改善中药组合物药学性能的方法和组合物及其用途与流程

1.本发明属于医药技术领域，涉及一种用于口咽炎性疾病的中药组合物，本发明中药组合物为苗医药的开喉剑喷雾剂的中药制剂，其具有清热解毒、消肿止痛之功效；临床上可用于急、慢性咽喉炎，扁桃体炎，咽喉肿痛，口腔炎，牙龈肿痛；例如临床上可用于肺胃蕴热所致的咽喉肿痛，口干口苦，牙龈肿痛以及口腔溃疡，复发性口疮见以上证候者。本发明中药组合物尤其可用于小儿口咽炎性疾病。特别地，本发明涉及提高开喉剑喷雾剂组合物药学性能的方法，以及所得的组合物及其用途。


背景技术：

2.小儿年幼，脏腑娇嫩，为“稚阴稚阳”之体，其形气未充，腠理常疏，易感外邪，此外儿童对外界事物好奇心旺盛，易随手抓取身边物品放入口中。随着气候变化、环境污染等外界因素影响，家属稍不注意，就容易使儿童“病从口入”，《育婴家秘》曰：“小儿脏腑娇嫩，脾常不足，运化失司，极易发病。时行疫毒经口鼻而人，蕴郁肺脾，发于手足，上熏口咽，外透肌肤，发为疱疹。”儿科临床上口腔溃疡属于常见发病率较高的疾病，其是指口腔黏膜表面发生浅表性溃疡，发病原因大多是柯萨奇病毒、细菌感染、手足口病及复发性口疮等，患儿常表现出流涎、发热及哭闹等症状[张夫波,等.蒙脱石散联合开喉剑与冰硼散比较治疗小儿口腔溃疡的疗效分析[j].中国妇幼健康研究,2017,28(s1):495]，其中手足口病是由肠道病毒引起的急性发热出疹性传染病，好发于3岁以下的婴幼儿，主要表现为手足、臀部皮肤红色斑丘疹及小疱疹，口腔内黏膜散在小溃疡及小疱疹，可出现发热，伴食欲减退，甚至拒食或进食后呕吐，可通过亲密接触、呼吸道及消化道等途径传染。此外，小儿扁桃体炎和急性咽炎也是儿童常见的呼吸道感染性疾病，以婴幼儿作为主要发病人群,具有起病急,病情进展快等特点，临床主要表现为咽痛、发烧、咳嗽、咳痰、声嘶、吞咽困难等症状；小儿急性咽喉炎多发于6个月至3岁婴幼儿，全年均可发病，早期表现为咽部灼热、干燥，病情迁延后伴有疼痛，且疼痛感于咳嗽、吞咽时加重，容易进展为慢性咽喉炎[孙静,等.开喉剑喷雾剂(儿童型)治疗小儿急性咽炎和急性扁桃体炎的用法用量探讨[j].中国实验方剂学杂志,2019,25(10):33-40；关晓娟,等.开喉剑喷雾剂联合克感利咽口服液治疗儿童急性扁桃体炎临床分析[j].新中医,2016,48(03):158-160]。
[0003]
中药开喉剑喷雾剂是由贵州三力公司所生产的苗药复方制剂，内容物为浅棕色至棕色液体，味甜、微苦、微麻，具有薄荷的清凉感，其处方为：八爪金龙、山豆根、蝉蜕、薄荷脑。开喉剑喷雾剂具有清热解毒、消肿止痛等功效，临床主要用于急、慢性咽喉炎，扁桃体炎、咽喉肿痛、口腔炎、牙龈肿痛等。其中，八爪金龙收载至《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)，包含三个基原，分别为：朱砂根、百两金、红凉伞，后因朱砂根收载入2015、2020版《中国药典》，故2019版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中八爪金龙只收载百两金和红凉伞两个基原，由此开喉剑喷雾剂组方中的八爪金龙更名为朱砂根。
[0004]
开喉剑喷雾剂通过喷雾给药方式直接作用于口腔黏膜，在病灶部位易形成最大药物浓度，具有生物利用度高、起效快、作用强等优点，且喷药后有薄荷的清凉感，避免了涂擦
等方法引起患儿疼痛，提高了患儿的依从性[彭骞,等.蒲地蓝消炎口服液联合开喉剑喷雾剂治疗小儿手足口病疗效观察[j].中医药导报，2012，18(03):41-42]。
[0005]
有研究表明开喉剑喷雾剂对变形杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌等均有较好的临床疗效[高存娇.分析开喉剑喷雾剂治疗小儿急性咽喉炎的疗效[j].中国医学文摘(耳鼻咽喉科学),2022,37(01):72-73]，此外开喉剑喷雾剂还可与其他药物或治疗方法联用，除增强抗炎作用外，还可用于治疗小儿疱疹性咽峡炎[叶冰,等.喉咽清口服液联合开喉剑喷雾剂治疗小儿疱疹性咽峡炎的临床疗效及其安全性[j].临床合理用药杂志,2021,14(21):51-54]、喉源性咳嗽[宋晓,等.穴位贴敷配合开喉剑喷雾剂治疗儿童喉源性咳嗽疗效观察[j].实用中医药杂志,2015,31(08):775-776]等。
[0006]
cn104758348b(申请号201510187892.5，三力)公开了开喉剑中药组合物在制备治疗口腔溃疡药物中的用途，该中药组合物由活性成分八爪金龙、山豆根、蝉蜕、薄荷脑制成，各活性成分重量比为八爪金龙：山豆根：蝉蜕：薄荷脑＝200-350：200-350：150-280：0.8-1.2，其中所述口腔溃疡为肿瘤放化疗导致的口腔溃疡。
[0007]
cn103040927a(申请号201110309375.2，三力)公开了一种用于治疗咽喉疾病的开喉剑喷雾剂及其制备方法，涉及一种具有清热解毒，消肿止痛作用，用于急、慢性咽喉炎，扁桃体炎，咽喉肿痛，口腔炎，口腔溃疡，口干口苦以及牙龈肿痛，复发性口疮等病症治疗的药物。该开喉剑喷雾剂以八爪金龙、山豆根、蝉蜕、薄荷脑为药材，还添加冰片、香精、枸橼酸、甜菊素、吐温-80、甘油、苯甲酸钠、乙醇作为辅料；在一个示例中，开喉剑喷雾剂的处方为：八爪金龙(即朱砂根)313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g为药材，辅料为冰片0.09g、杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、甜菊素2.0g、10ml吐温-80、甘油4ml、乙醇20ml、水至1000ml；在一个示例中，开喉剑喷雾剂的制法为：取原料药八爪金龙、山豆根、蝉蜕，加8倍药材量的水，煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃时测相对密度为1.05～1.10的清膏，加入乙醇，使含醇量达到75％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至80℃时测相对密度为1.10～1.35的清膏；然后取薄荷脑、冰片、香精、枸橼酸、苯甲酸钠、甜菊素、吐温-80、甘油、乙醇，搅拌溶解后，加入上述清膏中，加水至1000ml，搅拌均匀，滤过，灌装，即得开喉剑喷雾制剂。
