一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法与流程

本发明涉及中草药分离纯化，具体讲是一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法。

背景技术：

1、甘草为豆科植物甘草(glycyrrhiza uralensis fisch.)、胀果甘草(glycyrrhizainflata bat.)或光果甘草(glycyrrhiza glabra l.)的干燥根和根茎，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效。在甘草中已发现和确定化学结构的化合物类型有三萜皂苷、黄酮、香豆素、菌醇、生物碱、挥发油、有机酸等，其中三萜皂苷和黄酮类是其主要有效成分。2020版《中国药典》中以甘草苷和甘草酸为甘草质量控制的指标。

2、三萜皂苷类在甘草中含量较高，目前已从甘草属植物中分离得到60余种三萜类化合物。该类化合物中最主要的是具有甜味的皂苷-甘草甜素(glycyrrhizin)。甘草甜素又称甘草酸(glycyrrhizic acid)，是甘草的主要成分。目前，甘草酸被广泛应用于多种肝病的治疗。近年来，甘草酸的保肝机制成为国际研究的焦点，取得了较大的突破和进展。

3、甘草黄酮是从甘草中得到的生物活性较强的一类成分。目前已从甘草属植物中制备得到约300多种黄酮类成分，其中以二氢黄酮类和查耳酮类最为常见，代表性成分有甘草苷(liquiritin)、甘草素(liquiritigenin)、异甘草苷(isoliquiritin)、新异甘草苷(neoisoliquiritin)、黄甘草苷(glycyroside)等。甘草苷是具有抗炎活性的黄酮类成分，一直是国内外研究的热点。

4、现代研究表明，甘草纯化的方法有很多，如溶剂萃取、大孔树脂、硅胶柱层析、聚酰胺树脂、琼脂糖凝胶介质等。专利cn200610018275.3采用溶剂萃取、醇沉等步骤得到甘草黄酮粗品和甘草酸粗品，该方法制备过程中使用大量有机溶剂，不够经济和环保且过程复杂、重现性差。专利cn201811226087.9、cn200710011041.0采用硅胶和大孔树脂制备甘草苷和甘草酸类组分，存在二次纯化制备、溶剂消耗量大等问题。专利cn201811596234.1采用混合模式琼脂糖凝胶基质富集黄酮和三萜皂苷类组分，该方法采用的基质为软胶，耐压性差、因此制备流速低、导致效率无法提升。

5、综合目前纯化手段，现纯化制备甘草中活性成分时，存在纯度和收率低、分离纯化效率低、制备过程复杂等问题，所以开发一种高效、经济且能规模化放大生产甘草中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法。

2、本发明的技术解决方案如下：

3、一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，制备甘草提取物溶液，经澄清过滤后，将其在聚合物基质填料上富集、淋洗和洗脱，取洗脱液并对其后处理及分析；

4、其中所述洗脱分别在中性条件下和酸性条件下洗脱。

5、进一步地，所述聚合物基质填料上载有阴离子交换和疏水性质的配基。

6、进一步地，包括以下步骤：

7、s1：选择具有阴离子交换和疏水性质的聚合物基质填料；

8、s2：将甘草提取物溶解纯水中，配制浓度为1-100mg/ml的甘草提取物溶液，然后利用滤膜去除提取物溶液中颗粒物和部分色素，得到膜透过液；

9、s3：将膜透过液按照聚合物基质填料体积的1-200g/l作为上样量，上样到聚合物基质填料上，依次进行淋洗，然后依序在中性条件下和酸性条件下洗脱，分别得到含有黄酮类组分的洗脱液a以及含有三萜皂苷类组分的洗脱液b；

10、s4：将洗脱液a与洗脱液b，经过浓缩、脱酸、冻干或者喷干处理，分别得到黄酮和三萜皂苷类组分的干粉样品。

11、进一步地，所述聚合物基质填料，骨架为二乙烯基苯与苯乙烯，乙烯基吡咯烷酮，甲基丙烯酸缩水甘油酯或甲基丙烯酸酯共聚得到，表面键合的配基为仲胺基、叔胺基、季胺至少其中一种带有正电荷的基团。

