一种降低单纯疱疹病毒性角膜炎复发的中药组合物的制备方法

1.本发明涉及一种降低单纯疱疹病毒性角膜炎复发的中药组合物的制备方法，属于中药技术领域。


背景技术：

2.单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis，hsk)是由单纯疱疹病毒i型(herpes simplex virus，hsv-1)感染引起的一种非化脓性的免疫病理性眼病，具有发病快、易复发和致盲率高等特点。据统计，全世界大约67％的人(50岁以下)存在ⅰ型hsv感染，发达国家的发病率基本居于6/105～20/105，美国90％的成年人hsv抗原呈阳性，且每年发现近50万例活动性hsv感染的病例，发病率大约为11.8/105，其中25％-35％在初发感染后1-2年内复发；我国城市盲目患者调查中，角膜盲占第二位，而hsk的发病率逐年上升，在角膜盲的病因中hsk占42.8％，其发病率和致盲率均占角膜疾病的首位。国内关于180只眼在1-3年内的复发情况调查研究显示：其复发率分别为20.0％、31.5％、33.5％。近年来由于抗生素、激素的不合理应用，病毒耐药株的不断出现，机体免疫功能受到干扰，严重影响视功能，故本病及其复发的治疗已成为眼科界关注的焦点。
3.hsk的发生多与hsv-1有关，hsv-1的主要传播途径为黏膜接触，感染后通常潜伏于三叉神经节内，当机体受到应激、激光及紫外线照射等刺激、呼吸道感染、发热等导致免疫功能降低时，则可能使潜伏的hsv-1活化，导致机体不能抵抗病毒入侵或及时清除潜伏病毒，致使hsk发生甚至反复发作，造成角膜病损。临床上症见：“畏光、流泪、眼痛、角膜上皮缺损，呈点状、树枝状或地图状，或角膜基质水肿、混浊，荧光素染色阳性，角膜知觉减退。”因病毒潜伏在三叉神经节的感觉神经原内或角膜基质层内，抗病毒药物不能彻底清除，极易反复发作，目前尚无特效抗hsk复发的药物，对该类药物的研究已成为国内外研究的热点和难点。
4.hsk的西医治疗主要是应用抗病毒类药物(阿昔洛韦、更昔洛韦、干扰素等)、糖皮质激素类(妥布霉素地塞米松、甲泼尼龙等)等，抑制病毒复制，减轻炎症反应引起的角膜损害，从而达到促进疾病恢复、预防视力下降、缩短疗程、降低复发率等，但长期使用产生副作用较大，停药后极易复发；中医治疗主要以清热解毒为主，本发明的中药组合物改变了以往以单纯清热解毒为主的治疗方法，以扶正祛邪为主、辅以清热退翳类药物。
5.中国专利申请201910161531.1公开了一种治疗单纯疱疹病毒性角膜炎并降低其复发的中药组方。该中药组方由生黄芪、炒白术、防风、金银花、白及、淫羊藿、蒲公英、蒺藜、紫草、蝉蜕、防己和苦参组成，并加水煎煮制得汤剂，患者可直接服用。所述组方在临床上针对于单纯疱疹病毒性角膜炎(树枝状)、单纯疱疹病毒性角膜炎(盘状基质型)疗效好且无毒副作用。但是该专利获得的汤剂保存期短，不利于患者长期服用且并未有相应煎煮工艺的研究，所得煎液批间差异较大。本发明在该中药组方的基础上提供了一种适用于该中药组方固体制剂的制备方法，为临床提供制备工艺稳定的制剂，方便临床医生及患者使用。


技术实现要素：

6.本发明旨在解决现有技术中存在的问题之一，为此本发明提供了一种降低单纯疱疹病毒性角膜炎复发的中药组合物的制备方法。
7.本发明所采用的技术方案为：一种降低单纯疱疹病毒性角膜炎复发的中药组合物，其原料配比以制备1kg中药组合物计包括：
[0008][0009]
辅料为甘露醇、山梨醇、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、淀粉、糊精、麦芽糊精、蔗糖、蜂蜜、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、硬脂酸镁中的一种或多种。
