1.本发明涉及纳米银应用技术领域，具体涉及纳米银在抑制猪链球菌中的应用。
背景技术：
2.猪链球菌是人畜共患传染病猪链球菌病的病原体，根据其荚膜多糖抗原的不同，可分为35个血清型，其中1、2、7、9型血清型较为常见，并以2型毒力最强，传染范围最广。在集约化养殖中对猪群的健康造成重大威胁，人和猪感染后引起严重的脑、关节炎、心内膜炎等多种疾病，发病后的死亡率高。生产上常使用抗生素进行预防和治疗。
3.然而随着多年来的抗生素的使用以及细菌耐药性的传递等原因，近年来猪链球菌的耐药情况严峻，导致常用抗生素对耐药菌的抑制效果差，甚至无效，因此，减少抗生素的滥用的同时寻找有效抗菌的抗生素替代物对猪链球菌的防控具有重要意义。
4.纳米银是近年来新兴的新型抗菌材料，因其广谱、高效的抗菌作用而受到广泛的关注，但纳米银在抑制猪链球菌上的应用未见报道。
5.因此，发明纳米银在抑制猪链球菌中的应用来解决上述问题很有必要。
技术实现要素：
6.本发明的目的是提供纳米银在抑制猪链球菌中的应用，通过突破性地将纳米银应用于抑制猪链球菌，以及制备猪链球菌杀菌剂，其广谱、高效的抗菌作用能够有效灭活2型和9型猪链球菌(streptococcus suis)，以解决技术中的上述不足之处。
7.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
8.纳米银在抑制猪链球菌中的应用。
9.作为本发明的优选方案，所述纳米银用于抑制猪链球菌中临床常见的2型和9型猪链球菌(streptococcus suis)。
10.作为本发明的优选方案，所述纳米银用于抑制猪链球菌的生长。
11.作为本发明的优选方案，所述纳米银用于抑制猪链球菌生物膜的形成。
12.作为本发明的优选方案，所述纳米银造成猪链球菌氧化应激。
13.作为本发明的优选方案，所述纳米银用于减少猪链球菌胞内蛋白质。
14.纳米银在制备猪链球菌杀菌剂中的应用。
15.作为本发明的优选方案，所述猪链球菌杀菌剂用于抑制和灭活临床中常见的2型和9型猪链球菌(streptococcus suis)。
16.作为本发明的优选方案，所述纳米银设置为单质银，且单质银的粒径范围设置为1-100nm。
17.在上述技术方案中，本发明提供的技术效果和优点：
18.通过突破性地将纳米银应用于抑制猪链球菌，以及制备猪链球菌杀菌剂，发现了纳米银新的用途，并且产生了预料不到的技术效果，即纳米银具有广谱和高效的抗菌作用能够有效灭活2型和9型猪链球菌(streptococcus suis)，减少抗生素以及细菌耐药性的滥
用导致的猪链球菌的耐药情况，安全且有效的遏制猪链球菌的传播。
具体实施方式
19.为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将对本发明作进一步的详细介绍。
20.本发明提供了如下方案：
21.纳米银在抑制猪链球菌中的应用，经研究发现纳米银可以有效抑制猪链球菌的生长。
22.进一步的，在上述技术方案中，纳米银用于抑制猪链球菌中临床常见的2型和9型猪链球菌(streptococcus suis)，对于猪链球菌中的2型和9型猪链球菌(streptococcus suis)的抑制效果最为明显。
23.进一步的，在上述技术方案中，纳米银用于抑制猪链球菌的生长。
24.进一步的，在上述技术方案中，纳米银用于抑制猪链球菌生物膜的形成。
25.进一步的，在上述技术方案中，纳米银造成猪链球菌氧化应激。
26.进一步的，在上述技术方案中，纳米银用于减少猪链球菌胞内蛋白质。
27.纳米银在制备猪链球菌杀菌剂中的应用。
