一种细胞外基质生物膜的透明处理方法与流程

本发明属于动物源性植入性医疗器械，具体涉及种细胞外基质生物膜的透明处理方法。

背景技术：

1、组织、器官的丧失或功能障碍是人类所面临的重要健康问题。近年来，随着组织工程和再生医学的发展，组织、器官缺损的修复治疗技术取得了诸多的进步。细胞外基质生物膜是当前外科治疗组织缺损的重要手段之一，相比于人工合成的创伤敷料，细胞外基质生物膜具有更接近原有组织形态和内部微观结构的特点，故具有更优的促进和诱导组织再生，提高缺损创面愈合质量等效果。

2、细胞外基质生物膜有多种不同的组织来源，例如真皮、小肠、心包膜等，亦可来源于不同的物种，例如人、猪、牛等。但异种来源的材料本身含有大量细胞、遗传物质、脂肪，直接使用时会引发免疫排斥反应，细胞外基质生物膜需要经过脱脂、脱细胞去抗原、灭活病毒等处理，最大限度地保留细胞外基质成分和结构的同时，提高生物安全性。

3、尽管目前对细胞外基质生物膜的脱细胞、脱脂、消毒、灭活病毒等处理方式的研究已经较为成熟，也有多种细胞外基质生物膜产品上市，如脱细胞真皮基质、羊膜、人工皮肤等。然而，当前临床使用的细胞外基质产品均为非透明或非均匀分布透明的膜状材料，并未对其透明度进行标准要求和控制。

4、但在实际的临床治疗中，医生需定期在术后观察创面的愈合质量，测量愈合面积等参数。因此需要通过特定的创面组织染色后使用精密光学仪器观察，无法用肉眼在短时间内进行观察测量。非透明细胞外基质膜材料在术后的观察过程存在操作时间长，术后感染等风险和问题。

5、因此，开发一种细胞外基质生物膜的透明处理方法，提供透明度良好的细胞外基质膜材料，具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种细胞外基质生物膜的透明处理方法，从而提供一种透明度良好，利于临床进行创面观察的细胞外基质生物膜材料。

2、本发明提供了一种细胞外基质生物膜的透明处理方法，包括如下步骤：

3、(1)取动物膜组织，放置于前置处理剂中进行透明预处理，预处理时间为2～10h，预处理温度为4～30℃；所述前置处理剂是注射用水、无水乙醇或乙醇水溶液，所述乙醇水溶液中乙醇含量不低于50％v/v；

4、(2)预处理后的膜组织进行冷冻干燥；

5、所述动物膜组织是经过清洗、病毒灭活、脱脂和脱细胞处理的动物膜组织。

6、进一步地，步骤(1)所述预处理时间为5h，预处理温度为25℃。

7、进一步地，上述动物膜组织的厚度小于0.5mm，优选为0.001～0.5mm，前置处理剂为50％v/v乙醇水溶液或注射用水；

8、或，所述动物膜组织的厚度为0.5mm～1mm，前置处理剂为乙醇含量高于50％v/v的乙醇水溶液或无水乙醇；优选为乙醇含量不低于95％v/v的乙醇溶液或无水乙醇。

9、进一步地，步骤(2)所述的冷冻干燥程序为：

10、预冻-60～-30℃，保温4～14h；

11、第一阶段升温至-40～-10℃，保温1～8h；

12、第二阶段升温至-25～-10℃，保温1～6h；

13、第三阶段升温至-20～0℃，保温1～6h；

14、第四阶段升温至-15～5℃，保温0.5～3h；

15、第五阶段升温至0～20℃，保温0.5～3h；

16、第六阶段升温至5～25℃，保温0.5～3h；

17、第七阶段升温至10～35℃，保温6～12h。

18、进一步地，上述动物膜组织为动物的心包膜、膀胱基质膜、真皮基质、腹膜或小肠粘膜下层组织。

19、进一步地，上述动物是猪，优选为黑猪。

20、更进一步地，上述黑猪为莱芜黑猪、太湖黑猪、藏黑猪或皖南黑猪。

21、本发明还提供了一种脱细胞、脱脂肪且灭活病毒的细胞外基质生物膜，所述生物膜是心包膜，它的透明度满足如下要求：透光率不低于25％，优选为不低于40％；

22、或，所述生物膜是真皮基质，它的透明度满足如下要求：透光率不低于25％，优选为不低于50％；

23、或，所述生物膜是小肠粘膜下层，它的透明度满足如下要求：透光率不低于40％，优选为不低于80％。

24、进一步地，上述生物膜是按照权利要求1～7任一项所述的处理方法处理得到的透明细胞外基质生物膜。

25、本发明还提供了上述的细胞外基质生物膜在制备创伤敷料、生物工程支架中的应用。

26、本发明的有益效果：本发明方法能够有效提高细胞外基质生物膜的透明度，同时保留细胞外基质的固有理化生物特性，作为创伤敷料或组织工程支架，在促进和诱导组织再生、提高缺损创面愈合质量的同时，便于医生对组织缺损愈合情况进行清楚准确的观察判断，降低二次感染的风险，具有很好的临床使用价值。

27、本发明权利要求书中的术语“透光率”指按照gb/t 2410-2008标准测定并计算的透光率。

28、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

29、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种细胞外基质生物膜的透明处理方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，步骤(1)所述预处理时间为5h，预处理温度为25℃。

3.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述动物膜组织的厚度小于0.5mm，前置处理剂为50％v/v乙醇水溶液或注射用水；

4.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，步骤(2)所述的冷冻干燥程序为：

5.如权利要求1～4任一项所述的处理方法，其特征在于，所述动物膜组织为动物的心包膜、膀胱基质膜、真皮基质、腹膜或小肠粘膜下层组织。

6.如权利要求1～4任一项所述的处理方法，其特征在于，所述动物是猪，优选为黑猪。

7.如权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述黑猪为莱芜黑猪、太湖黑猪、藏黑猪或皖南黑猪。

8.一种脱细胞、脱脂肪且灭活病毒的细胞外基质生物膜，其特征在于，所述生物膜是心包膜，它的透明度满足如下要求：透光率不低于25％，优选为不低于40％；

9.如权利要求8所述的细胞外基质生物膜，其特征在于，它是按照权利要求1～7任一项所述的处理方法处理得到的透明细胞外基质生物膜。

10.权利要求8或9所述的细胞外基质生物膜在制备创伤敷料、生物工程支架中的应用。

技术总结
本发明提供了一种细胞外基质生物膜的透明处理方法，包括将动物膜组织先放置于前置处理剂中进行透明预处理，然后进行冷冻干燥的步骤。所述前置处理剂是注射用水、无水乙醇或乙醇水溶液，所述乙醇水溶液中乙醇含量不低于50％v/v。本发明方法能够有效提高细胞外基质生物膜的透明度，同时保留细胞外基质的固有理化生物特性，作为创伤敷料或组织工程支架，在促进和诱导组织再生、提高缺损创面愈合质量的同时，便于医生对组织缺损愈合情况进行清楚准确的观察判断，降低二次感染的风险，具有很好的临床使用价值。

技术研发人员：李怡,游晓亮
受保护的技术使用者：成都爱有加科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19