1.本发明属于细胞工程技术领域，具体地说，本发明涉及一种细胞因子再生喷雾的制备方法。
背景技术：
2.脐带间充质干细胞(mesenchymalstemcells，mscs)是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景，能具有较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提高细胞或器官移植的成功率；
3.脐带间质充质干细胞通常属于万能细胞，可以促进脑部的血液循环和新陈代谢，延缓衰老，可以提升病人的记忆力，对脑血管疾病可以起到缓解效果，也能够治疗老年痴呆；
4.其中，脐带间充质干细胞上清液中含有脐带间充质干细胞分泌的多种因子，研究表明，干细胞旁分泌作用对皮肤损伤修复，参与机体的免疫应答反应等方面具有重要的作用。
5.上述内容记载了脐带间充质干细胞的多种用途，但是针对脐带间充质干细胞的不同用法没有对应的剂型以供使用，尤其是用于皮肤损伤修复时。
技术实现要素：
6.为克服背景技术中存在的问题，本发明公开了一种细胞因子再生喷雾的制备方法，所述细胞因子再生喷雾以喷雾形式喷出与皮肤接触，在皮肤表面成膜隔绝伤口与外部环境，所述细胞因子再生喷雾的组成原料中包括脐带间充质干细胞上清液、透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂，脐带间充质干细胞上清液中存在干细胞分泌的生长因子，生长因子有极高的生物活性，可促进细胞分化增殖，诱导趋化炎症细胞，并影响细胞的分裂、迁移，透明质酸可起到保湿作用，田七氨酸可起到止血作用，盐酸莫西沙星可起到抗菌作用，所述脐带间充质干细胞上清液、透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂相互配合成为伤口辅料，以喷雾剂的形式喷出，用于皮肤损伤的修复，使用方便，效果良好。
7.为实现上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：
8.所述细胞因子再生喷雾的制备方法的步骤包括脐带间充质干细胞上清液的制备的制备及喷雾剂的制备。
9.作为优选：所述脐带间充质干细胞上清液的制备包括以下步骤：(1)取成品原代无血清培养基与培养基添加物按500:10混合成完全培养基；
10.(2)取送检合格的脐带间充质干细胞在生物安全柜进行复苏制备；
11.(3)按每个培养皿脐带间充质干细胞90万，完全培养基18毫升的标准进行脐带间充质细胞的扩增培养；
12.(4)将含有间充质干细胞和完全培养基放于34-37℃，3-5％co2含量的细胞培养箱中培养，培养得到细胞上清液；
13.(5)显微镜下观察培养皿中脐带间充质干细胞容积率大于80％时，进行细胞处理,将培养皿从培养箱中拿到生物安全柜中，将培养细胞的上清液倒出到无菌瓶中。
14.(6)将步骤(5)培养皿中的液体用移液管转移到无菌容器中，得到脐带间充质干细胞上清液；
15.(7)将步骤(6)中的上清液进行无菌、支原体、内毒素的检测；
16.(8)检测合格后待用；
17.作为优选：所述喷雾剂的制备包括以下步骤：
18.(1)所述组成喷雾剂的原料包括脐带间充质干细胞上清液、透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂；
19.(2)步骤(1)中所述组成喷雾剂的原料的重量百分比为：脐带间充质干细胞上清液10-25％、透明质酸1-3％、田七氨酸4-6％、成膜剂10-20％、挥发性溶剂余量。
20.(3)混料，将步骤(1)中的原料按照步骤(2)中的重量百分比进行混合；
21.(4)灭菌，将步骤(3)中混合后的原料进行灭菌处理；
22.(5)检测，将步骤(4)中灭菌后的原料取样进行无菌检测；
23.(6)分装，将步骤(5)中检测合格的物料进行分装，得到喷雾剂。
24.作为优选：所述步骤(1)中原代无血清培养基为α-mem培养液。
25.作为优选：所述步骤(1)中培养基添加物为100u/ml青霉素，100u/ml链霉素。
