本发明涉及疾病治疗领域。具体而言，本发明提供了gp96蛋白和由gp96蛋白构建的融合蛋白用于治疗肌萎缩侧索硬化的用途。此外，本发明还涉及可用于治疗肌萎缩侧索硬化的一种或多种症状的药物组合物，其包含本发明的gp96蛋白或由其构建的融合蛋白。
背景技术：
：：1、肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,als)，俗称“渐冻症”，该病是由于运动神经细胞进行性退化，主要影响皮层、脑干和脊髓中的运动神经元，导致四肢、躯干、胸部腹部的肌肉逐渐无力和萎缩，以及言语、吞咽和呼吸功能减退，直至呼吸衰竭死亡。肌萎缩侧索硬化的病因至今不明。20％的病例可能与遗传及基因缺陷有关。另外有部分环境因素，如重金属中毒等，都可能造成运动神经元损害，但是具体致病机制尚不清楚。肌萎缩侧索硬化症发病率很低，但是对病人的生活质量及生命构成很大威胁。目前治疗肌萎缩侧索硬化症的药物有依达拉奉edaravone(商品名radicava)和利鲁唑(riluzole)。据als协会称，每年约有5000人被确诊，平均预期寿命为两到五年，所以患者迫切需要变革性的治疗选择。2、有研究显示特定遗传背景、活性氧和氧化应激、神经炎症和自身免疫反应、treg功能失调和水平降低、运动神经细胞线粒体的功能异常、运动神经细胞代谢与功能失调、蛋白变性等介导的运动神经损伤和轴突病变可能是als进展和神经退行性疾病过程中的关键驱动因素。技术实现思路1、热休克蛋白(heat shock protein，hsp)是一类在生物进化中高度保守且广泛存在于原核及真核生物中的蛋白质，其主要生物学功能有：分子伴侣，参与新合成蛋白的折叠与组装；与细胞内的其他肽类蛋白质尤其是变性蛋白的结合，参与细胞的抗损伤、修复和热耐受过程；参与蛋白质水解过程；结合抗原肽，加工提呈肿瘤抗原及维持细胞内环境稳定等作用；对细胞的生长、发育、分化及死亡具有一定的调节作用。热休克蛋白gp96属于热休克蛋白家族中的一种，其具有显著的生物学活性。2、本技术的发明人经过大量的研究后发现，gp96蛋白可有效用于肌萎缩侧索硬化的治疗，在治疗系肌萎缩侧索硬化或缓解肌萎缩侧索硬化的症状方面具有重要的应用价值。3、此外，本技术发明人通过研究获得了由gp96蛋白构建的融合蛋白，其相对于gp96蛋白，具有提高的针对肌萎缩侧索硬化的治疗活性。4、治疗用途5、因此，在一方面，本技术提供了gp96蛋白或其变体或融合蛋白在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化；6、其中，所述变体与所述gp96蛋白相比，具有至少90％，例如至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％的序列同一性；或者，具有一个或几个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个)氨基酸的置换(优选保守置换)、添加或缺失，且保留了所述gp96蛋白的功能；7、所述融合蛋白包含所述gp96蛋白或其变体，以及，与所述gp96蛋白或其变体连接的另外的肽。8、在某些实施方案中，所述另外的肽任选地通过接头(例如，肽接头)连接于所述gp96蛋白或其变体的n端和/或c端。9、在某些实施方案中，所述另外的肽连接于所述gp96蛋白或其变体的n端。10、在某些实施方案中，所述另外的肽为柔性肽。11、在某些实施方案中，所述另外的肽包含一个或多个甘氨酸(g)。12、在某些实施方案中，所述另外的肽具有如(ggggs)n1c(ggggs)n2所示的结构，其中，所述n1和n2各自独立地选自：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。在某些实施方案中，所述n1和n2不同时为0。13、在某些实施方案中，所述另外的肽具有如seq id no:6所示的氨基酸序列。14、本领域技术人员已知，在mrna的翻译过程中，由于起始密码子的作用，所产生的多肽链第一位经常为起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸(m))。因此，本发明的gp96蛋白或其变体或融合蛋白不仅囊括在其n末端不包含起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸)的氨基酸序列，也囊括在其n末端包含起始密码子编码的氨基酸(例如，甲硫氨酸)的氨基酸序列。15、在某些实施方案中，所述gp96蛋白包含如seq id no:1或2所示的氨基酸序列，或由其组成。此处所示序列在其n端不包含起始密码子编码的甲硫氨酸。本领域技术人员理解，所述gp96蛋白也可以包含在其n端包含起始密码子编码的甲硫氨酸的上述氨基酸序列，或由其组成。16、在某些实施方案中，所述gp96蛋白通过基因工程方法(重组技术)产生。在某些实施方案中，所述gp96蛋白提取自天然生物样品。在某些实施方案中，所述gp96蛋白提取自动物离体胎盘组织。在某些实施方案中，所述gp96蛋白提取自人离体胎盘组织。在某些实施方案中，所述gp96蛋白提取自小鼠离体胎盘组织。17、在某些实施方案中，所述融合蛋白包含如seq id no:4所示的氨基酸序列，或由其组成。