12、进一步地，所述聚合物基质填料的粒径为10-150μm，孔径为5-30nm，比表面积为150-500m2/g。

13、进一步地，步骤s2中，所述滤膜为中空纤维膜、卷式膜以及陶瓷膜的至少一种。

14、进一步地，步骤s2中，甘草提取物具体为采取煎煮、回流、超声或微波辅助提取方式得到的粗提物，或者该粗提物再经过柱层析方式得到的精制提取物。

15、进一步地，步骤s3中，淋洗的方法具体为：使用反相有机溶剂体积分数为0-40％的水溶液，以2-4个柱体积进行淋洗杂质；其中反相有机溶剂种类为乙腈、乙醇或甲醇。

16、进一步地，所述酸性条件下采用的酸液为甲酸、乙酸、盐酸以及磷酸的至少一种。

17、进一步地，步骤s4中，所述浓缩采用旋转蒸发仪处理，脱酸采用脱酸柱处理，冻干或喷干采用冻干机或喷干机处理。

18、本发明的有益效果是：

19、(1)相比于常规的纯化制备甘草中活性成分的方法，本发明所涉及的方法仅利用洗脱液的改变，以及聚合物基质填料的选择，实现了在一种分离基质上甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的同时制备；制备过程简单、高效、经济且能规模化放大生产。

20、(2)本发明对于甘草中黄酮与三萜皂苷组分的富集与分离方法，其结果大致可以达到：对于黄酮类组分的纯度可以达到60-95％，收率在80-95％(以甘草苷为标准品计算)；对于三萜皂苷类组分的纯度可以达到55-90％，收率在90-95％(以甘草酸铵为标准品计算)，纯度和收率高。

技术特征：

1.一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，制备甘草提取物溶液，经澄清过滤后，将其在聚合物基质填料上富集、淋洗和洗脱，取洗脱液并对其后处理及分析；

2.根据权利要求1所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，所述聚合物基质填料上载有阴离子交换和疏水性质的配基。

3.根据权利要求1所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求1所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，所述聚合物基质填料，骨架为二乙烯基苯与苯乙烯，乙烯基吡咯烷酮，甲基丙烯酸缩水甘油酯或甲基丙烯酸酯共聚得到，表面键合的配基为仲胺基、叔胺基、季胺中至少其中一种带有正电荷的基团。

5.根据权利要求1所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，所述聚合物基质填料的粒径为10-150μm，孔径为5-30nm，比表面积为150-500m2/g。

6.根据权利要求3所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，步骤s2中，所述滤膜为中空纤维膜、卷式膜以及陶瓷膜的至少一种。

7.根据权利要求3所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，步骤s2中，甘草提取物具体为采取煎煮、回流、超声或微波辅助提取方式得到的粗提物，或者该粗提物再经过柱层析方式得到的精制提取物。

8.根据权利要求3所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，步骤s3中，淋洗的方法具体为：使用反相有机溶剂体积分数为0-40％的水溶液，以2-4个柱体积进行淋洗杂质；其中反相有机溶剂种类为乙腈、乙醇或甲醇。

9.根据权利要求1所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，所述酸性条件下采用的酸液为甲酸、乙酸、盐酸以及磷酸的至少一种。

10.根据权利要求1所述的一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，步骤s4中，所述浓缩采用旋转蒸发仪处理，脱酸采用脱酸柱处理，冻干或喷干采用冻干机或喷干机处理。

技术总结
本发明涉及一种甘草提取物中黄酮和三萜皂苷类组分的制备方法，涉及中草药分离纯化技术领域，该制备方法中使用的聚合物基质填料，同时具有阴离子交换和疏水两种模式，利用甘草黄酮和三萜皂苷类组分与杂质之间疏水保留与电荷性质的差异，结合洗脱液的改变，在一种分离基质上实现甘草中黄酮和三萜皂苷类组分的同时纯化制备；本发明对于黄酮类组分的纯度可以达到60‑95％，收率在80‑95％(以甘草苷为标准品计算)；对于三萜皂苷类组分的纯度可以达到55‑90％，收率在90‑95％(以甘草酸铵为标准品计算)，纯度及收率较高，制备过程简单、效率高、所使用的分离材料可反复再生使用，生产成本低，利于规模化生产，对于天然产物的组分分离过程与中药提取纯化过程，具有重要意义。

技术研发人员：俞冬萍,霍丽多,郭志谋,金高娃,周永正,韩紫薇
受保护的技术使用者：赣江中药创新中心
技术研发日：
技术公布日：2024/5/8