1.在一些实施方案中,本文提供了用于生物工程化的免疫调节融合蛋白的材料和方法及其用于检测、调节免疫应答和/或免疫相关病状的用途,以及用于筛选、诊断、影响、改善受试者对病原体或疫苗的反应或治疗疾病或病症诸如瘤形成、增生、癌症或病原体感染的材料和方法。
背景技术:
0、2.背景技术
1、免疫是涉及多种分子的多方面宿主应答。manzoor ahmad mir,第1章-共刺激和共刺激分子简介,编辑:manzoor ahmad mir,developing costimulatory molecules forimmunotherapy of diseases,academic press,2015,第1-43页,isbn 9780128025857。参与免疫应答的一种此类分子是cd40配体(cd40l)(cd154),一种肿瘤坏死因子(tnf)超家族成员,其存在于各种细胞和组织类型中并在cd4+t细胞上高度表达并与cd40受体多肽相互作用以增强共刺激信号传导。cd40受体多肽在多种先天性和适应性细胞(包括树突状细胞和b细胞)上表达。adv drug deliv rev.2019,15;141:92-103;immunol rev.2009年5月;229(1)。cd40激动剂可以增强抗原呈递,并且是单克隆抗体应用(诸如诊断、预后和治疗)的合适靶点。cancers(basel).2021年3月15日;13(6):1302。
2、3.
技术实现要素:
3、本发明的发明人理解,尤其是cd40激动剂单克隆抗体在不存在fc交联的情况下表现不佳并且显示很少的临床益处,并且此外,cd40激动剂抗体的全身施用已经与不良事件和肝毒性相关联,确定并解决了本领域对用于调节免疫应答,以及改善受试者对疫苗的反应,或治疗疾病或病症诸如癌症或病原体感染(例如,病毒感染)的工程化cd40激动剂的改进构建体的未满足的需求。因此,在一个方面,本文提供了一种单链三聚体cd40lfc融合蛋白,包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40配体cd40l亚基(cd40l三聚体);和(b)fc单体肽。
4、在一些实施方案中,fc单体肽通过肽系链与cd40l三聚体共价连接。在一些实施方案中,肽系链包含0个至20个氨基酸。
5、在一些实施方案中,cd40配体亚基包含cd40l细胞外结构域的一部分。
6、在一些实施方案中,cd40l三聚体连接至fc单体肽的n末端。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l fc融合蛋白包含选自seq id no:1-12的任一个序列,或其片段。
7、在一些实施方案中,cd40l三聚体连接至fc单体肽的c末端。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l fc融合蛋白包含选自seq id no:13-19的任一个序列,或其片段。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l fc融合蛋白包含seq id no:16或其片段。
8、在一些实施方案中,cd40配体亚基包含选自seq id no:20-22的序列中的任一者,或其片段。
9、在一些实施方案中,fc单体肽包含人fc序列。在一些实施方案中,人fc序列包含选自免疫球蛋白igg、iga、igm、igd和ige的序列。在一些实施方案中,人fc序列包含igg序列。在一些实施方案中,igg序列选自igg1、igg2、igg3和igg4。在一些实施方案中,igg序列包含igg1序列。在一些实施方案中,igg1序列包含seq id no:30或31,或其片段。在一些实施方案中,igg序列包含igg2序列。在一些实施方案中,igg2序列包含seq id no:29或其片段。
10、在一些实施方案中,肽接头选自包含egkssgsgs(seq id no:23)和(g3s)3(seq idno:25)的组。
11、在一些实施方案中,肽系链选自由(g4s)3(seq id no:24)、(g4s)2(seq id no:26)、(g4s)4(seq id no:27)和g4s(seq id no:28)组成的组。
12、在一些实施方案中,单链三聚体cd40l fc融合蛋白与野生型cd40l相比增强cd40多肽的活化。在一些实施方案中,cd40多肽的活化增强树突状细胞、b细胞、单核细胞和巨噬细胞的免疫刺激功能。在一些实施方案中,cd40多肽的活化包括与野生型cd40l相比增强的t细胞活化。在一些实施方案中,cd40多肽的活化包括与野生型cd40l相比增强的树突状细胞活化。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l fc融合蛋白与野生型cd40l相比增强抗肿瘤活性。
13、在另一方面,本文提供了一种包含两个本文公开的单链三聚体cd40lfc融合蛋白的二聚体。在一些实施方案中,二聚体是同源二聚体。在一些实施方案中,二聚体通过fc单体肽的缔合形成。
14、在另一方面,本文提供了一种编码单链三聚体cd40l fc融合蛋白的多核苷酸,所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基;和(b)fc单体肽。
15、在另一方面,本文提供了一种包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸的载体,所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基;和(b)fc单体肽。
16、在另一方面,本文提供了一种包含载体的宿主细胞,所述载体包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸,所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基;和(b)fc单体肽。
17、在另一方面,本文提供了一种包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸的宿主细胞,所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基;和(b)fc单体肽。
18、在另一方面,本文提供了一种包含药学上可接受的载体和单链三聚体cd40l融合蛋白的药物组合物,所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基;和(b)fc单体肽。
19、在另一方面,本文提供了一种包含单链三聚体cd40l融合蛋白的试剂盒,所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基;和(b)fc单体肽。
20、在一个方面,本文提供了一种包括用于提供单链三聚体cd40l融合蛋白的装置的系统,所述融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基;和(b)fc单体肽。在另一方面,本文提供了一种包括用于提供包含两个单链三聚体cd40l fc融合蛋白的二聚体的装置的系统,每个融合蛋白包含(a)通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基;和(b)fc单体肽。
