具有美容功效的皮肤外用剂，及其原料、制备和应用的制作方法

1.本公开属于化妆品技术领域，尤其涉及一种具有美容功效的皮肤外用剂，及其原料、制备和应用。


背景技术：

2.纳米药物是一类新的可促进药物经皮渗透的药物制剂，其核心技术是纳米载体技术。运用纳米载体技术，将药物负载于粒径为10～1000nm的纳米载体中进行经皮递送，可有效增加药物透过生物膜的能力，调节药物的释放速度，显著提高药物的生物利用度，同时还可改善难溶性药物的溶解性和水分散性，提高光敏性或热敏性药物的稳定性，在皮肤疾病治疗、护肤、美容等领域具有良好的应用前景。
3.纳米载体的具体形式一般包括有纳米囊泡、脂质体、微乳/纳米乳、纳米结晶、脂质液晶、聚合物纳米胶束以及无机纳米载体等。目前纳米载体常用的有脂质体和纳米乳，但脂质体和纳米乳作为载体包覆疏水性药物时多存在包封率低，稳定性不足，导致药物突释等问题。聚合物纳米胶束作为一种新型的纳米载体，具有诸多优点，如聚合物结构与胶束性能可调、可增溶疏水性药物、提高药物稳定性等。但传统的石油基聚合物胶束纳米载体的生物相容性较差，不可降解，聚合物壁材选择单一，对疏水性药物的包载能力虽然有所提升，但提升程度有限，且药物释放效果和透皮效果均不理想。
4.因此，本领域亟需研发一种稳定性佳，药量包封率和药物透皮量均较高，药物可缓慢释放，且可生物降解的纳米药物。


技术实现要素：

5.本公开所要解决的技术问题是克服现有技术中纳米载体对疏水性药物包封率和装载率较低，稳定性不足，导致药物突释，生物相容性差，药物透皮效果不理想，不可降解等缺陷，而提供一种具有美容功效的皮肤外用剂，及其原料、制备和应用。本公开采用具有生物相容性的两亲性嵌段共聚物，在溶剂中通过透析法自组装形成纳米胶束。相比于目前常用的纳米载体(脂质体和纳米乳)，本公开制得的纳米组合物具有更高的稳定性和药物包载能力，且药物透皮效果和缓释效果理想。相比于石油基聚合物，本公开所采用的两亲性嵌段共聚物具有理想的生物相容性，易被降解。
6.本公开采用以下技术方案解决上述技术问题：
7.本公开提供一种纳米组合物，包括由两亲性嵌段共聚物包载疏水性药物形成的纳米胶束；所述两亲性嵌段共聚物和所述疏水性药物的质量比为1：(0.5～4)；
8.其中，所述两亲性嵌段共聚物为经疏水改性的亲水性多糖；所述疏水改性过程中使用的疏水改性剂包括疏水性酯类改性剂和/或疏水性聚酯类改性剂。
9.一些实施例中，所述两亲性嵌段共聚物和所述疏水性药物的质量比较佳地为1：(0.5～2)，更佳地为1：(1～2)。
10.一些实施例中，所述纳米组合物的平均粒径一般可为100～200nm，较佳地为100～
150nm。
11.一些实施例中，所述亲水性多糖可包括羟丙基-β-环糊精和/或壳聚糖。其中，所述羟丙基-β-环糊精中羟基的取代度为14。
12.一些实施例中，所述疏水性药物可为化妆品领域具有美容功效的活性成分，一般可包括美白活性成分、抗衰老活性成分、抗炎活性成分和保护皮肤屏障活性成分中至少一种。
13.一些实施例中，所述疏水性药物可包括直链型疏水性药物和/或含苯环疏水性药物。
14.其中，所述直链型疏水性药物可包括视黄醇、角鲨烷和脱羧肌肽中至少一种。
15.其中，所述含苯环疏水性药物可包括含单苯环疏水性药物和/或含多苯环疏水性药物。所述含单苯环疏水性药物可包括生育酚、4-丁基间苯二酚和水杨酸甲酯中至少一种。所述含多苯环疏水性药物可包括光甘草定和/或苯乙基间苯二酚。
16.一些实施例中，所述疏水性酯类改性剂可包括对硝基氯甲酸苄酯。
17.一些实施例中，所述疏水性聚酯类改性剂可包括聚己内酯和/或聚乳酸。
18.其中，所述聚己内酯的聚合度可为2～6。
19.其中，所述聚乳酸的聚合度可为2～6。
20.一较佳实施例中，当所述疏水改性剂为所述对硝基氯甲酸苄酯时，所述两亲性嵌段共聚物为对硝基氯甲酸苄酯改性亲水性多糖，所述疏水性药物为含苯环疏水性药物，更佳地为含多苯环疏水性药物。研发过程中发现的，当所述两亲性嵌段共聚物中疏水改性剂为对硝基氯甲酸苄酯时，利于包载含苯环疏水性药物，更利于包载含多苯环疏水性药物。
21.一更佳实施例中，所述两亲性嵌段共聚物包括所述对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和/或对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖时，所述疏水性药物包括含多苯环疏水性药物。
22.一较佳实施例中，当所述疏水性改性剂为所述对硝基氯甲酸苄酯时，所述两亲性嵌段共聚物的制备方法包括如下步骤：在惰性气氛和溶剂中，所述亲水性多糖、所述对硝基氯甲酸苄酯和连接物在催化剂a和缩合剂作用下反应，制得对硝基氯甲酸苄酯改性亲水性多糖。根据本领域技术人员所知，所述反应包括酯化反应和酰胺化反应。
23.其中，所述溶剂可包括本领域常规使用的n,n-二甲基甲酰胺。
24.其中，所述连接物可为端基至少包括一个氨基和一个羧基的化合物，较佳地包括4-氨基丁酸、5-氨基戊酸和β-氨基丙酸中至少一种，更佳地包括4-氨基丁酸。
25.其中，所述缩合剂可包括二环己基碳二亚胺、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和二异丙基碳二亚胺中至少一种，较佳地包括二环己基碳二亚胺。
26.其中，所述催化剂a可包括4-二甲氨基吡啶。
27.其中，所述反应的温度可为25～50℃，例如30℃。
28.其中，所述反应的时间可为24～72h，例如48h。
29.其中，所述反应结束后还可进一步包括透析和/或干燥的操作。所述透析时透析袋的截留分子量mwco可为500～3500da，较佳地为1000da。所述透析的时间可为48～72h。所述干燥的方法可为本领域常规使用的冷冻干燥法。
30.其中，当所述亲水性多糖为所述羟丙基-β-环糊精时，所述羟丙基-β-环糊精和所
述对硝基氯甲酸苄酯的摩尔比可为1：(14.7～17.5)，例如1：16。
31.其中，当所述亲水性多糖为所述羟丙基-β-环糊精时，所述羟丙基-β-环糊精和所述连接物的摩尔比可为1：(14.7～17.5)，例如1：16。
32.其中，当所述亲水性多糖为所述羟丙基-β-环糊精时，所述羟丙基-β-环糊精和所述缩合剂的摩尔比可为1：(14.7～17.5)，例如1：15。
33.其中，当所述亲水性多糖为所述羟丙基-β-环糊精时，所述羟丙基-β-环糊精和所述催化剂a的摩尔比可为1：(1.47～1.75)，例如1：1.5。