[0010]
根据中医药理论，本发明中药组合物的处方中使用的中药的药理作用如下：
[0011]
1.黄芪(别名：黄耆、戴糁、戴椹、独椹)味甘，性微温
[0012]
归经：归脾、肺经
[0013]
功能主治：具有健脾补中，升阳举陷，益卫固表，利尿，托毒生肌的功效。主治脾气虚证，肺气虚证，气虚自汗证，气血亏虚，疮疡难溃难腐，或溃久难敛等。
[0014]
2.防风(别名：铜芸、回云、回草、百枝)味辛、甘，性微温
[0015]
归经：归膀胱
[0016]
功能主治：具有祛风解表，胜湿止痛，止痉的功效。主治外感表证，风疹瘙痒，风湿痹痛，破伤风证。
[0017]
3.白及(别名：甘根、连及草、白给、冰球)味苦、甘、涩，性寒
[0018]
归经：归肺
[0019]
功能主治：具有收敛止血，消肿生肌的功效。主治出血证，痈肿疮疡，手足皲裂，水火烫伤。
[0020]
4.蒲公英(别名：华花郎、蒲公草、食用蒲公)味苦、甘，性寒
[0021]
归经：归肝、胃经
[0022]
功能主治：具有清热解毒，消肿散结，利湿通淋的功效。主治痈肿疔毒，乳痈内痈，热淋涩痛，湿热黄疸，清肝明目。
[0023]
5.紫草(别名：硬紫草、软紫草)味甘、咸，性寒
[0024]
归经：归心，性
[0025]
功能主治：具有清热凉血，活血，解毒透疹的功效。主治温病血热毒盛，斑疹紫黑，麻疹不透，疮疡，湿疹，水火烫伤。
[0026]
6.麸炒白术
[0027]
功能主治：能缓和燥性，借麸入中，增强健脾、消肿作用。
[0028]
7.金银花(别名：忍冬花、鹭鸳花、银花)味甘，性寒
[0029]
归经：归肺、心、胃经
[0030]
功能主治：具有清热解毒，疏散风热的功效。主治痈肿疔疮，外感风热，温病初起，热毒血痢。
[0031]
8.淫羊藿(别名：刚前、仙灵脾、仙灵毗)味辛、甘，性温
[0032]
归经：归肾、肝经
[0033]
功能主治：具有补肾壮阳，强筋健骨，祛风除湿的功效。主治肾阳不足，阳痿遗精，遗尿尿频，风湿痹痛，骨痿瘫痪等。
[0034]
9.蒺藜(别名：茨、蒺藜、蒺藜子、旁通)味苦、辛，性平
[0035]
归经：归肝、肺经
[0036]
功能主治：具有平肝，解郁，明目，祛风的功效。主治头痛，眩晕，胸胁胀痛，乳房胀痛，癥瘕，目赤翳障，风疹瘙痒，白癜风，痈疽，瘰疬。
[0037]
10.蝉蜕(别名：蜩甲、蝉壳、伏壳、枯蝉)味甘、咸，性凉
[0038]
归经：归肺、肝经
[0039]
功能主治：具有疏散风热，利咽开音，透疹，明目退翳，息风止痉功效。主治风热感冒，温病初起，咽痛喑哑，麻疹不透，风疹瘙痒，目赤翳障，急慢惊风，破伤风等。
[0040]
本发明药物可以加一种或多种药学上可接受的载体混合制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型，优选将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、颗粒剂等。
[0041]
在此基础上，本发明还提供一种降低单纯疱疹病毒性角膜炎复发的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
[0042]
按处方比例称取各药味饮片，用水煎煮提取，提取液减压浓缩成浸膏，干燥获得干膏，粉碎成干膏粉，加入辅料，按照常规方法制备成常规药物固体制剂。
[0043]