[0008]
然而，现有技术仍然需要有新的开喉剑喷雾剂，以期提高其药学性能。


技术实现要素：

[0009]
本发明的目的在于提供一种开喉剑喷雾剂，或者，本发明的目的在于提供一种对开喉剑喷雾剂的用途。已经出人预料的发现，通过本发明方法制备得到的开喉剑喷雾剂呈现药学性能改善的效果。本发明基于此类发现而得以完成。
[0010]
为此，本发明第一方面提供了一种开喉剑喷雾剂，其处方为：朱砂根220～330g、山豆根220～330g、蝉蜕180～270g、薄荷脑0.8～1.2g，香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠1～2.5g、乙醇20ml，水适量，制成1000ml。
[0011]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其处方为：朱砂根250g、山豆根250g、蝉蜕200g、薄荷脑1g，菠萝香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠1g、乙醇20ml，水适量，制成1000ml。
[0012]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其处方为：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、乙醇20ml，水适量，制成1000ml。
[0013]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其制法为：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏，取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、乙醇20ml，搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0014]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其每1000ml中还包含2～4ml聚山梨酯80例如3ml聚山梨酯80；例如聚山梨酯80是在薄荷脑添加阶段加入的。
[0015]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其每1000ml中还包含甜菊素1.0～1.2g例如1.0～1.1g例如1.04g或1.1g；例如甜菊素是在薄荷脑添加阶段加入的。
[0016]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其中不包含甘油。
[0017]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其中不包含冰片。
[0018]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其处方为：朱砂根220～330g、山豆根220～330g、蝉蜕180～270g、薄荷脑0.8～1.2g，香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠1～2.5g、2～4ml聚山梨酯80、甜菊素1.0～1.2g、乙醇20ml，水适量，制成1000ml。
[0019]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其处方为：朱砂根250g、山豆根250g、蝉蜕200g、薄荷脑1g，菠萝香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠1g、3ml聚山梨酯80、甜菊素1.1g、乙醇20ml，水适量，制成1000ml。
[0020]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其处方为：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、3ml聚山梨酯80、甜菊素1.04g、乙醇20ml，水适量，制成1000ml。
[0021]
根据本发明第一方面的开喉剑喷雾剂，其制法为：取朱砂根、山豆根、蝉蜕三味药材加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏，取薄荷脑、香精、枸橼酸、苯甲酸钠、任选的聚山梨酯80、任选的甜菊素、乙醇，搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0022]
进一步的，本发明第二方面提供了制备本发明第一方面任一项所述开喉剑喷雾剂的方法，其包括如下步骤：取朱砂根、山豆根、蝉蜕三味药材加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏，取薄荷脑、香精、枸橼酸、苯甲酸钠、任选的聚山梨酯80、任选的甜菊素、乙醇，搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0023]