34.其中，当所述亲水性多糖为所述壳聚糖时，所述壳聚糖和所述对硝基氯甲酸苄酯的摩尔比可为1：(10.5～16)。
35.其中，当所述亲水性多糖为所述壳聚糖时，所述壳聚糖和所述连接物的摩尔比可为1：(10.5～16)。
36.其中，当所述亲水性多糖为所述壳聚糖时，所述壳聚糖和所述缩合剂的摩尔比可为1：(10.5～15)。
37.其中，当所述亲水性多糖为所述壳聚糖时，所述壳聚糖和所述催化剂a的摩尔比可为1：(1.05～1.5)。
38.一较佳实施例中，当所述疏水性改性剂为所述聚己内酯时，所述两亲性嵌段共聚物的制备方法包括如下步骤：在惰性气氛中，所述亲水性多糖和ε-己内酯在催化剂b作用下发生开环聚合反应，制得所述聚己内酯改性亲水性多糖。
39.其中，所述催化剂b可包括辛酸亚锡。所述催化剂b占所述ε-己内酯的质量百分比可为0.5％～2％，较佳地为1％。
40.其中，所述开环聚合反应的温度可为100～150℃，例如130℃。
41.其中，所述开环聚合反应的时间可为6～24h，例如12h。
42.其中，所述开环聚合反应的操作后还可进一步包括提纯和/或干燥的操作。
43.所述提纯包括如下步骤：所述开环聚合反应后的物料中加入ch2cl2至所述开环聚合反应后的物料完全溶解，所述溶解后的物料滴加到正己烷中，制得提纯后的聚己内酯改性亲水性多糖。
44.其中，当所述亲水性多糖为羟丙基-β-环糊精时，所述羟丙基-β-环糊精和所述ε-己内酯的摩尔比可为1：(33.6～100.8)，例如1：50。
45.其中，当所述亲水性多糖为壳聚糖时，所述壳聚糖和所述ε-己内酯的摩尔比可为1：(48～144)，例如1：50。
46.一较佳实施例中，当所述疏水性改性剂为所述聚乳酸时，所述两亲性嵌段共聚物的制备方法包括如下步骤：在惰性气氛中，所述亲水性多糖和d,l-丙交酯在催化剂c作用下发生开环聚合反应，制得所述聚乳酸改性亲水性多糖。
47.其中，所述催化剂c可包括辛酸亚锡。所述催化剂c占所述d,l-丙交酯的质量百分比可为0.5％～2％，较佳地为1％。
48.其中，所述开环聚合反应的温度可为100～150℃，例如130℃。
49.其中，所述开环聚合反应的时间可为6～24h，例如12h。
50.其中，当所述亲水性多糖为羟丙基-β-环糊精时，所述羟丙基-β-环糊精和所述d,l-丙交酯的摩尔比可为1：(30～100.8)。
51.其中，当所述亲水性多糖为壳聚糖时，所述壳聚糖和所述d,l-丙交酯的摩尔比可为1：(30～144)。
52.一较佳实施例中，所述两亲性嵌段共聚物包括聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精、聚乳酸改性羟丙基-β-环糊精、对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精、聚己内酯改性壳聚糖、聚乳酸改性壳聚糖和对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖中至少一种，较佳地为对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和/或对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖。
53.其中，所述聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精的数均分子量可为3000～11000，例如6169。
54.其中，所述聚乳酸改性羟丙基-β-环糊精的数均分子量可为4000～14000，例如5407。
55.其中，所述对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精的数均分子量可为4000～14000，例如5332。
56.其中，所述聚己内酯改性壳聚糖的数均分子量可为5000～18000，例如6320。
57.其中，所述聚乳酸改性壳聚糖的数均分子量可为5000～23000，例如5558。
58.其中，所述对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖的数均分子量可为3000～8000，例如5483。
59.本公开还提供一种如上所述的纳米组合物的制备方法，包括如下步骤：
60.(1)所述两亲性嵌段共聚物、所述疏水性药物和溶剂混合，制得物料a；所述两亲性嵌段共聚物和所述疏水性药物的质量比为1：(0.5～4)；
61.(2)在搅拌的条件下，将所述物料a滴加到水中，超声，透析，制得所述纳米组合物。
62.步骤(1)中，所述溶剂可包括烷烃类溶剂、酮类溶剂、呋喃类溶剂、酰胺类溶剂、亚砜类溶剂和醇类溶剂中至少一种。
63.其中，所述烷烃类溶剂可包括二氯甲烷。
64.其中，所述酮类溶剂可包括丙酮。
65.其中，所述呋喃类溶剂可包括四氢呋喃。
66.其中，所述酰胺类溶剂可包括n,n
’‑
二甲基甲酰胺。
67.其中，所述亚砜类溶剂可包括二甲基亚砜。
68.其中，所述醇类溶剂可包括1,3-丙二醇、甘油、1,4-丁二醇、戊二醇、1,2-己二醇、乙二醇、季戊四醇、双丙甘醇和缩二乙二醇中至少一种，较佳地为1,3-丙二醇。
69.步骤(1)中，所述混合可按照本领域常规在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速可为30～300rpm，例如150rpm。所述搅拌的时间可为10～60min，例如30min。
70.步骤(1)中，所述两亲性嵌段共聚物和所述疏水性药物的总质量占所述溶剂的质量百分比可为1％～30％，较佳地为6％～15％，例如8％。
71.步骤(1)中，所述两亲性嵌段共聚物和所述疏水性药物的质量比较佳地为1：(0.5～2)，更佳地为1：(1～2)。
72.步骤(2)中，所述搅拌的转速可为30～300rpm。
73.步骤(2)中，所述滴加的速度可为0.5～2ml/min，较佳地为0.5～1ml/min。
74.步骤(2)中，所述超声的频率可为300～900w，较佳地为500～700w。
75.步骤(2)中，所述超声的时间可为10～60min，较佳地为30min。
76.步骤(2)中，所述透析采用的透析袋的截留分子量mwco可为500～5000da，较佳地为1000～3000da。