进一步地说，按处方比例称取各药味饮片，加入7-9倍量的水，煎煮提取3次，每次保沸时间为30-90min，滤过，滤液减压浓缩成浸膏，浓缩温度为60-80摄氏度，减压干燥或喷雾干燥，获得干膏，粉碎得干膏粉，加入辅料，按照常规方法制备成常规药物固体制剂。
[0044]
更进一步地说，按处方比例称取各药味饮片，加入7-9倍量的水，煎煮提取3次，每次保沸时间为30-90min，滤过，滤液减压浓缩成浸膏，浓缩温度为60-80摄氏度，减压干燥或喷雾干燥，获得干膏，粉碎得干膏粉，加入辅料，干法制粒或使用乙醇湿法制粒，干燥，制成颗粒，按照常规方法制备成常规药物固体制剂。
[0045]
具体地说：
[0046]
制备方法包括以下步骤：按处方比例称取各药味饮片，加入7-9倍量的水，煎煮提取3次，每次保沸时间为30-90min，滤过，滤液减压浓缩成浸膏，浓缩温度为60-80摄氏度，减压干燥或喷雾干燥，获得干膏，粉碎得干膏粉，加入辅料混匀，加入70％-95％浓度的乙醇制粒，干燥整粒，即得制剂颗粒，按照常规方法制备成常规药物固体制剂；
[0047]
或制备方法包括以下步骤：按处方比例称取各药味饮片，加入7-9倍量的水，煎煮提取3次，每次保沸时间为30-90min，滤过，滤液减压浓缩成浸膏，浓缩温度为60-80摄氏度，减压干燥或喷雾干燥，获得干膏，粉碎得干膏粉，加入辅料混匀，干法制粒，整粒，即得制剂颗粒，按照常规方法制备成常规药物固体制剂。
[0048]
所述常规药物固体制剂包括颗粒剂、胶囊、片剂。
[0049]
其中，辅料与干膏粉的比例为1:5-1:3；减压干燥的温度为60-80摄氏度。
[0050]
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
[0051]
1.本中药组合物的剂型为固体制剂，保存期延长，方便患者贮藏及携带，满足患者长期用药的需求；
[0052]
2.通过对提取、浓缩及干燥工艺的研究，确认工艺参数，为临床提供制备工艺稳定的制剂，方便临床医生及患者使用。
具体实施方式
[0053]
一种降低单纯疱疹病毒性角膜炎复发的中药组合物，其原料配比以制备1kg中药组合物计包括：
[0054][0055]
辅料为甘露醇、山梨醇、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、淀粉、糊精、麦芽糊精、蔗糖、蜂蜜、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、硬脂酸镁中的一种或多种。
[0056]
一种降低单纯疱疹病毒性角膜炎复发的中药组合物的制备方法，具体包括如下步骤：
[0057]
制备方法包括以下步骤：按处方比例称取各药味饮片，加入7-9倍量的水，煎煮提取3次，每次保沸时间为30-90min，滤过，滤液减压浓缩成浸膏，浓缩温度为60-80摄氏度，减压干燥或喷雾干燥，获得干膏，粉碎得干膏粉，加入辅料混匀，加入70％-95％浓度的乙醇制粒，干燥整粒，即得制剂颗粒，按照常规方法制备成常规药物固体制剂。即：制剂颗粒灌装制成胶囊，制剂颗粒压片制成片剂。
[0058]
或制备方法包括以下步骤：按处方比例称取各药味饮片，加入7-9倍量的水，煎煮提取3次，每次保沸时间为30-90min，滤过，滤液减压浓缩成浸膏，浓缩温度为60-80摄氏度，减压干燥或喷雾干燥，获得干膏，粉碎得干膏粉，加入辅料混匀，干法制粒，整粒，即得制剂颗粒，按照常规方法制备成常规药物固体制剂。即：制剂颗粒灌装制成胶囊，制剂颗粒压片制成片剂。
[0059]
其中，辅料与干膏粉的比例为1:5-1:3；减压干燥的温度为60-80摄氏度；喷雾干燥的进口温度为150-180摄氏度。
[0060]
