1.本发明属于医药领域，尤其涉及一种银花泌炎灵片在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
背景技术：
：：2.溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，uc)是结肠和直肠非特异性炎症性疾病，最初表现有血性腹泻、腹痛、血便、体重减轻等，之后可能发展为癌症。uc可引起上皮细胞溃疡坏死、免疫细胞浸润以及粘膜屏障渗透性素乱，也称为“肠漏综合征”。流行病学统计显示，uc发病率明显抬升，在发病年龄上呈现出年轻化趋势。3.目前，uc的治疗包括外科治疗和药物治疗。常规药物治疗包括皮质类固醇氨基水杨酸、免疫抑制剂和肾上腺糖皮质激素类。氨基水杨酸类药物中最常用的是5-氨基水杨酸，是治疗uc的一线类药物，能有效缓解轻度和中度uc患者症状。柳氮磺吡啶是由5-氨基水杨酸(活性部分)和磺胺吡啶通过偶氢键连接而成，作为炎症性肠病的主要治疗药物，已有几十年的历史。该药物在胃和小肠中吸收不良，由回肠末端和结肠厌氧菌群释放的偶氮还原酶裂解偶氢键从而发挥活性，免疫抑制剂类药物有氨甲嘌呤、硫代嘌呤类似物和6-疏基嘌呤，但其疗效存在争议；丙酸倍氯米松是糖皮质激素类药物的一种，成为研究热点之一，有较好的耐受性。但现有药物治疗uc目标主要是诱导并维持临床症状缓解以及肠道黏膜愈合，防治并发症，改善生存质量，带来的毒副作用是主要的临床问题，如呕吐、恶心、头痛和疲劳，并且在治疗后常复发，增加结肠癌变风险。近年来，中药在uc的治疗中开始崭露头角，以其独特的多靶点作用、良好的耐受性、低毒性和价格优势受到越来越多的关注。4.传统中医没有uc的病名，但“水痢”、“久痢”、“泻痢”等与此病相似。《素问玄机原病式》有“诸泻痢皆属于湿，湿热甚于肠胃之内，而肠胃怫郁，以致气液不得宣通而成”。《景岳全书》曰：“若饮食失节，起居不时，以致脾胃受伤，则水反为湿，谷反为滞，精华之气不能输化，乃致合污下降，而泻痢作矣。”脾胃不能健运，则湿浊内生，蕴结日久则化毒，毒浊壅滞则伤肠络，肠络失和，血败肉腐而下痢赤白。湿浊内蕴又可致肠道气滞血瘀，血瘀壅滞肠中，血败肉腐成疡，乃致脓血便。湿邪毒浊留滞大肠，是uc患者腹痛、黏液脓血便之重要病机。浊毒内蕴、瘀湿内困造成肠道热毒湿浊壅滞、气滞血瘀，致肠络受损、血败肉腐，引起uc活动期病变，可同时见有发热、腹痛或腹胀、排黏液脓血便，或有小腹、肛门灼热，口干口苦，舌红苔白或黄腻，脉滑或滑数，治宜选用解毒化浊、活血祛湿之法。研究显示，清热解毒、祛湿化浊类药对黏膜炎性反应可起到抑制作用，显著改善uc肠道充血水肿、糜烂、溃疡，临床上，解毒清热、化浊祛湿药常选用椿皮、薏苡仁、马齿苋、黄芩、黄连、苦参等。5.银花泌炎灵片(yinhuamiyanlingtablet，ymt)国家药品标准，标准编号：ybz04512004，处方组成包括金银花100、半枝莲50、萹蓄30、瞿麦30、石韦30、川木通15、车前子30、淡竹叶30、桑寄生50、灯心草10等10味中药。处方中，金银花与半枝莲为君，清热解毒，且重用金银花；萹蓄、瞿麦、石韦、川木通、车前子为臣，利湿通淋；淡竹叶和灯心草为佐，清心除烦利尿；桑寄生为使，补益肝肾，扶正以祛邪。ymt为薄膜衣片，除去薄膜衣后显深褐色，味微苦、涩。具有清热解毒、利湿通淋之功效，可抑制大肠埃希菌、葡萄球菌、奇异变形杆菌等细菌，对抗细菌内毒素。用于治疗急性肾盂肾炎、急性膀胱炎等下焦湿热证，症见：发热恶寒、尿频急、尿道刺痛或尿血、腰痛等。临床研究证明了ymt治疗急性肾孟肾炎、急性膀胱炎、尿道炎、细菌性前列腺炎、下焦湿热等泌尿系统感染疾病的有效性和安全性。技术实现要素：6.本发明提供一种银花泌炎灵片在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。