进一步的，本发明第三方面提供了本发明第一方面任一项所述开喉剑喷雾剂在制备用于抗病毒的药物中的用途。
[0024]
根据本发明第三方面的用途，其中所述病毒选自：冠状病毒。
[0025]
根据本发明第三方面的用途，其中所述病毒选自：人类冠状病毒hcov-229e。
[0026]
进一步的，本发明第四方面提供了本发明第一方面任一项所述开喉剑喷雾剂在制备用于治疗急性咽炎的药物中的用途。
[0027]
根据本发明第四方面的用途，其中所述急性咽炎是冠状病毒引起的。
[0028]
根据本发明第四方面的用途，其中所述急性咽炎是人类冠状病毒hcov-229e引起的。
[0029]
在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。
[0030]
本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。
[0031]
本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
[0032]
开喉剑喷雾剂是贵州三力制药的产品。儿童型开喉剑喷雾剂的苗医功能主治为：旭嘎凯沓痂，泱安挡孟；陡：纳，蒙宁宫，蒙嘎宫昂，江杠房，水嘎果西；中医适应症为：清热解毒，消肿止痛。用于急、慢性咽喉炎，扁桃体炎，咽喉肿痛，口腔炎，牙龈肿痛。成人型开喉剑喷雾剂的苗医功能主治为：抬蒙蒙宋宫症；蒙嘎宫昂，来罗拉米；中医适应症为：清热解毒，消肿止痛。用于肺胃蕴热所致的咽喉肿痛，口干口苦，牙龈肿痛以及口腔溃疡，复发性口疮见以上证候者。
[0033]
朱砂根为紫金牛科植物朱砂根ardisia crenata sims的干燥根。秋、冬二季采挖，洗净，晒干。朱砂根性凉，味苦、辛，归肺、胃经，具有清热解毒，消肿散瘀，活血止痛，祛风除湿之功效，临床上常用于治疗急性咽炎、扁桃体炎、咽喉肿痛、风湿痹痛、跌打损伤等症，被苗族称为喉科良药。朱砂根中主要含有三萜皂苷类、香豆素类和其他类；其中皂苷结构类型主要为五环三萜类齐墩果烷型衍生物，其苷元有2种类型：环氧醚和12-烯；香豆素类主要为岩白菜素；还含有一些其他类成分：紫金牛醌、无羁萜、β-谷甾醇、胡萝卜苦苷。
[0034]
山豆根为豆科植物越南槐sophora tonkinensis gagnep.的干燥根和根茎。山豆根药性苦寒有毒，归肺、胃经，具有清热解毒、消肿利咽的功效，用于火毒蕴结、咽喉肿痛、肺热咳嗽、乳蛾喉痹、口舌生疮等症[国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[s].北京：中国医药科技出版社，2020]，《开宝本草》中记载:“主解诸药毒、止痛、消疱肿毒”，《本草经疏》谓山豆根为解毒清热之上药；《本草求真》载“解咽喉肿痛第一要药”。山豆根中含有生物碱、皂苷、黄酮类及多糖等化合物等化学成分，它的主要药用成份为生物碱例如苦参碱、氧化苦参碱，以及黄酮类成分例如三叶豆紫檀苷。
[0035]
蝉蜕药性甘、寒，归肺、肝经，具有疏散风热、明目退翳、利咽透疹等功效，临床上多用于治疗风热感冒、咽痛音哑、高热惊厥、喉痒频咳等症[孟宪兰,等.蝉衣在儿科临床中的应用[j].吉林中医药,1997(02):18]。《本草纲目》中记载：“蝉，主疗皆一切风热证，古人用身，后人用蜕，大抵治脏府经络，当用蝉身；治皮肤疮疡风热，当用蝉蜕”。《本草衍义》中记录：“治目昏翳。又水煎壳汁，治小儿出疮疹不快”。《药性论》中也写道：“治小儿浑身壮热惊痫，兼能止渴”。
[0036]
薄荷脑，也称薄荷醇，具有止痛、抗癌、抗炎等药理作用[杜渐.薄荷醇对lps诱导的
帕金森病模型的神经保护作用及其机制[d].吉林大学,2021.doi:10.27162/d.cnki.gjlin.2021.005422]。
[0037]
本发明制备的开喉剑喷雾剂呈现优良的效果，例如具有优良的生物学活性。
附图说明
[0038]
图1：开喉剑喷雾剂体外抗病毒作用。
[0039]
图2：动物咽部黏膜组织病变(he10
×
10)；a正常组，b模型组，c利巴韦林阳性药组，d开喉剑低剂量组，e开喉剑中剂量组，f开喉剑高剂量组。
具体实施方式
[0040]
通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。在本发明中，如未特别指明，所用药材均为药材的干燥品，且符合药典规定。
[0041]
本发明下文制备中药组合物时，如未特别说明，所用原料药材和辅料以及包装材料喷雾瓶均为同一批次。在制备中药组合物时，将制得的药液灌装于30ml的喷雾剂药用高密度聚乙烯瓶(b20190004717，万通)。
[0042]
实施例1：制备开喉剑喷雾剂(儿童型)
[0043]
本实施例参考国家药品标准ws-10132(zd-0132)-2002之处方和工艺制备开喉剑喷雾剂(儿童型)。
[0044]
处方：朱砂根250g、山豆根250g、蝉蜕200g、薄荷脑1g，辅料菠萝香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠1g、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0045]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0046]
实施例2：制备开喉剑喷雾剂
[0047]
本实施例参考国家药品标准ws-11017(zd-1017)-2002之处方和工艺制备开喉剑喷雾剂，其可称为成人型。
[0048]
