用于治疗疾病的乌司他丁多肽的制作方法

本公开内容的实施方案包括用于治疗与嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)升高相关的疾病(包括ne相关的肺和皮肤疾病)的方法和包含乌司他丁多肽的组合物。相关技术的描述乌司他丁(也为尿胰蛋白酶抑制剂)是来源于人尿的糖蛋白蛋白酶抑制剂，其抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、乳酸盐、脂肪酶、透明质酸酶和各种胰酶的活性。高纯度的乌司他丁已经在临床上用于治疗急性胰腺炎、慢性胰腺炎、stevens-johnson综合征、烧伤、感染性休克、中毒性表皮坏死松解症(ten)和其他疾病。然而，需要大量乌司他丁，因为它是丝氨酸蛋白酶抑制剂——一种有效的蛋白酶抑制剂，其与蛋白酶的活性位点不可逆地反应，并因此通常与其靶标一起以1:1的化学计量消耗。这种特性连同全身给药后实现的相对低的体内暴露为从天然乌司他丁蛋白生成治疗剂带来了挑战。嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)是在炎症期间由嗜中性粒细胞和巨噬细胞分泌的丝氨酸蛋白酶。已经报道嗜中性粒细胞弹性蛋白酶和类似蛋白酶的过量活性引起组织损伤，并改变许多肺病况如肺炎、呼吸窘迫和急性肺损伤(polverino等人,chest.152(2):249-262,2017)，以及皮肤病况如大疱性类天疱疮(liu等人,j clin invest.105(1):113-123,2000)中的重塑过程。本领域需要具有与它们的重组产生和/或治疗效用相关的改进特征的乌司他丁多肽，并且还需要将乌司他丁多肽的临床效用扩展到其他疾病。

背景技术：

技术实现思路

0、概述

1、本公开内容的实施方案包括治疗、改善有需要的对象中的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)相关疾病的症状或抑制有需要的对象中的嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)相关疾病的进展的方法，其包括向对象施用包含乌司他丁多肽的药物组合物。

2、在某些实施方案中，ne相关疾病包括肺病。在一些实施方案中，肺病选自以下中的一种或多种：α-1抗胰蛋白酶(a1at)缺乏症，包括其并发症、囊性纤维化、肺炎、急性肺损伤(ali)、急性呼吸窘迫综合征(ards)、慢性阻塞性肺病(copd)、支气管扩张和任选与冠状病毒(例如，covid-19)或流感感染相关的病毒诱导的肺损伤，包括以上的组合。在一些实施方案中，所述ne相关疾病是α-1抗胰蛋白酶(a1at)缺乏症，包括其并发症。

3、在某些实施方案中，对象具有降低的血清a1at水平，任选地具有a1at的正常血清水平的约或小于约80％、a1at的正常血清水平的约或小于约60％、a1at的正常血清水平的约或小于约40％或者a1at的正常血清水平的约10％-15％。

4、在一些实施方案中，对象具有任选地选自pims、piss、pimz、pisz和pizz的a1at表型/基因型。在某些实施方案中，对象具有选自缺陷型a1at等位基因和无效型a1at等位基因的a1at基因型。在具体的实施方案中，a1at缺陷型等位基因是e342k等位基因(z等位基因)或e264v等位基因(s等位基因)。

5、一些实施方案包括以下步骤：

6、(a)测定对象中的血清a1at水平和/或a1at表型/基因型；以及

7、(b)如果对象具有a1at表型/基因型和/或a1at水平相对于正常降低的血清水平，则向对象施用药物组合物。

8、在某些实施方案中，a1at表型/基因型选自pims、piss、pimz、pisz和pizz；其中所述a1at基因型包含缺陷型a1at等位基因或无效型a1at等位基因；和/或其中血清a1at水平是a1at的正常血清水平的约或小于约80％、60％、40％、20％、15％或10％。在一些实施方案中，a1at缺陷型等位基因是e342k等位基因(z等位基因)或e264v等位基因(s等位基因)。

9、在某些实施方案中，a1at缺乏症的并发症包括哮喘、支气管扩张、肝硬化、copd、呼吸衰竭和血管炎中的任何一种或多种。在某些实施方案中，对象具有呼吸短促(任选地在用力时和随后休息时)、喘息、痰产生或反复呼吸感染中的任何一种或多种。

10、特定的实施方案包括施用包含乌司他丁多肽的药物组合物与用于治疗a1at缺乏症的另外的治疗剂的组合，所述另外的治疗剂任选地是针对疾病相关的a1at突变体的rna干扰(rnai)剂、a1at增强疗法、支气管扩张剂、吸入的类固醇、抗生素药剂或抗病毒药剂。

11、在某些实施方案中，ne相关疾病是囊性纤维化，并且其中所述对象在基因囊性纤维化跨膜传导调节因子(cftr)中具有突变。在一些实施方案中，ne相关疾病包括皮肤或粘膜疾病。在特定的实施方案中，皮肤或粘膜疾病是白塞病、寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、大疱性类天疱疮和川崎病。

12、在一些实施方案中，ne相关疾病是自身免疫性疾病，例如，选自重症肌无力、温性自身免疫性溶血性贫血、甲状腺眼病、特发性血小板减少性紫癜、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、视神经脊髓炎、格林-巴利综合征和pla2r+膜性肾病的自身免疫性疾病。