26.作为优选：所述步骤(1)混合完成的培养基置于4-8℃冰箱保存备用。
27.作为优选：所述步骤(3)中脐带间充质细胞的增殖时间为3-4天。
28.作为优选：所述步骤(1)中挥发性溶剂为乙醇。
29.作为优选：所述步骤(2)中所述组成喷雾剂的原料的重量百分比为：脐带间充质干细胞上清液22％、透明质酸3％、田七氨酸5％、成膜剂20％、挥发性溶剂余量。
30.本发明的有益效果：所述细胞因子再生喷雾以喷雾形式喷出与皮肤接触，在皮肤表面成膜隔绝伤口与外部环境，所述细胞因子再生喷雾的组成原料中包括脐带间充质干细胞上清液、透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂，脐带间充质干细胞上清液中存在干细胞分泌的生长因子，生长因子有极高的生物活性，可促进细胞分化增殖，诱导趋化炎症细胞，并影响细胞的分裂、迁移，
31.另外，透明质酸可起到保湿作用，田七氨酸可起到止血作用，盐酸莫西沙星可起到抗菌作用，所述脐带间充质干细胞上清液、透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂相互配合成为伤口辅料，以喷雾剂的形式喷出，使用方便，效果良好。干细胞分泌的生长因子在体内含量极低，但却有极高的生物活性，干细胞分泌的生长因子在皮肤修复中起着重要作用，脐带间充质干细胞上清液是从人脐带中提取诱导分化的干细胞在培养过程中收集的上清液，其中含有干细胞因子种类有，表皮生长因子(egf)、成纤维细胞生长因子(fgf)、血小板源性生长因子(pdgf)、血小板内皮细胞生长因子(vegf)等。表皮生长因子(egf)，可促进皮肤细胞的新陈代谢，同时还可间接促进胶原蛋白和透明质酸的分泌。成纤维细胞生长因子(egf)，可促进成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞等的增殖，刺激血管新生、增加纤溶酶原激活物生成以及胶原蛋白的合成，从而减少瘢痕形成。血管内皮生长因子
(vegf)，可诱导皮肤微血管的生成，改善皮肤新陈代谢，同时也可提高微血管通透性，为皮肤细胞增殖和胶原蛋白的合成提供丰富的营养，可有效修复皮肤损伤
具体实施方式
32.为使上述目的，技术方案和有益效果更加清晰明确，以下结合实施例对本发明做具体说明。
33.实施例1：
34.所述细胞因子再生喷雾是将脐带间充质干细胞上清液混合透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂制备成喷雾剂，具体包括以下步骤：
35.(1)所述脐带间充质干细胞上清液的制备是取成品原代无血清培养基与培养基添加物按500:10混合成完全培养基，即利用α-mem培养液与100u/ml青霉素、100u/ml链霉素按照500:10的比例混合制成，混合完成的培养基置于6℃冰箱保存备用；
36.(2)取送检合格的脐带间充质干细胞在生物安全柜进行复苏制备；
37.(3)按每个培养皿脐带间充质干细胞90万，完全培养基18毫升的标准进行脐带间充质细胞的扩增培养，脐带间充质干细胞的增殖时间为3-4天；
38.(4)将含有间充质干细胞和完全培养基放于37℃，5％co2含量的细胞培养箱中培养，显微镜下观察培养皿中脐带间充质干细胞容积率大于80％时，进行细胞处理,将培养皿从培养箱中拿到生物安全柜中，将培养细胞的上清液倒出到无菌瓶中，得到脐带间充质干细胞上清液；
39.(5)将脐带间充质干细胞上清液进行无菌、支原体、内毒素的检测，检测合格后待用；
40.(6)将脐带间充质干细胞上清液、透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂按脐带间充质干细胞上清液22％、透明质酸3％、田七氨酸5％、成膜剂20％、乙醇余量的重量百分比进行混合；(7)混合后的原料进行灭菌处理，灭菌后的原料取样进行无菌检测，检测合格的物料分装到药用喷雾瓶内，得到喷雾剂。
41.实施例2：
42.所述细胞因子再生喷雾是将脐带间充质干细胞上清液混合透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂制备成喷雾剂，具体包括以下步骤：