处方：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，辅料杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0049]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0050]
实施例3：参照cn103040927a制备开喉剑喷雾剂
[0051]
本实施例参考cn103040927a(中国专利申请号201110309375.2)之说明书[0067]所记载的处方和制法实例，制备开喉剑喷雾剂。
[0052]
处方：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，辅料杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、10ml吐温-80、甜菊素2.0g、冰片0.09g、甘油4ml、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0053]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达到75％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、吐温-80、甜菊素、冰片、甘油，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述清膏中，加水至1000ml，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0054]
实施例4：制备开喉剑喷雾剂
[0055]
参考本发明实施例3制备开喉剑喷雾剂，但不加冰片。
[0056]
处方：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，辅料杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、10ml吐温-80、甜菊素2.0g、甘油4ml、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0057]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达到75％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、吐温-80、甜菊素、甘油，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述清膏中，加水至1000ml，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0058]
实施例5：制备开喉剑喷雾剂
[0059]
参考本发明实施例3制备开喉剑喷雾剂，但不加甘油。
[0060]
处方：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，辅料杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、10ml吐温-80、甜菊素2.0g、冰片0.09g、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0061]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达到75％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、吐温-80、甜菊素、冰片，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述清膏中，加水至1000ml，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0062]
实施例6：制备开喉剑喷雾剂
[0063]
参考本发明实施例12制备开喉剑喷雾剂，但聚山利酯80添加量为10ml。
[0064]
处方：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，辅料杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、甜菊素1.04g、10ml聚山利酯80、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0065]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、甜菊素、聚山利酯80，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0066]
实施例11：制备开喉剑喷雾剂(儿童型)
[0067]
本实施例在儿童型开喉剑喷雾剂处方工艺中添加适量甜菊素和聚山利酯80。
[0068]
处方：朱砂根250g、山豆根250g、蝉蜕200g、薄荷脑1g，辅料菠萝香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠1g、甜菊素1.1g、3ml聚山利酯80、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0069]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、甜菊素、聚山利酯80，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0070]