13、在某些实施方案中，相对于参考标准或健康对照，对象具有增加的ne水平或活性。

14、一些实施方案包括以下步骤：

15、(a)测定来自对象的样品中的ne水平或活性；以及

16、(b)如果相对于参考标准或健康对照，样品具有增加的ne水平或活性，则向对象施用药物组合物。

17、在一些实施方案中，样品是痰样品(任选地包含下气道的粘液)、血液或血清样品，或者皮肤或粘膜样品。在一些实施方案中，痰样品包含气道嗜中性粒细胞，并且该方法包括测定样品中表面结合的ne的水平或活性。在一些实施方案中，该方法包括测定样品中游离ne的水平或活性。

18、在一些实施方案中，乌司他丁多肽是重组乌司他丁多肽或尿来源的乌司他丁多肽。在一些实施方案中，乌司他丁多肽包含seq id no:2、由seq id no:2组成或基本上由seq id no:2组成，并且包含在残基n45处的n-连接的聚糖和在残基t17处的o-连接的聚糖。在一些实施方案中，乌司他丁多肽包含选自表u1的氨基酸序列或者其具有至少一种乌司他丁活性的活性变体或片段，由选自表u1的氨基酸序列或者其具有至少一种乌司他丁活性的活性变体或片段组成，或者基本上由选自表u1的氨基酸序列或者其具有至少一种乌司他丁活性的活性变体或片段组成。

19、在一些实施方案中，乌司他丁多肽包含以下、由以下组成或基本上由以下组成：

20、(a)seq id no:1或seq id no:1的变体，所述变体具有对o-连接的糖基化的至少一个修饰和至少一种乌司他丁活性；

21、(b)seq id no:1或(a)的片段，所述片段具有至少一种乌司他丁活性；或者

22、(c)(a)或(b)的变体，所述变体与(a)或(b)至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同，并且具有至少一种乌司他丁活性。

23、在一些实施方案中，(a)包含在seq id no:1的残基8-11的o-连接的糖基化位点处的取代或缺失，任选地在seq id no:1的残基s10处的取代或缺失，任选地s10a取代，或者(b)包含seq id no:1或2的约20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125或130个连续的氨基酸，由seq id no:1或2的约20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125或130个连续的氨基酸组成，或者基本上由seq id no:1或2的约20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125或130个连续的氨基酸组成。

24、在一些实施方案中，(b)包含seq id no:1或2的约20-130、20-120、20-110、20-100、20-90、20-80、20-70、20-60、20-50、20-40、20-30、30-130、30-120、30-110、30-100、30-90、30-80、30-70、30-60、30-50、30-40、40-130、40-120、40-110、40-100、40-90、40-80、40-70、40-60、40-50、50-130、50-120、50-110、50-100、50-90、50-80、50-70、50-60、60-130、60-120、60-110、60-100、60-90、60-80、60-70、70-130、70-120、70-110、70-100、70-90、70-80、80-130、80-120、80-110、80-100、80-90、90-130、90-120、90-110、90-100、100-130、100-120或100-110个连续的氨基酸，由seq id no:1或2的约20-130、20-120、20-110、20-100、20-90、20-80、20-70、20-60、20-50、20-40、20-30、30-130、30-120、30-110、30-100、30-90、30-80、30-70、30-60、30-50、30-40、40-130、40-120、40-110、40-100、40-90、40-80、40-70、40-60、40-50、50-130、50-120、50-110、50-100、50-90、50-80、50-70、50-60、60-130、60-120、60-110、60-100、60-90、60-80、60-70、70-130、70-120、70-110、70-100、70-90、70-80、80-130、80-120、80-110、80-100、80-90、90-130、90-120、90-110、90-100、100-130、100-120或100-110个连续的氨基酸组成，或者基本上由seq id no:1或2的约20-130、20-120、20-110、20-100、20-90、20-80、20-70、20-60、20-50、20-40、20-30、30-130、30-120、30-110、30-100、30-90、30-80、30-70、30-60、30-50、30-40、40-130、40-120、40-110、40-100、40-90、40-80、40-70、40-60、40-50、50-130、50-120、50-110、50-100、50-90、50-80、50-70、50-60、60-130、60-120、60-110、60-100、60-90、60-80、60-70、70-130、70-120、70-110、70-100、70-90、70-80、80-130、80-120、80-110、80-100、80-90、90-130、90-120、90-110、90-100、100-130、100-120或100-110个连续的氨基酸组成。

25、在一些实施方案中，(b)包含seq id no:1或2的结构域1，由seq id no:1或2的结构域1组成，或者基本上由seq id no:1或2的结构域1组成。在一些实施方案中，(b)包含seqid no:1或2的结构域2，由seq id no:1或2的结构域2组成，或者基本上由seq id no:1或2的结构域2组成。

26、在一些实施方案中，乌司他丁多肽包含以下氨基酸序列，由以下氨基酸序列组成，或者基本上由氨基酸序列组成，所述氨基酸序列与seq id no:2(utiδcs)至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同，保留了在seq id no:2的位置s10处的取代，任选地s10a取代。在一些实施方案中，乌司他丁多肽具有在残基n45处的n-连接的聚糖和在残基t17处的o-连接的聚糖，所述残基由seq id no:1或2定义。