77.步骤(2)中，所述透析的介质可为水。
78.步骤(2)中，所述透析的时间可为24～72h，例如48h。
79.步骤(2)中，所述透析的操作后还可进一步包括过滤的操作。
80.其中，所述过滤采用的滤膜的孔径可为0.2～0.8μm。
81.本公开中，惰性气氛可包括本领域常规使用的氮气和/或氩气。
82.本公开还提供一种如上所述的纳米组合物的制备方法制得的纳米组合物。
83.本公开还提供一种如上所述的纳米组合物作为原料在制备皮肤外用剂中的应用。
84.本公开还提供一种具有美容功效的皮肤外用剂，其包括如上所述的纳米组合物。
85.如上所述的纳米组合物为制备所述具有美容功效的皮肤外用剂时的原料。
86.一些实施例中，所述纳米组合物可作为所述具有美容功效的皮肤外用剂中的美白活性成分、抗衰老活性成分、抗炎活性成分和保护皮肤屏障活性成分中至少一种。
87.一些实施例中，所述具有美容功效的皮肤外用剂中还可包括乳化稳定剂、表面活性剂、防冻剂和溶剂中至少一种。
88.其中，所述乳化稳定剂可包括本领域常规使用的乳化稳定剂，较佳地包括辛酸/癸酸甘油三酯和/或辛酸/癸酸甘油酯类聚甘油-10酯类。
89.其中，所述表面活性剂可包括本领域常规使用的表面活性剂，较佳地包括泊洛沙姆188、聚山梨醇酯-80和聚甘油-10月桂酸酯中至少一种。
90.其中，所述防冻剂可包括本领域常规使用的防冻剂，较佳地包括甘油。
91.其中，所述溶剂可包括本领域常规使用的溶剂，较佳地包括1,3-丙二醇、1,2-己二醇和水中至少一种。
92.其中，所述纳米组合物中所述疏水性药物与所述乳化稳定剂的重量份数比可为1：(0.2～10)，较佳地为1：1.5。
93.其中，所述纳米组合物中所述疏水性药物与所述表面活性剂的重量份数比可为1：(0.67～22.5)，较佳地为1：2.1。
94.其中，所述纳米组合物中所述疏水性药物与所述防冻剂的重量份数比可为1：(0.48～7.5)，较佳地为1：1.3。
95.其中，所述纳米组合物中所述疏水性药物与所述溶剂的重量份数比可为1：(1～40)，较佳地为1：7.4。
96.在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本公开各较佳实例。
97.本公开所用试剂和原料均市售可得。
98.本公开的积极进步效果在于：本公开采用具有生物相容性的两亲性嵌段共聚物，在溶剂中通过透析法自组装形成纳米胶束。相比于目前常用的纳米载体(脂质体和纳米乳)，本公开所采用的纳米组合物具有更高的稳定性和药物包载能力，药物缓释效果和透皮能力均更理想。相比于石油基聚合物，本公开所采用的两亲性嵌段共聚物具有更好的生物相容性。
附图说明
99.本公开可以通过参考下文中结合附图所给出的描述而得到更好的理解。所述附图连同下面的详细说明一起包含在本说明书中并且形成本说明书的一部分，而且用来进一步举例说明本公开的优选实施例和解释本公开的原理和优点。其中：
100.图1为实施例1、实施例2和实施例7制得纳米组合物的透射电子显微图；
101.图2为实施例1～6制得纳米组合物的药物累计释放率随时间变化对比图；
102.图3为实施例1、实施例7～9制得纳米组合物的药物累计释放率随时间变化对比图；
103.图4为实施例1、实施例11～13和对比例9制得纳米组合物的药物累计释放率随时间变化对比图；
104.图5为实施例1、对比例1～6制得纳米组合物的药物累计释放率随时间变化对比图；
105.图6为实施例1、对比例1、对比例7和对比例8中不包覆疏水性药物时的纳米载体对体外细胞毒性结果对比图；
106.图7为实施例1、对比例1、对比例7、对比例8制得纳米组合物和苯乙基间苯二酚的体外细胞毒性结果对比图。
具体实施方式
107.下面通过实施例的方式进一步说明本公开，但并不因此将本公开限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
108.下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
109.实施例1
110.(1)对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精的制备：将取代度为14的羟丙基-β-环糊精(1.375g，0.001mol)、对硝基氯甲酸苄酯(3.363g，0.016mol)、4-氨基丁酸(1.605g，0.016mol)、二环己基碳二亚胺(3.177g，0.015mol)和4-二甲氨基吡啶(0.188g，0.0015mol)加入到反应瓶中，再加入30ml无水的n,n-二甲基甲酰胺，在氮气保护下，反应体系保持30℃反应48h，反应结束后，将反应后物料转移至截留分子量mwco为1000da的透析袋中，用去离子水透析48h，透析袋内物料经冷冻干燥制得对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精，对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精的数均分子量mn为5332；
111.(2)将制得的1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和2g苯乙基间苯二酚加入20g的1,3-丙二醇中，磁力搅拌30min，搅拌的转速为150rpm，待对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和苯乙基间苯二酚完全溶解，制得物料a；在搅拌的条件下，将物料a滴加到77g去离子水中，搅拌的转速为150rpm，滴加速度为1ml/min，滴加结束后在500w的条件下超声30min，将超声后物料转移到截留分子量mwco为1000的透析袋中，在去离子水中透析48h，透析结束后，经孔径为0.45μm的有机滤膜过滤，制得纳米组合物。
112.实施例2
113.与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)制得聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精，将步骤(2)中对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为等量的聚己内酯改性羟丙基-β-环糊
