复方丹参输卵管灌注液制剂、制备方法及其应用与流程

1.本发明涉及妇科介入医药技术领域，特别是涉及一种复方丹参输卵管灌注液制剂、制备方法及其应用。


背景技术：

2.输卵管炎在不孕妇女中较常见，主要由病原体感染引起，病原体包括葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、淋球菌、变形杆菌、肺炎球菌、厌氧菌、衣原体等。最容易发生感染的时间是产后或月经后，输卵管炎性阻塞已成为女性不孕的主要原因，占女性不孕的30％～40％。丹参注射液用于介入灌注治疗阻塞性输卵管炎已取得较好的疗效。
3.但是，介入通液后再黏连发生率仍较高。针对再通术后易发生输卵管再闭塞和宫内妊娠率不高，采用中药丹参注射液向输卵管腔内灌注，配合中医药辨证论治，术后1年输卵管通畅率91.5％，术后2年再粘连率达到了12.5％。另外，丹参注射液抑菌效果欠佳。


技术实现要素：

4.基于此，本发明的目的在于，提供一种复方丹参输卵管灌注液制剂、制备方法及其应用，该复方丹参输卵管灌注液制剂应用于输卵管介入再通术后用药，能够防止输卵管介入再通术后输卵管再粘连、受孕率低的问题，在预防输卵管术后再粘连、促进组织修复和改善输卵管的微循环方面具有明显的效果。
5.本发明提供一种复方丹参输卵管灌注液制剂，复方丹参输卵管灌注液制剂由丹参、枯矾组成。
6.进一步地，丹参为650-850g，枯矾为20-40g。
7.进一步地，丹参为750g，枯矾为30g。
8.本发明还提供一种上述复方丹参输卵管灌注液制剂的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：s1、取丹参洗净，加水蒸煮三次，合并三次的煎煮液，并过滤减压浓缩至750ml；s2、浓缩液用乙醇沉淀处理两次，过滤并将滤液浓缩至250ml，加入蒸馏水稀释至400ml，冷藏放置至少24小时，再过滤，在加入蒸馏水稀释至900ml；s3、加入枯矾，溶解、过滤并加蒸馏水稀释至1000ml，调节溶液的ph值至6.8，搅匀、灌封、灭菌，即可制得复方丹参输卵管灌注液制剂。
9.进一步地，在步骤s1中，丹参洗净后，第一次加水并蒸煮2小时以获得第一煎煮液，将第一煎煮液盛出后进行第二次加水并蒸煮1.5小时以获得第二煎煮液，将第二煎煮液盛出后进行第三次加水并蒸煮1.5小时以获得第三煎煮液；然后，合并第一煎煮液、第二煎煮液、第三煎煮液，并对混合后的煎煮液过滤减压浓缩至750ml煎煮液。
10.进一步地，在步骤s2中，向750ml煎煮液加入乙醇以获得第一混合溶液，第一混合溶液的乙醇含量为75％，并冷藏放置至少24小时；然后向第一混合溶液加入乙醇以获得第二混合溶液，第二混合溶液的乙醇含量为85％，并冷藏放置至少24小时；待乙醇沉淀处理后，过滤并将滤液浓缩至250ml，加入蒸馏水稀释至400ml，冷藏放置至少24小时，再过滤，在
加入蒸馏水稀释至900ml。
11.进一步地，在步骤s3中，加入枯矾，溶解、过滤并加蒸馏水稀释至1000ml，用10％氢氧化钠溶液调节ph值至6.8。
12.进一步地，在步骤s3中，采用100℃流通蒸汽进行30分钟的灭菌。
13.本发明还提供上述复方丹参输卵管灌注液制剂在制备治疗输卵管炎药物的应用。
14.相对于现有技术，本发明所述的复方丹参输卵管灌注液制剂、制备方法及其应用具有如下优点：
15.1、复方丹参输卵管灌注液制剂应用于输卵管介入再通术后用药，能够防止输卵管介入再通术后输卵管再粘连、受孕率低的问题，在预防输卵管术后再粘连、促进组织修复和改善输卵管的微循环方面具有明显的效果；
16.2、复方丹参输卵管灌注液制剂无毒、无抗原性，组织相容性良好，体内可降解，可通过介入再通术注入，且剂量可控，操作简单；
17.3、枯矾及丹参两者可起到互补作用及协同作用；去除引起输卵管阻塞的炎性分泌物、改善微循环、活血化瘀、防止通液后再次阻塞、加快输卵管内组织收复及解决介入手术可能造成的输卵管损伤，并具有广谱抑菌等作用；
18.4、复方丹参输卵管灌注液中的两种药物成分丹参和枯矾充分混合后，相容性和稳定性良好，能改善输卵管内环境及微循环；
19.5、本制剂采用的制备工艺、最佳的配比及辅料应用，使得复方丹参输卵管灌注液的稳定性进一步增强，复方丹参输卵管灌注液的疗效显著提高；本制剂的抑菌效果进一步增强；本制剂在去除坏死的输卵管上皮细胞及炎症组织的同时，最大限度的保护了正常输卵管上皮细胞的形态及功能；