在研制中药组合物的过程中，通过一系列实验，以选择本发明提供的药物制剂的制备工艺，保证其科学、合理、可行，得到的制剂具有有效的治疗效果。
[0061]
1.中药组合物制备方法研究
[0062]
1.1提取工艺研究
[0063]
采用正交试验，考察提取时间、加水倍量和提取次数三个因素，每个因素各取三个水平，因素水平表如下(见表1)，按照l9(34)正交试验表试验，以黄芪甲苷，升麻素苷、5-o-甲基维斯阿米醇苷含量作为评价指标(结果见表2-表7)，优选提取工艺。
[0064]
表1正交试验设计表
[0065][0066]
表2黄芪甲苷含测直观分析结果
[0067][0068]
表3黄芪甲苷方差分析表
[0069][0070]
方差分析：提取次数有显著性，故选择最大水平，即提取3次。
[0071]
直观分析：加水倍量，极差较大，故选择均值最大的水平，即水平3(9倍)；提取时间，极差最小，表明提取结果影响最小，若选择均值最大的水平，应选择水平3(90min)，但水平1,2,3均值接近，基于工业生产上节能降耗的考虑，且提取时间对提取效果无显著影响，故选择水平1(30min)。
[0072]
综上所述，最优选择加水量为9倍，提取次数为3次，每次时间为30min。
[0073]
表4 5-o-甲基维斯阿米醇苷含测直观分析表
[0074][0075]
表5 5-o-甲基维斯阿米醇苷方差分析表
[0076][0077]
方差分析：加水倍量及提取次数有显著性影响，故均选择最大水平，即加水量为9倍，提取次数为3次。
[0078]
直观分析：提取时间选择均值最大的水平，应选择水平1，即30min。
[0079]
综上所述，最优选择加水量为9倍，提取次数为3次，每次时间为30m。
[0080]
表6升麻素苷含测直观分析表
[0081][0082]
表7升麻素苷方差分析表
[0083]
[0084]
方差分析：提取次数有显著性影响，故提取次数选择水平3，即提取3次。
[0085]
直观分析：加水倍量选择均值最大的水平，应选择水平2，即7倍量；提取时间，若选择均值最大的水平，应选择水平3(90min)，但水平2与水平3均值接近，基于工业生产上节能降耗的考虑，且提取时间对提取效果无显著影响，故选择水平2(60min)。
[0086]
综上所述，最优选择加水量为7倍，提取次数为3次，每次时间为60m。
[0087]
汇总上述3个评价结果，按照3个评价结果进行验证试验，结果如下表8：
[0088]
表8评价结果
[0089][0090]
综上所述，提取次数定为3次，加水量为7-9倍，每次保沸时间30-90min，对黄芪甲苷、升麻素苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷的提取效率基本一致。
[0091]
1.2浓缩工艺研究
[0092]
当减压浓缩温度为60-80℃时，对黄芪甲苷、升麻素苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷的影响较小，因此浓缩温度定为60-80℃。
[0093]
1.3干燥工艺研究
[0094]
采用减压干燥，温度60-80℃；或者喷雾干燥，进口风温150-180℃，对黄芪甲苷、升麻素苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷的影响较小。
[0095]
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0096]
实施例1
[0097]