21、在一个方面,本文提供了一种活化cd40多肽的方法,包括使cd40多肽与本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白接触,其中所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白在结合时使cd40多肽活化。在另一方面,本文提供了一种活化cd40多肽的方法,包括使cd40多肽与包含两个本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白的二聚体接触,其中所述单链三聚体cd40lfc融合蛋白二聚体在结合时使cd40多肽活化。在另一方面,本文提供了一种活化t细胞的方法,包括使t细胞在存在本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白的情况下与抗原呈递细胞接触,其中抗原呈递细胞表达cd40多肽,并且其中所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白在结合cd40多肽时使t细胞活化。在另一方面,本文提供了一种活化t细胞的方法,包括使t细胞在存在包含两个本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白的二聚体的情况下与抗原呈递细胞接触,其中抗原呈递细胞表达cd40多肽,并且其中所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白二聚体在结合cd40多肽时使t细胞活化。在一些实施方案中,所述抗原呈递细胞向t细胞呈递抗原。在另一方面,本文提供了一种活化树突状细胞的方法,包括使cd40多肽与本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白接触,其中所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白在结合cd40多肽时使树突状细胞活化。在另一方面,本文提供了一种活化树突状细胞的方法,包括使cd40多肽与包含两个本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白的二聚体接触,其中所述单链三聚体cd40l fc融合蛋白二聚体在结合cd40多肽时使树突状细胞活化。
22、在一些实施方案中,所述方法在体外进行。在一些实施方案中,所述方法在体内进行。在一些实施方案中,所述接触还包括施用包含药学上可接受的载体和单链三聚体cd40lfc融合蛋白的药物组合物。在一些实施方案中,所述接触增强先天抗肿瘤免疫应答。
23、在一个方面,本文提供了一种治疗受试者的癌症的方法,包括向受试者施用治疗有效量的本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白。在另一方面,本文提供了一种治疗受试者的癌症的方法,包括向受试者施用治疗有效量的包含两个本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白的二聚体。
24、在一些实施方案中,所述方法还包括施用包含药学上可接受的载体和单链三聚体cd40l fc融合蛋白的药物组合物。在一些实施方案中,所述治疗增强先天抗肿瘤免疫应答。在一些实施方案中,所述方法还包括共同施用第二疗法。在一些实施方案中,所述癌症选自由黑色素瘤、间皮瘤、晚期实体瘤和淋巴瘤组成的组。
25、在一个方面,本文提供了一种用于制备单链三聚体cd40l fc融合蛋白或其片段的方法,包括(a)将编码本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白的多核苷酸引入到宿主细胞中;(b)在制备单链三聚体cd40l fc融合蛋白或其片段的条件下培养宿主细胞,以及(c)从细胞或培养物中回收单链三聚体cd40l fc融合蛋白或其片段。在另一方面,本文提供了一种制备包含两个单链三聚体cd40l fc融合蛋白的二聚体的方法,各自包括(a)将编码本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白的多核苷酸引入到宿主细胞中;(b)在制备单链三聚体cd40l fc融合蛋白或其片段的条件下培养宿主细胞;(c)从细胞或培养物中回收单链三聚体cd40l fc融合蛋白或其片段,以及(d)在有利于二聚化的条件下组合单链三聚体cd40l fc融合蛋白或其片段。在另一方面,本文提供了一种制备单链三聚体cd40l fc融合蛋白或其片段的药物组合物的方法,包括将本文公开的单链三聚体cd40l fc融合蛋白或其片段与药学上可接受的载体组合以获得药物组合物。
26、在一个方面,本文提供了一种包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。在一些实施方案中,cd40l亚基包含cd40l细胞外结构域的一部分。在一些实施方案中,cd40l亚基包含选自seqid no:20至22的序列中的任一者,或其片段。
27、在一些实施方案中,肽接头中的至少一个肽接头选自由egkssgsgs(seq id no:23)和(g3s)3(seq id no:25)组成的组。在一些实施方案中,肽接头中的至少两个肽接头选自由egkssgsgs(seq id no:23)和(g3s)3(seq id no:25)组成的组。在一些实施方案中,肽接头中的至少两个肽接头具有相同的序列。
28、在一些实施方案中,单链三聚体cd40l融合蛋白包含选自seq id no:35-38的任一个序列,或其片段。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l融合蛋白与非来源于cd40l的肽或多肽融合。
29、在另一方面,单链三聚体cd40l融合蛋白与肽系链融合。在一些实施方案中,肽系链选自由(g4s)3(seq id no:24)、(g4s)2(seq id no:26)、(g4s)4(seq id no:27)和g4s(seqid no:28)组成的组。在一些实施方案中,肽系链与单链三聚体cd40l融合蛋白的n末端融合。在一些实施方案中,肽系链与单链三聚体cd40l融合蛋白的c末端融合。
30、在另一方面,单链三聚体cd40l融合蛋白与fc单体肽融合。在一些实施方案中,fc单体肽包含人fc序列。在一些实施方案中,人fc序列包含选自免疫球蛋白igg、iga、igm、igd和ige的序列。在一些实施方案中,人fc序列包含igg序列。在一些实施方案中,igg序列选自igg1、igg2、igg3和igg4。在一些实施方案中,igg序列包含igg1序列。在一些实施方案中,igg1序列包含seq id no:30或31,或其片段。在一些实施方案中,igg序列包含igg2序列。在一些实施方案中,igg2序列包含seq id no:29或其片段。
31、在一些实施方案中,单链三聚体cd40l融合蛋白经由肽系链与fc单体肽融合。在一些实施方案中,肽系链包含0个至20个氨基酸。在一些实施方案中,肽系链选自由(g4s)3(seqid no:24)、(g4s)2(seq id no:26)、(g4s)4(seq id no:27)和g4s(seq id no:28)组成的组。
32、在一些实施方案中,cd40l三聚体连接至fc单体肽的n末端。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l fc融合蛋白包含选自seq id no:1-12的任一个序列,或其片段。在一些实施方案中,cd40l三聚体连接至fc单体肽的c末端。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l fc融合蛋白包含选自seq id no:13-19的任一个序列,或其片段。
33、在另一方面,单链三聚体cd40l融合蛋白与野生型cd40l相比增强cd40多肽的活化。在一些实施方案中,cd40多肽的活化增强t细胞和/或b细胞的免疫刺激功能。在一些实施方案中,cd40多肽的活化包括与野生型cd40l相比,b细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞、树突状细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、单核细胞、粒细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜中性粒细胞的活化增强。