20.6、可发挥丹参注射液局部用药的效果，体现两种药物充分混合后注入输卵管的疗效；再次，本制剂的两种有效成分在保护正常输卵管上皮细胞、修复受损输卵管上皮细胞、阻止组织粘连、具有广谱抑菌作用等功能上可起到互补作用及协同作用；
21.7、复方丹参输卵管灌注液制剂还可用于人体的天然管腔、腹腔等部位，可用于防止各种手术引起的粘连，促进组织再生及修复，减少局部炎症，恢复组织功能，应用范围广，前景好。
22.为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。
附图说明
23.图1为cdtp对兔输卵管刺激性病理切片图；
24.图2为复方丹参输卵管灌注液hplc色谱图；
具体实施方式
25.一种复方丹参输卵管灌注液制剂，其可应用于输卵管介入再通术后用药，能够防止输卵管介入再通术后输卵管再粘连、受孕率低的问题，在预防输卵管术后再粘连、促进组织修复和改善输卵管的微循环方面具有明显的效果。该由丹参与枯矾组成。其中，丹参为650-850g，枯矾为20-40g。最优地，该复方丹参输卵管灌注液制剂的配方具体采用丹参750g、枯矾30g。
26.一种复方丹参输卵管灌注液制剂的制备方法，其包括如下步骤：
27.取丹参洗净，加水蒸煮三次，合并三次的煎煮液，并过滤减压浓缩至750ml；
28.浓缩液用乙醇沉淀处理两次，过滤并将滤液浓缩至250ml，加入蒸馏水稀释至400ml，冷藏放置至少24小时，再过滤，在加入蒸馏水稀释至900ml；
29.加入枯矾，溶解、过滤并加蒸馏水稀释至1000ml，用10％氢氧化钠溶液调节ph值至6.8，搅匀、灌封、灭菌，即可制得复方丹参输卵管灌注液制剂。
30.以复方丹参输卵管灌注液制剂采用丹参750g、枯矾30g为例，该复方丹参输卵管灌注液制剂的制作方法包括如下步骤：
31.取750g丹参洗净，第一次加水并蒸煮2小时以获得第一煎煮液，将第一煎煮液盛出后进行第二次加水并蒸煮1.5小时以获得第二煎煮液，将第二煎煮液盛出后进行第三次加水并蒸煮1.5小时以获得第三煎煮液；然后，合并第一煎煮液、第二煎煮液、第三煎煮液，并对混合后的煎煮液过滤减压浓缩至750ml煎煮液；
32.向750ml煎煮液加入乙醇以获得第一混合溶液，第一混合溶液的乙醇含量为75％，并冷藏放置至少24小时；然后向第一混合溶液加入乙醇以获得第二混合溶液，第二混合溶液的乙醇含量为85％，并冷藏放置至少24小时；待乙醇沉淀处理后，过滤并将滤液浓缩至250ml，加入蒸馏水稀释至400ml，冷藏放置至少24小时，再过滤，在加入蒸馏水稀释至900ml；
33.向900ml溶液加入30g枯矾，溶解、过滤，然后加蒸馏水稀释至1000ml，并且用10％氢氧化钠溶液将1000ml溶液的ph值调节至6.8，接着搅匀、灌封，并且采用100℃流通蒸汽进行30分钟的灭菌，即可制得复方丹参输卵管灌注液制剂。
34.实施例1：复方丹参输卵管灌注液储入相容性和稳定性观察试验
35.表1：将配置好的样品分别在3～5℃的冰箱、20～25℃、33℃、37℃的恒温箱中和室温放置观察其相容性和稳定性，结果如下：
[0036][0037]
结论：丹参与枯矾水溶液相容性良好，复方丹参输卵管灌注液较稳定。
[0038]
实施例2：复方丹参输卵管灌注液(cdtp)对新西兰兔输卵管黏膜影响的评价实验
[0039]
(1)目的：考察复方丹参输卵管灌注液(cdtp)对新西兰兔输卵管黏膜的影响。
[0040]
(2)方法：对性成熟新西兰兔手术剖腹，向输卵管内注射复方丹参灌注液，24h后作病理切片检查影响程度，以生理盐水作空白对照，并以不经手术的新西兰兔为阴性对照。
[0041]
(3)结果：参见图1，图1为cdtp对兔输卵管刺激性病理切片图，其中，a为阴性组，b为空白组，c为给药组。复方丹参输卵管灌注液对输卵管黏膜有一定的影响，使黏膜上皮细胞不同程度地脱落，并伴有散在的中性粒细胞。空白对照和阴性对照显示输卵管黏膜均正常完整。
[0042]
(4)结论：cdtp对新西兰兔输卵管黏膜具有一定的影响。该考察cdtp对新西兰兔输卵管黏膜的影响操作方法可行、可靠，亦间接反映了cdtp对输卵管炎性阻塞的祛腐作用，为输卵管阻塞后再通提供了实验室依据。
[0043]
实施例3：复方丹参输卵管灌注液治疗阻塞性输卵管的量效关系初步研究
[0044]
(1)目的：观察复方丹参输卵管灌注液对阻塞性输卵管再通疗效，探讨其最佳用量及量效关系。
