齐墩果酸在制备预防中暑合并肾损伤的药物中的应用

1.本发明属于药物应用领域，具体涉及一种齐墩果酸在制备预防中暑合并肾损伤的药物中的应用。


背景技术：

2.近些年来，全球平均气温持续上升，据统计，1986年至2005年全球平均地表温度比工业化前水平高0.61℃，并在2006年至2015年十年间进一步升高0.87℃。最新数据显示，2015年至2020年为有记录以来最热的6 年，全球平均温度增加了1.2℃。全球日益变暖使全球许多城市都面临更多更强的高温热浪事件。
3.中暑是高温环境直接诱发的最为严重的疾病之一。中暑通常表现为在高热环境中机体无法控制体温时出现体温过高(通常定义为体温＞40℃)，从而导致谵妄、昏迷、癫痫发作等中枢神经系统功能障碍，以及多器官功能衰竭。其中，急性肾损伤是中暑患者常伴有的症状。在1995年芝加哥发生的高温热浪事件中，超过50％的中暑患者都出现急性肾损伤，其中重度中暑患者基本都会伴随有急性肾损伤并发症。中暑引起的急性肾损伤并不是一过性的，可发展成慢性肾病，对于在炎热环境中工作的户外人员和军事人员来说，这是一个严重的健康危害。目前对于中暑合并急性肾损伤仍无有效的治疗措施，因此寻求有效的预防手段是亟待解决的问题，具有重要的公共卫生学意义。
4.齐墩果酸(oleanolic acid，oa)属于五环三萜类化合物，存在广泛，在医学草本植物、食物及其他植物中均可提炼出。随着研究的不断深入， oa的化学、物理性质不断清晰，其药理作用引起了临床上的广泛关注。 oa具有调节细胞增殖、凋亡、糖代谢、抗细胞损伤等作用，药理作用广泛。但现有技术中还未见有将齐墩果酸应用于预防中暑合并急性肾损伤的相关技术启示或文献报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于解决现有技术问题的不足，提供一种齐墩果酸在制备预防中暑合并肾损伤的药物中的应用。
6.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
7.本发明的目的是提供一种齐墩果酸在制备预防中暑合并肾损伤的药物中的应用。
8.优选的，所述的中暑合并并发症为中暑合并急性肾损伤。
9.优选的，所述齐墩果酸作为预防中暑合并肾损伤的药物中的主要活性成分之一或唯一活性成分。
10.优选的，所述药物还包含药学上可接受的载体。更优选的，所述载体选自填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、溶剂中的至少一种。
11.优选的，所述药物的剂型为口服剂或注射剂，更优选为液剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、膜剂、膏剂、冲剂等口服剂或注射剂。液剂可以包括溶液剂或混悬剂。
12.优选的，所述应用中，制备的预防中暑合并肾损伤的药物的剂型为口服剂，更优选
的齐墩果酸的用量为以小鼠终浓度计为15-90mg/kg，更优选为30mg/kg。更优选地，口服剂中齐墩果酸的浓度为1-10mg/ml；更优选地，药物剂型为液剂，溶剂为玉米油、0.5％cmc-na水溶液、5％dmso 水溶液、橄榄油、含有2％tween 80的pbs的至少一种。
13.本发明与现有技术相比，其有益效果主要体现在：
14.本发明提供了一种齐墩果酸的新应用，首次提出一种齐墩果酸在制备预防中暑合并肾损伤的药物领域中的新应用。本发明内容显示，齐墩果酸能有效保护机体防止或减轻中暑合并的急性肾损伤，具有预防中暑合并急性肾损伤的效果，能够应用于制备预防中暑合并急性肾损伤的药物，具有广阔的应用前景。本发明提供的技术内容对于当前的中暑合并肾损伤的预防及治疗领域而言是重大的新突破，对于中暑合并肾损伤的研究领域及其相应的药物领域具有重要意义。
附图说明
15.图1为本发明齐墩果酸对小鼠血清尿素氮(bun)的影响图；
16.图2为本发明齐墩果酸对小鼠血清肌酐(crea)的影响图；
17.图3为本发明齐墩果酸对小鼠肾脏炎症因子白介素6(il-6)的影响图；
18.图4为本发明齐墩果酸对小鼠肾脏nadh脱氢酶(辅酶q)1α复合体亚基3(ndufa3)的影响图；
19.图5为本发明齐墩果酸对小鼠肾脏e3泛素连接酶(prkn)的影响图。
具体实施方式
20.下面通过具体实施例，并结合附图对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
21.实施例1齐墩果酸用于预防中暑合并肾损伤的动物药效学实验
22.1)材料准备