34、在一些实施方案中,cd40多肽的活化包括增加cd40多肽的表达。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l融合蛋白与野生型cd40l相比增强抗肿瘤活性。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l融合蛋白与野生型cd40l相比增强促炎活性。在一些实施方案中,单链三聚体cd40l融合蛋白与野生型cd40l相比增强感染性病原体的清除。
35、在另一方面,单链三聚体cd40l融合蛋白使b细胞群的抗体产生增加约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约100%、约125%、约150%、约175%、约200%、约250%、约300%、约400%、约500%、约600%、约700%、约800%、约900%或约1000%。
36、在另一方面,单链三聚体cd40l融合蛋白增加t细胞群对促炎细胞因子的分泌。在一些实施方案中,促炎细胞因子是il-1、il-2、il-6、il 12、il-17、il-22、il-23、gm-csf、tnf-α、ifn-γ,或它们的任何组合。在一些实施方案中,细胞因子产生增加约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约100%、约125%、约150%、约175%、约200%、约250%、约300%、约400%、约500%、约600%、约700%、约800%、约900%或约1000%。
37、在另一方面,单链三聚体cd40l融合蛋白将巨噬细胞群中吞噬性巨噬细胞的最小百分比增加至约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%。
38、在一些实施方案中,单链三聚体cd40l融合蛋白将树突状细胞群中抗原呈递树突状细胞的最小百分比增加至约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%。
39、在另一方面,多肽与药剂缀合。在一些实施方案中,药剂选自由放射性同位素、金属螯合剂、酶、荧光化合物、生物发光化合物和化学发光化合物组成的组。
40、在另一方面,本文提供了一种编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
41、在另一方面,本文提供了一种包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸的载体,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
42、在另一方面,本文提供了一种包含载体的宿主细胞,所述载体包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
43、在另一方面,本文提供了一种包含编码单链三聚体cd40l融合蛋白的多核苷酸的宿主细胞,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
44、在另一方面,本文提供了一种包含药学上可接受的载体和包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽的药物组合物,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
45、在另一方面,本文提供了一种包含多肽的试剂盒,所述多肽包含单链三聚体cd40l融合蛋白,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
46、在另一方面,本文提供了一种包括用于提供包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽的装置的系统,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
47、在另一方面,本文提供了一种用于活化表达cd40多肽的靶细胞的方法,包括使靶细胞与有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸接触,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基,其中所述单链三聚体cd40l融合蛋白在结合cd40多肽时使靶细胞活化。
48、在一些实施方案中,靶细胞的活化测量为靶细胞的增殖或成熟增加。在一些实施方案中,靶细胞的增殖或成熟增加约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约100%、约125%、约150%、约175%、约200%、约250%、约300%、约400%、约500%、约600%、约700%、约800%、约900%或约1000%。
49、在一些实施方案中,靶细胞的活化测量为靶细胞的存活时间延长。在一些实施方案中,靶细胞的存活时间增加约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约100%、约125%、约150%、约175%、约200%、约250%、约300%、约400%、约500%、约600%、约700%、约800%、约900%或约1000%。
50、在一些实施方案中,靶细胞是抗原呈递细胞。在一些实施方案中,靶细胞是自然杀伤细胞、b细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞或它们的组合。
51、在另一方面,本文提供了一种用于促进b细胞群的抗体产生的方法,包括使b细胞与有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸接触,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
52、在一些实施方案中,b细胞群的抗体产生增加约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约100%、约125%、约150%、约175%、约200%、约250%、约300%、约400%、约500%、约600%、约700%、约800%、约900%或约1000%。
53、在另一方面,使b细胞在存在抗原或编码抗原的多核苷酸的情况下与包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸接触,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基,并且其中由b细胞产生的抗体特异性地结合至抗原。在一些实施方案中,所述方法进一步促进能够响应于抗原产生抗体的记忆b细胞的形成。
54、在一些实施方案中,多肽或多核苷酸在疫苗组合物或助剂组合物中。在一些实施方案中,抗原或编码抗原的多核苷酸在疫苗组合物中。在一些实施方案中,抗原源于或来源于感染性病原体。在一些实施方案中,感染性病原体是病毒、细菌、真菌、寄生虫或它们的组合。在一些实施方案中,抗原源于或来源于患病细胞。在一些实施方案中,患病细胞是癌细胞。在一些实施方案中,患病细胞是被感染性病原体感染的细胞。在一些实施方案中,感染性病原体是病毒、细菌、真菌、寄生虫或它们的组合。
55、在一些实施方案中,抗原由抗原呈递细胞呈递。在一些实施方案中,抗原呈递细胞是树突状细胞。在一些实施方案中,抗原与mhc i类或mhc ii类复合物缔合。