实施例12：制备开喉剑喷雾剂
[0071]
本实施例在成人型开喉剑喷雾剂处方工艺中添加适量甜菊素和聚山利酯80
[0072]
处方：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，辅料杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、甜菊素1.04g、3ml聚山利酯80、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0073]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、甜菊素、聚山利酯80，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0074]
实施例21：制备开喉剑喷雾剂(儿童型)
[0075]
本实施例在儿童型开喉剑喷雾剂处方工艺中添加适量甜菊素和聚山利酯80。
[0076]
处方：朱砂根250g、山豆根250g、蝉蜕200g、薄荷脑1g，辅料菠萝香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠1g、甜菊素1.1g、3ml聚山利酯80、甘氨酸6g、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0077]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、甜菊素、聚山利酯80、甘氨酸，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0078]
实施例22：制备开喉剑喷雾剂
[0079]
本实施例在成人型开喉剑喷雾剂处方工艺中添加适量甜菊素和聚山利酯80
[0080]
处方：朱砂根313g、山豆根313g、蝉蜕250g、薄荷脑1g，辅料杨梅香精5.5ml、枸橼酸1g、苯甲酸钠2.5g、甜菊素1.04g、3ml聚山利酯80、甘氨酸8g、乙醇20ml、水适量，制成1000ml。
[0081]
制法：朱砂根、山豆根、蝉蜕三味加8倍药材量的水，煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.10(50℃)的清膏，加入乙醇，使含醇量达80％，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.20(80℃)的清膏；取薄荷脑、苯甲酸钠、枸橼酸、香精、甜菊素、聚山利酯80、甘氨酸，用乙醇20ml搅拌溶解后，加入上述浸膏中，加水至规定量，搅拌均匀，滤过，灌装，即得。
[0082]
试验例1：喷雾性能考察
[0083]
将本发明实施例制备的灌装于喷雾瓶中的喷雾剂，于0月(制备后2天之内)测定每喷量，接着40℃暗处静置，于2、4、6月取样测定每喷量。每喷量的测定方法：对于某一批次在
某时间点的待测样品，取6瓶、每瓶喷弃初始5喷后连喷6次并收集之，测定此6瓶共36喷的喷出药液量，计算平均每喷药液的重量，作为每喷量。对于某一批样品，以其某时间点的每喷量除以0月每喷量再乘以100％所得百分数作为该时间点的每喷相对量。
[0084]
经测定，聚乙烯瓶配合口腔液体药用喷雾泵(b20190003718，博纳)使用时，各喷雾剂于2、4、6月三个月的每喷相对量：实施例1喷雾剂三个月结果依次分别为98.6％、96.1％、92.4％，实施例2喷雾剂三个月结果依次分别为98.3％、95.7％、91.6％，实施例3～6、实施例11～12以及实施例21～22全部喷雾剂三个月结果依次分别在99.2～101.7％范围内、99.4～101.1％范围内、98.7～100.4％范围内，例如实施例11喷雾剂6月结果为99.6％，例如实施例12喷雾剂6月结果为100.1％；聚乙烯瓶配合药用喷雾剂泵freepod(b20190000625，aptar mezzovico)使用时，各喷雾剂于2、4、6月三个月的每喷相对量：实施例1喷雾剂三个月结果依次分别为97.8％、95.3％、91.2％，实施例2喷雾剂三个月结果依次分别为98.0％、95.4％、91.0％，实施例3～6、实施例11～12以及实施例21～22全部喷雾剂三个月结果依次分别在99.3～101.1％范围内、99.6～100.8％范围内、98.9～100.6％范围内，例如实施例11喷雾剂6月结果为99.9％，例如实施例12喷雾剂6月结果为99.3％；聚乙烯瓶配合药用喷雾剂泵(b20210000603，美捷时)使用时，各喷雾剂于2、4、6月三个月的每喷相对量：实施例1喷雾剂三个月结果依次分别为98.1％、95.7％、92.0％，实施例2喷雾剂三个月结果依次分别为98.5％、95.1％、90.4％，实施例3～6、实施例11～12以及实施例21～22全部喷雾剂三个月结果依次分别在99.5～101.3％范围内、99.1～100.7％范围内、98.5～100.5％范围内，例如实施例11喷雾剂6月结果为100.2％，例如实施例12喷雾剂6月结果为99.2％；聚乙烯瓶配合口服液体药用喷雾剂泵(b20190000977，世通)使用时，各喷雾剂于2、4、6月三个月的每喷相对量：实施例1喷雾剂三个月结果依次分别为98.3％、95.5％、91.4％，实施例2喷雾剂三个月结果依次分别为97.8％、94.8％、90.7％，实施例3～6、实施例11～12以及实施例21～22全部喷雾剂三个月结果依次分别在99.4～101.2％范围内、99.6～100.6％范围内、98.9～101.1％范围内，例如实施例11喷雾剂6月结果为99.8％，例如实施例12喷雾剂6月结果为99.2％。据此结果，出人意料的发现，一些添加了吐温和甜菊素的喷雾剂具有优良的喷雾稳定性，这一结论在使用多种品牌的喷雾剂泵时均呈现相同的结果。