27、在一些实施方案中，乌司他丁多肽与fc区融合以形成乌司他丁-fc融合多肽，其中所述乌司他丁-fc融合多肽具有至少一种乌司他丁活性。在一些实施方案中，fc区包含来自iga、igd、ige、igg或igm免疫球蛋白重链的ch2区、ch3区、ch4区和/或铰链区，由来自iga、igd、ige、igg或igm免疫球蛋白重链的ch2区、ch3区、ch4区和/或铰链区组成，或者基本上由来自iga、igd、ige、igg或igm免疫球蛋白重链的ch2区、ch3区、ch4区和/或铰链区组成。在一些实施方案中，fc区包含表f1的人fc区氨基酸序列中的一种或多种，包括其变体、片段、同源物、直系同源物、旁系同源物和组合；由表f1的人fc区氨基酸序列中的一种或多种，包括其变体、片段、同源物、直系同源物、旁系同源物和组合组成；或者基本上由表f1的人fc区氨基酸序列中的一种或多种，包括其变体、片段、同源物、直系同源物、旁系同源物和组合组成。在一些实施方案中，乌司他丁-fc融合多肽包含相对于野生型fc区具有至少一种改变的效应子功能和/或药代动力学(pk)特征的修饰的fc区。

28、在一些实施方案中，至少一种乌司他丁活性包括蛋白酶抑制剂活性，任选地嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(ne)抑制剂活性或胰蛋白酶抑制剂活性，以及任选地抗炎活性。在一些实施方案中，至少一种乌司他丁活性是胰蛋白酶抑制剂活性，并且其中所述乌司他丁多肽作为胰蛋白酶抑制剂具有约或至少约1000-3000u/mg，或者约或至少约1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900或3000u/mg的比活性，其中一个单位(u)是将2μg胰蛋白酶的活性抑制50％的乌司他丁多肽的量。在一些实施方案中，至少一种乌司他丁活性是ne-抑制剂活性，并且乌司他丁多肽在嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性的体外测定中具有约10μg/ml或更低值的ic50，任选地具有约10、9、8、7、6、5、4、3、2或1μg/ml或更低值的ic50，包括其间的所有范围和整数，任选地具有约1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3、1-2、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、2-3、3-10、3-9、3-9、3-7、3-6、3-5、3-4 10μg/ml的ic50。在一些实施方案中，乌司他丁多肽在嗜中性粒细胞弹性蛋白酶活性的体外测定中具有约100nm或更低值的ic50，任选地具有约100、90、80、70、60、50、40、30、20或10nm或更低值的ic50，包括其间的所有范围和整数，任选地具有约10-100、10-90、10-80、10-70、10-60、10-50、10-40、10-30、10-20、20-100、20-90、20-80、20-70、20-60、20-50、20-40、20-30、30-100、30-90、30-80、30-70、30-60、30-50、30-40、40-100、40-90、40-80、40-70、40-60或40-50nm的ic50。

29、在一些实施方案中，药物组合物具有基于蛋白质或基于重量-重量的至少约80％、85％、90％、95％、98％或99％的纯度，并且大体上无聚集，任选地少于约10％、9％、8％、7％、6％或5％聚集的，并且其中所述组合物大体上无内毒素。在一些实施方案中，药物组合物通过sec-hplc具有小于约1eu内毒素/mg蛋白、小于约100ng宿主细胞蛋白/mg蛋白、小于约10pg宿主细胞dna/mg蛋白和/或大于约95％单峰纯度。

30、某些实施方案包括通过静脉内(iv)、皮下(sc)、吸入、局部或口服施用向对象施用药物组合物。某些实施方案包括通过吸入施用，任选地利用喷雾器、定量吸入器或干粉吸入器，将所述药物组合物施用至患有肺病的对象。一些实施方案包括通过局部或口服施用，任选地作为口腔漱口剂，将所述药物组合物施用至患有皮肤或粘膜疾病的对象。

31、在一些实施方案中，药物组合物包含剂量为约50,000u/kg至约1,000,000u/kg的乌司他丁多肽，包括其间的所有整数和范围。

32、在一些实施方案中，任选地如在约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月或更长的时间段内测量的，相对于对照或参考，所述药物组合物的施用将所述对象中的ne水平或活性任选地降低约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％或更多。在一些实施方案中，药物组合物的施用将有需要的对象的预期寿命任选地增加约或至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60年或更多年。

33、在一些实施方案中，对象患有肺病，并且任选地如在约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月或更长的时间段内测量的，相对于对照或参考，药物组合物的施用将对象的呼吸功能改善约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％或更多。在一些实施方案中，改善的呼吸功能选自以下中的一种或多种：增加的呼气时间、增加的吸气时间、降低的峰值呼气流量、降低的峰值吸气流量、降低的呼吸分钟体积(rmv)和降低的呼吸速率。

34、在一些实施方案中，对象患有皮肤或粘膜疾病，并且任选地如在约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月或更长的时间段内测量的，相对于对照或参考，药物组合物的施用将对象中的皮肤或粘膜损伤或溃疡减少约或至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％、1000％或更多。

35、                         序列表

36、<110>  代阿麦迪卡美国股份有限公司(diamedica usa inc.)

