类泛素化抑制剂增敏阿糖胞苷在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法

本发明属于化学药物，具体涉及一种类泛素化抑制剂增敏阿糖胞苷在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

1、阿糖胞苷（cytosine arabinoside，ara-c）是治疗急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病、神经胶质瘤等肿瘤的一线用药。以急性髓系白血病（acutemyelogenous leukemia，aml）为例，对于初发的aml病人，阿糖胞苷单独或联合治疗诱导肿瘤完全缓解的比例约65%。但是约1～2年后，66%的缓解病人对ara-c产生耐药并复发。当前仍然没有非常有效克服阿糖胞苷耐药的手段。

2、samhd1是一类dntp水解酶，能够水解阿糖胞苷活性代谢产物三磷酸阿糖胞苷，从而降低细胞中起细胞毒作用的活性成分三磷酸阿糖胞苷的浓度。因此，samhd1蛋白水平肿瘤细胞对与阿糖胞苷的敏感性呈负相关。在阿糖胞苷耐药的急性髓系白血病中，samdh1的表达水平明显上调，并介导阿糖胞苷耐药，然而samhd1在阿糖胞苷耐药aml中表达上调的机制尚未阐明。因此，探明samhd1在耐药aml中表达上调的机制，有助于发现新的aml阿糖胞苷耐药治疗靶点。

3、类泛素（sumo）化修饰是由一类sumo小分子（包括sumo-1，sumo-2，sumo-3，sumo-4）介导的蛋白翻译后修饰方式，通过类泛素化e3连接酶（包括pias1，pias2，pias3，pias4等）的作用，将sumo分子通过共价连接结合到靶蛋白分子赖氨酸上，从而改变靶蛋白的结构、稳定或生物学活性。目前已经发现多个关键蛋白受sumo化修饰。sumo 化修饰对调节细胞增殖和分化等生物学功能至关重要，但针对不同的底物和不同的应激过程来说影响各异，导致的生物学效应也多种多样。

4、发明人研究发现samhd1蛋白受pias-4(protein inhibitor of activated stat4)连接酶介导的sumo化修饰，该修饰促进samhd蛋白的稳定性，导致samhd1在阿糖胞苷耐药的aml细胞中表达上调。敲低介导sumo化的e3连接酶pias4，或用sumo化抑制剂包括银杏酸、2-do8、tak-981等处理可降低samhd1的表达，并增敏阿糖胞苷对急性髓系白血病的杀伤作用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一种类泛素化抑制剂增敏阿糖胞苷在制备抗肿瘤药物中的应用，实现增敏阿糖胞苷对aml细胞的细胞毒作用以及克服aml细胞对阿糖胞苷治疗的耐药作用。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种类泛素化抑制剂增敏阿糖胞苷在制备抗肿瘤药物中的应用，所述阿糖胞苷和类泛素化抑制剂同时或顺序应用于治疗肿瘤疾病。

4、优选的，所述类泛素化（sumo化）抑制剂为可以抑制samhd1蛋白特定位点的类泛素化修饰，从而导致samhd1蛋白稳定性降低，下调samhd1蛋白的表达。

5、优选的，所述samhd1特定位点的类泛素化修饰导致samhd1蛋白稳定，上调samdh1蛋白的表达。

6、优选的，介导所述samhd1特定位点的类泛素化修饰的类泛素化酶为pias4，类泛素化修饰分子为sumo-1。

7、优选的，所述类泛素化抑制剂选自银杏酸、2-do8、tak-981，或其药学上可接受的盐中的任意一种。所述类泛素化抑制剂具有逆转肿瘤细胞阿糖胞苷耐药，恢复（或部分恢复）肿瘤细胞对阿糖胞苷治疗的敏感性。其中银杏酸、2-do8、tak-981的结构式如下：

8、，

9、，。

10、优选的，所述阿糖胞苷的使用浓度为1µm～250 µm，所述2-d08的使用浓度为50～200 µm，所述银杏酸的使用浓度为1.5～6 µm。

11、优选的，所述肿瘤疾病为急性髓系白血病或者神经胶质瘤。

12、本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含阿糖胞苷或其化学上可接受的盐、以及类泛素化抑制剂或其药学上可接受的盐，所述药物组合物具有协同杀伤肿瘤细胞的作用。