56、在另一方面,本文提供了一种增加t细胞群分泌促炎细胞因子的方法,包括使t细胞群在存在有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸的情况下与抗原呈递细胞群接触,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。在一些实施方案中,细胞因子是il-1、il-2、il-6、il 12、il-17、il-22、il-23、gm-csf、tnf-α、ifn-γ,或它们的任何组合。在一些实施方案中,细胞因子产生增加约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%、约100%、约125%、约150%、约175%、约200%、约250%、约300%、约400%、约500%、约600%、约700%、约800%、约900%或约1000%。
57、在另一方面,本文提供了一种增加巨噬细胞群对患病细胞的吞噬作用的方法,包括使患病细胞、巨噬细胞,或患病细胞和巨噬细胞两者与有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸接触,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
58、在一些实施方案中,巨噬细胞群中吞噬性巨噬细胞的最小百分比增加约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%。在一些实施方案中,通过共培养用第一荧光染料标记的巨噬细胞和用第二荧光染料标记的患病细胞来测量巨噬细胞的吞噬作用,其中第一荧光染料和第二荧光染料不同。在一些实施方案中,通过测定包含患病细胞的巨噬细胞的百分比来测量吞噬性巨噬细胞的百分比。在一些实施方案中,患病细胞是癌细胞或被感染性病原体感染的细胞。在一些实施方案中,感染性病原体是病毒、细菌、真菌、寄生虫或它们的组合。
59、在另一方面,本文提供了一种增加树突状细胞群的抗原呈递的方法,包括使树突状细胞在存在抗原的情况下与有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸接触,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
60、在一些实施方案中,树突状细胞群中呈递抗原的树突状细胞的最小百分比增加约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%。在一些实施方案中,通过共培养用第一荧光染料标记的树突状细胞和用第二荧光染料标记的抗原来测量树突状细胞的抗原呈递,其中第一荧光染料和第二荧光染料不同。在一些实施方案中,通过测定树突状细胞群中与抗原共定位的树突状细胞的百分比来测量呈递抗原的树突状细胞的百分比。
61、在一些实施方案中,抗原源于或来源于感染性病原体。在一些实施方案中,感染性病原体是病毒、细菌、真菌、寄生虫或它们的组合。在一些实施方案中,抗原源于或来源于患病细胞。在一些实施方案中,患病细胞是癌细胞。在一些实施方案中,患病细胞是被感染性病原体感染的细胞。在一些实施方案中,感染性病原体是病毒、细菌、真菌、寄生虫或它们的组合。
62、在一些实施方案中,多肽或多核苷酸在疫苗组合物或助剂组合物中。在一些实施方案中,抗原或编码抗原的多核苷酸在疫苗组合物中。
63、在另一方面,本文提供了一种增加靶细胞表达cd40多肽的方法,包括使靶细胞与有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸接触,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
64、在一些实施方案中,靶细胞是患病细胞。在一些实施方案中,患病细胞是癌细胞。在一些实施方案中,患病细胞是被感染性病原体感染的细胞。在一些实施方案中,感染性病原体是病毒、细菌、真菌、寄生虫或它们的组合。
65、在一些实施方案中,靶细胞是免疫细胞。在一些实施方案中,靶细胞是抗原呈递细胞。在一些实施方案中,靶细胞是自然杀伤细胞、b细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞或它们的组合。
66、在一些实施方案中,患病细胞群减少约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%。
67、在另一方面,本文提供了一种在患病细胞群周围的组织中形成促炎环境的方法,包括使组织与有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸接触,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
68、在一些实施方案中,组织中活化的b细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞、树突状细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、单核细胞、粒细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜中性粒细胞的浸润增加。
69、在一些实施方案中,组织中促炎细胞因子的浓度增加。在一些实施方案中,促炎细胞因子是il-1、il-2、il-6、il 12、il-17、il-22、il-23、gm-csf、tnf-α、ifn-γ,或它们的任何组合。
70、在一些实施方案中,组织中抗原呈递细胞对源于或来源于患病细胞的抗原的呈递增加。
71、在一些实施方案中,组织中患病细胞的吞噬作用增加。
72、在一些实施方案中,组织中由细胞介导的细胞毒性诱导的患病细胞的凋亡增加。在一些实施方案中,组织中由抗体依赖性细胞毒性诱导的患病细胞的凋亡增加。
73、在一些实施方案中,组织中的患病细胞群减少。在一些实施方案中,组织中的患病细胞群减少约10%、约20%、约30%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%、约80%、约85%、约90%、约95%或约99%。
74、在一些实施方案中,所述方法在体外或体内进行。
75、在另一方面,本文提供了一种消除受试者的患病细胞的方法,包括施用有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。
76、在一些实施方案中,患病细胞不表达cd40多肽。在一些实施方案中,患病细胞表达cd40多肽。在一些实施方案中,患病细胞是癌细胞。在一些实施方案中,患病细胞是被感染性病原体感染的细胞。在一些实施方案中,感染性病原体是病毒、细菌、真菌、寄生虫或它们的组合。
77、在另一方面,本文提供了一种治疗有需要的受试者的癌症的方法,包括施用有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。在一些实施方案中,所述治疗增强先天的、体液的或细胞介导的抗肿瘤免疫应答。在一些实施方案中,所述方法还包括共同施用第二疗法。在一些实施方案中,癌症选自由黑色素瘤、间皮瘤、晚期实体瘤和淋巴瘤组成的组。
78、在另一方面,本文提供了一种治疗有需要的受试者的感染的方法,包括施用有效量的包含单链三聚体cd40l融合蛋白的多肽或编码所述多肽的多核苷酸,其中单链三聚体cd40l融合蛋白包含通过肽接头彼此共价连接的三个cd40l亚基。在一些实施方案中,所述治疗增强先天的、体液的或细胞介导的抗感染免疫应答。
79、在一些实施方案中,将多肽或多核苷酸与疫苗组合物共同施用以预防受试者的感染。在一些实施方案中,将多肽或多核苷酸与疫苗组合物同时或依次共同施用。
80、 序列表
81、<110> 詹森生物科技公司(janssen biotech, inc.)