37、       里克·保尔斯(pauls, rick)

38、       大卫·瓦姆贝克(wambeke, david)

39、       悉尼·吉尔曼(gilman, sydney)

40、<120> 用于治疗疾病的乌司他丁多肽

41、<130>  diam-041/01wo 316251-2197

42、<150>  us 63/143,403

43、<151>  2021-01-29

44、<160>  33

45、<170>  patentin version 3.5

46、<210>  1

47、<211>  147

48、<212>  prt

49、<213>  智人(homo sapiens)

50、<400>  1

51、ala val leu pro gln glu glu glu gly ser gly gly gly gln leu val

52、1               5                   10                  15

53、thr glu val thr lys lys glu asp ser cys gln leu gly tyr ser ala

54、            20                  25                  30

55、gly pro cys met gly met thr ser arg tyr phe tyr asn gly thr ser

56、        35                  40                  45

57、met ala cys glu thr phe gln tyr gly gly cys met gly asn gly asn

58、    50                  55                  60

59、asn phe val thr glu lys glu cys leu gln thr cys arg thr val ala

60、65                  70                  75                  80

61、ala cys asn leu pro ile val arg gly pro cys arg ala phe ile gln

62、                85                  90                  95

63、leu trp ala phe asp ala val lys gly lys cys val leu phe pro tyr

64、            100                 105                 110

65、gly gly cys gln gly asn gly asn lys phe tyr ser glu lys glu cys

66、        115                 120                 125

67、arg glu tyr cys gly val pro gly asp gly asp glu glu leu leu arg

68、    130                 135                 140

69、phe ser asn

70、145

71、<210>  2

72、<211>  147

73、<212>  prt

74、<213>  智人(homo sapiens)

75、<400>  2

76、ala val leu pro gln glu glu glu gly ala gly gly gly gln leu val

77、1               5                   10                  15

78、thr glu val thr lys lys glu asp ser cys gln leu gly tyr ser ala

79、            20                  25                  30

80、gly pro cys met gly met thr ser arg tyr phe tyr asn gly thr ser

81、        35                  40                  45

82、met ala cys glu thr phe gln tyr gly gly cys met gly asn gly asn

83、    50                  55                  60

84、asn phe val thr glu lys glu cys leu gln thr cys arg thr val ala

85、65                  70                  75                  80

86、ala cys asn leu pro ile val arg gly pro cys arg ala phe ile gln

87、                85                  90                  95

88、leu trp ala phe asp ala val lys gly lys cys val leu phe pro tyr

89、            100                 105                 110

90、gly gly cys gln gly asn gly asn lys phe tyr ser glu lys glu cys

91、        115                 120                 125

92、arg glu tyr cys gly val pro gly asp gly asp glu glu leu leu arg

93、    130                 135                 140

94、phe ser asn

95、145

96、<210>  3

97、<211>  70

98、<212>  prt

99、<213>  智人(homo sapiens)

100、<400>  3

101、ala val leu pro gln glu glu glu gly ser gly gly gly gln leu val

102、1               5                   10                  15

103、thr glu val thr lys lys glu asp ser cys gln leu gly tyr ser ala

104、            20                  25                  30

105、gly pro cys met gly met thr ser arg tyr phe tyr asn gly thr ser

106、        35                  40                  45

107、met ala cys glu thr phe gln tyr gly gly cys met gly asn gly asn

108、    50                  55                  60

109、asn phe val thr glu lys

110、65                  70

111、<210>  4

112、<211>  66

113、<212>  prt

114、<213>  智人(homo sapiens)

115、<400>  4

116、thr val ala ala cys asn leu pro ile val arg gly pro cys arg ala

117、1               5                   10                  15

118、phe ile gln leu trp ala phe asp ala val lys gly lys cys val leu

119、            20                  25                  30

120、phe pro tyr gly gly cys gln gly asn gly asn lys phe tyr ser glu

121、        35                  40                  45

122、lys glu cys arg glu tyr cys gly val pro gly asp gly asp glu glu

123、    50                  55                  60

124、leu leu

125、65

126、<210>  5

127、<211>  19

128、<212>  prt

129、<213>  智人(homo sapiens)

130、<400>  5

131、val pro ser thr pro pro thr pro ser pro ser thr pro pro thr pro

132、1               5                   10                  15

133、ser pro ser

134、<210>  6

135、<211>  101

136、<212>  prt

137、<213>  智人(homo sapiens)

138、<400>  6

139、cys cys his pro arg leu ser leu his arg pro ala leu glu asp leu

140、1               5                   10                  15

141、leu leu gly ser glu ala asn leu thr cys thr leu thr gly leu arg

142、            20                  25                  30

143、asp ala ser gly val thr phe thr trp thr pro ser ser gly lys ser

144、        35                  40                  45

145、ala val gln gly pro pro glu arg asp leu cys gly cys tyr ser val

146、    50                  55                  60

147、ser ser val leu pro gly cys ala glu pro trp asn his gly lys thr

148、65                  70                  75                  80

149、phe thr cys thr ala ala tyr pro glu ser lys thr pro leu thr ala

150、                85                  90                  95

151、thr leu ser lys ser

152、            100

153、<210>  7

154、<211>  131

155、<212>  prt

156、<213>  智人(homo sapiens)

