一种预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物及其用途

1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物及其用途。


背景技术：

2.随着国家经济水平的提高，人们对身体健康越来越重视，心血管疾病是人类健康的第一杀手，泛指由于血液黏稠、高脂血症、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病，发病率死亡率居高不下，严重威胁50岁以上老年人群的身体健康。而近年来心血管疾病的发生不断年轻化，所以防治心血管疾病的相关研究也成为研究热点。目前已出现的以恢复供血、抑制局部的炎症反应、维持血管结构和功能的完整性为治疗目标的药物，包括钙离子拮抗剂、抗栓药、抗炎药和自由基清除剂等。但由于这些化学药物毒副作用和耐药性的局限性，不易长期服药治疗。由此研究工作者对毒副作用小、特异性强、对血管具有保护作用的药物日益关注。
3.葛根是一种药食同源型植物，其具有丰富的营养，具有解肌退热，生津，透疹，升阳止泻的功能。随着研究的不断深入葛根的药用作用越来越引起广大药学工作者的重视，大量研究工作表明，葛根对代谢性疾病中血管具有保护作用，在体内和体外均有明显抗氧化应激的作用。
4.而罗格列酮作为经典降血糖药物，在糖尿病治疗领域发挥重要作用。除了显著的降糖作用外，目前已有大量报道罗格列酮对代谢性疾病血管损伤有预防和治疗作用，但使用罗格列酮也有心血管风险，相关研究发现罗格列酮会导致心肌梗死和心衰风险分别增加28％和72％。因此，急需开发出一种能有效降低罗格列酮心血管的毒副作用，减少其用药量，且最大限度地发挥其防治由于代谢性疾病诱导的血管性疾病作用的药物。