13、本发明还提供了一种药物制剂，包含治疗有效量的所述药物组合物和至少一种药学上可接受的载体。

14、本发明还提供了一种商业包装品，其包括所述类泛素化抑制剂或其药学上可接受的盐，以及针对与阿糖胞苷在肿瘤治病治疗中同时或顺序的说明。

15、鉴于samhd1在介导肿瘤细胞对阿糖胞苷敏感性中的关键作用，发明人拟鉴定samhd1的关键调控因子，以便开发增强阿糖胞苷对肿瘤细胞敏感性的新策略。发明人首先检测了samhd1是否受sumo化的修饰作用，结果显示samhd1的确受sumo化修饰作用。进一步研究发现sumo-1分子介导samhd1的sumo化修饰；pias4是介导samhd1 sumo化修饰的e3泛素连接酶。通过免疫印迹检测sumo化修饰对samhd1蛋白表达的影响，发现高表达sumo-1或pias4可显著上调samhd1蛋白的表达，提示sumo化修饰可促进samhd1蛋白表达。

16、接下来，发明人检测了samhd1的sumo化修饰是否影响aml细胞对阿糖胞苷的敏感性及耐药。首先发明人通过在培养基逐渐增加阿糖胞苷浓度，诱导以hl60，hel细胞为母本的阿糖胞苷耐药株hl60-r，hel-r。以免疫印迹法检测耐药细胞中samhd1蛋白sumo化修饰及pias4蛋白表达。结果显示，在耐药细胞中samhd1的sumo化修饰以及pias4表达水平均显著上调，提示samhd1的sumo化修饰与aml细胞阿糖胞苷敏感性相关；因此发明人在耐药细胞hl60-r，hel-r中敲低pias4，发现samhd1的表达显著下调，并且hl60-r，hel-r细胞对阿糖胞苷的敏感性显著升高。基于这一结果，发明人检测sumo化修饰抑制剂2-d08或银杏酸（ginkgolic acid）对耐药aml细胞的作用，发现二者均能够明显恢复耐药hl60-r及hel-r细胞对阿糖胞苷的敏感性（其协同效应ci值远小于1）。接下来，发明人检测2-d08及银杏酸与阿糖胞苷对于aml母本细胞的作用，结果显示2-d08与银杏酸处理都能与阿糖胞苷协同抑制hl60以及hel细胞的增殖作用。

17、有益效果：本发明提供了一种类泛素化抑制剂增敏阿糖胞苷在制备抗肿瘤药物中的应用以及其药物组合物，可应用于抗急性髓系白血病、神经胶质瘤、阿糖胞苷耐药肿瘤中。经实验测定可得，本发明提供的药物组合物在杀伤肿瘤细胞中显示明显的协同效益，对于阿糖胞苷耐药的急性髓系白血病细胞具有良好的杀伤效果。

技术特征：

1.一种类泛素化抑制剂增敏阿糖胞苷在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述阿糖胞苷和类泛素化抑制剂同时或顺序应用于治疗肿瘤疾病。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述类泛素化抑制剂为可以抑制samhd1蛋白特定位点的类泛素化修饰。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述类泛素化抑制剂选自银杏酸、2-do8、tak-981，或其药学上可接受的盐中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肿瘤疾病为急性髓系白血病或者神经胶质瘤。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述samhd1特定位点的类泛素化修饰导致samhd1蛋白稳定，上调samdh1蛋白的表达。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：介导所述samhd1特定位点的类泛素化修饰的类泛素化酶为pias4，类泛素化修饰分子为sumo-1。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述阿糖胞苷的使用浓度为1µm～250 µm，所述2-d08的使用浓度为50～200 µm，所述银杏酸的使用浓度为1.5～6 µm。

8.一种药物组合物，其特征在于：包含权利要求1～7任一所述的阿糖胞苷或其化学上可接受的盐、以及类泛素化抑制剂或其药学上可接受的盐。

9.一种药物制剂，其特征在于：包含治疗有效量的权利要求7所述的药物组合物和至少一种药学上可接受的载体。

10.一种商业包装品，其特征在于：其包括如权利要求3所述的类泛素化抑制剂或其药学上可接受的盐，以及针对与阿糖胞苷在肿瘤治病治疗中同时或顺序的说明。

技术总结
本发明属于化学药物技术领域，具体公开了一种类泛素化抑制剂增敏阿糖胞苷在制备抗肿瘤药物中的应用，并进一步公开了包含阿糖胞苷和类泛素化抑制剂的药物组合物以及药物制剂。本发明通过类泛素化抑制剂增敏阿糖胞苷，可应用于抗急性髓系白血病、神经胶质瘤、阿糖胞苷耐药肿瘤中，经实验测定可得，本发明在杀伤肿瘤细胞中显示明显的协同效益，对于阿糖胞苷耐药的急性髓系白血病细胞具有良好的杀伤效果。

技术研发人员：吕小斌,张飞飞,牛少瑞,唐小凤
受保护的技术使用者：南昌市第一医院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29