精，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物；
114.其中，聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精的制备方法为：将取代度为14的羟丙基-β-环糊精(1.375g，0.001mol)和ε-己内酯(5.745g，0.05mol)依次加入到反应瓶中，加入辛酸亚锡(0.057g，0.14mmol)，在氮气保护下，反应体系保持130℃反应12h，反应结束后，将反应后物料中加入50ml的ch2cl2至物料完全溶解，并将溶解后物料滴加到500ml正己烷中提纯，收集固体沉淀，固体沉淀经干燥得到聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精，数均分子量mn为6169，聚己内酯聚合度为3。
115.实施例3
116.与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)制得聚乳酸改性羟丙基-β-环糊精，将步骤(2)中对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为等量的聚乳酸改性羟丙基-β-环糊精，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物；
117.其中，聚乳酸改性羟丙基-β-环糊精的制备方法为：将取代度为14的羟丙基-β-环糊精(1.375g，0.001mol)和d,l-丙交酯(4.84g，0.03mol)依次加入到反应瓶中，加入辛酸亚锡(0.048g，0.12mmol)，在氮气保护下，反应体系保持130℃反应12h，反应结束后，将反应后物料中加入50ml的ch2cl2至物料完全溶解，并将溶解后物料滴加到500ml正己烷中提纯，收集固体沉淀，固体沉淀经干燥得到聚乳酸改性羟丙基-β-环糊精，数均分子量mn为5407，聚乳酸聚合度为2。
118.实施例4
119.与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)制得对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖，将步骤(2)中对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为等量的对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物；
120.其中，对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖制备方法为：将壳聚糖(1.526g，0.001mol)、对硝基氯甲酸苄酯(3.363g，0.016mol)、4-氨基丁酸(1.605g，0.016mol)、二环己基碳二亚胺(3.177g，0.015mol)和4-二甲氨基吡啶(0.188g，0.0015mol)加入到反应瓶中，再加入30ml无水n,n-二甲基甲酰胺，在氮气保护下，反应体系保持30℃反应48h，反应结束后，将反应后物料转移至截留分子量mwco为1000da的透析袋中，用去离子水透析48h，透析袋内物料经冷冻干燥制得对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖，对硝基氯甲酸苄酯改性壳聚糖的数均分子量mn为5483。
121.实施例5
122.与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)制得聚己内酯改性壳聚糖，将步骤(2)中对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为等量的聚己内酯改性壳聚糖，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物；
123.其中，聚己内酯改性壳聚糖的制备方法为：将壳聚糖(1.526g，0.001mol)和ε-己内酯(5.745g，0.05mol)依次加入到反应瓶中，加入辛酸亚锡(0.057g，0.14mmol)，在氮气保护下，反应体系保持130℃反应12h，反应结束后，将反应后物料中加入50ml的ch2cl2至物料完全溶解，并将溶解后物料滴加到500ml正己烷中提纯，收集固体沉淀，固体沉淀经干燥得到聚己内酯改性壳聚糖，数均分子量mn为6320，聚己内酯聚合度为5。
124.实施例6
125.与实施例1相比，区别仅在于步骤(1)制得聚乳酸改性壳聚糖，将步骤(2)中对硝基
氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为等量的聚乳酸改性壳聚糖，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物；
126.其中，聚乳酸改性壳聚糖的制备方法为：将的壳聚糖(1.526g，0.001mol)和d,l-丙交酯(4.84g，0.03mol)依次加入到反应瓶中，加入的辛酸亚锡(0.048g，0.12mmol)，在氮气保护下，反应体系保持130℃反应12h，反应结束后，将反应后物料中加入50ml的ch2cl2至物料完全溶解，并将溶解后物料滴加到500ml正己烷中提纯，收集固体沉淀，固体沉淀经干燥得到聚乳酸改性壳聚糖，数均分子量mn为5558，聚乳酸聚合度为3。
127.实施例7
128.与实施例1相比区别仅在于将步骤(2)中疏水性药物苯乙基间苯二酚替换为等量的4-丁基间苯二酚，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物。
129.实施例8
130.与实施例1相比区别仅在于将步骤(2)中疏水性药物苯乙基间苯二酚替换为等量的生育酚，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物。
131.实施例9
132.与实施例1相比区别仅在于将步骤(2)中疏水性药物苯乙基间苯二酚替换为等量的水杨酸甲酯，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物。
133.实施例10
134.与实施例1相比区别仅在于将步骤(2)中疏水性药物苯乙基间苯二酚替换为等量的光甘草定，其他条件参数同实施例1，制得纳米组合物。