按处方比例称取各药味饮片，加入9倍量水，煎煮3次，每次30分钟，滤过，滤液减压浓缩(80℃)，减压干燥(80℃)，获得干膏，粉碎，得干膏粉，加入糊精1/3倍量，混匀，加入80％乙醇制粒，干燥，整粒，即得制剂颗粒。所得颗粒亦可灌装胶囊或压成片剂。
[0098]
实施例2
[0099]
按处方比例称取各药味饮片，加入9倍量水，煎煮3次，每次90分钟，滤过，滤液减压浓缩(60℃)，减压干燥(60℃)，滤液减压浓缩(60℃)，减压干燥(60℃)，获得干膏，粉碎，得干膏粉，加入糊精1/4倍量，混匀，加入70％乙醇制粒，干燥，整粒，即得制剂颗粒。所得颗粒亦可灌装胶囊或压成片剂。
[0100]
实施例3
[0101]
按处方比例称取各药味饮片，加入7倍量水，煎煮3次，每次60分钟，滤过，滤液减压浓缩(70℃)，喷雾干燥，进口风温150-180℃，获得干膏粉，加入糊精1/5倍量，混匀，加入95％乙醇制粒，干燥，整粒，即得制剂颗粒。所得颗粒亦可灌装胶囊或压成片剂。
[0102]
实施例4毒性实验
[0103]
本项研究按照国家glp规范要求实施，观察sd大鼠连续3个月(13周)经口灌胃给予不同剂量的中药组合物中间体干膏粉药液后出现的毒性反应和死亡情况，为临床应用中的毒性反应的监测及解救措施提供参考。
[0104]
试验选用检疫和体重合格的spf级sd大鼠120只，雌雄各半，465
×
300
×
200mm3笼里饲养，每笼5只。按照国标(gb14925-2010)spf级实验动物环境条件要求进行饲养，动物检疫和适应环境饲养5天。
[0105]
本试验观察了sd大鼠连续3个月(13周)经口灌胃给予不同剂量的本发明中药组合物中间体干膏粉药液后的长期毒性反应。选用sd大鼠160只，雌雄各半，按性别体重随机分为4组，分别为本发明中药组合物中间体干膏粉低剂量组(17.01g生药/kg)、本发明中药组合物中间体干膏粉中剂量组(34.02g生药/kg)、本发明中药组合物中间体干膏粉高剂量组(45.36g生药/kg)，按15ml/kg体积灌胃给药，连续给药4周，并经4周停药恢复期。给药中期(第7周末)、给药末期(第13周末)及恢复期末(第17周末)按计划分别解剖sd大鼠40只(10只/组)、80只(20只/组)、40只(10只/组)，雌雄各半。检查项目包括：一般临床观察；体重、摄食量测定；尿常规、血液学、血液生化、凝血及电解质检查、眼科检查、骨髓涂片；脏器系数测定；组织病理学检查等。
[0106]
试验结果：
[0107]
试验期间，所有动物均按计划实施安乐死，无动物意外死亡。
[0108]
一般临床观察：sd大鼠经口灌胃给予本发明中药组合物中间体干膏粉3个月(13周)，空白对照组和本发明中药组合物中间体干膏粉低、中、高剂量组动物一般状况等均未见明显异常。
[0109]
体重、摄食量：sd大鼠连续3个月(13周)经口灌胃给予低、中、高剂量(17.01、34.02、45.36g生药/kg)的本发明中药组合物中间体干膏粉，对体重、摄食量无明显影响。
[0110]
血液学、生化、电解质、凝血及尿常规检查：sd大鼠连续3个月(13周)经口灌胃给予低、中、高剂量(17.01、34.02、45.36g生药/kg)的本发明中药组合物中间体干膏粉，对动物血液学、生化、电解质、凝血及尿常规指标无明显影响。
[0111]
眼科检查：本发明中药组合物中间体干膏粉各剂量组及空白对照组眼科检查未见明显异常。
[0112]
骨髓检查：外周血象检查未见与药物毒性有关的异常，故骨髓涂片未进行显微镜下观察。
[0113]
对脏器系数的影响：sd大鼠连续3个月(13周)经口灌胃给予低、中、高剂量(17.01、34.02、45.36g生药/kg)的本发明中药组合物中间体干膏粉，对脏器系数的影响需结合病理检查结果进一步分析。
