抗转铁蛋白受体融合蛋白及其使用方法与流程

背景技术：

1、亨特综合征(hunter syndrome)或mps ii是一种由ids基因突变引起的罕见x连锁隐性病症。艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶(ids)活性不足在多种器官和组织中导致糖胺聚糖(gag)、硫酸乙酰肝素(hs)和硫酸皮肤素(ds)的积累，并导致溶酶体功能障碍。大约三分之二的患者表现出神经元病表型(nmps ii)。一种ids的重组形式已被批准用于治疗亨特综合征，但由于难以穿过血脑屏障(bbb)递送重组酶，因此其对脑的影响甚微。一种可能的方法涉及利用抗转铁蛋白受体抗体来促进大分子诸如ids穿过bbb的技术。

技术实现思路

1、因此，某些实施方案提供一种融合蛋白，其包含：

2、(a)艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶(ids)氨基酸序列、ids变体氨基酸序列或其催化活性片段，和

3、(b)如本文所述的抗转铁蛋白受体(tfr)抗体(例如，抗人tfr抗体)，

4、其中所述融合蛋白包含至少约6mol/mol的唾液酸:融合蛋白和/或包含约1.5至约2.5mol/mol的甘露糖-6-磷酸(m6p):融合蛋白。在某些实施方案中，所述融合蛋白包含约15-16mol/mol之间的唾液酸:融合蛋白(即，约15至约16mol/mol的唾液酸:融合蛋白)和/或包含约1.5至约2.5mol/mol之间的m6p:融合蛋白(即，约1.5至约2.5mol/mol的m6p:融合蛋白)。在某些实施方案中，所述融合蛋白包含约15-16mol/mol之间的唾液酸:融合蛋白(即，约15至约16mol/mol的唾液酸:融合蛋白)和/或包含约1.5至约2.3mol/mol之间的m6p:融合蛋白(即，约1.5至约2.3mol/mol的m6p:融合蛋白)。

5、在某些实施方案中，所述融合蛋白包含：

6、(a)艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶(ids)氨基酸序列、ids变体氨基酸序列或其催化活性片段，和

7、(b)抗人转铁蛋白受体抗体，其中所述抗体包含：

8、i)包含gysftny(seq id no:13)的重链互补决定区1(cdr-h1)或相对于seq idno:13具有1或2个取代的序列；

9、ii)包含ypggdy(seq id no:15)的重链cdr-h2或相对于seq id no:15具有1或2个取代的序列；

10、iii)包含sgnydevay(seq id no:16)的重链cdr-h3或相对于seq id no:16具有1或2个取代的序列；

11、iv)包含rssqslvhsngntylh(seq id no:7)的轻链cdr-l1或相对于seq id no:7具有1或2个取代的序列；

12、v)包含kvsnrfs(seq id no:8)的轻链cdr-l2或相对于seq id no:8具有1或2个取代的序列；和

13、vi)包含sqsthvpwt(seq id no:9)的轻链cdr-l3或相对于seq id no:9具有1或2个取代的序列；

14、其中所述融合蛋白包含至少约6mol/mol的唾液酸:融合蛋白(例如，约15-16mol/mol之间的唾液酸:融合蛋白(即，约15至约16mol/mol的唾液酸:融合蛋白))。

15、在某些其他实施方案中，所述融合蛋白包含：

16、(a)艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶(ids)氨基酸序列、ids变体氨基酸序列或其催化活性片段，和

17、(b)抗人转铁蛋白受体抗体，其中所述抗体包含：

18、i)包含gysftny(seq id no:13)的重链cdr-h1或相对于seq id no:13具有1或2个取代的序列；

19、ii)包含ypggdy(seq id no:15)的重链cdr-h2或相对于seq id no:15具有1或2个取代的序列；

20、iii)包含sgnydevay(seq id no:16)的重链cdr-h3或相对于seq id no:16具有1或2个取代的序列；

21、iv)包含rssqslvhsngntylh(seq id no:7)的轻链cdr-l1或相对于seq id no:7具有1或2个取代的序列；

22、v)包含kvsnrfs(seq id no:8)的轻链cdr-l2或相对于seq id no:8具有1或2个取代的序列；和

23、vi)包含sqsthvpwt(seq id no:9)的轻链cdr-l3或相对于seq id no:9具有1或2个取代的序列；

24、其中所述融合蛋白包含约1.5至约2.5mol/mol的m6p:融合蛋白。在某些实施方案中，所述融合蛋白包含约1.5至约2.3mol/mol之间的m6p:融合蛋白(即，约1.5至约2.3mol/mol的m6p:融合蛋白)。