82、<120> 生物工程化的免疫调节融合蛋白组合物
83、<130> 14620-628-228 / jbi6455wopct1
84、<140>
85、<141>
86、<150> us 63/160,694
87、<151> 2021-03-12
88、<150> us 63/160,693
89、<151> 2021-03-12
90、<150> us 63/160,691
91、<151> 2021-03-12
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95、<151> 2021-03-12
96、<160> 40
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1883、 565 570 575
1884、glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu val thr leu glu asn
1885、 580 585 590
1886、gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu tyr tyr ile tyr ala
1887、 595 600 605
1888、gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser ser gln ala pro phe
1889、 610 615 620
1890、ile ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg phe glu arg ile leu
1891、625 630 635 640
1892、leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys pro cys gly gln gln
1893、 645 650 655
1894、ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro gly ala ser val
1895、 660 665 670
1896、phe val asn val thr asp pro ser gln val ser his gly thr gly phe
1897、 675 680 685
1898、thr ser phe gly leu leu lys leu
1899、 690 695
1900、<210> 20
1901、<211> 143
1902、<212> prt
1903、<213> 人工序列
1904、<220>
1905、<223> cd40l v.1
1906、<400> 20
1907、asn pro gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr
1908、1 5 10 15
1909、thr ser val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn
1910、 20 25 30
1911、asn leu val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln
1912、 35 40 45
1913、gly leu tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu
1914、 50 55 60
1915、ala ser ser gln ala pro phe ile ala ser leu trp leu lys ser pro
1916、65 70 75 80
1917、gly arg phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser
1918、 85 90 95
1919、ala lys pro cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu
1920、 100 105 110
1921、leu gln pro gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln
1922、 115 120 125
1923、val ser his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu
1924、 130 135 140
1925、<210> 21
1926、<211> 141
1927、<212> prt
1928、<213> 人工序列
1929、<220>
1930、<223> cd40l v.2
1931、<400> 21
1932、gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser
1933、1 5 10 15
1934、val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu
1935、 20 25 30
1936、val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu
1937、 35 40 45
1938、tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser
1939、 50 55 60
1940、ser gln ala pro phe ile ala ser leu trp leu lys ser pro gly arg
1941、65 70 75 80
1942、phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys
1943、 85 90 95
1944、pro cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln
1945、 100 105 110
1946、pro gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln val ser
1947、 115 120 125
1948、his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu
1949、 130 135 140
1950、<210> 22
1951、<211> 143
1952、<212> prt
1953、<213> 人工序列
1954、<220>
1955、<223> cd40l v.3
1956、<400> 22
1957、asn pro gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr
1958、1 5 10 15
1959、thr ser val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn
1960、 20 25 30
1961、asn leu val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln
1962、 35 40 45
1963、gly leu tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu
1964、 50 55 60
1965、ala ser ser gln ala pro phe ile ala ser leu cys leu lys ser pro
1966、65 70 75 80
1967、gly arg phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser
1968、 85 90 95
1969、ala lys pro cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu
1970、 100 105 110
1971、leu gln pro gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln
1972、 115 120 125
1973、val ser his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu
1974、 130 135 140
1975、<210> 23
1976、<211> 9
1977、<212> prt
1978、<213> 人工序列
1979、<220>
1980、<223> 接头
1981、<400> 23
1982、glu gly lys ser ser gly ser gly ser
1983、1 5
1984、<210> 24
1985、<211> 15
1986、<212> prt
1987、<213> 人工序列
1988、<220>
1989、<223> 接头
1990、<400> 24
1991、gly gly gly gly ser gly gly gly gly ser gly gly gly gly ser
1992、1 5 10 15
1993、<210> 25
1994、<211> 12
1995、<212> prt
1996、<213> 人工序列
1997、<220>
1998、<223> 接头
1999、<400> 25
2000、gly gly gly ser gly gly gly ser gly gly gly ser
2001、1 5 10
2002、<210> 26
2003、<211> 10
2004、<212> prt
2005、<213> 人工序列
2006、<220>
2007、<223> 接头
2008、<400> 26
2009、gly gly gly gly ser gly gly gly gly ser
2010、1 5 10
2011、<210> 27
2012、<211> 20
2013、<212> prt
2014、<213> 人工序列
2015、<220>
2016、<223> 接头
2017、<400> 27
2018、gly gly gly gly ser gly gly gly gly ser gly gly gly gly ser gly
2019、1 5 10 15
2020、gly gly gly ser
2021、 20
2022、<210> 28
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2024、<212> prt
2025、<213> 人工序列
2026、<220>
2027、<223> 接头
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2029、gly gly gly gly ser
2030、1 5
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2035、<220>
2036、<223> fc单体v.1
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2038、val glu arg lys ser cys val glu cys pro pro cys pro ala pro pro
2039、1 5 10 15
2040、val ala gly pro ser val phe leu phe pro pro lys pro lys asp thr
2041、 20 25 30
2042、leu met ile ser arg thr pro glu val thr cys val val val asp val
2043、 35 40 45
2044、ser his glu asp pro glu val gln phe asn trp tyr val asp gly val
2045、 50 55 60
2046、glu val his asn ala lys thr lys pro arg glu glu gln phe asn ser
2047、65 70 75 80
2048、thr phe arg val val ser val leu thr val val his gln asp trp leu
2049、 85 90 95
2050、asn gly lys glu tyr lys cys lys val ser asn lys gly leu pro ala
2051、 100 105 110
2052、pro ile glu lys thr ile ser lys thr lys gly gln pro arg glu pro
2053、 115 120 125
2054、gln val tyr thr leu pro pro ser arg glu glu met thr lys asn gln
2055、 130 135 140
2056、val ser leu thr cys leu val lys gly phe tyr pro ser asp ile ala
2057、145 150 155 160