[0114]
大体解剖和病理检查：未发现有毒性意义的病理改变。
[0115]
结论：在本实验条件下，sd大鼠连续3个月(13周)经口灌胃给予低、中、高剂量(17.01、34.02、45.36g生药/kg)的本发明中药组合物中间体干膏粉，暂未见明显毒性反应剂量(noael)为45.36g生药/kg。
[0116]
实施例5药效学研究
[0117]
1.实验目的
[0118]
根据本发明中药组合物中间体干膏粉功能主治，本研究采用角膜环钻压痕法及角
膜上皮划痕法联合单纯性疱疹病毒(herpes simplex virus，hsv)感染日本大耳白兔眼建立复发性单纯疱疹病毒性角膜炎模型，经口灌胃给予不同剂量的本发明中药组合物中间体干膏粉，通过手持裂隙灯观察角膜病变，并取泪液进行空斑试验，同时进行角膜组织病理学检查，综合评价本发明中药组合物中间体干膏粉对复发单纯疱疹病毒性角膜炎模型的药效作用，另采用二甲苯致炎和醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加试验，并采用扭体试验，考察本发明中药组合物中间体干膏粉抗炎镇痛作用，为其临床用药提供实验依据。
[0119]
2.实验方法
[0120]
(1)本发明中药组合物中间体干膏粉对实验兔复发性单纯疱疹性角膜炎模型的影响：选用检疫合格日本大耳兔56只，雌雄各半，分为8只正常对照组和48只模型组，其中模型组动物采用乙醚吸入轻微麻醉后，用6mm环钻在角膜中央作一压痕，并以6.5号针头在压痕内作“#”划痕(深度仅限上皮层)，采用100μl单纯性疱疹病毒原液滴入兔双眼结膜囊内，轻合眼睑按摩1min，造模3周左右肉眼和手持裂隙灯观察模型组动物角膜基本恢复，采用uvb照射(光源tw20，波长302nm，照射剂量200mj/cm2)角膜诱导复发单纯疱疹病毒性角膜炎。选取眼睑红肿明显的模型动物，按体重及性别随机分成5组，体重2.5～3.0kg，分别为模型对照组、阿昔洛韦片组、本发明中药组合物中间体干膏粉低、中及高剂量组，每组8只动物，雌雄各半。各组按5ml/kg经口灌胃给予不同浓度的药液，正常对照组及模型对照组经口灌胃给予等体积的纯水，每天1次，连续14天。定期观察各组动物眼部情况，于末次给药后采用蘸有dmem培养液的棉签擦拭左右两侧角膜，检测各组泪腺的病毒滴度，采集后各组动物按15mg/kg静脉注射10mg/ml丙泊酚乳状注射液麻醉后股动物放血安乐死，解剖取角膜组织，经福尔马林灌注固定后，石蜡包埋、切片、he染色，置于光镜下观察角膜组织病理学变化。
[0121]
(2)本发明中药组合物中间体干膏粉对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响：选用检疫合格的spf级icr小鼠50只，雌雄各半，体重18.5～25.2g，按性别及体重随机分为空白对照组、阿司匹林肠溶片组(0.23g/kg)、本发明中药组合物中间体干膏粉低、中、高剂量组，每组10只动物。各组小鼠按20ml/kg经口灌胃给予相应剂量的药液，空白对照组经口灌胃给予等体积纯水，1次/日，连续7天。于末次给药后1h，各组小鼠右耳涂抹50μl的二甲苯致炎，左耳不涂作为对照，30min后处死，沿耳廓基线剪下双耳，用直径6mm打孔器冲下左耳和右耳同一部位的圆片，称取左、右两耳重量，计算肿胀度。
[0122]