135.实施例11
136.与实施例1相比区别仅在于步骤(2)中，将1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和2g苯乙基间苯二酚替换为2g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和1g苯乙基间苯二酚，去离子水的用量为77g，其他条件参数不变，制得纳米组合物。
137.实施例12
138.与实施例1相比区别仅在于步骤(2)中，将2g苯乙基间苯二酚替换为1g苯乙基间苯二酚，去离子水的添加量为78g，其他条件参数不变，制得纳米组合物。
139.实施例13
140.与实施例1相比区别仅在于步骤(2)中，将2g苯乙基间苯二酚替换为4g苯乙基间苯二酚，去离子水的添加量为75g，其他条件参数不变，制得纳米组合物。
141.实施例14
142.(1)聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精的制备方法为：将取代度为14的羟丙基-β-环糊精(1.375g，0.001mol)和ε-己内酯(5.745g，0.05mol)依次加入到反应瓶中，加入辛酸亚锡(0.057g，0.14mmol)，在氮气保护下，反应体系保持130℃反应12h，反应结束后，将反应后物料中加入50ml的ch2cl2至物料完全溶解，并将溶解后物料滴加到500ml正己烷中提纯，收集固体沉淀，固体沉淀经干燥得到聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精，数均分子量mn为6169；
143.(2)将制得的1g聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精和2g苯乙基间苯二酚加入35g的二甲基亚砜中，磁力搅拌30min，搅拌的转速为150rpm，待聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精和苯乙基间苯二酚完全溶解，制得物料a；在搅拌的条件下，将物料a滴加到77g去离子水中，搅拌的转速为300rpm，滴加速度为0.5ml/min，滴加结束后在700w的条件下超声30min，将超声后
物料转移到截留分子量mwco为3000的透析袋中，在去离子水中透析48h，透析结束后，经孔径为0.45μm的有机滤膜过滤，制得纳米组合物。
144.研发过程中发现，本实施例制得的纳米组合物的功效与实施例2更为接近。
145.实施例15
146.(1)聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精的制备方法为：将取代度为14的羟丙基-β-环糊精(1.375g，0.001mol)和ε-己内酯(5.745g，0.05mol)依次加入到反应瓶中，加入辛酸亚锡(0.057g，0.14mmol)，在氮气保护下，反应体系保持130℃反应12h，反应结束后，将反应后物料中加入50ml的ch2cl2至物料完全溶解，并将溶解后物料滴加到500ml正己烷中提纯，收集固体沉淀，固体沉淀经干燥得到聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精，数均分子量mn为6169；
147.(2)将制得的1g聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精和2g脱羧肌肽加入50g的缩二乙二醇中，磁力搅拌30min，搅拌的转速为150rpm，待聚己内酯改性羟丙基-β-环糊精和脱羧肌肽完全溶解，制得物料a；在搅拌的条件下，将物料a滴加到77g去离子水中，搅拌的转速为150rpm，滴加速度为2ml/min，滴加结束后在300w的条件下超声30min，将超声后物料转移到截留分子量mwco为1000的透析袋中，在去离子水中透析48h，透析结束后，经孔径为0.45μm的有机滤膜过滤，制得纳米组合物。
148.研发过程中发现，本实施例制得的纳米组合物的功效与实施例8更为接近。
149.实施例16
150.(1)对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精的制备：将取代度为14的羟丙基-β-环糊精(1.375g，0.001mol)、对硝基氯甲酸苄酯(3.363g，0.016mol)、4-氨基丁酸(1.605g，0.016mol)、二环己基碳二亚胺(3.177g，0.015mol)和4-二甲氨基吡啶(0.188g，0.0015mol)加入到反应瓶中，再加入30ml无水n,n-二甲基甲酰胺，在氮气保护下，反应体系保持30℃反应48h，反应结束后，将反应后物料转移至截留分子量mwco为1000da的透析袋中，用去离子水透析48h，透析袋内物料经冷冻干燥制得对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精，对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精的数均分子量mn为5332；
151.(2)将制得的1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精、0.5g苯乙基间苯二酚、0.5g光甘草定、0.5g生育酚和0.5g脱酸肌肽加入20g的1,3-丙二醇中，磁力搅拌30min，搅拌的转速为150rpm，待完全溶解，制得物料a；在搅拌的条件下，将物料a滴加到77g去离子水中，搅拌的转速为150rpm，滴加速度为1ml/min，滴加结束后在500w的条件下超声30min，将超声后物料转移到截留分子量mwco为1000的透析袋中，在去离子水中透析48h，透析结束后，经孔径为0.45μm的有机滤膜过滤，制得纳米组合物。
152.研发过程中发现，本实施例制得的纳米组合物的功效与实施例7更为接近。
153.应用实施例1
154.具有美容功效的皮肤外用剂的制备方法包括如下步骤：