157、<400>  7

158、gly asn thr phe arg pro glu val his leu leu pro pro pro ser glu

159、1               5                   10                  15

160、glu leu ala leu asn glu leu val thr leu thr cys leu ala arg gly

161、            20                  25                  30

162、phe ser pro lys asp val leu val arg trp leu gln gly ser gln glu

163、        35                  40                  45

164、leu pro arg glu lys tyr leu thr trp ala ser arg gln glu pro ser

165、    50                  55                  60

166、gln gly thr thr thr phe ala val thr ser ile leu arg val ala ala

167、65                  70                  75                  80

168、glu asp trp lys lys gly asp thr phe ser cys met val gly his glu

169、                85                  90                  95

170、ala leu pro leu ala phe thr gln lys thr ile asp arg leu ala gly

171、            100                 105                 110

172、lys pro thr his val asn val ser val val met ala glu val asp gly

173、        115                 120                 125

174、thr cys tyr

175、    130

176、<210>  8

177、<211>  6

178、<212>  prt

179、<213>  智人(homo sapiens)

180、<400>  8

181、val pro pro pro pro pro

182、1               5

183、<210>  9

184、<211>  101

185、<212>  prt

186、<213>  智人(homo sapiens)

187、<400>  9

188、cys cys his pro arg leu ser leu his arg pro ala leu glu asp leu

189、1               5                   10                  15

190、leu leu gly ser glu ala asn leu thr cys thr leu thr gly leu arg

191、            20                  25                  30

192、asp ala ser gly ala thr phe thr trp thr pro ser ser gly lys ser

193、        35                  40                  45

194、ala val gln gly pro pro glu arg asp leu cys gly cys tyr ser val

195、    50                  55                  60

196、ser ser val leu pro gly cys ala gln pro trp asn his gly glu thr

197、65                  70                  75                  80

198、phe thr cys thr ala ala his pro glu leu lys thr pro leu thr ala

199、                85                  90                  95

200、asn ile thr lys ser

201、            100

202、<210>  10

203、<211>  131

204、<212>  prt

205、<213>  智人(homo sapiens)

206、<400>  10

207、gly asn thr phe arg pro glu val his leu leu pro pro pro ser glu

208、1               5                   10                  15

209、glu leu ala leu asn glu leu val thr leu thr cys leu ala arg gly

210、            20                  25                  30

211、phe ser pro lys asp val leu val arg trp leu gln gly ser gln glu

212、        35                  40                  45

213、leu pro arg glu lys tyr leu thr trp ala ser arg gln glu pro ser

214、    50                  55                  60

215、gln gly thr thr thr phe ala val thr ser ile leu arg val ala ala

216、65                  70                  75                  80

217、glu asp trp lys lys gly asp thr phe ser cys met val gly his glu

218、                85                  90                  95

219、ala leu pro leu ala phe thr gln lys thr ile asp arg leu ala gly

220、            100                 105                 110

221、lys pro thr his val asn val ser val val met ala glu val asp gly

222、        115                 120                 125

223、thr cys tyr

224、    130

225、<210>  11

226、<211>  58

227、<212>  prt

228、<213>  智人(homo sapiens)

229、<400>  11

230、glu ser pro lys ala gln ala ser ser val pro thr ala gln pro gln

231、1               5                   10                  15

232、ala glu gly ser leu ala lys ala thr thr ala pro ala thr thr arg

233、            20                  25                  30

234、asn thr gly arg gly gly glu glu lys lys lys glu lys glu lys glu

235、        35                  40                  45

236、glu gln glu glu arg glu thr lys thr pro

237、    50                  55

238、<210>  12

239、<211>  108

240、<212>  prt

241、<213>  智人(homo sapiens)

242、<400>  12

243、glu cys pro ser his thr gln pro leu gly val tyr leu leu thr pro

244、1               5                   10                  15

245、ala val gln asp leu trp leu arg asp lys ala thr phe thr cys phe

246、            20                  25                  30

247、val val gly ser asp leu lys asp ala his leu thr trp glu val ala

248、        35                  40                  45

249、gly lys val pro thr gly gly val glu glu gly leu leu glu arg his

250、    50                  55                  60

251、ser asn gly ser gln ser gln his ser arg leu thr leu pro arg ser

252、65                  70                  75                  80

253、leu trp asn ala gly thr ser val thr cys thr leu asn his pro ser

254、                85                  90                  95

255、leu pro pro gln arg leu met ala leu arg glu pro

256、            100                 105

257、<210>  13

258、<211>  117

259、<212>  prt

260、<213>  智人(homo sapiens)

261、<400>  13

262、ala ala gln ala pro val lys leu ser leu asn leu leu ala ser ser

263、1               5                   10                  15

264、asp pro pro glu ala ala ser trp leu leu cys glu val ser gly phe

265、            20                  25                  30

266、ser pro pro asn ile leu leu met trp leu glu asp gln arg glu val

267、        35                  40                  45

268、asn thr ser gly phe ala pro ala arg pro pro pro gln pro arg ser

269、    50                  55                  60

270、thr thr phe trp ala trp ser val leu arg val pro ala pro pro ser

271、65                  70                  75                  80

272、pro gln pro ala thr tyr thr cys val val ser his glu asp ser arg

273、                85                  90                  95

274、thr leu leu asn ala ser arg ser leu glu val ser tyr val thr asp

275、            100                 105                 110

276、his gly pro met lys

277、        115

278、<210>  14

279、<211>  107

280、<212>  prt

281、<213>  智人(homo sapiens)

