ABCF1或其激动剂在制备抗DNA病毒制剂中的应用

本发明属于hbv病毒抑制活性成分，具体涉及abcf1或其激动剂在制备抗dna病毒制剂中的应用。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、乙型肝炎病毒(hepatitis b virus，hbv)是一种嗜肝dna病毒，其慢性感染与肝硬化及肝癌密切相关，是肝癌发生的重要诱发因素，严重威胁人类健康。hbv复制过程复杂，病毒颗粒结合肝细胞表面的ntcp受体进入肝细胞，其基因组dna(rc-dna)进入细胞核，经过一系列修复机制形成共价闭合环状dna(covalently closed circular dna,cccdna)。cccdna作为病毒转录的唯一模板，结合宿主细胞组蛋白、病毒核心蛋白等形成微小染色体介导病毒长期持续存在，宿主蛋白与cccdna之间的相互作用对于其形成、稳定性和转录活性至关重要。cccdna结构稳定，半衰期长，不易被降解，是体内病毒的储存库，也是hbv慢性感染后持续存在和难以清除的重要原因。但是，宿主蛋白如何识别cccdna并调控hbv复制目前还不清楚。因此，深入研究hbv cccdna的互作蛋白及其调控cccdna活性的分子机制，对发现新的hbv复制干预靶点和策略具有重要的意义。

3、固有免疫细胞及肝细胞通过模式识别受体(prr)识别hbv，诱导干扰素产生，是机体激发有效免疫反应、清除hbv的重要前提。因此，确定靶向hbv固有免疫反应的调控因子，对于hbv防治非常重要，是目前乙肝病毒研究领域的热点和难题。基于我们前期建立的cccdna-肝细胞核蛋白互作筛选模型，该研究鉴定到了一个重要的先天免疫调节因子abcf1。abcf1于1998年首次作为tnfα刺激基因被发现，属于atp结合盒(abc)转运蛋白超家族中abcf亚家族的成员。和其他亚家族成员不同的是abcf1缺少跨膜结构域，在胞核胞浆中均有表达。abcf1由804个氨基酸组成，包含n端结构域(nd)和2个核酸结合结构域(nbd)。研究表明，abcf1可以与isd相互作用从而调控干扰素信号通路，在识别dna的天然免疫应答过程中发挥着重要作用。此外，有研究显示abcf1被鉴定为oct4和sox2的共激活剂，通过发生相分离转录激活多能性基因，对于干细胞的自我更新十分重要。但是，abcf1是否能识别cccdna并调控hbv复制目前尚未报道。

技术实现思路

1、针对上述研究背景，本发明明确了abcf1作为cccdna的互作蛋白，能参与调控干扰素应答，并且通过相分离抑制cccdna转录和病毒复制，对hbv的感染调控、致病机制的理论研究和临床治疗都有非常积极的意义。

2、基于上述研究成果，本发明提供如下的技术方案：

3、本发明第一方面，提供abcf1或其激动剂在制备抗dna病毒制剂中的应用。

4、优选的，所述abcf1可采用市售重组abcf1蛋白制剂，所述重组abcf1蛋白制剂的来源不限于工程菌表达或液相合成、固相合成等方式。

5、进一步的，所述abcf1还广泛的包括上述多肽经化学或遗传修饰后形成的衍生多肽；所述修饰物包括但不限于链霉亲和素、生物素、放射性同位素、荧光剂、酶、细胞毒性物质、抗肿瘤剂等，还包括上述蛋白采用物理吸附、载体、树脂交联材料等进行固定的产品。

6、进一步的，所述abcf1还包括abcf1蛋白与效应片段的融合多肽，所述效应片段包括穿膜肽或用于延长abcf1体内半衰期的片段，如血清白蛋白或其片段、聚乙二醇、结合血清白蛋白的结构域等。

7、进一步的，所述abcf1还包括abcf1的截短体，所述截短体保留abcf1中的部分序列，并且具有与abcf1基本相似的生理活性。

8、优选的，所述abcf1的激动剂为包括但不限于能够刺激受试者机体内abcf1表达含量升高的化合物实体、聚合物、多肽或核酸物质，还包括基于基因工程方式对受试者机体中abcf1进行过表达的相关试剂，如质粒、慢病毒等。

9、本发明针对abcf1抑制病毒复制的机制研究中表明，abcf1能够促进机体中干扰素的表达，有望实现广谱的抗病毒效果，所述抗dna病毒制剂优选用于预防、改善或治疗dna病毒感染相关疾病的药物、模型药剂、检测试剂等；进一步的，所述dna病毒的具体实例如乙型肝炎病毒(hbv)、天花病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、eb病毒、水痘-带状疱疹病毒。