此处所示序列在其n端不包含起始密码子编码的甲硫氨酸。本领域技术人员理解，所述融合蛋白也可以包含在其n端包含起始密码子编码的甲硫氨酸的上述氨基酸序列，或由其组成。18、在某些实施方案中，所述gp96蛋白或其变体或融合蛋白还可包含另外的蛋白标签、靶向部分或其任意组合。19、在本文中，蛋白标签是本领域熟知的，其实例包括但不限于his、flag、gst、mbp、ha、myc、gfp或生物素，并且本领域技术人员已知如何根据期望目的(例如，纯化、检测或示踪)选择合适的蛋白标签。20、在本文中，术语“靶向部分”是指，能够将本发明的gp96蛋白或其变体或融合蛋白引导至所期望的位置的结构域，所述期望的位置可以为特定的组织、特定的细胞、甚至特定的细胞内位置(例如细胞核、核糖体、内质网、溶酶体或过氧化物酶体)。本领域技术人员已知如何通过期望位置的特性设计相应的靶向结构域。在某些实施方案中，所述靶向部分包括配体、受体或抗体或其结合结构域。21、在某些实施方案中，所述药物用于以下的一项或多项：22、(1)诱导调节性t细胞的产生；23、(2)抑制th17细胞的产生；24、(3)诱导th2细胞的数量；25、(4)抑制th1细胞的产生；26、(5)降低运动神经细胞活性氧和氧化应激；27、(6)降低sod1的表达；28、(7)恢复运动神经细胞线粒体的功能异常；29、(8)减少细胞中变性的蛋白；30、(9)降低肌酸激酶含量和/或抑制肌酸激酶活性，上调肌酸水平；31、(10)促进神经生长因子的产生；32、(11)促进病变的运动神经轴突的生长；33、(12)提高轴突运输能力。34、在某些实施方案中，所述药物用于以下的一项或多项：35、(1)在受试者中诱导调节性t细胞的产生；36、(2)在受试者中抑制th17细胞的产生；37、(3)在受试者中诱导th2细胞的数量；38、(4)在受试者中抑制th1细胞的产生；39、(5)在受试者中降低运动神经细胞活性氧和氧化应激；40、(6)在受试者中降低sod1的表达；41、(7)在受试者中恢复运动神经细胞线粒体的功能异常；42、(8)在受试者中减少细胞中变性的蛋白；43、(9)在受试者中降低肌酸激酶含量和/或抑制肌酸激酶活性，上调肌酸水平；44、(10)在受试者中促进神经生长因子的产生；45、(11)在受试者中促进病变的运动神经轴突的生长；46、(12)在受试者中提高轴突运输能力。47、在某些实施方案中，所述受试者为人或小鼠。在某些优选的实施方案中，所述受试者是人。48、在某些实施方案中，所述调节性t细胞为cd4+cd25+foxp3+调节性t细胞。在某些实施方案中，所述th17为产生il-17(白介素17)的cd4+ t细胞。在某些实施方案中，所述th1为产生ifn-γ(γ干扰素)、tnfβ(β肿瘤坏死因子)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、il-2、淋巴毒素(lt)的cd4+ t细胞。在某些实施方案中，所述th2为产生il4、il5、il-9、il-10和il-13的cd4+ t细胞。49、融合蛋白及其治疗用途50、在另一方面，本技术还提供了融合蛋白，其包含gp96蛋白或其变体，以及，与所述gp96蛋白或其变体连接的另外的肽；51、其中，所述变体与所述gp96蛋白相比，具有至少90％，例如至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％的序列同一性；或者，具有一个或几个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或9个)氨基酸的置换(优选保守置换)、添加或缺失，且保留了所述gp96蛋白的功能；52、所述另外的肽任选地通过接头(例如，肽接头)连接于所述gp96蛋白或其变体的n端和/或c端；并且，所述另外的肽具有如(ggggs)n1c(ggggs)n2所示的结构，其中，所述n1和n2各自独立地选自：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10。在某些实施方案中，所述n1和n2不同时为0。53、在某些实施方案中，所述另外的肽具有如seq id no:6所示的氨基酸序列。54、在某些实施方案中，所述gp96蛋白包含如seq id no:1或2所示的氨基酸序列，或由其组成。此处所示序列在其n端不包含起始密码子编码的甲硫氨酸。本领域技术人员理解，所述gp96蛋白也可以包含在其n端包含起始密码子编码的甲硫氨酸的上述氨基酸序列，或由其组成。55、在某些实施方案中，所述融合蛋白包含如seq id no:4所示的氨基酸序列，或由其组成。此处所示序列在其n端不包含起始密码子编码的甲硫氨酸。本领域技术人员理解，所述gp96蛋白也可以包含在其n端包含起始密码子编码的甲硫氨酸的上述氨基酸序列，或由其组成。56、在某些实施方案中，所述融合蛋白还可包含另外的蛋白标签、靶向部分或其任意组合。57、在本文中，蛋白标签是本领域熟知的，其实例包括但不限于his、flag、gst、mbp、ha、myc、gfp或生物素，并且本领域技术人员已知如何根据期望目的(例如，纯化、检测或示踪)选择合适的蛋白标签。