282、<400>  14

283、val cys ser arg asp phe thr pro pro thr val lys ile leu gln ser

284、1               5                   10                  15

285、ser cys asp gly gly gly his phe pro pro thr ile gln leu leu cys

286、            20                  25                  30

287、leu val ser gly tyr thr pro gly thr ile asn ile thr trp leu glu

288、        35                  40                  45

289、asp gly gln val met asp val asp leu ser thr ala ser thr thr gln

290、    50                  55                  60

291、glu gly glu leu ala ser thr gln ser glu leu thr leu ser gln lys

292、65                  70                  75                  80

293、his trp leu ser asp arg thr tyr thr cys gln val thr tyr gln gly

294、                85                  90                  95

295、his thr phe glu asp ser thr lys lys cys ala

296、            100                 105

297、<210>  15

298、<211>  108

299、<212>  prt

300、<213>  智人(homo sapiens)

301、<400>  15

302、asp ser asn pro arg gly val ser ala tyr leu ser arg pro ser pro

303、1               5                   10                  15

304、phe asp leu phe ile arg lys ser pro thr ile thr cys leu val val

305、            20                  25                  30

306、asp leu ala pro ser lys gly thr val asn leu thr trp ser arg ala

307、        35                  40                  45

308、ser gly lys pro val asn his ser thr arg lys glu glu lys gln arg

309、    50                  55                  60

310、asn gly thr leu thr val thr ser thr leu pro val gly thr arg asp

311、65                  70                  75                  80

312、trp ile glu gly glu thr tyr gln cys arg val thr his pro his leu

313、                85                  90                  95

314、pro arg ala leu met arg ser thr thr lys thr ser

315、            100                 105

316、<210>  16

317、<211>  110

318、<212>  prt

319、<213>  智人(homo sapiens)

320、<400>  16

321、gly pro arg ala ala pro glu val tyr ala phe ala thr pro glu trp

322、1               5                   10                  15

323、pro gly ser arg asp lys arg thr leu ala cys leu ile gln asn phe

324、            20                  25                  30

325、met pro glu asp ile ser val gln trp leu his asn glu val gln leu

326、        35                  40                  45

327、pro asp ala arg his ser thr thr gln pro arg lys thr lys gly ser

328、    50                  55                  60

329、gly phe phe val phe ser arg leu glu val thr arg ala glu trp glu

330、65                  70                  75                  80

331、gln lys asp glu phe ile cys arg ala val his glu ala ala ser pro

332、                85                  90                  95

333、ser gln thr val gln arg ala val ser val asn pro gly lys

334、            100                 105                 110

335、<210>  17

336、<211>  15

337、<212>  prt

338、<213>  智人(homo sapiens)

339、<400>  17

340、glu pro lys ser cys asp lys thr his thr cys pro pro cys pro

341、1               5                   10                  15

342、<210>  18

343、<211>  11

344、<212>  prt

345、<213>  artificial sequence

346、<220>

347、<223>  modified human igg1 hinge sequence

348、<400>  18

349、ser asp lys thr his thr cys pro pro cys pro

350、1               5                   10

351、<210>  19

352、<211>  110

353、<212>  prt

354、<213>  智人(homo sapiens)

355、<400>  19

356、ala pro glu leu leu gly gly pro ser val phe leu phe pro pro lys

357、1               5                   10                  15

358、pro lys asp thr leu met ile ser arg thr pro glu val thr cys val

359、            20                  25                  30

360、val val asp val ser his glu asp pro glu val lys phe asn trp tyr

361、        35                  40                  45

362、val asp gly val glu val his asn ala lys thr lys pro arg glu glu

363、    50                  55                  60

364、gln tyr asn ser thr tyr arg val val ser val leu thr val leu his

365、65                  70                  75                  80

366、gln asp trp leu asn gly lys glu tyr lys cys lys val ser asn lys

367、                85                  90                  95

368、ala leu pro ala pro ile glu lys thr ile ser lys ala lys

369、            100                 105                 110

370、<210>  20

371、<211>  107

372、<212>  prt

373、<213>  智人(homo sapiens)

374、<400>  20

375、gly gln pro arg glu pro gln val tyr thr leu pro pro ser arg asp

376、1               5                   10                  15

377、glu leu thr lys asn gln val ser leu thr cys leu val lys gly phe

378、            20                  25                  30

379、tyr pro ser asp ile ala val glu trp glu ser asn gly gln pro glu

380、        35                  40                  45

381、asn asn tyr lys thr thr pro pro val leu asp ser asp gly ser phe

382、    50                  55                  60

383、phe leu tyr ser lys leu thr val asp lys ser arg trp gln gln gly

384、65                  70                  75                  80

385、asn val phe ser cys ser val met his glu ala leu his asn his tyr

386、                85                  90                  95

387、thr gln lys ser leu ser leu ser pro gly lys

388、            100                 105

389、<210>  21

390、<211>  229

391、<212>  prt

392、<213>  智人(homo sapiens)

