一种具有降血压功效的发酵黄精提取物、制备方法与应用

1.本发明属于植物提取物药物研究技术领域，具体涉及一种具有降血压功效的发酵黄精提取物，并进一步公开其制备方法与应用。


背景技术：

2.黄精为百合科植物滇黄精polygonatum kingianum coll.et hemsl.、黄精polygonatum sibiricum red.或多花黄精polygonatum cyrtonema hua的干燥根茎，按形状不同，习称大黄精、鸡头黄精、姜形黄精等。据《中国药典》2020版记载，黄精有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功效，用于脾胃气虚、体倦乏力、胃阴不足、口干食少、肺虚燥咳、劳嗽咳血、精血不足、腰膝酸软、须发早白、内热消渴等症。黄精在2002年被列入卫健委公布的既是食品又是药品的中药名单上，在大健康产业急速发展的背景下，黄精提取物在功能性食品的开发应用将得到广泛应用。
3.据报道，黄精含有多糖、皂苷、三萜、生物碱、木脂素、黄酮、植物甾醇及挥发油等多种化学成分。其中，多糖和皂苷类成分在黄精中量较大，为其主要药效成分，也是黄精主要的生物学活性成分之一，具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗辐射等多种生物学活性。黄精中含有的中性皂苷为甾体皂苷，皂苷类成分主要有薯蓣皂苷元、毛地黄糖苷和菝葜皂苷元。现代药理研究表明，甾体皂苷具有调节血糖、抗肿瘤、改善学习记忆等多种药理活性。另外，黄精中含有的黄酮类化合物也具有抗肿瘤、抗病毒、防衰老、抗菌消炎、防动脉粥样硬化以及保护心脑血管等功能。
4.目前，市面上含有黄精的功能性食品中，大多将黄精原材直接粉碎添加，使得黄精的有效利用率大大降低。传统的黄精提取方法大部分只针对黄精多糖、黄精皂苷等其中的某一个单一成分，未综合考虑其他功能性成分。因此，开发一种耗时短、提取效率高、营养成分丰富的发酵黄精提取物对于黄精功能性产品的开发具有积极的意义。