[0045]
(2)方法：50例输卵管阻塞患者，采用随机对照临床研究，用同轴导管行输卵管介入再通术，再通成功后对照组20例灌注丹参注射液(丹参注射液5ml+生理盐水5ml)，研究组a、b、c组不同组别各10例，灌注不同剂量的复方丹参输卵管灌注液(a组：复方丹参输卵管灌注液2ml+生理盐水8ml；b组：复方丹参输卵管灌注液5ml+生理盐水5ml；c组：复方丹参输卵管灌注液8ml+生理盐水2ml)，在患者术后第12个月行输卵管造影观察通畅率，随访1年内受孕率。
[0046]
(3)结果：研究组b组的再通成功率最高，对照组次之，然后是研究组a组和研究组c组。术后12个月随访输卵管通畅率、通而不畅率及再闭塞率，研究组通而不畅率和再闭塞率较对照组低，其中研究组b组最低，差异有统计学意义(p＜0.05)。
[0047]
表2各组患者的一般情况
[0048]
组别例数年龄(岁)输卵管阻塞条数再通成功率[条(％)]研究组a组1029.4
±
6.02523(92)研究组b组1030.4
±
6.32423(95.8)研究组c组1028.0
±
4.92018(90.0)对照组2028.3
±
6.13331(93.9)
[0049]
由表2可知，对照组的再通成功率为93.9％，研究组a组为92.0％，研究组b组为95.8％，研究组c组为90.0％，以研究组b的再通成功率最高，对照组次之，然后是研究组a组和研究组c组。研究组b与对照组丹参浓度一致，再通率较高，说明丹参浓度过高和过低会影响再通成功率。
[0050]
表3术后12个月随访输卵管通畅率、通而不畅率及再闭塞率[条(％)]
[0051][0052]
由表3可知，术后12个月随访输卵管通畅率、通而不畅率及再闭塞率，研究组通而不畅率和再闭塞率较对照组低，其中研究组中b组最低。说明低浓度枯矾的加入对通而不畅
率和再闭塞率有一定程度的降低，其中以研究组b浓度降低最明显。
[0053]
(4)结论：丹参浓度过高和过低会影响再通成功率，复方丹参输卵管灌注液能显著降低再粘连导致的通而不畅率及再闭塞率。
[0054]
实施例4：复方丹参输卵管灌注液中枯矾含量的测定
[0055]
(1)目的：对自制复方丹参输卵管灌注液中枯矾的含量进行测定。
[0056]
(2)方法：用edta络合滴定法对枯矾进行定量分析。
[0057]
(3)结果：3批样品中含量均大于0.5mg/ml，平均回收率为98.16％，rsd为0.21％。
[0058]
(4)结论:本法操作简便,重复性好，能有效地控制本品的质量。
[0059]
表4枯矾重复性试验
[0060][0061]
表5枯矾加样回收试验
[0062][0063]
表6 3批样品的枯矾含量测定结果
[0064]
批号第一批第二批第三批含量(mg/ml)0.5550.5430.563
[0065]
实施例5：高效液相色谱法测定复方丹参输卵管灌注液中丹参素含量
[0066]
(1)目的：建立高效液相色谱法测定复方丹参输卵管灌注液中丹参素含量。
[0067]
(2)方法：色谱柱:inertsil c18柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相：甲醇－1％冰醋酸，梯度洗脱；流速：1.0ml/min；检测波长：280nm。
[0068]
(3)结果：参见图2，图2为复方丹参输卵管灌注液hplc色谱图，其中，图中a为丹参素对照品溶液，图中b为供试品溶液，图中c为丹参阴性对照溶液，图中1为丹参素。丹参素检测浓度在8.5～42.5μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(0.99 9)；平均加样回收率为98.36％，rsd为1.02％。
[0069]
(4)结论：该方法简单、灵敏、准确，可用于复方丹参输卵管灌注液的质量控制。
[0070]
表7梯度洗脱时间程序
[0071]
时间(min)a(％)b(％)0109051090102080153070
[0072]
表8加样回收率实验结果(n＝6)
[0073][0074]
表9含量测定结果(n＝6)
[0075]
批号第一批第二批第三批平均含量(g/ml)181.44159.40184.42
[0076]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。