2058、val glu trp glu ser asn gly gln pro glu asn asn tyr lys thr thr
2059、 165 170 175
2060、pro pro met leu asp ser asp gly ser phe phe leu tyr ser lys leu
2061、 180 185 190
2062、thr val asp lys ser arg trp gln gln gly asn val phe ser cys ser
2063、 195 200 205
2064、val met his glu ala leu his asn his tyr thr gln lys ser leu ser
2065、 210 215 220
2066、leu ser pro gly lys
2067、225
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2069、<211> 232
2070、<212> prt
2071、<213> 人工序列
2072、<220>
2073、<223> fc单体v.2
2074、<400> 30
2075、glu pro lys ser ser asp lys thr his thr cys pro pro cys pro ala
2076、1 5 10 15
2077、pro glu ala ala gly gly pro ser val phe leu phe pro pro lys pro
2078、 20 25 30
2079、lys asp thr leu met ile ser arg thr pro glu val thr cys val val
2080、 35 40 45
2081、val ser val ser his glu asp pro glu val lys phe asn trp tyr val
2082、 50 55 60
2083、asp gly val glu val his asn ala lys thr lys pro arg glu glu gln
2084、65 70 75 80
2085、tyr asn ser thr tyr arg val val ser val leu thr val leu his gln
2086、 85 90 95
2087、asp trp leu asn gly lys glu tyr lys cys lys val ser asn lys ala
2088、 100 105 110
2089、leu pro ala pro ile glu lys thr ile ser lys ala lys gly gln pro
2090、 115 120 125
2091、arg glu pro gln val tyr thr leu pro pro ser arg glu glu met thr
2092、 130 135 140
2093、lys asn gln val ser leu thr cys leu val lys gly phe tyr pro ser
2094、145 150 155 160
2095、asp ile ala val glu trp glu ser asn gly gln pro glu asn asn tyr
2096、 165 170 175
2097、lys thr thr pro pro val leu asp ser asp gly ser phe phe leu tyr
2098、 180 185 190
2099、ser lys leu thr val asp lys ser arg trp gln gln gly asn val phe
2100、 195 200 205
2101、ser cys ser val met his glu ala leu his asn his tyr thr gln lys
2102、 210 215 220
2103、ser leu ser leu ser pro gly lys
2104、225 230
2105、<210> 31
2106、<211> 223
2107、<212> prt
2108、<213> 人工序列
2109、<220>
2110、<223> fc单体v.3
2111、<400> 31
2112、his thr cys pro pro cys pro ala pro glu ala ala gly gly pro ser
2113、1 5 10 15
2114、val phe leu phe pro pro lys pro lys asp thr leu met ile ser arg
2115、 20 25 30
2116、thr pro glu val thr cys val val val ser val ser his glu asp pro
2117、 35 40 45
2118、glu val lys phe asn trp tyr val asp gly val glu val his asn ala
2119、 50 55 60
2120、lys thr lys pro arg glu glu gln tyr asn ser thr tyr arg val val
2121、65 70 75 80
2122、ser val leu thr val leu his gln asp trp leu asn gly lys glu tyr
2123、 85 90 95
2124、lys cys lys val ser asn lys ala leu pro ala pro ile glu lys thr
2125、 100 105 110
2126、ile ser lys ala lys gly gln pro arg glu pro gln val tyr thr leu
2127、 115 120 125
2128、pro pro ser arg glu glu met thr lys asn gln val ser leu thr cys
2129、 130 135 140
2130、leu val lys gly phe tyr pro ser asp ile ala val glu trp glu ser
2131、145 150 155 160
2132、asn gly gln pro glu asn asn tyr lys thr thr pro pro val leu asp
2133、 165 170 175
2134、ser asp gly ser phe phe leu tyr ser lys leu thr val asp lys ser
2135、 180 185 190
2136、arg trp gln gln gly asn val phe ser cys ser val met his glu ala
2137、 195 200 205
2138、leu his asn his tyr thr gln lys ser leu ser leu ser pro gly
2139、 210 215 220
2140、<210> 32
2141、<211> 669
2142、<212> prt
2143、<213> 人工序列
2144、<220>
2145、<223> tpp000161222 - c40w33 - 成熟蛋白
2146、<400> 32
2147、ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser val
2148、1 5 10 15
2149、leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu val
2150、 20 25 30
2151、thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu tyr
2152、 35 40 45
2153、tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser ser
2154、 50 55 60
2155、gln ala pro phe ile ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg phe
2156、65 70 75 80
2157、glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys pro
2158、 85 90 95
2159、cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro
2160、 100 105 110
2161、gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln val ser his
2162、 115 120 125
2163、gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu glu gly lys ser
2164、 130 135 140
2165、ser gly ser gly ser gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser
2166、145 150 155 160
2167、ser lys thr thr ser val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr
2168、 165 170 175
2169、met ser asn asn leu val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val
2170、 180 185 190
2171、lys arg gln gly leu tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser
2172、 195 200 205
2173、asn arg glu ala ser ser gln ala pro phe ile ala ser leu cys leu
2174、 210 215 220
2175、lys ser pro gly arg phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr
2176、225 230 235 240
2177、his ser ser ala lys pro cys gly gln gln ser ile his leu gly gly
2178、 245 250 255
2179、val phe glu leu gln pro gly ala ser val phe val asn val thr asp
2180、 260 265 270
2181、pro ser gln val ser his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu
2182、 275 280 285
2183、lys leu glu gly lys ser ser gly ser gly ser gln ile ala ala his
2184、 290 295 300
2185、val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser val leu gln trp ala
2186、305 310 315 320
2187、glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu val thr leu glu asn
2188、 325 330 335
2189、gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu tyr tyr ile tyr ala
2190、 340 345 350
2191、gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser ser gln ala pro phe
2192、 355 360 365
2193、ile ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg phe glu arg ile leu
2194、 370 375 380
2195、leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys pro cys gly gln gln
2196、385 390 395 400
2197、ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro gly ala ser val
2198、 405 410 415
2199、phe val asn val thr asp pro ser gln val ser his gly thr gly phe
2200、 420 425 430
2201、thr ser phe gly leu leu lys leu val glu arg lys ser cys val glu
2202、 435 440 445