7.本发明采取的技术方案是：银花泌炎灵片在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。8.在银花泌炎灵片的干预下，溃疡性结肠炎模型小鼠体内炎症因子和髓过氧化物酶的水平均显著降低。9.在银花泌炎灵片的干预下，疾病活动指数和结肠组织损伤也得到有效改善或恢复。10.本发明的优点是：传统中医认为溃疡性结肠炎系因脾胃不能健运，湿浊内生，蕴结日久则化毒，毒浊壅滞则伤肠络，治宜选用解毒化浊、活血祛湿之法。银花泌炎灵片清热解毒，利水渗湿，可及时显著改善溃疡性结肠炎活动期肠道充血水肿、糜烂、溃疡症状，缩短活动期的病程，减低患者的痛苦。11.经现代医学研究证明，银花泌炎灵片具有抑菌、抗炎、镇痛的功能，经动物实验研究，证明其对溃疡性结肠炎模型小鼠具有良好的治疗作用，可显著降低溃疡性结肠炎模型小鼠炎症因子和髓过氧化物酶的平均水平，有效改善疾病活动指数，使结肠组织损伤得到及时恢复。附图说明12.图1是各组小鼠每日体重变化图；13.图2是各组小鼠每日dai评分图；14.图3是各组小鼠的结肠长度图；15.图4是各组小鼠的脾脏系数图；16.图5是各组小鼠血清和结肠中tnf-α的水平图；17.图6是各组小鼠血清和结肠中il-6的水平图；18.图7是各组小鼠血清和结肠中inos的水平图；19.图8是各组小鼠血清和结肠中mpo的水平图；20.图9是各组结肠切片典型样本的h&e染色照片；21.图10是各组结肠切片典型样本的组织病理学评分图。具体实施方式22.银花泌炎灵片在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。23.在银花泌炎灵片的干预下，溃疡性结肠炎模型小鼠体内炎症因子和髓过氧化物酶的水平均显著降低。24.在银花泌炎灵片的干预下，疾病活动指数和结肠组织损伤也得到有效改善或恢复。25.下边通过实验例来进一步说明本发明的效果。26.实验例、银花泌炎灵片对溃疡性结肠炎模型小鼠的干预作用27.1.1实验材料28.1.1.1药物与试剂，供试品和主要试剂见表1.1。29.表1.1药物与试剂[0030][0031]1.1.2仪器设备[0032]主要仪器见表1.2。[0033]表1.2实验仪器[0034][0035]1.1.3实验动物[0036]雄性balb/c小鼠60只，雌雄各半，体重：25±2g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，批号：20210519。动物实验按照国家卫生研究院《动物伦理学使用指南》进行。在22～24℃、50～60％相对湿度和12h:12h明暗循环环境下适应性喂养5天后，随机分为6组：空白对照组(control)、uc模型组(model)、肠炎宁片阳性药组(0.5g/kg，ct)、ymt低剂量组(0.6g/kg，ymtl)、ymt中剂量组(1.2g/kg，ymtm)和ymt高剂量组(2.4g/kg，ymth)，每组10只，雌雄各5只。[0037]1.1.4主要溶液配制[0038]3.5％dss溶液：称取3.5gdss粉剂溶于100ml双蒸水，使其充分溶解至溶液透明。[0039]银花泌炎灵片供试品溶液：取银花泌炎灵片，研磨成粉末，混合后，分别称取3.0g、6.0g、12.0g，各加入100ml双蒸水，超声10分钟，配制成混悬液，使其终浓度分别为30mg/ml、60mg/ml、120mg/ml。[0040]肠炎宁片对照品溶液：取肠炎宁片，研磨成粉末，称取粉末2.5g，加入100ml双蒸水，超声10分钟，配制成混悬液，使其终浓度为25mg/ml。[0041]以上溶液储存于4℃冰箱，备用。