一种唾液酸组合物及其在缓解炎症中的应用的制作方法

1.本发明涉及唾液酸功能制品技术领域，尤其涉及一种唾液酸组合物及其在缓解炎症中的应用。


背景技术：

2.唾液酸(sialic acid)是9-碳单糖的衍生物，又称为燕窝酸，是一种天然存在的碳水化合物。唾液酸被认为是神经节苷脂的传递递质，并且是大脑的组成成分之一，其通常以低聚糖，糖脂或者糖蛋白的形式存在。
3.现有研究表明，唾液酸在大脑和神经系统的产生和发育中发挥非常重要的作用，并且对于儿童脑功能的正常发育较为重要。此外，唾液酸广泛应用于生活中的各个领域，例如常被应用于各类食品、化妆品和保健品中。
4.但是，目前对于唾液酸功能的研究尚不充分，其在更广泛范围内的应用仍有待研究。


技术实现要素：

5.为了解决现有技术存在的问题，本发明的目的是提供一种唾液酸组合物及其在缓解炎症中的应用，通过复配唾液酸、海藻糖和精氨酸，显著提高了唾液酸的抗炎能力。
6.第一方面，本发明提供一种唾液酸组合物，包括：唾液酸、海藻糖和精氨酸；所述唾液酸和海藻糖的质量比为1：(8～10)；所述组合物的水溶液ph值为6～8。
7.本发明发现唾液酸具备一定程度的抗炎效果，在这一研究的基础上，探索其更多功能的过程中意外发现在复配唾液酸、海藻糖和精氨酸之后，其抗炎能力显著提升。具体组合方式为使其中唾液酸和海藻糖用量在一定质量比范围内，之后添加精氨酸使其ph值达到5～8，得到该组合物。
8.进一步地，在所述唾液酸组合物中，所述唾液酸的质量百分含量≥9％。
9.进一步地，以重量份计，包括唾液酸5～15份、海藻糖80～100份和精氨酸1～10份。
10.进一步地，以重量份计，包括唾液酸9-11份、海藻糖80～90份和精氨酸5～6.5份。
11.本发明进一步提供所述的唾液酸组合物在缓解炎症中的应用。
12.本发明进一步提供所述的唾液酸组合物在制备用于缓解炎症的药物或具有舒缓功效的化妆品中的应用。
13.第二方面，本发明提供一种抗炎产品，包括所述的唾液酸组合物。
14.进一步地，所述抗炎产品为具有舒缓功效的化妆品，或，具有抗炎功能的药物制剂。作为一个具体的化妆品种类，所述的具有舒缓功效的化妆品包括具有抗炎功能的牙膏。
15.进一步地，还包括：稳定剂、增溶剂、缓冲剂、防腐剂、增稠剂、摩擦剂、保湿剂、矫味剂、缓冲剂或其他赋形剂中的任意一种或多种。
16.进一步地，所述抗炎产品的剂型为片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、水剂、膏剂、霜剂、凝胶剂、吸入剂、喷雾剂、膜剂、混悬剂、锭剂、酏剂、糖浆剂、油包水或水包油乳剂、口
服液或滴丸剂中的一种或多种。
17.本发明具备如下有益效果：
18.本发明研究发现唾液酸本身具备一定的抗炎效果，但是抗炎效果有限，进一步在其基础复配海藻糖和精氨酸，得到的唾液酸组合物在抗炎效果上显著提升，相较于未作处理的炎症细胞模型，pge2的表达水平下降幅度达到35％以上，这在减缓炎症的领域具有重要意义。特别地，本发明在人牙龈成纤维细胞建立炎症反应模型，并且证明组合物在此模型上有显著的抗炎作用，说明本组合物可以更为具体的应用于牙膏、漱口水等化妆品或卫生用品。
附图说明
19.图1为本发明实施例1提供的唾液酸的mtt实验结果示意图。
20.图2为本发明实施例2提供的组合物nanapro的mtt实验结果示意图。
具体实施方式
21.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
22.下述实施例中涉及的试剂，若无特别说明，均可以市售购得。
23.下述实施例中涉及的试验方法，若无特别说明，均可按照本领域常规方法实施。
24.实施例1
25.本实施例基于il-1α刺激人牙龈成纤维细胞建立炎症反应模型，研究唾液酸的抗炎效果，具体如下：
26.1、实验材料
27.本发明所用细胞为人牙龈成纤维细胞，批号210708，可市售购得。以il-1α为促炎因子进行诱导得到炎症反应模型，诱导方法可以参照cn111139219a专利记载的方法，通过检测pge2含量可以有效判断组合物的抗炎效果。
28.2、实验试剂
29.本发明涉及高糖dmem(gibco)、胎牛血清(兰州荣晔)、pbs(博士德)、mtt(sigma)、dmso(sigma)、地塞米松(sigma)、pge2 elisa试剂盒(abcam)等试剂。
30.3、试验仪器
31.本发明涉及co2培养箱(thermo，150i)、超净工作台(苏州安泰，sw-cj-1f)、酶标仪(biotek，epoch)。
32.4、试验方法
33.(1)按照4
×
104个/孔的接种密度接种细胞至24孔板，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。
34.(2)按照如下表所示的方案配置各实验组和对照组的溶液，其中mtt实验(如图1所示)显示样品n-乙酰神经氨酸(燕窝酸、燕窝素、唾液酸)基于牙龈成纤维细胞，在6.25mg/ml浓度范围内未表现出明显的细胞毒性。
35.表1实验组和各对照组的配置方案
[0036][0037]
(3)给药和刺激
[0038]
根据表1的配置方案，在24孔板中细胞铺板率达到40％～50％时，进行分组给药及刺激，每孔给药量为1ml，每组设3个复孔。后在培养箱(37℃、5％co2)中继续培养24h。
[0039]
(4)收集细胞上清液
[0040]
培养24h后，收集细胞培养上清液于ep管中，置于-80℃冰箱冷冻保存。
[0041]
(5)elisa检测
[0042]
根据pge2 elisa试剂盒的操作说明书进行检测。