43.(1)所述脐带间充质干细胞上清液的制备是取成品原代无血清培养基与培养基添加物按500:10混合成完全培养基，即利用α-mem培养液与100u/ml青霉素、100u/ml链霉素按照500:10的比例混合制成，混合完成的培养基置于4℃冰箱保存备用；
44.(2)取送检合格的脐带间充质干细胞在生物安全柜进行复苏制备；
45.(3)按每个培养皿脐带间充质干细胞90万，完全培养基18毫升的标准进行脐带间充质细胞的扩增培养，脐带间充质干细胞的增殖时间为3天；
46.(4)将含有间充质干细胞和完全培养基放于34℃，3％co2含量的细胞培养箱中培养，显微镜下观察培养皿中脐带间充质干细胞容积率大于80％时，进行细胞处理,将培养皿从培养箱中拿到生物安全柜中，将培养细胞的上清液倒出到无菌瓶中，得到脐带间充质干细胞上清液；
47.(5)将脐带间充质干细胞上清液进行无菌、支原体、内毒素的检测，检测合格后待
用；
48.(6)将脐带间充质干细胞上清液、透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂按照脐带间充质干细胞上清液10％、透明质酸1％、田七氨酸4％、成膜剂10％、乙醇余量的重量百分比进行混合；
49.(7)混合后的原料进行灭菌处理，灭菌后的原料取样进行无菌检测，检测合格的物料分装到药用喷雾瓶内，得到喷雾剂。
50.实施例3：
51.所述细胞因子再生喷雾是将脐带间充质干细胞上清液混合透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂制备成喷雾剂，具体包括以下步骤：
52.(1)所述脐带间充质干细胞上清液的制备是取成品原代无血清培养基与培养基添加物按500:10混合成完全培养基，即利用α-mem培养液与100u/ml青霉素、100u/ml链霉素按照500:10的比例混合制成，混合完成的培养基置于8℃冰箱保存备用；
53.(2)取送检合格的脐带间充质干细胞在生物安全柜进行复苏制备；
54.(3)按每个培养皿脐带间充质干细胞90万，完全培养基18毫升的标准进行脐带间充质细胞的扩增培养，脐带间充质干细胞的增殖时间为4天；
55.(4)将含有间充质干细胞和完全培养基放于35℃，4％co2含量的细胞培养箱中培养，显微镜下观察培养皿中脐带间充质干细胞容积率大于80％时，进行细胞处理,将培养皿从培养箱中拿到生物安全柜中，将培养细胞的上清液倒出到无菌瓶中，得到脐带间充质干细胞上清液；
56.(5)将脐带间充质干细胞上清液进行无菌、支原体、内毒素的检测，检测合格后待用；
57.(6)将脐带间充质干细胞上清液、透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂按照脐带间充质干细胞上清液20％、透明质酸2％、田七氨酸4.5％、成膜剂15％、乙醇余量的重量百分比进行混合；
58.(7)混合后的原料进行灭菌处理，灭菌后的原料取样进行无菌检测，检测合格的物料分装到药用喷雾瓶内，得到喷雾剂。
59.对比例：
60.按照下述步骤生产一种伤口处理用喷雾剂：
61.(1)将透明质酸、盐酸莫西沙星、田七氨酸、成膜剂、挥发性溶剂按透明质酸3％、田七氨酸5％、成膜剂20％、乙醇余量的重量百分比进行混合；
62.(2)混合后的原料进行灭菌处理，灭菌后的原料取样进行无菌检测，检测合格的物料分装到药用喷雾瓶内，得到伤口处理用喷雾剂。
63.效果分析：
64.操作过程中对上述三个实施例中细胞扩增情况进行比对，实施例1中细胞扩增情况最好，另外对三个实施例生产的喷雾剂进行实验使用，同时配合使用对比例中生产的伤口处理用喷雾剂进行对比，例如将实施例1、实施例2、实施例3、对比例生产的产品提供给有外伤的人员使用，并观察并记录使用效果，根据效果比对得住，实施例1伤口愈合效果最快。
65.最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在
形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。