[0042]1.2实验方法[0043]1.2.1造模及给药[0044]空白对照组给予蒸馏水，其余各组自由饮用3.5％dss溶液7天以诱导uc模型。造模第4天到第10天，空白对照组和模型组小鼠灌胃给予蒸馏水，其他组灌胃给予相应药物。第9天禁食12h后，在第10天处死小鼠。实验期间，每日仔细观察并详细记录实验小鼠的基本情况，包括活动情况、精神状态、皮毛的光泽度、大便性状等。将饮用3.5％dss溶液后出现腹泻、半稀便、肉眼血便或大便隐血，任一症状作为建立实验模型成功与否的标志。[0045]1.2.2体重和疾病活动指数评分[0046]在实验过程中，每天称量所有小鼠的体重，并观察小鼠的一般行为状态，每天对小鼠的体重变化、粪便状态和便血情况进行记录，并根据表1.3中所示标准进行评分，根据公式：疾病活动指数(diseaseactivityindex，dai)＝(体重减轻评分+粪便状态评分+便血情况评分)/3，计算出每天每组小鼠的平均dai评分。[0047]表1.3疾病活动指数评分标准[0048][0049]1.2.3样本的收集及预处理[0050]血清样本：实验第10天将小鼠禁食12h，通过眼球取血获得全血样本，4℃条件下静置30分钟后以4000r/min低温离心10分钟，收集血清样本，-80℃储存，备用。[0051]结肠样本：采血后颈椎脱臼处死所有小鼠，分离结肠组织，用刻度尺测量结肠长度后将结肠纵向剖开，用生理盐水冲洗结肠，截取远端结肠(1cm)4％多聚甲醛固定用于组织病理学检查，剩余的结肠样本-80℃储存，备用。[0052]脾脏样本：分离脾脏组织，精确称量后，根据以下公式计算脾脏系数：脾脏系数＝脾脏质量(mg)/小鼠体重(g)[0053]1.2.4血清炎性因子检测[0054]取各组小鼠血清样品，按照elisa试剂盒说明书分别检测各组小鼠血清样品中il-6、tnf-α、inos含量。[0055]1.2.5结肠组织炎性因子和抗氧化参数检测[0056]取各组小鼠结肠组织，在4℃下用预冷的磷酸盐缓冲液(pbs)匀浆成10％的组织匀浆，13000r/min离心10分钟，收集上清液。采用bca蛋白浓度检测试剂盒测定各组小鼠结肠组织匀浆蛋白浓度，按il-6、tnf-α、inos和mpo检测试剂盒说明书进行各组小鼠结肠组织il-6、tnf-α、inos和mpo含量。[0057]1.2.6病理组织学评分[0058]处死小鼠后，迅速剪开腹腔，取肛门至盲肠末端的整个肠段，在预冷无菌磷酸盐缓冲液中清洗，去除血迹，将结肠自然伸展开，平铺到白纸上，记录结肠长度。同时查看小鼠腹腔内的其他器官是否出现病变。取距肛门1cm的结肠组织，用4％多聚甲醛固定24h后，依次对结肠组织进行石蜡包埋、切片、脱蜡、水化、h&e染色，在光学显微镜下观察切片并拍照。结肠组织病理学评分按sykes法评分，标准见表1.4。[0059]表1.4结肠切片组织病理学评分标准[0060][0061]1.2.7数据统计与分析[0062]使用spss软件对实验结果进行分析，所有实验数据表示为平均值±sd。采用anova结合dunnett-t检验对不同组别之间进行比较分析，p《0.05则具有统计学意义。[0063]1.3实验结果[0064]1.3.1对小鼠体重和疾病活动指数评分的影响[0065]各组小鼠每日体重变化和dai评分如图1、2所示，与control组相比，###p《0.001；与model组相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。[0066]体重在整个实验过程中，control组的小鼠行动和饮食正常，体重上升；model组小鼠随着造模时间的增长逐渐食欲减退和体重减轻；各给药组小鼠在经银花泌炎灵片和肠炎宁片干预后，体重下降速率明显减缓，第10天各给药组小鼠体重均大于模型组(p《0.05，p《0.01，p《0.001)。