58、在本文中，术语“靶向部分”是指，能够将本发明的融合蛋白引导至所期望的位置的结构域，所述期望的位置可以为特定的组织、特定的细胞、甚至特定的细胞内位置(例如细胞核、核糖体、内质网、溶酶体或过氧化物酶体)。本领域技术人员已知如何通过期望位置的特性设计相应的靶向结构域。在某些实施方案中，所述靶向部分包括配体、受体或抗体或其结合结构域。59、本发明的融合蛋白不受其产生方式的限定，例如，其可以通过基因工程方法(重组技术)产生，也可以通过化学合成方法产生。60、在另一方面，本技术还提供了分离的核酸分子，其编码如上所述的融合蛋白。61、在另一方面，本技术还提供了载体，其包含如上所述的分离的核酸分子。在某些实施方案中，所述载体为克隆载体或表达载体(例如，昆虫细胞表达载体)。在某些实施方案中，本发明的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体，柯斯质粒等等。62、在另一方面，本技术还提供了宿主细胞，其包含如上所述的分离的核酸分子或载体。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞(例如sf9细胞)，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。63、易于理解，所述宿主细胞所包含的编码如上所述的分离的核酸分子或载体包含编码所述融合蛋白的核苷酸序列。64、在某些实施方案中，所述编码所述融合蛋白的核苷酸序列通过重组昆虫病毒表达载体导入所述宿主细胞。65、在某些实施方案中，所述编码所述融合蛋白的核苷酸序列通过重组昆虫病毒导入所述宿主细胞。在某些实施方案中，所述重组昆虫病毒是通过重组昆虫病毒表达载体在昆虫细胞中表达或传代得到的。66、在另一方面，本技术还提供了制备如上所述的融合蛋白的方法，其包括，在允许蛋白表达的条件下，培养如上所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述融合蛋白。67、在另一方面，本技术还提供了药物组合物，其包含如上所述的融合蛋白、分离的核酸分子、载体或宿主细胞，以及，药学上可接受的载体和/或赋形剂。68、本发明的药物组合物可以配制成医学领域已知的任何剂型，例如，片剂、丸剂、混悬剂、乳剂、溶液、凝胶剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、锭剂、栓剂、注射剂(包括注射液、冻干粉剂)等形式。在一些实施方案中，本发明的药物组合物可以配制成注射液或冻干粉剂。69、此外，本发明的融合蛋白、分离的核酸分子、载体或宿主细胞可以以单位剂量形式存在于药物组合物中，以便于施用。70、本发明的药物组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法来施用，包括但不限于，口服、口腔、舌下、眼球、局部、肠胃外、直肠、叶鞘内、内胞浆网槽内、腹股沟、膀胱内、局部(如，粉剂、药膏或滴剂)，或鼻腔途径。但是，对于许多治疗用途而言，优选的给药途径/方式是胃肠外给药(例如静脉注射，皮下注射，腹膜内注射，肌内注射)。技术人员应理解，给药途径和/或方式将根据预期目的而发生变化。在一个优选的实施方案中，本发明的药物组合物通过静脉输注或注射给予。71、本发明所提供的药物组合物可以单独使用或联合使用，也可以与另外的药学活性剂联合使用。这种另外的药学活性剂可以在施用本发明的药物组合物之前、同时或之后施用。72、在某些实施方案中，所述药物组合物任选地还包含另外的药学活性剂。73、在某些实施方案中，所述另外的药学活性剂为具有治疗肌萎缩侧索硬化的药物。74、在另一方面，本技术还提供了如上所述的融合蛋白，分离的核酸分子，载体，宿主细胞或药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在受试者中预防和/或治疗肌萎缩侧索硬化。75、在某些实施方案中，所述药物组合物用于以下的一项或多项：76、(1)诱导调节性t细胞的产生；77、(2)抑制th17细胞的产生；78、(3)诱导th2细胞的数量；79、(4)抑制th1细胞的产生；80、(5)降低运动神经细胞活性氧和氧化应激；81、(6)降低sod1的表达；82、(7)恢复运动神经细胞线粒体的功能异常；83、(8)减少细胞中变性的蛋白；84、(9)降低肌酸激酶含量和/或抑制肌酸激酶活性，上调肌酸水平；85、(10)促进神经生长因子的产生；86、(11)促进病变的运动神经轴突的生长；87、(12)提高轴突运输能力。88、在某些实施方案中，所述药物组合物用于以下的一项或多项：89、(1)在受试者中诱导调节性t细胞的产生；90、(2)在受试者中抑制th17细胞的产生；91、(3)在受试者中诱导th2细胞的数量；92、(4)在受试者中抑制th1细胞的产生；93、(5)在受试者中降低运动神经细胞活性氧和氧化应激；94、(6)在受试者中降低sod1的表达；95、(7)在受试者中恢复运动神经细胞线粒体的功能异常；96、(8)在受试者中减少细胞中变性的蛋白；97、(9)在受试者中降低肌酸激酶含量和/或抑制肌酸激酶活性，上调肌酸水平；98、(10)在受试者中促进神经生长因子的产生；99、(11)在受试者中促进病变的运动神经轴突的生长；100、(12)在受试者中提高轴突运输能力。