393、<400>  21

394、met ser asp lys thr his thr cys pro pro cys pro ala pro glu leu

395、1               5                   10                  15

396、leu gly gly pro ser val phe leu phe pro pro lys pro lys asp thr

397、            20                  25                  30

398、leu met ile ser arg thr pro glu val thr cys val val val asp val

399、        35                  40                  45

400、ser his glu asp pro glu val lys phe asn trp tyr val asp gly val

401、    50                  55                  60

402、glu val his asn ala lys thr lys pro arg glu glu gln tyr asn ser

403、65                  70                  75                  80

404、thr tyr arg val val ser val leu thr val leu his gln asp trp leu

405、                85                  90                  95

406、asn gly lys glu tyr lys cys lys val ser asn lys ala leu pro ala

407、            100                 105                 110

408、pro ile glu lys thr ile ser lys ala lys gly gln pro arg glu pro

409、        115                 120                 125

410、gln val tyr thr leu pro pro ser arg glu glu met thr lys asn gln

411、    130                 135                 140

412、val ser leu thr cys leu val lys gly phe tyr pro ser asp ile ala

413、145                 150                 155                 160

414、val glu trp glu ser asn gly gln pro glu asn asn tyr lys thr thr

415、                165                 170                 175

416、pro pro val leu asp ser asp gly ser phe phe leu tyr ser lys leu

417、            180                 185                 190

418、thr val asp lys ser arg trp gln gln gly asn val phe ser cys ser

419、        195                 200                 205

420、val met his glu ala leu his asn his tyr thr gln lys ser leu ser

421、    210                 215                 220

422、leu ser pro gly lys

423、225

424、<210>  22

425、<211>  12

426、<212>  prt

427、<213>  智人(homo sapiens)

428、<400>  22

429、glu arg lys cys cys val glu cys pro pro cys pro

430、1               5                   10

431、<210>  23

432、<211>  109

433、<212>  prt

434、<213>  智人(homo sapiens)

435、<400>  23

436、ala pro pro val ala gly pro ser val phe leu phe pro pro lys pro

437、1               5                   10                  15

438、lys asp thr leu met ile ser arg thr pro glu val thr cys val val

439、            20                  25                  30

440、val asp val ser his glu asp pro glu val gln phe asn trp tyr val

441、        35                  40                  45

442、asp gly val glu val his asn ala lys thr lys pro arg glu glu gln

443、    50                  55                  60

444、phe asn ser thr phe arg val val ser val leu thr val val his gln

445、65                  70                  75                  80

446、asp trp leu asn gly lys glu tyr lys cys lys val ser asn lys gly

447、                85                  90                  95

448、leu pro ala pro ile glu lys thr ile ser lys thr lys

449、            100                 105

450、<210>  24

451、<211>  107

452、<212>  prt

453、<213>  智人(homo sapiens)

454、<400>  24

455、gly gln pro arg glu pro gln val tyr thr leu pro pro ser arg glu

456、1               5                   10                  15

457、glu met thr lys asn gln val ser leu thr cys leu val lys gly phe

458、            20                  25                  30

459、tyr pro ser asp ile ala val glu trp glu ser asn gly gln pro glu

460、        35                  40                  45

461、asn asn tyr lys thr thr pro pro met leu asp ser asp gly ser phe

462、    50                  55                  60

463、phe leu tyr ser lys leu thr val asp lys ser arg trp gln gln gly

464、65                  70                  75                  80

465、asn val phe ser cys ser val met his glu ala leu his asn his tyr

466、                85                  90                  95

467、thr gln lys ser leu ser leu ser pro gly lys

468、            100                 105

469、<210>  25

470、<211>  62

471、<212>  prt

472、<213>  智人(homo sapiens)

473、<400>  25

474、glu leu lys thr pro leu gly asp thr thr his thr cys pro arg cys

475、1               5                   10                  15

476、pro glu pro lys ser cys asp thr pro pro pro cys pro arg cys pro

477、            20                  25                  30

478、glu pro lys ser cys asp thr pro pro pro cys pro arg cys pro glu

479、        35                  40                  45

480、pro lys ser cys asp thr pro pro pro cys pro arg cys pro

481、    50                  55                  60

482、<210>  26

483、<211>  110

484、<212>  prt

485、<213>  智人(homo sapiens)

486、<400>  26

487、ala pro glu leu leu gly gly pro ser val phe leu phe pro pro lys

488、1               5                   10                  15

489、pro lys asp thr leu met ile ser arg thr pro glu val thr cys val

490、            20                  25                  30

491、val val asp val ser his glu asp pro glu val gln phe lys trp tyr

492、        35                  40                  45

493、val asp gly val glu val his asn ala lys thr lys pro arg glu glu

494、    50                  55                  60

495、gln tyr asn ser thr phe arg val val ser val leu thr val leu his

496、65                  70                  75                  80

497、gln asp trp leu asn gly lys glu tyr lys cys lys val ser asn lys

498、                85                  90                  95

499、ala leu pro ala pro ile glu lys thr ile ser lys thr lys

500、            100                 105                 110

501、<210>  27

502、<211>  107

503、<212>  prt

504、<213>  智人(homo sapiens)