155.将制得的1.875g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和5g苯乙基间苯二酚、1g生育酚、1g光甘草定、0.5g脱酸肌肽加入20g的1,3-丙二醇中，磁力搅拌30min，搅拌的转速为150rpm，待对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和苯乙基间苯二酚完全溶解，制得物料a；在搅拌的条件下，将物料a滴加到47.625g去离子水中，搅拌的转速为150rpm，滴加速度为1ml/min，滴加结束后在500w的条件下超声30min，将超声后物料转移到截留分子量mwco为1000的透析袋中，在去离子水中透析48h，透析结束后，经孔径为0.45μm的有机滤膜
过滤，制得纳米组合物；
156.将上述制得的纳米组合物与6g辛酸/癸酸甘油三酯、5g的1,3-丙二醇、1g的1,2-己二醇、10g甘油、3g泊洛沙姆188、8g聚山梨醇酯-80、5g聚甘油-10月桂酸酯和5g辛酸/癸酸甘油酯类聚甘油-10酯类混合，制得具有美容功效的皮肤外用剂。
157.对比例1
158.与实施例1相比，区别仅在于将1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为1g的聚氨酯(石油基聚合物，不具备生物相容性)，其他条件参数不变，制备纳米组合物。
159.对比例2
160.与实施例1相比，区别仅在于将1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为1g的β-环糊精，其他条件参数不变，制备纳米组合物。
161.对比例3
162.与实施例1相比，区别仅在于将1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为1g的羟丙基-β-环糊精，其他条件参数不变，制备纳米组合物。
163.对比例4
164.与实施例1相比，区别仅在于将1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为1g的n-烷基化改性壳聚糖(n-烷基化改性壳聚糖的制备方法参考：n-烷基化壳聚糖/白芨多糖复合材料制备，郭亮亮等，应用化学，2020,49(03),632-637)，其他条件参数不变，制备纳米组合物。
165.对比例5(不进行透析操作)
166.与实施例1相比区别仅在于步骤(2)的操作不同，具体为：将1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和2g苯乙基间苯二酚加入20g的1,3-丙二醇中，磁力搅拌30min，搅拌的转速为150rpm，待对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精和苯乙基间苯二酚完全溶解，制得物料a；在搅拌的条件下，将物料a滴加到77g去离子水中，搅拌的转速为150rpm，滴加速度为1ml/min，滴加结束后在500w的条件下超声30min，超声后，经孔径为0.45μm的有机滤膜过滤，制得纳米组合物。
167.对比例6
168.与实施例1相比区别仅在于步骤(2)的操作不同，具体为：将1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精加入20g的1,3-丙二醇中，磁力搅拌30min，搅拌的转速为150rpm，待完全溶解，制得物料b；在搅拌的条件下，将物料b滴加到77g去离子水中，搅拌的转速为150rpm，滴加速度为1ml/min，滴加结束后在500w的条件下超声30min，将超声后物料转移到截留分子量mwco为1000的透析袋中，在去离子水中透析48h，制得空白聚合物胶束溶液；将2g的苯乙基间苯二酚加入10g丙酮中，待完全溶解后加入到空白聚合物胶束溶液中，在150rpm条件下磁力搅拌30min，待丙酮挥发后，得到纳米组合物。
169.对比例7
170.将0.9g的大豆卵磷脂、0.1g的胆固醇和2g的苯乙基间苯二酚加入至20g的1,3-丙二醇中，在60℃下磁力搅拌3h，搅拌转速为150rpm，得到混合溶液；将上述混合溶液通过旋转蒸发(40℃、转速为250rpm)除去1,3-丙二醇；待1,3-丙二醇被完全除去后，再加入到77g去离子水中，通过超声分散处理30min，超声功率为500w，超声后物料经孔径为0.45μm的有机相滤膜过滤，得包裹苯乙基间苯二酚的脂质体溶液。
171.对比例8
172.将2.0g的苯乙基间苯二酚与15.0g的辛酸/癸酸甘油三酯混合加热至85℃，至苯乙基间苯二酚完全溶解，然后再加入到20g的1,3-丙二醇中，得到油相组分；将63g去离子水通过蠕动泵滴入至上述油相组分中，滴加的速度为1ml/min，滴加完成后，在剪切速度为15000rpm的条件下进行高速剪切，再于1000bar条件下进行高压均质，高压均质循环处理5次，获得包载苯乙基间苯二酚的纳米乳。
173.对比例9
174.与实施例1相比区别仅在于步骤(2)中，将2g苯乙基间苯二酚替换为5g苯乙基间苯二酚，去离子水的添加量为74g，其他条件参数不变，制得纳米组合物。
175.效果实施例1
176.采用brookhaven instruments corporation,usa，型号为bi-200sm的动态光散射粒度分析仪(dls)表征上述实施例1～13和对比例1～9制得样品的粒径，结果见表1。
177.对实施例1～13和对比例1～9制得样品(待测液)进行包封率测定。
178.包封率测定方法：取200μl待测液，经超滤离心(9000rpm，30min)制得滤液，取5μl滤液经高效液相色谱仪(hplc，日本岛津)测定滤液中疏水性药物的含量，即待测液中未被包覆的游离疏水性药物的含量。另取上述待测液，加入甲醇溶液，按待测液：甲醇＝1:9(v/v)超声破乳30min，用0.45μm有机相滤膜过滤后，取5μl样品溶液经高效液相色谱仪(hplc，日本岛津)测定疏水性药物的含量，即待测液中疏水性药物的总含量。根据公式1计算纳米载体对疏水性药物的包封率(ee)。hplc系统所用分析柱为非极性c18柱，流动相为乙腈，流速为1.0ml/min，色谱柱柱温为30℃，每组实验均进行三次平行实验，实验结果取其算术平均值，结果见表1。
179.ee(％)＝(1-c1/c0)
×
100％(公式1)；
180.c1表示待测液中未被包覆的游离疏水性药物的浓度；c0表示经甲醇超声破乳后，待测液中疏水性药物的总浓度。