101、在某些实施方案中，所述受试者为人或小鼠。在某些优选的实施方案中，所述受试者是人。102、在某些实施方案中，所述调节性t细胞为cd4+cd25+foxp3+调节性t细胞。在某些实施方案中，所述th17为产生il-17(白介素17)的cd4+ t细胞。在某些实施方案中，所述th1为产生ifn-γ(γ干扰素)、tnfβ(β肿瘤坏死因子)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、il-2、淋巴毒素(lt)的cd4+ t细胞。在某些实施方案中，所述th2为产生il4、il5、il-9、il-10和il-13的cd4+ t细胞。103、术语定义104、在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的病毒学、生物化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。105、当本文使用术语“例如”、“如”、“诸如”、“包括”、“包含”或其变体时，这些术语将不被认为是限制性术语，而将被解释为表示“但不限于”或“不限于”。106、除非本文另外指明或根据上下文明显矛盾，否则术语“一个”和“一种”以及“该”和类似指称物在描述本发明的上下文中(尤其在以下权利要求的上下文中)应被解释成覆盖单数和复数。107、如本文中所使用的，术语“gp96”又称为grp94，是位于细胞内质网膜上的热休克蛋白90家族中的一员。gp96蛋白由n端结构域(n末端atp结合结构域)、m结构域(带电中间结构域)以及c端结构域(c末端同源二聚结构域)组成。gp96是本领域技术人员公知的，其序列可参见各种公共数据库，例如ncbi genbank数据库登录号：aah66656.1。108、如本文中所使用的，当提及gp96蛋白的氨基酸序列时，其使用seq id no：1所示的序列来进行描述。然而，本领域技术人员理解，在gp96的氨基酸序列中，可天然产生或人工引入突变或变异，而不影响其生物学功能。因此，在本发明中，术语“gp96”及其类似表述应包括所有此类序列，包括例如seq id no：1所示的序列以及其天然或人工的变体。并且，当描述gp96蛋白的序列片段时，其不仅包括seq id no：1的序列片段，还包括其天然或人工变体中的相应序列片段。109、如本文中所使用的，术语“分离的”或“被分离的”指的是，从天然状态下经人工手段获得的。如果自然界中出现某一种“分离”的物质或成分，那么可能是其所处的天然环境发生了改变，或从天然环境下分离出该物质，或二者情况均有发生。例如，某一活体动物体内天然存在某种未被分离的多聚核苷酸或多肽，而从这种天然状态下分离出来的高纯度的相同的多聚核苷酸或多肽即称之为分离的。术语“分离的”或“被分离的”不排除混有人工或合成的物质，也不排除存在不影响物质活性的其它不纯物质。110、如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac)；噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。111、如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如s2果蝇细胞或sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，cho细胞，cos细胞，nso细胞，hela细胞，bhk细胞，hek 293细胞或人细胞等的动物细胞。112、如本文中所使用的，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个dna分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如，如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60％的同一性。例如，dna序列ctgact和caggtt共有50％的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如align程序(dnastar,inc.)方便地进行的needleman等人(1970)j.mol.biol.48：443-453的方法来实现。还可使用已整合入align程序(版本2.0)的e.meyers和w.miller(comput.applbiosci.，4:11-17(1988))的算法，使用pam120权重残基表(weight residue table)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外，可使用已整合入gcg软件包(可在www.gcg.com上获得)的gap程序中的needleman和wunsch(j moibiol.48:444-453(1970))算法，使用blossum 62矩阵或pam250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gap weight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。