505、<400>  27

506、gly gln pro arg glu pro gln val tyr thr leu pro pro ser arg glu

507、1               5                   10                  15

508、glu met thr lys asn gln val ser leu thr cys leu val lys gly phe

509、            20                  25                  30

510、tyr pro ser asp ile ala val glu trp glu ser ser gly gln pro glu

511、        35                  40                  45

512、asn asn tyr asn thr thr pro pro met leu asp ser asp gly ser phe

513、    50                  55                  60

514、phe leu tyr ser lys leu thr val asp lys ser arg trp gln gln gly

515、65                  70                  75                  80

516、asn ile phe ser cys ser val met his glu ala leu his asn arg phe

517、                85                  90                  95

518、thr gln lys ser leu ser leu ser pro gly lys

519、            100                 105

520、<210>  28

521、<211>  12

522、<212>  prt

523、<213>  智人(homo sapiens)

524、<400>  28

525、glu ser lys tyr gly pro pro cys pro ser cys pro

526、1               5                   10

527、<210>  29

528、<211>  110

529、<212>  prt

530、<213>  智人(homo sapiens)

531、<400>  29

532、ala pro glu phe leu gly gly pro ser val phe leu phe pro pro lys

533、1               5                   10                  15

534、pro lys asp thr leu met ile ser arg thr pro glu val thr cys val

535、            20                  25                  30

536、val val asp val ser gln glu asp pro glu val gln phe asn trp tyr

537、        35                  40                  45

538、val asp gly val glu val his asn ala lys thr lys pro arg glu glu

539、    50                  55                  60

540、gln phe asn ser thr tyr arg val val ser val leu thr val leu his

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542、gln asp trp leu asn gly lys glu tyr lys cys lys val ser asn lys

543、                85                  90                  95

544、gly leu pro ser ser ile glu lys thr ile ser lys ala lys

545、            100                 105                 110

546、<210>  30

547、<211>  107

548、<212>  prt

549、<213>  智人(homo sapiens)

550、<400>  30

551、gly gln pro arg glu pro gln val tyr thr leu pro pro ser gln glu

552、1               5                   10                  15

553、glu met thr lys asn gln val ser leu thr cys leu val lys gly phe

554、            20                  25                  30

555、tyr pro ser asp ile ala val glu trp glu ser asn gly gln pro glu

556、        35                  40                  45

557、asn asn tyr lys thr thr pro pro val leu asp ser asp gly ser phe

558、    50                  55                  60

559、phe leu tyr ser arg leu thr val asp lys ser arg trp gln glu gly

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561、asn val phe ser cys ser val met his glu ala leu his asn his tyr

562、                85                  90                  95

563、thr gln lys ser leu ser leu ser leu gly lys

564、            100                 105

565、<210>  31

566、<211>  112

567、<212>  prt

568、<213>  智人(homo sapiens)

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570、val ile ala glu leu pro pro lys val ser val phe val pro pro arg

571、1               5                   10                  15

572、asp gly phe phe gly asn pro arg lys ser lys leu ile cys gln ala

573、            20                  25                  30

574、thr gly phe ser pro arg gln ile gln val ser trp leu arg glu gly

575、        35                  40                  45

576、lys gln val gly ser gly val thr thr asp gln val gln ala glu ala

577、    50                  55                  60

578、lys glu ser gly pro thr thr tyr lys val thr ser thr leu thr ile

579、65                  70                  75                  80

580、lys glu ser asp trp leu gly gln ser met phe thr cys arg val asp

581、                85                  90                  95

582、his arg gly leu thr phe gln gln asn ala ser ser met cys val pro

583、            100                 105                 110

584、<210>  32

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586、<212>  prt

587、<213>  智人(homo sapiens)

588、<400>  32

589、asp gln asp thr ala ile arg val phe ala ile pro pro ser phe ala

590、1               5                   10                  15

591、ser ile phe leu thr lys ser thr lys leu thr cys leu val thr asp

592、            20                  25                  30

593、leu thr thr tyr asp ser val thr ile ser trp thr arg gln asn gly

594、        35                  40                  45

595、glu ala val lys thr his thr asn ile ser glu ser his pro asn ala

596、    50                  55                  60

597、thr phe ser ala val gly glu ala ser ile cys glu asp asp trp asn

598、65                  70                  75                  80

599、ser gly glu arg phe thr cys thr val thr his thr asp leu pro ser

600、                85                  90                  95

601、pro leu lys gln thr ile ser arg pro lys

602、            100                 105

603、<210>  33

604、<211>  131

605、<212>  prt

606、<213>  智人(homo sapiens)

607、<400>  33

608、gly val ala leu his arg pro asp val tyr leu leu pro pro ala arg

609、1               5                   10                  15

610、glu gln leu asn leu arg glu ser ala thr ile thr cys leu val thr

611、            20                  25                  30

612、gly phe ser pro ala asp val phe val gln trp met gln arg gly gln

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614、pro leu ser pro glu lys tyr val thr ser ala pro met pro glu pro

615、    50                  55                  60

616、gln ala pro gly arg tyr phe ala his ser ile leu thr val ser glu

617、65                  70                  75                  80

618、glu glu trp asn thr gly glu thr tyr thr cys val val ala his glu

619、                85                  90                  95

620、ala leu pro asn arg val thr glu arg thr val asp lys ser thr gly

621、            100                 105                 110

622、lys pro thr leu tyr asn val ser leu val met ser asp thr ala gly

623、        115                 120                 125

624、thr cys tyr

625、    130