28.进一步的，在上述技术方案中，猪链球菌杀菌剂用于抑制和灭活临床中常见的2型和9型猪链球菌(streptococcus suis)。
29.进一步的，在上述技术方案中，纳米银设置为单质银，且单质银的粒径范围设置为1-100nm，粒径在1-100nm的单质银可通过物理、化学、生物等方法制备，经研究发现其具有广谱的抗菌作用。
30.对于纳米银在抑制猪链球菌生长中的应用，本技术通过如下多个实施例，适当改进工艺参数实现研究验证：
31.实施例1：不同浓度纳米银对猪链球菌生长的抑制研究
32.挑取单菌落接种于tsb中，37℃恒温摇床培养8h，采用平板计数法计算细菌浓度，菌液暂存于4℃冰箱，将猪链球菌接种于含tsb的96孔板中，加入不同浓度的agnps溶液，使细菌的终浓度为1.0
×
106cfu/ml，实验组将纳米银从100μg/ml到0.098μg/ml进行二倍倍比稀释，对照组不加纳米银，将板置于37℃的恒温箱中培养24h，然后在600nm的波长下测定各孔的吸光度，并根据公式计算抑制率，其公式如下：
[0033][0034]
实施例2：不同浓度纳米银对猪链球菌生物膜形成的影响研究
[0035]
在96孔板上，各待测菌液分别加入纳米银溶液，使纳米银终浓度分别为50、25、12.5、6、25μg/ml，对照组为不加纳米银的菌液，另外设置加纳米银的空白培养基为空白对照，于37℃静置培养24h后进行结晶紫染色。弃掉培养基，每孔加入300μl的pbs清洗3次，倒置排水后，加入150μl甲醇固定20min后弃液，倒置干燥，随后加入150μl结晶紫溶液染色15min，吸出液体后洗涤至没有污渍，干燥后加入150μl乙酸(33％)洗脱30min以上，用紫外分光光度计测定od570nm值，并根据公式计算抑制率。
[0036][0037]
实施例3：纳米银导致猪链球菌的氧化应激研究
[0038]
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二氯荧光素二乙酸酯(h2dcf-da)对细菌细胞进行染色来检测ros的产生。将h2dcf-da用pbs稀释为1mm。在细菌生长的对数期加入纳米银溶液，以加入等量pbs的菌液为对照，作用12h后用pbs洗涤，重悬于pbs中，加入1mm的h2dcf-da后避光孵育30min，收集细菌，洗涤重悬，将菌悬液滴在载玻片上，室温自然干燥。使用荧光显微镜观察。
[0039]
实施例4纳米银对猪链球菌胞内蛋白质的影响研究
[0040]
把孵育至对数生长阶段的猪链球菌按1％(v/v)加入tsb中，37℃恒温培养12h，将纳米银加入样品，对照组加入等量pbs，作用5h后，将样品在4℃、4000rpm低温离心10min，取得的菌体后悬浮于适量无菌水，将5x sds-peage loading buffer和样品以1：4的比例混合后用沸水浴8min，最后把混合物以9000rmp离心5min，将获得的上清进行sds-peage电泳，结束后用考马斯亮蓝染色40min，脱色液多次脱色至蛋白条带清晰可见，在日光灯板上斤进行呈像拍摄。
[0041]
经上述实施例研究发现纳米银能够抑制猪链球菌的生长、能够抑制猪链球菌生物膜的形成、能够造成猪链球菌氧化应激和能够减少猪链球菌胞内蛋白质。
[0042]
即可有效抑制2型和9型猪链球菌(streptococcus suis)的生长，可以用于制备猪链球菌生长抑制剂。
[0043]
以上只通过说明的方式描述了本发明的某些示范性实施例，毋庸置疑，对于本领域的普通技术人员，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。因此，上述描述在本质上是说明性的，不应理解为对本发明权利要求保护范围的限制。