181.取实施例1、2和7的样品滴加在覆盖碳膜的200目透射电子显微镜用铜网上，室温静置至待溶剂完全挥发，采用hitachi,ltd,japan，型号为ht700的透射电子显微镜表征纳米载体的微观形貌，加速电压为120kv，对比图见图1，图1中(a)、(b)和(c)分别对应实施例1、2和7制得纳米组合物的透射电镜图。
182.表1
183.[0184][0185]
通过比较实施例1和对比例1的结果可知，相比于石油基聚合物，采用本公开实施例1具有生物相容性的两亲性嵌段共聚物对疏水性药物包裹得到的纳米胶束的粒径更小，且包封率更高。
[0186]
通过比较实施例1和对比例2～4的结果可知，以β-环糊精、羟丙基-β-环糊精和n-烷基化改性壳聚糖包裹疏水性药物时，得到纳米胶束的粒径较大，纳米胶束的包封率也较低。本公开实施例制得的纳米胶束的粒径可控制在100nm至200nm之间，且纳米胶束的包封率较高。
[0187]
通过比较实施例1和对比例5的结果可知，透析处理的步骤影响纳米胶束的粒径和包封率。未经过透析处理的纳米胶束的包封率仅有62.4％，明显降低。
[0188]
通过比较实施例1和对比例6的结果可知，制备方法对最终制备得到的纳米胶束的粒径和包封率影响较大。测试的结果表明，采用本公开的方法制备得到的纳米胶束的粒径较小，包封率较大，更适合用于化妆品领域。
[0189]
通过比较实施例1和对比例7、8的结果可知，纳米载体的种类对最终产品的粒径和包封率也有较大影响。本公开特定种类的两亲性嵌段共聚物与传统脂质体和纳米乳相比，当包裹视黄醇、角鲨烷、生育酚、脱羧肌肽、4-丁基间苯二酚、水杨酸甲酯、光甘草定和苯乙基间苯二酚等疏水性药物时，得到的产品的粒径更小，包封率更高。
[0190]
通过比较实施例1～6和对比例4的结果可知，两亲性嵌段共聚物的种类影响纳米胶束的粒径和包封率。测试结果表明，对硝基氯甲酸苄酯改性水溶性多糖对疏水性药物的
包覆能力更强，且制得的纳米胶束的粒径更小。对比例4虽然也对亲水性多糖进行了疏水改性，但其改性剂不属于疏水性酯类改性剂和疏水性聚酯类改性剂，制得纳米胶束对疏水性药物的包覆能力明显差于本公开实施例。
[0191]
通过比较实施例1、实施例7～10的结果可知，疏水性药物的种类对纳米胶束的粒径和包封率也有一定的影响。实施例1、7～8和10为对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精分别对苯乙基间苯二酚、4-丁基间苯二酚、生育酚、水杨酸甲酯和光甘草定的包载，结果表明实施例1和实施例10样品的包封率接近，且均较高(分别为94.3％和93.7％)，相应样品的粒径均较小(分别为100.2nm和118.4nm)。猜测可能是跟药物的分子结构有关，苯乙基间苯二酚和光甘草定为双苯环结构，4-丁基间苯二酚、生育酚和水杨酸甲酯为单苯环结构，对硝基氯甲酸苄酯改性亲水性多糖更易于包覆含双苯环结构的疏水性药物。研发过程中还发现，对硝基氯甲酸苄酯改性亲水性多糖对含苯环结构疏水性药物的包封率明显高于其对直链型结构疏水性药物的包封率。
[0192]
通过比较实施例1、实施例11～13和对比例9的结果可知，随着两亲性嵌段共聚物与疏水性药物的质量比增加时，制得的纳米胶束的粒径会出现变化，而包封率则呈现先增大后下降的趋势，当两亲性嵌段共聚物与疏水性药物的质量比为1:2时，样品的包封率最高为94.3％；当两亲性嵌段共聚物与疏水性药物的质量比为1:5时，聚合物胶束的粒径急剧增大，包封率急剧下降。因此，本公开适宜将两亲性嵌段共聚物与疏水性药物的质量比控制在1:0.5～4，当控制在1:1～2时效果最佳。
[0193]
效果实施例2
[0194]
取5ml实施例1～13和对比例1～9制得的样品，分别置于透析袋(mwco3500-4000da)中，封好透析袋，转入药物溶出仪，再加入含1％吐温-20的pbs缓冲溶液(495ml)。温度设定在37℃，搅拌速度为150rpm，每隔一定时间各取样5ml，并同时补充5ml含1％吐温-20的pbs缓冲溶液。用高效液相色谱仪(hplc，日本岛津)测定不同时间取样液中药物的浓度，得到纳米载体的药物释放曲线，结果见表2和图2～5。
[0195]
表2
[0196][0197]
实施例1～6的药物释放实验的结果如图2所示。从图2可知，实施例1样品的药物释放速率最慢，其次是实施例2和实施例4。结果表明，本公开实施例1～6制得纳米胶束具有理想的缓释和释放效果。
[0198]
实施例1、实施例7～9药物释放实验的结果如图3所示。从图3可知，包载的药物的种类影响药物的释放效果。包载苯乙基间苯二酚的缓释效果最好，包载水杨酸甲酯的缓释效果相对较差。
[0199]
实施例1、实施例11～13和对比例9药物释放实验的结果如图4所示。从图4可知，两亲性嵌段共聚物和疏水性药物的质量比影响药物的释放效果。两亲性嵌段共聚物和疏水性药物的质量比为1:2时，药物的缓释效果最好；两亲性嵌段共聚物和疏水性药物的质量比为1:5时，药物的缓释效果最差。
[0200]
实施例1、对比例1-6药物释放实验的结果如图5所示。从图5可知，亲水性多糖包裹前的疏水改性处理，纳米载体的制备方法，透析处理，纳米载体的种类等均会影响药物的缓释效果。实施例1的缓释效果明显优于对比例1～6，说明在本公开中，特定种类的两亲性嵌段共聚物包裹疏水性药物的缓释效果要明显优于脂质体和纳米乳，疏水改性后的亲水性多糖的缓释效果优于未进行疏水改性处理的亲水性多糖，且本公开制备方法制得的纳米胶束的缓释效果要优于其他方法制备的纳米胶束的缓释效果。
[0201]
效果实施例4
[0202]
使用透皮吸收(促渗)试验评价实施例1～6、对比例1～8制得纳米胶束对疏水性药物的透皮吸收(促渗)能力的影响。
[0203]
具体方法如下：
[0204]
体外透皮实验选用垂直式扩散池，以裸鼠皮肤为模型(腹部皮肤，去除皮下脂肪层和血管)。接收液为磷酸缓冲溶液(pbs溶液)。将皮片固定在供给池与接收池之间，皮肤层向上，平衡20min。各样品取液加入供给池，在1h、2h、4h、6h、8h和24h时取接收液。通过高效液相色谱(hplc，日本岛津)测定接收液中苯乙基间苯二酚的含量，并以此计算单位面积累计透过量，结果见表3。
[0205]
皮片上单位面积累计透过量的计算公式如下：
[0206][0207]
其中，qn为t时间样品的单位面积累计透过量(μg/cm2)，a为渗透面积，cn为t时间浓度测定值，ci为t时间之前浓度测定值，v为接收液总体积，v0为取样体积。
[0208]
表3
[0209][0210]