[0085]
试验例2：粘滞性能考察
[0086]
以聚乙烯瓶分别配合试验例1中提及的四种喷雾泵，参照试验例1方法，测定四种喷雾泵喷注射用水(相当于一种标准粘度的液体)时的每喷量(36喷的均值)，再测定四种喷雾泵喷各实施例所得喷雾剂药液的每喷量，按下式计算某种喷雾泵喷雾某种药液时的偏离百分数：
[0087]
偏离百分数＝[(喷水每喷量-喷药液每喷量)
÷
喷水每喷量]
×
100％
[0088]
结果：四种喷雾泵喷雾实施例1～2药液的偏离百分数均在0.9～1.3％范围内例如喷雾泵(b20190003718)喷雾实施例1药液的偏离百分数为1.16％，四种喷雾泵喷雾实施例11～12和实施例21～22药液的偏离百分数均在1.2～1.5％范围内例如喷雾泵(b20190003718)喷雾实施例11药液的偏离百分数为1.33％，四种喷雾泵喷雾实施例5～6药液的偏离百分数均在4.5～5.4％范围内例如喷雾泵(b20190003718)喷雾实施例5药液的偏离百分数为5.27％，四种喷雾泵喷雾实施例3～4药液的偏离百分数均在8.6～11.3％范围
内例如喷雾泵(b20190003718)喷雾实施例5药液的偏离百分数为10.53％。由此结果可见，处方中添加较高浓度的吐温80(和甘油)时可能由于粘度增加进而造成每喷的喷雾量减小，这种现象是期待避免的。另外经测定，喷雾泵(b20190003718)喷注射用水的每喷量为152.6mg、喷雾剂泵freepod(b20190000625)喷注射用水的每喷量为127.1mg、喷雾剂泵(b20210000603)喷注射用水的每喷量为155.8mg、喷雾剂泵(b20190000977)喷注射用水的每喷量为146.3mg，这些结果表明不同品牌喷雾泵的设计喷雾量是不同的，但是这种差异并不影响本发明其它试验的准确性。
[0089]
需要说明的是，上述偏离百分数与药液性能和喷雾泵有关，而与灌装药液的瓶子无关，例如与使用的喷雾剂药用高密度聚乙烯瓶无关。
[0090]
试验例3：苦参碱的测定
[0091]
本试验例提供测定喷雾剂药液中的苦参碱含量，测定方法如下：照中国药典2020年版四部附录vid之高效液相色谱法的规范进行测定；用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(welch ultimate plus c18，4.6
×
250mm，5μm)；以无腈-无水乙醇-0.3％磷酸溶液(80:10:10)为流动相，检测波长为220nm，理论板数按苦参碱峰计算应不低于2010；取苦参碱对照品适量，精密称定，加乙腈-无水乙醇(80:20)溶解，制成每1ml含80μg的溶液，得对照品溶液；取待测试的喷雾剂溶液，摇匀，精密量取5ml，加水稀释至20ml，摇匀，加入浓氨试液0.5ml，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷溶液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇溶解并转移至10ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定并计算每1ml药液中的苦参碱量，得到喷雾剂药液中苦参碱浓度(μg/ml)。
[0092]
将本发明实施例制备的灌装于喷雾瓶中的喷雾剂，于0月(制备后2天之内)测定喷雾剂药液中苦参碱浓度，接着40℃暗处静置，分别于3月、6月取样测定苦参碱浓度。对于某一批样品，以其某取样时间苦参碱浓度除以0月苦参碱浓度再乘以100％所得百分数作为该取样时间点苦参碱相对含量(％)。经测定，实施例1～2、实施例5～6、实施例11～12、实施例21～22所得各喷雾剂3月苦参碱相对含量均在99.1～100.4％范围内，例如实施例11和12喷雾剂3月苦参碱相对含量分别为99.8％和99.4％，实施例3和4喷雾剂3月苦参碱相对含量分别为93.6％和94.2％；实施例1～2、实施例5～6、实施例11～12、实施例21～22所得各喷雾剂6月苦参碱相对含量均在98.4～99.5％范围内，例如实施例11和12喷雾剂6月苦参碱相对含量分别为98.7％和99.1％，实施例3和4喷雾剂6月苦参碱相对含量分别为88.2％和89.5％。据此结果，出人意料的发现，一些添加了冰片的喷雾剂中苦参碱化学稳定性变差，尽管尚不清楚这一结果是冰片单独引起的还是冰片与其它物质一起作用引起的，本领域技术人员知晓这种倾向性结果是不可取的。依据上述试验例1～3的结果，实施例11～12和实施例21～22的处方工艺是有利的，其不但具有优良的喷雾稳定性，并且具有优良的化学稳定性。
[0093]
试验例4：岩白菜素的测定
[0094]
岩白菜素是本发明喷雾剂的重要化学成分，对其进行测定是有必要的。
[0095]
本发明参考中国药典2020年版四部之高效液相色谱法(通则0512)的规范，对喷雾剂中的岩白菜素含量进行测定，方法如下：
[0096]
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(25:
75)为流动相；检测波长为275nm；理论板数按岩白菜素峰计算应不低于1500；
[0097]
对照品溶液的制备：取岩白菜素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；
[0098]
供试品溶液的制备：精密吸取喷雾剂溶液5ml置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；