2203、cys pro pro cys pro ala pro pro val ala gly pro ser val phe leu
2204、 450 455 460
2205、phe pro pro lys pro lys asp thr leu met ile ser arg thr pro glu
2206、465 470 475 480
2207、val thr cys val val val asp val ser his glu asp pro glu val gln
2208、 485 490 495
2209、phe asn trp tyr val asp gly val glu val his asn ala lys thr lys
2210、 500 505 510
2211、pro arg glu glu gln phe asn ser thr phe arg val val ser val leu
2212、 515 520 525
2213、thr val val his gln asp trp leu asn gly lys glu tyr lys cys lys
2214、 530 535 540
2215、val ser asn lys gly leu pro ala pro ile glu lys thr ile ser lys
2216、545 550 555 560
2217、thr lys gly gln pro arg glu pro gln val tyr thr leu pro pro ser
2218、 565 570 575
2219、arg glu glu met thr lys asn gln val ser leu thr cys leu val lys
2220、 580 585 590
2221、gly phe tyr pro ser asp ile ala val glu trp glu ser asn gly gln
2222、 595 600 605
2223、pro glu asn asn tyr lys thr thr pro pro met leu asp ser asp gly
2224、 610 615 620
2225、ser phe phe leu tyr ser lys leu thr val asp lys ser arg trp gln
2226、625 630 635 640
2227、gln gly asn val phe ser cys ser val met his glu ala leu his asn
2228、 645 650 655
2229、his tyr thr gln lys ser leu ser leu ser pro gly lys
2230、 660 665
2231、<210> 33
2232、<211> 140
2233、<212> prt
2234、<213> 人工序列
2235、<220>
2236、<223> cd40l v.4
2237、<400> 33
2238、ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser val
2239、1 5 10 15
2240、leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu val
2241、 20 25 30
2242、thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu tyr
2243、 35 40 45
2244、tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser ser
2245、 50 55 60
2246、gln ala pro phe ile ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg phe
2247、65 70 75 80
2248、glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys pro
2249、 85 90 95
2250、cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro
2251、 100 105 110
2252、gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln val ser his
2253、 115 120 125
2254、gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu
2255、 130 135 140
2256、<210> 34
2257、<211> 141
2258、<212> prt
2259、<213> 人工序列
2260、<220>
2261、<223> cd40l v.5
2262、<400> 34
2263、gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser
2264、1 5 10 15
2265、val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu
2266、 20 25 30
2267、val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu
2268、 35 40 45
2269、tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser
2270、 50 55 60
2271、ser gln ala pro phe ile ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg
2272、65 70 75 80
2273、phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys
2274、 85 90 95
2275、pro cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln
2276、 100 105 110
2277、pro gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln val ser
2278、 115 120 125
2279、his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu
2280、 130 135 140
2281、<210> 35
2282、<211> 443
2283、<212> prt
2284、<213> 人工序列
2285、<220>
2286、<223> cd40l三聚体v.1
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2288、asn pro gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr
2289、1 5 10 15
2290、thr ser val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn
2291、 20 25 30
2292、asn leu val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln
2293、 35 40 45
2294、gly leu tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu
2295、 50 55 60
2296、ala ser ser gln ala pro phe ile ala ser leu trp leu lys ser pro
2297、65 70 75 80
2298、gly arg phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser
2299、 85 90 95
2300、ala lys pro cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu
2301、 100 105 110
2302、leu gln pro gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln
2303、 115 120 125
2304、val ser his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu glu
2305、 130 135 140
2306、gly lys ser ser gly ser gly ser gln ile ala ala his val ile ser
2307、145 150 155 160
2308、glu ala ser ser lys thr thr ser val leu gln trp ala glu lys gly
2309、 165 170 175
2310、tyr tyr thr met ser asn asn leu val thr leu glu asn gly lys gln
2311、 180 185 190
2312、leu thr val lys arg gln gly leu tyr tyr ile tyr ala gln val thr
2313、 195 200 205
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2315、 210 215 220
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2319、 245 250 255
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2321、 260 265 270
2322、val thr asp pro ser gln val ser his gly thr gly phe thr ser phe
2323、 275 280 285
2324、gly leu leu lys leu glu gly lys ser ser gly ser gly ser gln ile
2325、 290 295 300
2326、ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser val leu
2327、305 310 315 320
2328、gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu val thr
2329、 325 330 335
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2331、 340 345 350
2332、ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser ser gln
2333、 355 360 365
2334、ala pro phe ile ala ser leu trp leu lys ser pro gly arg phe glu
2335、 370 375 380
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2337、385 390 395 400
2338、gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro gly
2339、 405 410 415
2340、ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln val ser his gly
2341、 420 425 430
2342、thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu
2343、 435 440
2344、<210> 36
2345、<211> 453
2346、<212> prt
2347、<213> 人工序列
2348、<220>
2349、<223> cd40l三聚体v.2
2350、<400> 36
2351、asn pro gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr
2352、1 5 10 15
2353、thr ser val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn
2354、 20 25 30
2355、asn leu val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln
2356、 35 40 45
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2362、 85 90 95