技术实现要素：

5.为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种具有降血压功效的发酵黄精提取物，所述发酵提取物具有营养成分丰富的优势；
6.本发明所要解决的第二个技术问题在于提供上述具有降血压功效的发酵黄精提取物的制备方法；
7.本发明所要解决的第三个技术问题在于提供上述发酵黄精提取物用于制备预防及治疗心血管疾病药物的用途，尤其是用于制备降血压药物的用途。
8.为解决上述技术问题，本发明所述的一种具有降血压功效的发酵黄精提取物的制备方法，包括如下步骤：
9.(1)取粉碎后的黄精粉末加水混匀得到黄精浆料，并向所述黄精浆料中加入第一复合酶制剂进行酶解处理，灭酶并收集黄精酶解液，备用；
10.(2)取清洗后的草玉露叶片加水制浆得到草玉露浆料，并向所述草玉露浆料中加
入第二复合酶制剂进行酶解处理，灭酶并收集草玉露酶解液，备用；
11.(3)将所述黄精酶解液和所述草玉露酶解液混合得到发酵基料，加入益生菌剂进行发酵，收集发酵液，即得。
12.具体的，所述步骤(1)中，所述第一复合酶制剂包括纤维素酶和淀粉酶的混合物；
13.所述纤维素酶和淀粉酶的质量比为1：0.5-1。
14.具体的，所述步骤(1)中，所述黄精粉末与水的质量比为1：2-5；
15.所述第一复合酶制剂的加入量占所述黄精粉末用量的2-5wt％。
16.具体的，所述步骤(2)中，所述第二复合酶制剂包括纤维素酶和果胶酶的混合物；
17.所述纤维素酶和果胶的质量比为1：1-2。
18.具体的，所述步骤(2)中，所述草玉露叶片与水的质量比为1：2-5；
19.所述第二复合酶制剂的加入量占所述草玉露叶片用量的2-5wt％。
20.具体的，所述步骤(3)中，所述益生菌剂包括副干酪乳杆菌。
21.具体的，所述步骤(3)中，所述发酵步骤的温度为20-30℃，发酵时间为48-72h。
22.具体的，所述步骤(3)中，还包括将所述发酵液进行真空冷冻干燥的步骤。
23.本发明还公开了由所述方法制备得到的发酵黄精提取物。
24.本发明还公开了所述发酵黄精提取物用于制备降血压药物的用途。
25.本发明还公开了所述草玉露及其酶解物和/或发酵物用于制备降血压药物的用途。
26.本发明所述发酵黄精提取物基于黄精的酶解物与草玉露的酶解物为发酵基料，通过益生菌剂进行发酵，所得发酵产物具有较好的降血压功效，可用于制备降血压药物。本发明所述黄精和草玉露的混合发酵物，相对于黄精提取物/发酵物具有更好的降血压效果，也从侧面证明了所述草玉露及其酶解物和/或发酵物具有降血压的效果，可作为潜在的降血压物质进行开发研究。
27.本发明所述发酵黄精提取物基于纤维素酶和淀粉酶对黄精进行酶解处理，所得酶解物更有助于促进有效成分的溶出，所得发酵物的药效性能更优。同样的，本发明所述发酵黄精提取物基于纤维素酶和果胶酶对草玉露进行酶解处理，所得酶解物更有助于促进有效成分的溶出，所得发酵物的药效性能更优。
具体实施方式
28.本发明下述实施例中，所述益生菌剂选择市售科汉森l.casei 431副干酪乳杆菌菌株，使用时，将保存的菌株加水进行分散获得菌悬液，再按照相对于发酵基料5v/v％的添加量进行添加菌剂。
29.实施例1
30.本实施例所述发酵黄精提取物的制备方法，包括如下步骤：
31.(1)取品质良好的干燥黄精进行粉碎，并取粉碎后的黄精粉末1kg加水(质量比1：3)混匀得到黄精浆料，随后在常温下向所述黄精浆料中加入占所述黄精粉末量3wt％的第一复合酶制剂(纤维素酶：淀粉酶＝1：1)进行酶解处理6h，加热灭酶并收集黄精酶解液，备用；
32.(2)取品质良好且叶片肥厚的草玉露叶片1kg，经清洗后加水(质量比1：3)进行常
规破碎制浆得到草玉露浆料，随后在常温下向所述草玉露浆料中加入占所述草玉露叶片量3wt％的第二复合酶制剂(纤维素酶：果胶酶＝1：2)进行酶解处理6h，加热灭酶并收集草玉露酶解液，备用；
33.(3)将上述得到的所述黄精酶解液和所述草玉露酶解液混合得到发酵基料，加入所述副干酪乳杆菌的菌悬液，于25℃下进行常规发酵60h，收集发酵产物进行过滤，收集发酵液，经真空冷冻干燥至粉末态，即得。
34.实施例2
35.本实施例所述发酵黄精提取物的制备方法，包括如下步骤：
36.(1)取品质良好的干燥黄精进行粉碎，并取粉碎后的黄精粉末1kg加水(质量比1：2)混匀得到黄精浆料，随后在常温下向所述黄精浆料中加入占所述黄精粉末量2wt％的第一复合酶制剂(纤维素酶：淀粉酶＝1：0.5)进行酶解处理6h，加热灭酶并收集黄精酶解液，备用；