[0099]
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算药液中的岩白菜素浓度。
[0100]
使用上述hplc法，对所制得的各实施例喷雾剂药液直接取样进行测定，结果：实施例1、11和21喷雾剂中岩白菜素浓度为542.8μg/ml、534.1μg/ml、548.4μg/ml，实施例2、12和22喷雾剂中岩白菜素浓度为674.2μg/ml、682.6μg/ml、663.4μg/ml，实施例3～6喷雾剂中岩白菜素浓度为658～686μg/ml例如实施例3为677.5μg/ml。从稳定性试验的角度讲，该结果可以当作各喷雾剂0月岩白菜素含量。将本文所制得的各实施例喷雾剂药液灌装于药用高密度聚乙烯瓶(20ml药液/瓶)，密封，于40℃暗处静置6月，直接吸取药液用上述hplc法稀释后测定岩白菜素浓度，计算各药液样品此6月相对于0月的相对含量(％)，结果：实施例21和22喷雾剂6月岩白菜素相对含量分别为98.7％和98.3％，实施例1～6、实施例11～12喷雾剂6月岩白菜素相对含量均在90～92％范围内，例如实施例3喷雾剂6月岩白菜素相对含量为91.6％。将本文所制得的各实施例喷雾剂药液精确灌装于药用高密度聚乙烯瓶(20.0ml药液/瓶)，密封，于40℃暗处静置6月，将待测药液转移至50ml量瓶中，用25ml甲醇分3次振摇清洗瓶子，洗液转移至量瓶中，再用甲醇定容，接着精密吸取5ml置20ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得供试品溶液，用上述hplc法测定此供试品溶液的岩白菜素浓度，计算各药液样品此6月相对于0月的相对含量(％)，结果：实施例1～6、实施例11～12、实施例21～22喷雾剂6月岩白菜素相对含量均在97.8～99.4％范围内，例如实施例3喷雾剂6月岩白菜素相对含量为98.2％。将本文所制得的各实施例喷雾剂药液灌装于药用玻璃瓶(20ml药液/瓶)，密封，于40℃暗处静置6月，直接吸取药液用上述hplc法稀释后测定岩白菜素浓度，计算各药液样品此6月相对于0月的相对含量(％)，结果：实施例1～6、实施例11～12、实施例21～22喷雾剂6月岩白菜素相对含量均在97.6～99.1％范围内，例如实施例3喷雾剂6月岩白菜素相对含量为98.5％。以上结果表明，药液长期静置后，岩白菜素虽然不会有明显损失，但是可能会粘附在药用高密度聚乙烯瓶内壁；出人意料的发现是，在药液中添加甘氨酸可以避免此种粘附。因此在本发明喷雾剂的一个实施方案中，其每1000ml药液中还包含甘氨酸6～8g，例如6g或8g，此外，甘氨酸可以随聚山利酯一起添加。此外，岩白菜素不会出现粘附现象从药品贮藏、运输和使用角度讲，药用高密度聚乙烯瓶作为喷雾剂药瓶是更适宜的、亦是更普遍使用的。
[0101]
试验例5：开喉剑喷雾剂体外抗病毒、体内防治急性咽炎的药效学研究
[0102]
1.试药
[0103]
实施例1开喉剑喷雾剂，
[0104]
利巴韦林喷剂：江苏天济药业有限公司产，h20059502。
[0105]
2.实验动物
[0106]
幼龄icr小鼠(spf/vaf级)，体重13～15g，3～4周龄，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：scxk(京)2016-0011。
[0107]
3.病毒和细胞
[0108]
病毒毒株：副流感病毒3(hpiv3，购自atcc)，呼吸道合胞病毒(rsv)、柯萨奇病毒a6(coxa6)、人类冠状病毒(hcov-229e)，由中国医学科学院医药生物技术研究所提供，-80℃冰箱保存备用。
[0109]
细胞株：人喉癌上皮细胞hep-2，人胚肺纤维细胞mrc-5；人肺上皮细胞a549购自北京北纳创联生物技术研究院，液氮保存备用。
[0110]
4.试验试剂：营养肉汤培养基购自corning，rabbit il-2等elisa试剂盒购自上海酶联，其余常规试剂自市售途径购得。
[0111]
5.试验仪器：a2型生物安全柜(thromomsc1.8，thromo公司)、多功能酶标仪(enspire，德国perkinelmer公司)、全自动细胞计数仪(ic1000，countstar公司)、倒置显微镜(ckx41，olympus公司)、荧光倒置显微镜(ix71，olympus公司)、全自动血液体液一体机(xn-55，sysmex公司)，其余常规试验仪器自市售途径购得。
[0112]
6.体外抗病毒药效学研究
[0113]
6.1.药物在体外培养细胞上的毒性作用：
[0114]
将开喉剑喷雾剂用营养肉汤培养液做2倍倍比稀释，共8个稀释度，加到已长成单层的mrc5、a549及hep-2细胞培养板中，100μl/孔，每个稀释度做4个复孔，同时设正常细胞对照。将培养板置37℃，5％co2培养箱中培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，连续72h，确定细胞不出现明显病变的最低稀释倍数(最大无毒浓度tc0)，并按reed-muench法计算50％细胞毒性浓度(tc
50
)。结果见表1。
[0115]
细胞病变按6级标准判断：
[0116]
－：细胞生长正常，无病变出现；
[0117]
±
：细胞病变少于整个单层的10％；
[0118]
+：细胞病变约占整个单层细胞的25％以下；
[0119]
++：细胞病变约占整个单层细胞的50％以下；
[0120]
+++：细胞病变约占整个单层细胞的75％以下；
[0121]
++++：细胞病变约占整个单层细胞的75％以上。
[0122]
表1：药物对体外培养细胞的毒性作用(原浓度0.7g生药/ml)