23.实验动物：9-10周龄健康雄性c57bl/6n小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，公司许可证编号：scxk(浙)2019-0001，饲养于浙江中医药大学实验动物中心，饲养环境：在22
±
1℃，12/12小时的昼/夜周期下饲养，并给予自由饮食及饮水。
24.试剂：齐墩果酸(sigma)；玉米油(阿拉丁)，bun(美康生物)，crea (美康生物)。
25.2)药物制备
26.齐墩果酸灌胃液的剂量(玉米油作为口服剂溶剂，齐墩果酸在口服剂中浓度为1-10mg/kg)：以齐墩果酸计，小鼠终浓度为15mg/kg-90mg/kg小鼠体重；即每只小鼠每天给齐墩果酸15-90mg/kg。此处需要注意的是，本发明中对应的小鼠模型所适宜的齐墩果酸终浓度为15-90mg/kg，但实际上，不同小鼠模型所适宜的齐墩果酸的用量也可能具有不同，甚至超出上述范围，因此具体的齐墩果酸的用量可以依据具体的实验对象进行优化选择，而不局限于上述范围。在优化齐墩果酸的用量过程中，凡是可以起到本发明所述技术效果的，均属于本发明所述的技术方案，落入本发明保护范围内。
27.更优选的，本发明中涉及到的齐墩果酸在口服剂(玉米油作为溶剂) 中的浓度(即药物浓度)与小鼠终浓度的对应关系优选如下：
28.终浓度15mg/kg小鼠体重，药物浓度为1.6mg/ml；
29.终浓度30mg/kg小鼠体重，药物浓度为3.2mg/ml；
30.终浓度60mg/kg小鼠体重，药物浓度为6.4mg/ml；
31.终浓度90mg/kg小鼠体重，药物浓度为9.6mg/ml。
32.3)研究方案
33.3.1)动物模型：
34.c57bl/6小鼠于spf级别动物实验室进行适应性喂养后，随机分为6 组，每组10只，分别为对照组(control，cc)，模型组(heat，hc)，模型+齐墩果酸a组(heat+15mg/kg oa)，模型+齐墩果酸b组(heat+30mg/kgoa)，模型+齐墩果酸c组(heat+60mg/kg oa)，模型+齐墩果酸d组 (heat+90mg/kg oa)。
35.将对照组小鼠置于22
±
1℃的环境中，模型+齐墩果酸组在暴露前连续接受齐墩果酸灌胃7天，第7天于灌胃后一小时，将模型组和模型+齐墩果酸组小鼠暴露于39.5
±
0.5℃高温环境中。在高温暴露期间小鼠禁水禁食，使用小鼠肛温计监测小鼠核心体温，观察高温暴露组(即模型组)小鼠核心体温达到最大值或热衰竭状态时，停止暴露，本发明中模型组小鼠于 170.6min核心体温达到最大值，模型组和模型+齐墩果酸组小鼠于相同时间停止暴露，将模型组和模型+齐墩果酸组小鼠转移至22
±
1℃温度下恢复9 小时，并给予水和饲料。对照组小鼠除高温暴露外均给予相同处理。
36.3.2)肾功能检测
37.小鼠恢复9小时后用戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉，腹下腔静脉取血测定bun和crea。
38.3.3)肾脏组织基因表达水平检测：
39.使用rnaiso plus试剂提取肝脏样本的总rna，用cdna逆转录试剂盒将rna逆转录成cdna，用sybr green对il-6，ndufa3和prkn的mrna 水平进行检测。
40.4)实验结果：
41.图1为本发明齐墩果酸对小鼠血清尿素氮(bun)的影响图，结果表明，四个剂量(30-90mg/kg)的齐墩果酸均可以显著改善高温引起的血清 bun水平升高现象(control：7.6
±
0.55mmol/l；heat：39.0
±
3.92mmol/l； heat+15mg/kg oa：6.9
±
0.24mmol/l；heat+30mg/kg oa:7.7
±
0.51 mmol/l；heat+60mg/kg oa:5.9
±
0.19mmol/l；heat+90mg/kg oa:11.44
±ꢀ
2.51mmol/l)。在正常情况下血中尿素氮主要是经肾小球滤过而随尿排出的，当肾小球滤过功能减退时，血中的尿素氮浓度升高。血清bun水平较低且与对照组持平意味着肾小球滤过功能并未受到损伤。
42.图2为本发明齐墩果酸对小鼠血清肌酐(crea)的影响图，结果表明，30mg/kg-90mg/kg剂量的齐墩果酸可以显著改善高温引起的血清crea水平升高现象(control：12.3
±
0.89μmol/l；heat：26.8
±
6.90μmol/l；heat+15 mg/kg oa：17.1
±