10、本发明验证的一种实施方式中，所述dna病毒为hbv病毒，上述abcf1或其激动剂用于制备抗hbv病毒制剂。

11、上述实施方式中，所述abcf1为一种abcf1截短体，所述截短体包含abcf1的n端结构域，所述截短体的氨基酸序列如seq id no:1所示，其核苷酸序列如seq id no:2所示。

12、经本发明验证，abcf1的n端结构域与hbv病毒复制过程中产生cccdna具有良好的结合特性，可通过上述结合作用有效减少hbv病毒在机体内的复制，从而抑制hbv感染造成的相关疾病，如乙型肝炎、肝硬化、肝纤维化、肝癌、上消化道出血、急性肾功能不全等。

13、本发明第二方面，提供一种药物组合物，所述组合物中包括活性剂量的abcf1或其激动剂。

14、优选的，所述药物组合物中，还包括药学上所必须的载体。

15、优选的，所述药物组合物的剂型没有特别的限制，优选的方式为固体制剂或液体制剂；固体制剂的情形下，所述载体包括但不限于赋形剂，润滑剂，粘合剂，崩解剂等；液体制剂的情形下，所述载体包括范不限于溶剂，增溶剂，悬浮剂，等渗剂，缓冲剂，舒缓剂等，还可以根据需要可以适当地加入防腐剂，抗氧化剂，着色剂，甜味剂和其他制剂添加剂。

16、作为赋形剂的优选实例，例如，可以使用乳糖，蔗糖，d-甘露糖醇，淀粉，结晶纤维素，轻质无水硅酸等。

17、作为润滑剂的优选实例，例如，可以使用硬脂酸镁，硬脂酸钙，滑石粉，胶体二氧化硅等。

18、作为粘合剂的优选实例，例如，可以使用结晶纤维素，蔗糖，d-甘露糖醇，糊精，羟丙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮等。

19、作为崩解剂的优选实例，例如，可以使用淀粉，羧甲基纤维素，羧甲基纤维素钙，交联羧甲基纤维素钠，羧甲基淀粉钠等。

20、作为溶剂的优选实例，可以使用注射用水，醇，丙二醇，聚乙二醇，芝麻油，玉米油等。

21、作为增溶剂的优选实例，例如，使用聚乙二醇，丙二醇，d-甘露醇，苯甲酸苄酯，乙醇，三氨基甲烷，胆固醇，三乙醇胺，碳酸钠，柠檬酸钠等。

22、悬浮剂的合适实例包括，例如，表面活性剂(硬脂基三乙醇胺，月桂基硫酸钠，月桂基氨基丙酸，卵磷脂，苯扎氯铵，苄索氯铵，单硬脂酸甘油酯等)，可以使用亲水性聚合物(聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟甲基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙基纤维素等)。

23、作为张度剂的合适实例，例如，可以使用氯化钠，甘油，d-甘露醇等。

24、作为缓冲剂的优选实例，例如，可以使用磷酸盐，乙酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐等的缓冲溶液。

25、作为舒缓剂的优选实例，例如，可以使用苯甲醇等。

26、作为防腐剂的优选实例，例如，可以使用对氧苯甲酸酯，氯丁醇，苯甲醇，苯乙醇，脱氢乙酸，山梨酸等。

27、作为抗氧化剂的优选实例，例如，可以使用亚硫酸盐，抗坏血酸等。

28、优选的，所述药物组合物中，还包括其他抗病毒活性成分或辅助抗病毒成分，所述抗病毒活性成分优选为抗dna病毒药物，如阿昔洛韦；所述辅助抗病毒成分包括但不限于免疫调节药物、抗生素、解热、缓解呼吸急迫类药物，具体的实例如复方氨基比林、安痛定、青霉素、链霉素、尼可杀米、氨茶碱等。

29、本发明第三方面，提供一种hbv病毒感染相关疾病的治疗药物，所述治疗药物中，包括活性剂量的abcf1、abcf1截短体或abcf1的激动剂。

30、上述第三方面中，所述hbv病毒感染相关疾病优选为乙肝或肝癌(hcc)。

31、另外，上述abcf1、abcf1截短体或abcf1的激动剂的剂量属于依据治疗药物的施用目的、受试对象及给药方式等因素可以常规确认的技术手段。