重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗及其应用

本发明涉及生物工程，尤其涉及一种稳定表达h9亚型禽流感病毒ha基因与传染性法氏囊vp2基因的重组火鸡疱疹病毒(rhvt)活载体疫苗及其应用。

背景技术：

1、禽流感是由禽流感病毒(avian influenza virus,aiv)引起禽类感染的一种急性接触性传染病。禽流感病毒属于正粘病毒科a型流感病毒属，根据oie的分类标准，依病毒的毒力和致病力强弱不同，可将禽流感病毒分为高致病力禽流感病毒和低致病力禽流感病毒，h9n2病毒属于低致病性亚型禽流感病毒。

2、h9n2流感病毒是目前在全球范围流行的一种低致病性禽流感病毒，可以感染包括鸡、鸭、鹌鹑等禽类。h9n2亚型禽流感病毒与其他病原体共同感染可以引起产蛋量减少、死亡率增高，造成了巨大的经济损失。目前主要通过免疫的方式防止鸡感染h9n2，目前使用的h9n2疫苗是灭活疫苗，包括单苗、多价灭活苗等类型。然而，由于灭活疫苗不能有效刺激细胞免疫与粘膜免疫，导致使用灭活疫苗免疫后并不能完全阻止h9n2感染，导致病毒在免疫压力下，持续变异，不利于h9n2病毒的防控。

3、传染性法氏囊病(ibd)是由传染性法氏囊病病毒(ibdv)引起的，损害鸡的免疫器官，引起免疫抑制疾病。ibdv在全世界范围内流行，疫苗免疫是防控ibd的主要手段。目前常用的疫苗为重组活疫苗、减毒活疫苗与灭活疫苗。目前变异型ibdv在国内与国外广泛流行，给禽养殖行业带来巨大的经济损失，急需研制针对变异型ibdv的新型疫苗。

4、马立克氏病(md)是一种由马立克氏病病毒(mdv)引起的鸡的淋巴增殖性疾病。由于火鸡疱疹病毒(hvt)与mdv病毒具有一定的进化亲缘关系，而且hvt对鸡没有致病性，hvt一直被广泛用于预防mdv强毒(vmdv)感染。但目前仍缺乏安全高效的预防mdv强毒感染的活疫苗。

技术实现思路

1、本发明要解决目前缺乏能同时预防h9亚型禽流感病毒、传染性法氏囊病毒和马立克氏病毒感染的安全有效疫苗的技术问题，提供一种重组火鸡疱疹病毒(hvt)活载体疫苗，该疫苗不仅稳定表达h9亚型禽流感病毒主要抗原蛋白ha，而且稳定表达传染性法氏囊病毒vp2抗原蛋白，在免疫动物体内，可以诱导良好的体液免疫与细胞免疫应答，适用于作为禽流感、传染性法氏囊病和马立克氏病的三价活载体疫苗。

2、为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

3、在本发明的一个方面，提供了一种重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，所述活载体疫苗包含h9亚型禽流感病毒ha基因和传染性法氏囊病病毒vp2基因，并稳定表达h9亚型禽流感病毒ha蛋白和传染性法氏囊病病毒vp2蛋白。

4、所述重组火鸡疱疹病毒的基因组含有表达低致病性h9亚型禽流感病毒ha蛋白的基因、表达传染性法氏囊病病毒vp2蛋白的基因及cmv真核启动子。

5、在一个具体实施方式中，所述重组火鸡疱疹病毒(rhvt)稳定表达h9亚型禽流感病毒ha基因与传染性法氏囊病病毒vp2基因。

6、在一个具体实施方式中，所述重组火鸡疱疹病毒(rhvt)利用cmv启动子与polya尾同时表达h9亚型禽流感病毒ha基因与传染性法氏囊病病毒vp2基因。

7、在一个具体实施方式中，所述重组火鸡疱疹病毒(rhvt)中，h9亚型禽流感病毒ha基因的插入位置为火鸡疱疹病毒的ul区域；传染性法氏囊病病毒vp2基因的插入位置为火鸡疱疹病毒的us区域。

8、优选的，所述h9亚型禽流感病毒ha蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述h9亚型禽流感病毒ha基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

9、优选的，所述传染性法氏囊病病毒vp2蛋白的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述传染性法氏囊病病毒vp2基因的核苷酸序列如seq id no.4所示。

10、在本发明的另一方面，还提供了一种上述重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗在制备预防和/或治疗禽流感、传染性法氏囊病、和马立克氏病的疫苗中的应用。

11、本发明的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，是利用火鸡疱疹病毒为活载体，构建表达禽流感病毒与传染性法氏囊病毒的主要免疫保护性抗原基因的重组活载体疫苗，在靶动物体内，该类重组活载体疫苗，可以诱导良好的体液免疫与细胞免疫应答，可以弥补常规灭活疫苗不能有效激活细胞免疫的缺陷。本发明获得的活载体疫苗(rhvt-h9-vp2)具有血清ⅲ型mdv疫苗株的弱毒特征，可作为禽流感、传染性法氏囊病和马立克氏病三价活载体疫苗，具有很好的应用前景。

技术特征：

1.一种重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述活载体疫苗包含h9亚型禽流感病毒ha基因和传染性法氏囊病病毒vp2基因，并稳定表达h9亚型禽流感病毒ha蛋白和传染性法氏囊病病毒vp2蛋白。

2.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述h9亚型禽流感病毒ha基因在病毒活载体中的插入位置为火鸡疱疹病毒的ul区域。

3.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述传染性法氏囊病病毒vp2基因在病毒活载体中的插入位置为火鸡疱疹病毒的us区域。

4.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述h9亚型禽流感病毒ha蛋白的氨基酸序列如seq id no.1所示。

5.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述h9亚型禽流感病毒ha基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。

6.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述传染性法氏囊病病毒vp2蛋白的氨基酸序列如seq id no.3所示。

7.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述传染性法氏囊病病毒vp2基因的核苷酸序列如seq id no.4所示。

8.权利要求1-7任一项所述重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗在制备预防和/或治疗禽流感的疫苗中的应用。

9.权利要求1-7任一项所述重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗在制备预防和/或治疗传染性法氏囊病的疫苗中的应用。

10.权利要求1-7任一项所述重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗在制备预防和/或治疗马立克氏病的疫苗中的应用。

技术总结
本发明公开了一种重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，所述活载体疫苗包含H9亚型禽流感病毒HA基因和传染性法氏囊病病毒VP2基因，并稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白和传染性法氏囊病病毒VP2蛋白。本发明还公开了上述重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗的应用。本发明的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，在免疫动物体内，可以诱导良好的免疫应答，具有血清Ⅲ型MDV疫苗株的弱毒特征，可作为禽流感、传染性法氏囊病和马立克氏病三价活载体疫苗，具有很好的应用前景。

技术研发人员：李泽君,刘芹防,张志飞
受保护的技术使用者：中国农业科学院上海兽医研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12