[0043]
5、结果统计与分析
[0044]
应用graphpad prism作图，结果表示为mean
±
sd。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。p《0.05认为具有显著差异，p《0.01认为具有极显著差异。
[0045]
6、检测结果
[0046]
本发明得到如下表所示的结果：
[0047]
表2实验组和各对照组的pge2检测结果汇总表
[0048][0049]
备注：用t-test方法进行统计分析时，与bc组相比，显著性以#表示，p-value＜0.05表示为#，p-value＜0.01表示为##；与nc组相比，显著性以*表示，p-value＜0.05表示为*，p-value＜0.01表示为**。
[0050]
结果显示与bc组相比，nc组的pge2分泌水平极显著升高(p《0.01)，表明il-1α刺激可以极显著提高pge2的分泌量，说明本次测试il-1α刺激条件有效。
[0051]
与nc组相比，pc组的pge2分泌水平极显著降低(p《0.01)，说明本次测试阳性对照有效。
[0052]
与nc组相比，样品燕窝酸(燕窝酸、燕窝素、唾液酸)-6.25mg/ml能够显著抑制il-1α刺激引起的pge2分泌。
[0053]
实施例2
[0054]
本实施例基于il-1α刺激人牙龈成纤维细胞建立炎症反应模型，同实施例1为同批次实验，研究组合物的抗炎效果，具体如下：
[0055]
1、实验材料
[0056]
本发明所用细胞为人牙龈成纤维细胞，批号210708，可市售购得。以il-1α为促炎因子进行诱导得到炎症反应模型，诱导方法可以参照cn111139219a专利记载的方法，通过检测pge2含量可以有效判断组合物的抗炎效果。
[0057]
2、实验试剂
[0058]
本发明涉及高糖dmem(gibco)、胎牛血清(兰州荣晔)、pbs(博士德)、mtt(sigma)、dmso(sigma)、地塞米松(sigma)、pge2 elisa试剂盒(abcam)等试剂。
[0059]
3、试验仪器
[0060]
本发明涉及co2培养箱(thermo，150i)、超净工作台(苏州安泰，sw-cj-1f)、酶标仪(biotek，epoch)。
[0061]
4、试验方法
[0062]
(1)按照4
×
104个/孔的接种密度接种细胞至24孔板，培养箱(37℃、5％co2)中孵育过夜。
[0063]
(2)按照如下表所示的方案配置各实验组和对照组的溶液，根据mtt检测结果(如图2所示)，认为样品nana pro基于牙龈成纤维细胞，在12.5mg/ml浓度范围内未表现出明显的细胞毒性。
[0064]
表3实验组和各对照组的配置方案
[0065][0066]
nana pro的配置方法如下：
[0067]
实验组1将唾液酸、海藻糖以及精氨酸按照sa：海藻糖：精氨酸比例为：10:84.3：5.7；按比例混匀后粉碎制备。
[0068]
实验组2将精氨酸和海藻糖单独按实验组1的配比称取后混匀后粉碎得到。
[0069]
(3)给药及刺激
[0070]
根据表3所示的配置方案，待24孔板中细胞铺板率达到40％～50％时，进行分组给药及刺激，每孔给药量为1ml，每组设3个复孔。在培养箱(37℃、5％co2)中继续培养24h。
[0071]
4)收集细胞上清液：培养24h后，收集细胞培养上清液于ep管中，置于-80℃冰箱冷冻保存。
[0072]
5)elisa检测：根据pge2 elisa试剂盒的操作说明书进行检测。
[0073]
5、结果统计与分析
[0074]
应用graphpad prism作图，结果表示为mean
±
sd。各组间比较采用t-test统计分
析。统计分析均为双尾。p《0.05认为具有显著差异，p《0.01认为具有极显著差异。
[0075]
6、检测结果
[0076]
本发明得到如下表所示的结果：
[0077]
表4实验组和各对照组的pge2检测结果汇总表
[0078][0079]
备注：用t-test方法进行统计分析时，与bc组相比，显著性以#表示，p-value＜0.05表示为#，p-value＜0.01表示为##；与nc组相比，显著性以*表示，p-value＜0.05表示为*，p-value＜0.01表示为**。
[0080]
结果显示：
[0081]
与bc组相比，nc组的pge2分泌水平极显著升高(p《0.01)，表明il-1α刺激可以极显著提高pge2的分泌量，说明本次测试il-1α刺激条件有效。
[0082]
与nc组相比，pc组的pge2分泌水平极显著降低(p《0.01)，说明本次测试阳性对照有效。
[0083]
与nc组相比，样品nana pro-12.5mg/ml能够显著抑制il-1α刺激引起的pge2分泌。
[0084]
根据mtt检测结果，认为样品nana在6.25mg/ml浓度范围内、海藻糖和精氨酸混合物在12.5mg/ml浓度范围内、nana pro在12.5mg/ml浓度范围内基于牙龈成纤维细胞，均未表现出明显的细胞毒性。
[0085]
综合比较实施例2和实施例1的pge2的检测结果可以看出，唾液酸单独成分确实具备一定的抗炎效果，但是本发明在其基础上复配了海藻糖和精氨酸得到的组合物nana pro，其中唾液酸成分的用量降低为五分之一，但是与唾液酸原有的效果和省去了唾液酸成分的空白组相比展现出了更明显的抗炎效果，说明了这三者在抗炎方面具备一定的协同效果。
[0086]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。