(3)本发明中药组合物中间体干膏粉对醋酸致小鼠毛细血管通透性的影响：选取检疫合格的icr小鼠50只，雌雄各半，体重18.3～24.1g，按性别体重随机分为空白对照组、阿司匹林肠溶片组、本发明中药组合物中间体干膏粉低、中、高剂量组，每组10只动物。各组小鼠按给药体积20ml/kg经口灌胃给予相应药物，空白对照组经口灌胃等体积给予纯水，每日1次，连续给药7天。末次给药后1h，各组小鼠按10ml/kg尾静脉注射0.5％伊文斯蓝溶液，随即腹腔注射0.8％醋酸溶液，0.2ml/只，1h后颈椎脱臼处死，腹腔注射0.9％氯化钠注射液4.0ml，轻揉小鼠腹部后，剪开腹部皮肤肌肉，吸取1.0ml液体，3000r/min离心15min，取上清液于590nm比色测定吸光度值。
[0123]
(4)本发明中药组合物中间体干膏粉对醋酸致小鼠扭体的影响：选取检疫合格的icr小鼠50只，雌雄各半，体重16.3～26.9g，按性别体重随机分为空白对照组、阿司匹林肠溶片组、本发明中药组合物中间体干膏粉低、中、高剂量组，每组10只动物。各组动物按20ml/kg经口灌胃给予相应浓度药液，空白对照组经口灌胃给予等体积的纯水，每天1次，连
续给药7天。末次给药后30min各组小鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/只，连续观察15min。观察记录每只小鼠的扭体反应(腹部内凹，伸展后肢，臀部抬高)次数。
[0124]
3.实验结果
[0125]
(1)本发明中药组合物中间体干膏粉对实验兔复发性单纯疱疹性角膜炎模型的影响：角膜环钻压痕法及角膜上皮划痕法联合单纯性疱疹病毒(herpes simplex virus，hsv)诱导实验兔，建立单纯性疱疹病毒角膜炎模型，结果显示造模后d3模型组动物双侧眼睑均出现轻微红肿，角膜出现多个点状病变，造模后d7动物双侧眼睑严重红肿，角膜点状病变覆盖率较广，造模后d14眼睑红肿仍然较严重，但是角膜点状病变稍有恢复，大约直至3周角膜基本恢复，经200mj/cm2紫外照射后，次日模型组动物角膜混浊加重，点状病变较多。模型动物眼部经荧光素钠染色后，采用手持裂隙灯显微镜观察动物角膜，显示角膜出现多处点状溃疡，眼底混浊，且角膜评分显著增加，且泪腺病毒滴度显著增加，提示复发性单纯性疱疹病毒角膜炎模型构建成功。模型实验兔经口灌胃不同剂量的本发明中药组合物中间体干膏粉，每天1次，连续给药14天，结果显示本发明中药组合物中间体干膏粉中、高剂量(1.11、2.22g干膏粉/kg)均能明显减少角膜评分，减轻角膜及眼睑病变，低、中及高剂量(1.11、2.22g干膏粉/kg)均能抑制角膜单纯疱疹性病毒复制。
[0126]
(2)本发明中药组合物中间体干膏粉对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响：本发明中药组合物中间体干膏粉高剂量(6.19g干膏粉/kg)能明显减轻二甲苯诱导耳廓肿胀。
[0127]
(3)本发明中药组合物中间体干膏粉对醋酸致小鼠毛细血管通透性的影响：本发明中药组合物中间体干膏粉低、中、高剂量(1.55、3.10、6.19g干膏粉/kg)均能明显降低小鼠毛细血管通透性吸光度值，能抑制小鼠毛细血管通透性增加。
[0128]
(4)本发明中药组合物中间体干膏粉对醋酸致小鼠扭体的影响：本发明中药组合物中间体干膏粉低、中、高剂量(1.55、3.10、6.19g干膏粉/kg)均能明显减少醋酸致小鼠扭体次数，高剂量能明显延长扭体潜伏期。
[0129]
4.实验结论
[0130]
综上所述，在本试验条件下，本发明中药组合物中间体干膏粉对复发性单纯疱疹病毒模型具有明显治疗作用，并具有抗炎镇痛的作用。
[0131]
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。