[0123][0124]
注：“－”代表细胞生长正常，无病变出现；“1”代表“+”，即细胞病变约占整个单层细胞的25％以下；“2”代表“++”，即细胞病变约占整个单层细胞的50％以下；“3”代表“+++”，即细胞病变约占整个单层细胞的75％以下；“4”代表“++++”，即细胞病变约占整个单层细胞
的75％以上。结果见表2。
[0125]
表2：药物对体外培养细胞的毒性作用(单位：mg生药/ml)
[0126]
指标tc
50
tc0mrc-515.610.9a54915.610.9hep-27.85.5
[0127]
6.2.药物在体外培养细胞上对病毒的抑制作用
[0128]
取已长成单层细胞mrc-5，a549，hep-2的培养板，倒掉培养液，用细胞维持液冲洗细胞面3遍后，分别接种hcov-229e，rsv，coxa6，hpiv3病毒液，100tcid
50
，100μl/孔，置37℃5％co2培养箱中吸附1h后，依次加入无毒浓度以下8个稀释度的各药液，100μl/孔，同时设正常细胞对照和病毒对照。置37℃5％co2培养箱中培养，每日倒置显微镜下观察细胞病变情况，72小时后病毒对照组细胞病变为+++～～++++时记录试验结果。按reed-muench计算50％抑制浓度(ic
50
)和治疗指数(ti)，ti＝tc
50
/ic
50
。结果见表3。
[0129]
表3：药物对病毒感染体外细胞的抑制作用
[0130][0131][0132]
注：“－”代表细胞生长正常，无病变出现；
±
：细胞病变少于整个单层的10％；“1”代表“+”，即细胞病变约占整个单层细胞的25％以下；“2”代表“++”，即细胞病变约占整个单层细胞的50％以下；“3”代表“+++”，即细胞病变约占整个单层细胞的75％以下；“4”代表“++++”，即细胞病变约占整个单层细胞的75％以上。结果见表4和图1。
[0133]
表4：药物在体外培养细胞上对病毒的抑制作用
[0134]
病毒ic
50
(mg生药/ml)tihcov-229e1.997.8
[0135]
采用cpe法观察药物对hcov-229e、pr8、rsv、ad3、coxa6、hpiv3病毒感染后体外培养mrc-5、a549及hep-2细胞病变的影响，表1～4及图1结果显示的：实施例1之开喉剑喷雾剂(儿童型)对hcov-229e所致细胞病变显示明显的抑制作用，ic
50
为1.99mg生药/ml，而对hpiv3、rsv、coxa6感染的hep-2细胞未呈现抑制作用。
[0136]
参照上述“6.体外抗病毒药效学研究”，对本发明实施例11～12以及实施例21～22四种喷雾剂测试它们在体外培养细胞上对病毒的抑制作用，结果四种喷雾剂对hcov-229e
所致细胞病变显示明显的抑制作用：实施例11喷雾剂的ic
50
为1.56mg生药/ml，实施例12喷雾剂的ic
50
为1.45mg生药/ml，实施例21喷雾剂的ic
50
为1.51mg生药/ml，实施例22喷雾剂的ic
50
为1.39mg生药/ml，实施例11～12以及实施例21～22四种喷雾剂对hpiv3、rsv、coxa6感染的hep-2细胞均未呈现抑制作用。
[0137]
7.体内药效学研究——对冠状病毒感染致幼龄小鼠急性咽炎模型的影响
[0138]
用hcov-229e感染致幼龄小鼠急性咽炎模型，通过咽部病变评分及病理检测评价开喉剑喷雾剂的体内药效。
[0139]
试验方法：采用hcov-229e病毒液感染幼龄小鼠咽部。除正常对照组外，其余各组均咽部注射100tcid
50
稀释的hcov-229e病毒液，50μl/只/次，每天1次，连续2天，造成急性咽炎模型。第3天开始咽喉部喷雾给药实施例1喷雾剂或利巴韦林(100μl/只/天)，连续3天，正常对照组和模型对照组在同等条件下喷赋形剂。第6天解剖动物，肉眼观察小鼠咽部黏膜的情况。
[0140]
咽部病变评分标准：
[0141]“－”：咽部组织呈淡红色，表面湿润，有光泽，未见分泌物，无充血肿胀；
[0142]“+”：咽部黏膜光泽度欠佳，有少量分泌物，且有轻度急性充血；
[0143]“++”：咽部组织光泽度较差，呈暗红色，有少量分泌物，呈急性充血伴轻度肿胀；
[0144]“+++”：咽部组织呈暗红色、无光泽，黏液性分泌物增多，呈现明显急性充血、肿胀状态。
[0145]
肉眼观察正常对照组动物咽部组织呈淡红色，表面湿润，有光泽，未见分泌物，无充血肿胀；模型对照组动物咽部组织光泽度较差，呈暗红色，有少量分泌物，呈急性充血伴轻度肿胀；各给药组动物咽部病变均有不同程度减轻，表现为充血、肿胀明显减轻、未见明显的炎性分泌物。结果见下表5。
[0146]
表5：开喉剑喷雾剂对冠状病毒感染致幼龄小鼠急性咽炎模型的影响
[0147][0148]
注：p值与模型对照组比较。
[0149]
表中结果显示，模型对照组咽部病变积分与正常对照组比较有显著性差异(p《0.01)；开喉剑喷雾剂(儿童型)不同给药组咽部病变积分有不同程度降低，与模型对照组比较有显著性差异(p《0.05、p《0.01)。
[0150]
处死动物后，取咽部黏膜组织进行病理学检查，结果如图2，显示其中开喉剑喷雾剂三个剂量组对冠状病毒感染致幼龄小鼠急性咽炎模型显示出较好的治疗作用。
[0151]
在进一步的试验中，参照上述“7.体内药效学研究——对冠状病毒感染致幼龄小鼠急性咽炎模型的影响”，对本发明实施例11～12以及实施例21～22四种喷雾剂测试它们对冠状病毒感染致幼龄小鼠急性咽炎模型的影响，病变均值的结果见表5，显示两种添加了3ml吐温和甜菊素或者进一步添加甘氨酸的喷雾剂均呈现优良的效果。
[0152]
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。