技术实现要素：

5.本发明的目的是为了解决上述现有技术的不足而提供一种预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物，该组合物能够有效预防和/或治疗血管损伤疾病。
6.本发明的目的通过下述技术方案予以实现：一种预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物，包括葛根提取物和罗格列酮。
7.进一步的，所述葛根提取物和罗根列酮的质量比为100-1000：0.5-1。
8.进一步的，所述葛根提取物和罗根列酮的质量比为750：1。
9.进一步的，所述葛根提取物的制备包括如下步骤：
10.(1)取葛根，切碎，干燥；
11.(2)将4～6ml的水加入到1g经步骤(1)干燥后的葛根中，并于90～100℃温度下提取3-5小时；
12.(3)将步骤(2)获得的提取液进行抽滤，取上层液体；滤液用3-5倍体积的无水乙醇萃取，3-5℃过夜后抽滤，沉淀、洗涤和干燥，即得所述葛根提取物。
13.更进一步的，在步骤(2)中，葛根与水的重量体积比为1g：5ml，提取温度为95℃，提取时间为4h。
14.本发明还提供了所述预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物在制备用于预防和/或或治疗血管损伤疾病药物中的用途。
15.本发明还提供了一种预防和/或治疗血管损伤疾病的药物，包含所述预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物以及药物学可接受的载体。
16.进一步的，所述药物的剂型为口服剂型。
17.进一步的，所述口服剂型为片剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、溶液剂或悬混剂。
18.本发明所述药物在使用时，每日用制剂量中含葛根提取物按体重为400-4000mg/60kg，每日用制剂量中含罗格列酮按体重为4-8mg/60kg。
19.本发明的有益效果在于：本发明公开的一种预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物，通过将葛根提取物和罗格列酮为有效组成成分进行配合，并利用两者之间的协同作用使该组合物能够有效预防和/或治疗血管损伤疾病。通过实验证明相对于单一组分的葛根提取物或罗格列酮，本发明所述包含葛根提取物和罗格列酮的组合物，对血管内皮细胞具有更好的保护作用。同时，在本发明所述的组合物中，葛根提取物的加入能够降低罗格列酮引起的心肌细胞凋亡的风险，即显著降低了药物的毒副作用，减少其用药量，有效防治血管内皮的损伤，可用于预防和/或治疗血管损伤的相关疾病，也为治疗和预防血管损伤疾病提供了一种新的安全有效的药物组合，同时为防治血管损伤疾病药物提供了理论指导。
附图说明
20.图1为各实验组的血管内皮细胞活性统计图；其中，1)代表高糖组对正常组有显著差异；2)代表高糖+葛根提取物组、高糖+罗格列酮组对高糖组有显著差异；3)代表组合物组对高糖组有显著差异。
21.图2为各实验组的ldh释放量统计图；其中，1)代表高糖组对正常组有显著差异；2)代表高糖+葛根提取物组、高糖+罗格列酮组对高糖组有显著差异；3)代表组合物组对高糖组有显著差异。
22.图3为各实验组在显微镜下观察的细胞形态图。
23.图4为各实验组的心肌细胞凋亡情况统计图；其中，1)代表高糖+罗格列酮组对正常组有显著差异；2)代表组合物组对高糖+罗格列酮组有显著差异。
24.图5为各实验组的凋亡相关蛋白bax、bcl-2和gapdh统计图。
具体实施方式
25.为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备均为本技术领域常规试剂、方法和设备。
26.除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
27.实施例1
28.本实施例提供了一种预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物，包括葛根提取物和罗格列酮。
29.进一步的，所述葛根提取物和罗根列酮的质量比为100：0.5。
30.进一步的，所述葛根提取物的制备包括如下步骤：
31.(1)取葛根，切碎，干燥；
32.(2)将4ml的水加入到1g经步骤(1)干燥后的葛根中，并于90℃温度下提取3小时；
33.(3)将步骤(2)获得的提取液进行抽滤，取上层液体；滤液用3倍体积的无水乙醇萃取，3℃过夜后抽滤，沉淀、洗涤和干燥，即得所述葛根提取物。
34.实施例2
35.本实施例提供了一种预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物，包括葛根提取物和罗格列酮。
36.进一步的，所述葛根提取物和罗根列酮的质量比为750：1。
37.进一步的，所述葛根提取物的制备包括如下步骤：
38.(1)取葛根，切碎，干燥；
39.(2)将5ml的水加入到1g经步骤(1)干燥后的葛根中，并于95℃温度下提取4小时；
40.(3)将步骤(2)获得的提取液进行抽滤，取上层液体；滤液用4倍体积的无水乙醇萃取，4℃过夜后抽滤，沉淀、洗涤和干燥，即得所述葛根提取物。
41.实施例3
42.本实施例提供了一种预防和/或治疗血管损伤疾病的组合物，包括葛根提取物和罗格列酮。
43.进一步的，所述葛根提取物和罗根列酮的质量比为1000：1。
44.进一步的，所述葛根提取物的制备包括如下步骤：
45.(1)取葛根，切碎，干燥；
46.(2)将6ml的水加入到1g经步骤(1)干燥后的葛根中，并于100℃温度下提取5小时；
47.(3)将步骤(2)获得的提取液进行抽滤，取上层液体；滤液用5倍体积的无水乙醇萃取，5℃过夜后抽滤，沉淀、洗涤和干燥，即得所述葛根提取物。
48.实施例4
49.本实施例旨在研究所述组合物对血管内皮细胞的保护作用，实验方法具体如下：
50.分离并原代培养血管内皮细胞，具体操作为：在高倍手术显微镜下解剖小鼠冠状动脉，于左锁骨下动脉远侧的主动脉壁上做个小切口，置入导引钢丝直至冠状动脉处，在钢丝引导下仔细分离动脉被膜及周围脂肪组织，并将冠状动脉完整取出，用显微器械将其剪成血管组织块，并立即放入含有内皮生长因子的专业培养基中，定期观察并半量换液，直至实验所用。
51.使用高糖刺激血管内皮细胞，实验分为五组，分别为正常组、高糖组、高糖+葛根提取物组、高糖+罗格列酮组、高糖+组合物组，其中，正常组使用5.5mm的葡萄糖处理血管内皮细胞(加入甘露醇调节等渗)，高糖组使用30mm的高浓度葡萄糖处理血管内皮细胞12小时，随后在高糖组的血管内皮细胞中分别加入葛根提取物、罗格列酮及组合物进行干预，12小时后收集样本，进而得到各实验组：正常组、高糖组、高糖+葛根提取物(22.5mg/ml)组、高糖+罗格列酮(30μg/ml)组、高糖+组合物(22.5mg/ml的葛根提取物+30μg/ml的罗格列酮)组。各组经过刺激给药后，使用mtt分析法和ldh释放法检测各组对于血管内皮细胞的保护作用，同时固定血管内皮细胞，染色后在激光共聚焦显微镜下观察。
52.本实施例的实验结果如图1-3所示。结果表明，相比于高糖组，高糖+葛根提取物组、及高糖+罗格列酮组的细胞活性明显上升，且ldh释放量明显下降，说明经葛根提取物或罗格列酮处理后，血管内皮连接功能明显恢复，由此表明葛根提取物或罗格列酮均对血管内皮细胞具有保护作用。而相比于高糖+葛根提取物组及高糖+罗格列酮组，高糖+组合物组的细胞活性有了更明显的上升，ldh释放量也出现了更明显的下降，说明经葛根提取物和罗格列酮组成的组合物处理后，血管内皮连接功能的恢复更显著，说明所述组合物对血管内皮细胞具有更好的保护作用。
53.实施例5
54.本实施例旨在研究所述组合物对心肌细胞凋亡的影响，实验方法具体如下：本实验使用心肌细胞株ac16，1640培养液为基础，含有青链霉素双抗液(青霉素100u/ml和链霉素100u/ml)和10％ fbs培养瓶中，置于37℃、5％ co2的培养箱中培养。同样采用实施例4的分组实验方案，各组经过高糖刺激给药后，收集细胞检测心肌细胞凋亡情况，具体实验步骤为：孔板中的细胞用pbs洗涤一次，加入1ml无edta 0.25％胰酶，待细胞变圆且有部分细胞悬浮，即加入pbs终止消化。用移液枪轻轻吹打细胞，使细胞悬浮。收集细胞于流式管中，1500rpm离心5min，弃上清。随后pbs洗涤细胞：加入3ml的4℃预冷的pbs完全重悬细胞，1500rpm离心5min，弃上清。沉淀用200μl的binding buffer重悬。最后加入5μl annexin v-fitc混匀后，加入5μl propidium iodide，混匀。室温下避光反应15min，于1hour内上机检测：annexin v-fitc的绿色荧光通过fitc通道(fl1)检测，pi红色荧光通过pi通道(fl2)检测。流式细胞仪参数如下：激发波长ex＝488nm，发射波长fl1(em＝525
±
20nm)；fl2(em＝585
±
21nm)。用flowjo软件分析细胞凋亡的比例及数目。
55.本实施例的实验结果如图4-5所示，结果表明，相比高糖组，高糖+罗格列酮组的细胞凋亡率明显上升，凋亡相关蛋白bax明显增加，bcl-2明显下降，由此表明罗格列酮具有促使心肌细胞凋亡的作用。而相比高糖+罗格列酮组，高糖+组合物组的细胞凋亡率明显下降，凋亡相关蛋白bax明显降低，bcl-2明显回升，由此可以说明所述组合物中葛根提取物的加入具有降低罗格列酮引起的心肌细胞凋亡风险的作用。
56.上述的具体实施例是对本发明技术方案和有益效果的进一步说明，并非对实施方式的限定。对本领域技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。