1.03μmol/l；heat+30mg/kg oa:10.9
±
1.26μmol/l； heat+60mg/kg oa:15.3
±
0.65μmol/l；heat+90mg/kg oa:13.0
±
1.73 mmol/l)。血清肌酐的浓度变化主要由肾小球的滤过能力(肾小球滤过率) 来决定。滤过能力下降，则肌酐浓度升高。血肌酐值明显较高意味着肾脏受损，血肌酐能较准确的反映肾实质受损的情况。血清crea水平较低且与对照组基本持平意味着肾实质并未受到较大损伤。
43.图3为本发明齐墩果酸对小鼠肾脏炎症因子白介素6(il-6)的影响图，结果表明，不同剂量的齐墩果酸均可以显著抑制高温暴露小鼠肾脏组织中炎症因子il-6的表达
(control：1.0
±
0.43；heat：28.5
±
6.25；heat+15mg/kgoa：2.1
±
0.79；heat+30mg/kg oa:4.2
±
1.02；heat+60mg/kg oa:1.5
±
0.19； heat+90mg/kg oa:10.0
±
6.01)。il 6能诱导b细胞分化和产生抗体，并诱导t细胞活化增殖、分化，参与机体的免疫应答，是炎性反应的促发剂。肾脏组织中il-6表达较低意味着肾脏炎症反应较轻，且明显轻于模型组。
44.图4为本发明齐墩果酸对小鼠肾脏nadh脱氢酶(辅酶q)1α复合体亚基3(ndufa3)的影响图，结果表明，不同剂量的齐墩果酸可以显著促进高温暴露小鼠肾脏组织中ndufa3的表达(control：1.0
±
0.12；heat：0.52
±
0.03； heat+15mg/kg oa：0.81
±
0.07；heat+30mg/kg oa:0.6
±
0.01；heat+60 mg/kg oa:0.65
±
0.04；heat+90mg/kg oa:0.69
±
0.05)。ndufa3是线粒体氧化磷酸化复合体i的亚基，功能是调节复合体i的生成使其发挥氧化磷酸化作用，为细胞正常供能所必须。肾脏组织中ndufa3表达较高意味着肾脏内正常氧化磷酸化功能并未受损。
45.图5为本发明齐墩果酸对小鼠肾脏e3泛素连接酶(prkn)的影响图，结果表明，不同剂量的齐墩果酸可以显著促进高温暴露小鼠肾脏组织中 prkn的表达(control：1.0
±
0.06；heat：0.19
±
0.02；heat+15mg/kg oa： 0.93
±
0.07；heat+30mg/kg oa:0.69
±
0.05；heat+60mg/kg oa:0.82
±
0.04； heat+90mg/kg oa:0.49
±
0.09)。prkn基因编码的蛋白parkin介导了线粒体自噬过程。受损的线粒体会促进活性氧簇的产生，加重线粒体功能障碍，线粒体自噬可以及时清除受损的线粒体，对维护细胞稳态有重要作用。肾脏组织中prkn表达较高意味着肾脏内受损的线粒体可以及时被清除，维护细胞稳态。
46.由上述实验结果可知，模型组小鼠在高温暴露条件下，均表现出相应表征指标的显著变化，出现明显的中暑合并肾损伤的症状；而同时，与模型组相比，在齐墩果酸的作用下，小鼠的肾功能相关的各项指标均明显优于模型组的相应指标，由此可知在齐墩果酸的作用下能够有效防止或减缓小鼠的中暑合并急性肾损伤的症状，因此可知齐墩果酸具有优秀的预防中暑合并急性肾损伤的作用，将齐墩果酸应用于制备预防中暑合并肾损伤的药物，将会具有良好的预防效果和保护机体的作用。
47.实施例2齐墩果酸用于制备预防中暑合并肾损伤的药物
48.本实施例提供以下药物作为齐墩果酸用于制备预防中暑合并肾损伤的药物的示例，但不局限于以下示例。
49.一种齐墩果酸的口服剂，包含以下成分：齐墩果酸0.375mg-0.75mg，其余为玉米油。所述口服剂中齐墩果酸浓度优选为1-10mg/ml；齐墩果酸的给药剂量终浓度优选为15mg/kg-90mg/kg体重。
50.一种齐墩果酸的口服悬浮液，所述口服悬浮液中溶剂为0.5％cmc-na 水溶液，主要成分为齐墩果酸。
51.一种齐墩果酸的悬浮液剂，所述液剂中以5％dmso水溶液作为悬浮液溶剂，主要成分为齐墩果酸。
52.一种齐墩果酸的注射剂，所述注射剂中以橄榄油作为皮下注射溶剂，主要成分为齐墩果酸。
53.一种齐墩果酸的口服剂，所述口服剂中以含有2％tween 80的pbs 作为口服剂溶剂，主要成分为齐墩果酸。
54.以上所述的实施例只是本发明的较佳方案，并非对本发明作任何形式上的限制，
在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。