其中，ct组的体重变化最接近于control组，ymth组、ymtm组、ymtl组的体重变化与剂量的增加呈正相关。[0067]dai评分实验过程中，control组小鼠大便干燥，无肛门出血，dai评分基本不变；而model组小鼠随着dss诱导时间的延长逐渐出现稀便、血便，dai评分也随着造模时间延长而增加；从实验的第5天开始就可看出各给药组小鼠的dai分数增长速率较model组明显减缓，实验第10天，各给药组dai评分均显著低于model组(p《0.01，p《0.001)，其中ct组评分最低，ymth组次之。ymth组、ymtm组、ymtl组的dai评分与剂量的增加呈负相关。[0068]以上结果表明，银花泌炎灵片能呈剂量依赖性地缓解小鼠体重下降以及降低dai评分，有效改善uc模型小鼠的症状。[0069]1.3.2对小鼠结肠长度与脾脏系数的影响[0070]各组小鼠结肠长度和脾脏系数如图3、图4所示，(与空白对照组相比，###p《0.001；与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。[0071]可以看出，与control组相比，model组结肠长度明显缩短(p《0.001)，说明小鼠结肠组织受损；而口服银花泌炎灵或肠炎宁后，可有效减轻结肠损伤程度，ymth组结肠长度显著长于model组(p《0.01)。此外，model组小鼠的脾脏系数较之control组显著升高(p《0.001)，说明小鼠体内产生了炎症反应；而各给药组的脾脏系数均较model组显著降低(p《0.001)，其中以ct组效果最好，ymth次之。综上可见银花泌炎灵可减轻uc模型小鼠的结肠损伤和炎症反应。[0072]1.3.3对炎症因子及mpo含量的影响[0073]血清和结肠中炎症因子及mpo水平如图5、6、7、8所示，(与control组相比，###p《0.001；与model组相比，*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。[0074]model组血清中tnf-α、inos和il-6的水平均显著高于control组(p《0.001)，药物干预后上述三种炎症因子的水平均受到不同程度的抑制。与model组比较，ct和ymt的干预使得小鼠血清中的三种炎症因子水平均明显降低(p《0.001)，inos和il-6含量的上升也受到抑制(p《0.05)。在结肠中ymt和ct对tnf-α、inos和il-6的影响与在血清中相似。此外，uc模型小鼠结肠中mpo水平明显升高，经ct、ymth、ymtm和ymtl干预后mpo水平较model组明显降低(p《0.001)。从上述结果可以看出ymt可呈剂量依赖性地降低uc模型小鼠的tnf-α、inos、il-6和mpo水平。[0075]1.3.4小鼠结肠组织病理学检查[0076]各组结肠切片典型样本的h&e染色照片及组织病理学评分，分别如图9、10所示。结果显示，control组可见正常完整的结肠结构和黏膜上皮；但model组结肠黏膜损伤严重，黏膜下区水肿，杯状细胞缺失，炎症细胞浸润，隐窝缺失；与model组比较，各给药组结肠组织症状均不同程度上有所缓解，炎症细胞浸润减少，上皮损伤恢复，结肠组织相对完整。[0077]1.4小结[0078]采用dss诱导法建立了uc小鼠模型，首次评价了银花泌炎灵片对uc小鼠的保护作用。在银花泌炎灵片的干预下，uc模型小鼠体内炎症因子和髓过氧化物酶的水平均显著降低，疾病活动指数和结肠组织损伤也得到有效改善或恢复；银花泌炎灵片的作用效果呈现明显的剂量依赖性。以上结果初步证明了银花泌炎灵片具有较好的抗uc作用。当前第1页12当前第1页12