合物在较低用量下可达到高效抑菌和抗氧化效果。
具体实施方式
36.为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
37.实施例1：羊栖菜的提取。
38.将干燥的羊栖菜100kg粉碎，过50目筛，用500ml的95％乙醇在78℃下浸提2-3h，离心10min，过滤除去不溶物，滤液加入活性炭脱色，过滤除去活性炭、离心，上清液浓缩，得羊栖菜提取物。
39.实施例2：积雪草的提取。
40.将干燥的积雪草100kg粉碎，过100目筛，加入500ml去离子水，浸泡10h、加热煮沸，分离出药液，向药渣中加入500ml去离子水，加热煮沸，将两次煮沸后的药液合并，过滤除去不溶物，滤液加入活性炭脱色，过滤除去活性炭、离心，上清液浓缩，得积雪草提取物。
41.实施例3：茵陈蒿的提取。
42.将干燥的茵陈蒿100kg粉碎，并过50目筛，加入体积比为1:9的水与乙醇混合溶剂1000ml，60-70℃下浸提3-5小时、超声萃取、滤液加入活性炭脱色、过滤除去活性炭、浓缩滤液，得茵陈蒿提取物。
43.实施例4：黑大豆的提取。
44.将干燥黑大豆100kg粉碎，并过50目筛，加入体积比为2:8的水与丁二醇混合溶剂1000ml，40-50℃浸提3-4小时、调节ph值至4.0-5.0，超声萃取、过滤，滤液加入活性炭脱色、过滤、滤液浓缩，得黑大豆提取物。
45.实施例5：含海洋植物提取物的组合物的制备。
46.将羊栖菜提取物20g、积雪草提取物10g、茵陈蒿提取物10g、黑大豆提取物20g和1,3-丁二醇40g混合搅拌，升温至50℃，搅拌溶解，降至室温，过滤除去不溶性杂质，得含海洋植物提取物的组合物。
47.实施例6：含海洋植物提取物的组合物的制备。
48.将羊栖菜提取物10g、积雪草提取物15g、茵陈蒿提取物5g、黑大豆提取物30g和1,3-丁二醇40g混合搅拌，升温至50℃，搅拌溶解，降至室温，过滤除去不溶性杂质，得含海洋植物提取物的组合物。
49.实施例7：含海洋植物提取物的组合物的制备。
50.将羊栖菜提取物30g、积雪草提取物5g、茵陈蒿提取物15g、黑大豆提取物10g和1,3-丁二醇40g混合搅拌，升温至50℃，搅拌溶解，降至室温，过滤除去不溶性杂质，得含海洋植物提取物的组合物。
51.对比例1：单组分组合物的制备。
52.将羊栖菜提取物60g和1,3-丁二醇40g混合搅拌，升温至50℃，搅拌溶解，降至室温，过滤除去不溶性杂质，得单组分组合物。
53.对比例2：单组分组合物的制备。
54.将积雪草提取物60g和1,3-丁二醇40g混合搅拌，升温至50℃，搅拌溶解，降至室温，过滤除去不溶性杂质，得单组分组合物。
55.对比例3：单组分组合物的制备。
56.将茵陈蒿提取物60g和1,3-丁二醇40g混合搅拌，升温至50℃，搅拌溶解，降至室温，过滤除去不溶性杂质，得单组分组合物。
57.对比例4：单组分组合物的制备。
58.将黑大豆提取物60g和1,3-丁二醇40g混合搅拌，升温至50℃，搅拌溶解，降至室温，过滤除去不溶性杂质，得单组分组合物。
59.最低抑菌浓度(mic)和最小杀菌浓度(mbc)的测定：
60.液体培养基的制备：称取蛋白胨10g，葡萄糖10g，氯化钠5g和牛肉膏5g，加水煮沸使各成分充分溶解，定容至1000ml，冷却至常温，调节ph至中性，将培养基置于0.1mpa、120℃的条件下，灭菌30min，冷却至常温，置于4℃冰箱中保存备用。
61.(2)菌悬液的制备：
62.菌种：金黄色葡萄球菌atcc6538，来源为广东省微生物菌种保藏中心。
63.菌悬液的制备：取对数生长期的金黄色葡萄球菌置于液体培养基接种，37℃下培养12h，用无菌液体培养基将菌液调配成0.5麦氏浊度的菌悬液，进行1:1000比例稀释至含菌量约为105cfu/ml。
64.(3)最小抑菌浓度(mic)和最低杀菌浓度(mbc)的测定。
65.采用二倍稀释法探寻合适的抑菌和杀菌浓度范围：将处于对数生长期的金黄色葡
萄球菌接种到液体培养基中(菌悬液浓度为1
×
105cfu/ml)，分别加入等量的不同浓度的实施例5-7、对比例1-4的组合物，使培养基中实施例5-7、对比例1-4的组合物的浓度分别为：160、80、40、20、10、5、2.5mg/ml，至于37℃、120r/min下震荡培养24h，观察生长情况，记录试管中无细菌生长的最低浓度，以确定合适抑菌浓度范围。
66.采用梯度法确定最小抑菌浓度和最低杀菌浓度：将处于对数生长期的金黄色葡萄球菌接种到液体培养基中(菌悬液浓度为1
×
105cfu/ml)，分别加入等量的不同浓度的实施例5-7、对比例1-4的组合物，使培养基中实施例5-7、对比例1-4的组合物的浓度为：对二倍稀释法确定浓度按0.5mg/ml的浓度梯度进行测试，