37.(2)取品质良好且叶片肥厚的草玉露叶片1kg，经清洗后加水(质量比1：5)进行常规破碎制浆得到草玉露浆料，随后在常温下向所述草玉露浆料中加入占所述草玉露叶片量5wt％的第二复合酶制剂(纤维素酶：果胶酶＝1：1)进行酶解处理6h，加热灭酶并收集草玉露酶解液，备用；
38.(3)将上述得到的所述黄精酶解液和所述草玉露酶解液混合得到发酵基料，加入所述副干酪乳杆菌的菌悬液，于25℃下进行常规发酵60h，收集发酵产物进行过滤，收集发酵液，经真空冷冻干燥至粉末态，即得。
39.实施例3
40.本实施例所述发酵黄精提取物的制备方法，包括如下步骤：
41.(1)取品质良好的干燥黄精进行粉碎，并取粉碎后的黄精粉末1kg加水(质量比1：5)混匀得到黄精浆料，随后在常温下向所述黄精浆料中加入占所述黄精粉末量5wt％的第一复合酶制剂(纤维素酶：淀粉酶＝1：0.8)进行酶解处理6h，加热灭酶并收集黄精酶解液，备用；
42.(2)取品质良好且叶片肥厚的草玉露叶片1kg，经清洗后加水(质量比1：2)进行常规破碎制浆得到草玉露浆料，随后在常温下向所述草玉露浆料中加入占所述草玉露叶片量2wt％的第二复合酶制剂(纤维素酶：果胶酶＝1：1.5)进行酶解处理6h，加热灭酶并收集草玉露酶解液，备用；
43.(3)将上述得到的所述黄精酶解液和所述草玉露酶解液混合得到发酵基料，加入所述副干酪乳杆菌的菌悬液，于25℃下进行常规发酵60h，收集发酵产物进行过滤，收集发酵液，经真空冷冻干燥至粉末态，即得。
44.对比例1
45.本对比例所述发酵黄精提取物的制备方法同实施例1，其区别仅在于，不添加所述草玉露酶解物，而仅以所述黄精酶解物进行发酵，发酵条件完全相同。
46.对比例2
47.本对比例所述发酵黄精提取物的制备方法同实施例1，其区别仅在于，不添加所述草玉露酶解物，且直接以黄精粉末浆料为发酵基料进行发酵，发酵条件完全相同。
48.对比例3
49.本对比例所述发酵提取物的制备方法同实施例1，其区别仅在于，不添加所述黄精酶解物，而仅以所述草玉露酶解物进行发酵，发酵条件完全相同。
50.对比例4
51.本对比例所述发酵提取物的制备方法同实施例1，其区别仅在于，不添加所述黄精酶解物，且直接以草玉露叶片浆料为发酵基料进行发酵，发酵条件完全相同。
52.实验例
53.1、对自发性高血压大鼠的降血压作用
54.按照传统实验方法，研究单次口服及连续3天多次口服对自发性高血压大鼠(shr)血压的影响。
55.试验动物：正常wistar大鼠4只，雌雄各半，3-4月龄，体重200-220g；自发性高血压大鼠24只，雄性各半，3-4月龄，体重200-220g，购自北京中国医学科学院阜外心血管病医院实验动物中心。
56.饲养：饲养于正压净化通风动物房，室温25
±
2℃，自由进食与饮水。
57.试验仪器：crs-iii型电脑大鼠心率血压仪，101-2电热恒温箱。
58.实验分组：
59.正常对照组：正常wistar大鼠(n＝4)，普通饲养，自动饮水，不作任何处理；
60.空白对照组：自发性高血压大鼠(n＝4)；
61.受试药物组1-5：每组分别设置自发性高血压大鼠(n＝4)，雌雄各半。
62.试验方法：
63.试验动物购入后，将大鼠放入测压仪中进行训练2周，并在第二周起隔日测定血压。测压前动物放入37
±
1℃电热箱内加温，并在15分钟后用crs-iii型电脑大鼠心率血压仪测定大鼠尾动脉收缩压(sbp)和舒张压(dbp)。
64.正常对照组：正常wistar大鼠进行普通饲养，自动饮水，不作任何处理；
65.空白对照组：试验大鼠普通饲养，灌蒸馏水；
66.受试药物组1-5：试验大鼠分别给予实施例1及对比例1-4获得的发酵提取物，给药剂量为50mg/kg体重。
67.上述阴性对照组及受试药物组1-5中试验大鼠，每天用药一次，连续3天，分别测定实验前及第二天(48h)、第三天(72h)给药后4小时的血压。
68.实验结果：试验数据以平均值
±
标准差表示，试验结果见下表1。
69.表1 各实验组对自发性高血压大鼠血压的影响
[0070][0071]
可见，本发明所述发酵提取物的起效时间较快，能够快速的起到降低血压的作用，且所述发酵提取物的降压持续性较好。各实验组结果显示，本发明基于黄精酶解物和草玉露酶解物为发酵基料获得的发酵提取物，降血压的性能明显优于单独基于黄精酶解物或草玉露酶解物获得的发酵提取物，更优于单独基于黄精或草玉露进行发酵获得的发酵提取物的降压效果。尤其需要强调的是，上述实验证明了所述草玉露及其酶解物的发酵提取物具有降血压的功效，虽然其单独降血压的效果略差于黄精及其酶解物的发酵提取物，但仍可作为潜在的降血压物质进行后续的研究。
[0072]
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。