113、如本文中所使用的，术语“保守置换”意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的预期性质的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和pcr介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的(参见，例如，brummell等人，biochem.32:1180-1187(1993)；kobayashi等人protein eng.12(10):879-884(1999)；和burks等人proc.natlacad.set usa94:412-417(1997)，其通过引用并入本文)。114、本文涉及的二十个常规氨基酸的编写遵循常规用法。参见例如，immunology-asynthesis(2nd edition,e.s.golub and d.r.gren,eds.,sinauer associates,sunderland,mass.(1991))，其以引用的方式并入本文中。在本发明中，术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用a或ala表示。115、如本文中所使用的，术语“受试者”包括但不限于各种动物，特别是哺乳动物，例如人或小鼠。在某些实施方案中，所述受试者(例如人或小鼠)患有肌萎缩侧索硬化。116、如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指，在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如remington's pharmaceutical sciences.edited by gennaro ar,19thed.pennsylvania:mack publishing company,1995)，并且包括但不限于：ph调节剂，表面活性剂，离子强度增强剂，维持渗透压的试剂，延迟吸收的试剂，稀释剂，佐剂，防腐剂，稳定剂等。例如，ph调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液。表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如tween-80。离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。维持渗透压的试剂包括但不限于糖、nacl及其类似物。延迟吸收的试剂包括但不限于单硬脂酸盐和明胶。稀释剂包括但不限于水，水性缓冲液(如缓冲盐水)，醇和多元醇(如甘油)等。佐剂包括但不限于铝佐剂(例如氢氧化铝)，弗氏佐剂(例如完全弗氏佐剂)等。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如硫柳汞，2-苯氧乙醇，对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。稳定剂具有本领域技术人员通常理解的含义，其能够稳定药物中的活性成分的期望活性(例如对psd-95泛素化的抑制活性)，包括但不限于谷氨酸钠，明胶，spga，糖类(如山梨醇，甘露醇，淀粉，蔗糖，乳糖，葡聚糖，或葡萄糖)，氨基酸(如谷氨酸，甘氨酸)，蛋白质(如干燥乳清，白蛋白或酪蛋白)或其降解产物(如乳白蛋白水解物)等。117、如本文中所使用的，术语“治疗”是指，治疗或治愈疾病(例如肌萎缩侧索硬化)，延缓疾病的一种或多种症状的发作，和/或延缓疾病的发展。118、如本文中所使用的，术语“有效量”是指，可以有效实现预期目的的量。例如，治疗有效量可以是有效地或足以治疗或治愈疾病(例如肌萎缩侧索硬化)，延缓疾病的一种或多种症状的发作和/或延缓疾病发展的量。这样的有效量可以由本领域技术人员或医生容易地确定，并且可以与预期目的、受试者的一般健康状况、年龄、性别、体重、待治疗的疾病的严重程度、并发症、施用方式等相关。这样的有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。119、发明的有益效果120、本发明的gp96蛋白或由其构建的融合蛋白具有降低运动神经细胞活性氧和氧化应激，减少细胞中变性的蛋白的含量，诱导调节性t细胞的产生，降低th17细胞数量，下调th1并上调th2免疫，抑制神经炎症，恢复运动神经细胞线粒体的功能异常，抑制肌酸激酶活性并上调肌酸水平，促进神经生长因子的产生，促进病变的运动神经轴突的生长，和/或，提高轴突运输能力的作用，可有效用于肌萎缩侧索硬化的治疗，在治疗系肌萎缩侧索硬化或缓解肌萎缩侧索硬化的症状方面具有重要的应用价值。121、下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。当前第1页12当前第1页12