67.同时分别以无菌水和1,3-丁二醇作为空白对照组，于37℃、120r/min震荡培养24h后观察，液体培养基颜色澄清的最小稀释浓度为最小杀菌浓度(mic)。再将菌液涂布平板，观察菌体的生长情况，菌体不生长的最小稀释浓度即为mbc值。
68.表1.实施例5-7和对比例1-4的组合物的mic和mbc测定结果。
[0069][0070][0071]
由表1可知，羊栖菜提取物、积雪草提取物、茵陈蒿提取物和黑大豆提取物复配制得的含海洋植物提取物的组合物各组分间有协同抑菌作用。
[0072]
dpph自由基清除率的测定：
[0073]
称取40mg dpph，加入1000ml甲醇溶解，得到0.04mg/ml的dpph甲醇溶液，将实施例5-7和对比例1-4分别配制浓度为0.5mg/ml的样品溶液。取2ml各样品溶液中加入2ml dpph甲醇溶液，避光反应30min，在517nm处测定吸光值。以蒸馏水代替样品为空白，以甲醇溶液代替dpph甲醇溶液做样品空白，以维生素c做阳性对照。
[0074]
样品对dpph自由基的清除率用以下公式计算：
[0075]
dpph自由基清除率＝[1-(a1-a2)/a0]
×
100％；
[0076]
空白a0：2ml蒸馏水+2ml dpph溶液的吸光值；
[0077]
样品a1：2ml样品溶液+2ml dpph溶液的吸光值；
[0078]
样品空白a2：2ml样品溶液+2ml甲醇溶液的吸光值。
[0079]
表2.实施例5-7和对比例1-4的组合物对dpph自由基清除率的测试结果。
[0080]
样品dpph自由基清除率(％)
实施例586.0实施例683.6实施例782.4对比例164.2对比例250.6对比例367.8对比例463.7阳性对照组40.3
[0081]
由表2可知，羊栖菜提取物、积雪草提取物、茵陈蒿提取物与黑大豆提取物复配制得的含海洋植物提取物的组合物的抗氧化效果均比单组分的效果好，由此说明，羊栖菜提取物、积雪草提取物、茵陈蒿提取物与黑大豆提取物复配制得的含海洋植物提取物的组合物存在协同抗氧化作用。
[0082]
精华液的配方组成及制备方法：
[0083]
表3.精华液的配方组成及用量(kg)。
[0084][0085]
将丙二醇、甘油、1,2-己二醇、尿囊素、乙基己基甘油和水混合，搅拌至溶解，分别加入实施例5-7、对比例1-4制得的组合物，然后加入卡波姆和黄原胶，搅拌至溶解，可得精华液。
[0086]
防腐挑战实验：
[0087]
实验菌种：细菌为金黄色葡萄球菌atcc6538，真菌为黑曲霉atcc16404，均来源于广东省微生物菌种保藏中心。
[0088]
试验方法：参照ctfa挑战实验要求，在实施例8-10、对比例5-8制得的精华液5ml中
分别接种金黄色葡萄球菌1.0
×
106cfu/g(cfu/ml)和黑曲霉1.0
×
104cfu/g(cfu/ml)，接种后的样品在特定时间分离检测。
[0089]
试验结果判定：0小时(即接种后立刻取样)、7天，14天，21天和28天结果，要求在第7天时的细菌降低99.9％，真菌降低90％；并且在28天内持续下降，则通过防腐挑战试验。结果如表4所示。
[0090]
表4.实施例8-10和对比例5-8制得的精华液的防腐挑战试验结果。
[0091][0092]
由表4可知，由实施例5-7的含海洋植物提取物的组合物制得的精华液均通过了防腐挑战测试，具有较强的防腐效果；而由对比例1-4的单组分组合物制得的精华液随着时间的推移，细菌和真菌总数均有下降，说明均有一定的防腐效果，但均未通过防腐挑战测试。
[0093]
人体皮肤斑贴实验：
[0094]
实验目的：将含有实施例5-7制得的含海洋植物提取物的组合物的精华液的安全性进行检测。
[0095]
试验方法：年龄构成和性别随机选取志愿者100名，符合2007《化妆品卫生规范》纳入、排除标准；选取上背部脊椎两侧皮肤为受试部位，皮肤分为两部分，一部分为空白对照，一部分分别涂抹实施例8-10制备的精华液；将加有斑试物的斑试器胶带自下向上贴牢；斑贴试验时间为48h；贴敷后48h后，去除斑试器，30min后观察记录试验结果。
[0096]
表5.皮肤不良反应分级标准。
[0097][0098][0099]
表6.皮肤斑贴试验结果。
[0100][0101]
由表6可知，含海洋植物提取物的组合物的精华液对受试者基本为阴性反应，均无严重不良反应，结果判定该含海洋植物提取物的组合物的精华液对人体无不良反应。
[0102]
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制，尽管对照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解，技术人员阅读本技术说明书后依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换，但这些修改或变更均未脱离本发明申请待批权利要求保护范围之内。