25、某些实施方案还提供了包含如本文所述的融合蛋白和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

26、某些实施方案提供了包含如本文所述的融合蛋白的宿主细胞。某些实施方案提供产生如本文所述的融合蛋白的方法，包括在适于产生所述融合蛋白的条件下在宿主细胞中表达一种或多种可操作以表达1)如本文所述的轻链；和2)连接至如本文所述的ids氨基酸序列的重链的多核苷酸。

27、某些实施方案提供通过如本文所述的方法制备的融合蛋白。

28、某些实施方案提供了降低有需要的受试者中的一种或多种gag物质的水平的方法，包括向所述受试者施用如本文所述的融合蛋白或如本文所述的药物组合物(例如，施用如本文所述的治疗有效剂量)。

29、某些实施方案提供治疗有需要的受试者的亨特综合症的方法，包括向所述受试者施用如本文所述的融合蛋白或如本文所述的药物组合物(例如，施用如本文所述的治疗有效剂量)。

30、某些实施方案还提供降低有需要的受试者中的一种或多种gag物质的水平的方法，包括以约1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的剂量向所述受试者施用融合蛋白，其中所述融合蛋白包含：

31、(a)艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶(ids)氨基酸序列、ids变体氨基酸序列或其催化活性片段，和

32、(b)抗人转铁蛋白受体抗体，其中所述抗体包含：

33、i)包含gysftny(seq id no:13)的重链互补决定区1(cdr-h1)或相对于seq idno:13具有1或2个取代的序列；

34、ii)包含ypggdy(seq id no:15)的重链cdr-h2或相对于seq id no:15具有1或2个取代的序列；

35、iii)包含sgnydevay(seq id no:16)的重链cdr-h3或相对于seq id no:16具有1或2个取代的序列；

36、iv)包含rssqslvhsngntylh(seq id no:7)的轻链cdr-l1或相对于seq id no:7具有1或2个取代的序列；

37、v)包含kvsnrfs(seq id no:8)的轻链cdr-l2或相对于seq id no:8具有1或2个取代的序列；和

38、vi)包含sqsthvpwt(seq id no:9)的轻链cdr-l3或相对于seq id no:9具有1或2个取代的序列。

39、某些实施方案提供治疗有需要的受试者的亨特综合征的方法，包括以约1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的剂量向所述受试者施用融合蛋白，其中所述融合蛋白包含：

40、(a)艾杜糖醛酸2-硫酸酯酶(ids)氨基酸序列、ids变体氨基酸序列或其催化活性片段，和

41、(b)抗人转铁蛋白受体抗体，其中所述抗体包含：

42、i)包含gysftny(seq id no:13)的重链互补决定区1(cdr-h1)或相对于seq idno:13具有1或2个取代的序列；

43、ii)包含ypggdy(seq id no:15)的重链cdr-h2或相对于seq id no:15具有1或2个取代的序列；

44、iii)包含sgnydevay(seq id no:16)的重链cdr-h3或相对于seq id no:16具有1或2个取代的序列；

45、iv)包含rssqslvhsngntylh(seq id no:7)的轻链cdr-l1或相对于seq id no:7具有1或2个取代的序列；

46、v)包含kvsnrfs(seq id no:8)的轻链cdr-l2或相对于seq id no:8具有1或2个取代的序列；和

47、vi)包含sqsthvpwt(seq id no:9)的轻链cdr-l3或相对于seq id no:9具有1或2个取代的序列。

48、某些实施方案还提供本文公开的可用于制备如本文所述的融合蛋白的方法和中间体。