从表3的结果可以看出，两亲性嵌段共聚物的种类和制备方法均会影响疏水性药物的透皮吸收效果。
[0211]
实施例1～6在1h、4h、8h和24h的透皮吸收效果均优于对比例1～4，说明本公开特定种类的两亲性嵌段共聚物与疏水性药物的匹配性更高，从而提高了疏水性药物的透皮吸收效果。
[0212]
实施例1在1h、4h、8h和24h的透析吸收效果均优于对比例5和对比例6，说明透析处理和纳米粒子的加料顺序会影响疏水性药物的透皮吸收效果。研发过程中还发现，采用本公开的制备方法包覆视黄醇、角鲨烷、生育酚、脱羧肌肽等直链型分子结构疏水性药物，包覆4-丁基间苯二酚、水杨酸甲酯等单苯环分子结构疏水性药物，以及包覆光甘草定和苯乙基间苯二酚等多苯环分子结构疏水性药物制得的纳米胶束均具有较好的透皮吸收效果。
[0213]
实施例1在1h、4h、8h和24h的透皮吸收效果均优于对比例7、8，说明纳米载体的种类影响疏水性药物的透皮吸收效果。本公开采用的特定种类两亲性嵌段共聚物包覆疏水性药物制得的纳米粒子的透皮吸收效果明显优于传统纳米粒子。
[0214]
效果实施例5
[0215]
(1)使用体外细胞毒性测试评价空白实施例1、空白对比例1、空白对比例7、空白对比例8的生物相容性。
[0216]
在实施例1、对比例1、对比例7和对比例8的制备步骤基础上，制备未载药的空白纳米载体，分别为空白实施例1、空白对比例1、空白对比例7和空白对比例8。方法如下：
[0217]
空白实施例1的制备：将1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精加入20g的1,3-丙二醇中，磁力搅拌30min，搅拌的转速为150rpm，待完全溶解，制得混合溶液；在搅拌的条件下，将混合溶液滴加到79g去离子水中，搅拌的转速为150rpm，滴加速度为1ml/min，滴加结束后在500w的条件下超声30min，将超声后物料转移到截留分子量mwco为1000da的透析袋中，在去离子水中透析48h，透析结束后，经孔径为0.45μm的有机滤膜过滤，即可。
[0218]
空白对比例1的制备：将空白实施例1中的1g对硝基氯甲酸苄酯改性羟丙基-β-环糊精替换为1g的聚氨酯(石油基聚合物)，其余不变，即可。
[0219]
空白对比例7的制备：将0.9g的大豆卵磷脂、0.1g的胆固醇加入至20g的1,3-丙二醇中，在60℃下磁力搅拌3h，搅拌转速为150rpm，得到混合溶液；将上述混合溶液通过旋转蒸发(40℃、转速为250rpm)除去1,3-丙二醇；待1,3-丙二醇被完全除去后，再加入到79g去离子水中，通过超声分散处理30min，超声功率为500w，超声后物料经孔径为0.45μm的有机相滤膜过滤，即可。
[0220]
空白对比例8的制备：将15.0g的辛酸/癸酸甘油三酯加入到20g的1,3-丙二醇中，得到油相组分；将65g去离子水通过蠕动泵滴入至上述油相组分中，滴加的速度为1ml/min，滴加完成后，在剪切速度为15000rpm的条件下进行高速剪切，再于1000bar条件下进行高压均质，高速剪切和高压均质循环处理5次，即可。
[0221]
体外细胞毒性测试采用cck-8实验方法，以小鼠成纤维细胞(nih-3t3细胞)为模型。将nih-3t3细胞(密度为3000个细胞/孔)接种于96孔板中，加入dmem培养基(含10％fbs和1％p/s)，将nih-3t3细胞置于37℃及含5％co2的细胞培养箱中培育24h。实验组除去培养基，替换成含上述测试样品的培养基溶液，含上述样品的培养基溶液的浓度分别为3.7μg/ml、11.11μg/ml、33.33μg/ml、100μg/ml和300μg/ml(以3.7μg/ml含空白实施例1培养基溶液为例，其含义是1ml培养基溶液中包含的空白实施例1制得产品的含量为3.7μg)，在细胞培养箱中继续培养24h。对照组除去培养基，替换成新培养基溶液，在细胞培养箱中继续培养24h。设置空白组，即在96孔板中不培养细胞，仅添加空白培养基。往96孔板中加入cck-8溶剂(10μl/孔)，再培育4h。通过酶标仪检测各孔中的溶液在450nm处的吸光度，采用如下公式计算nih-3t3细胞的存活率。
[0222][0223]
其中，asample表示实验组吸光度；acontrol表示对照组吸光度；ablank表示空白组吸光度。
[0224]
空白实施例1、空白对比例1、空白对比例7和空白对比例8的体外细胞毒性结果如图6所示。
[0225]
结果表明，nih-3t3细胞与各实验浓度的空白实施例1共培育24h后，细胞存活率均高于95％，且均高于nih-3t3细胞分别与空白对比例1、空白对比例7和空白对比例8共培育后的细胞存活率。说明本公开实施例1中采用的壁材材料具有良好的生物相容性，且优于对比例1、对比例7和对比例8中采用的壁材材料。
[0226]
(2)使用与上述相同的体外细胞毒性测试评价实施例1、对比例1、对比例7、对比例
8和苯乙基间苯二酚分散液的生物相容性。
[0227]
配置苯乙基间苯二酚质量百分含量为2wt％的苯乙基间苯二酚分散液；将上述实施例1、对比例1、对比例7、对比例8制得纳米胶束和苯乙基间苯二酚分散液分别配置成浓度为3.7μg/ml、11.11μg/ml、33.33μg/ml、100μg/ml和300μg/ml的待测液(待测液配置方法与空白实施例1培养基溶液配置方法相同)，体外细胞毒性结果如图7所示。
[0228]
结果表明，nih-3t3细胞与各实验浓度的实施例1和苯乙基间苯二酚共培育24h后，实施例1实验组的细胞存活率显著高于苯乙基间苯二酚实验组，说明通过实施例1的聚合物包裹可显著降低苯乙基间苯二酚的毒性。
[0229]
nih-3t3细胞与各实验浓度的实施例1、对比例1、对比例7和对比例8共培育24h后，实施例1实验组的细胞存活率高于对比例1、对比例7和对比例8实验组，说明实施例1降低苯乙基间苯二酚毒性的效果优于对比例1、对比例7和对比例8。
[0230]
最后，还需要说明的是，在本公开中术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0231]
尽管上面已经通过本公开的具体实施例的描述对本公开进行了披露，但是，应该理解，本领域技术人员可在所附方案的精神和范围内设计对本公开的各种修改、改进或者等同物。这些修改、改进或者等同物也应当被认为包括在本公开所要求保护的范围内。