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2364、 100 105 110
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2367、val ser his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu gly
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2369、gly gly ser gly gly gly ser gly gly gly ser asn pro gln ile ala
2370、145 150 155 160
2371、ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser val leu gln
2372、 165 170 175
2373、trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu val thr leu
2374、 180 185 190
2375、glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu tyr tyr ile
2376、 195 200 205
2377、tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser ser gln ala
2378、 210 215 220
2379、pro phe ile ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg phe glu arg
2380、225 230 235 240
2381、ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys pro cys gly
2382、 245 250 255
2383、gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro gly ala
2384、 260 265 270
2385、ser val phe val asn val thr asp pro ser gln val ser his gly thr
2386、 275 280 285
2387、gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu gly gly gly ser gly gly
2388、 290 295 300
2389、gly ser gly gly gly ser asn pro gln ile ala ala his val ile ser
2390、305 310 315 320
2391、glu ala ser ser lys thr thr ser val leu gln trp ala glu lys gly
2392、 325 330 335
2393、tyr tyr thr met ser asn asn leu val thr leu glu asn gly lys gln
2394、 340 345 350
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2396、 355 360 365
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2398、 370 375 380
2399、leu cys leu lys ser pro gly arg phe glu arg ile leu leu arg ala
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2401、ala asn thr his ser ser ala lys pro cys gly gln gln ser ile his
2402、 405 410 415
2403、leu gly gly val phe glu leu gln pro gly ala ser val phe val asn
2404、 420 425 430
2405、val thr asp pro ser gln val ser his gly thr gly phe thr ser phe
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2407、gly leu leu lys leu
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2411、<212> prt
2412、<213> 人工序列
2413、<220>
2414、<223> cd40l三聚体v.3
2415、<400> 37
2416、asn pro gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr
2417、1 5 10 15
2418、thr ser val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn
2419、 20 25 30
2420、asn leu val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln
2421、 35 40 45
2422、gly leu tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu
2423、 50 55 60
2424、ala ser ser gln ala pro phe ile ala ser leu cys leu lys ser pro
2425、65 70 75 80
2426、gly arg phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser
2427、 85 90 95
2428、ala lys pro cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu
2429、 100 105 110
2430、leu gln pro gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln
2431、 115 120 125
2432、val ser his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu glu
2433、 130 135 140
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2435、145 150 155 160
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2439、 180 185 190
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2441、 195 200 205
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2444、ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg phe glu arg ile leu leu
2445、225 230 235 240
2446、arg ala ala asn thr his ser ser ala lys pro cys gly gln gln ser
2447、 245 250 255
2448、ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro gly ala ser val phe
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2450、val asn val thr asp pro ser gln val ser his gly thr gly phe thr
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2453、 290 295 300
2454、asn pro gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr
2455、305 310 315 320
2456、thr ser val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn
2457、 325 330 335
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2460、gly leu tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu
2461、 355 360 365
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2464、gly arg phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser
2465、385 390 395 400
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2467、 405 410 415
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2474、<212> prt
2475、<213> 人工序列
2476、<220>
2477、<223> cd40l三聚体v.4
2478、<400> 38
2479、ile ala ala his val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser val
2480、1 5 10 15
2481、leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu val
2482、 20 25 30
2483、thr leu glu asn gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu tyr
2484、 35 40 45
2485、tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser ser
2486、 50 55 60
2487、gln ala pro phe ile ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg phe
2488、65 70 75 80
2489、glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys pro
2490、 85 90 95
2491、cys gly gln gln ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro
2492、 100 105 110
2493、gly ala ser val phe val asn val thr asp pro ser gln val ser his
2494、 115 120 125
2495、gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu lys leu glu gly lys ser
2496、 130 135 140
2497、ser gly ser gly ser gln ile ala ala his val ile ser glu ala ser
2498、145 150 155 160
2499、ser lys thr thr ser val leu gln trp ala glu lys gly tyr tyr thr
2500、 165 170 175
2501、met ser asn asn leu val thr leu glu asn gly lys gln leu thr val
2502、 180 185 190
2503、lys arg gln gly leu tyr tyr ile tyr ala gln val thr phe cys ser
2504、 195 200 205
2505、asn arg glu ala ser ser gln ala pro phe ile ala ser leu cys leu
2506、 210 215 220
2507、lys ser pro gly arg phe glu arg ile leu leu arg ala ala asn thr
2508、225 230 235 240
2509、his ser ser ala lys pro cys gly gln gln ser ile his leu gly gly
2510、 245 250 255
2511、val phe glu leu gln pro gly ala ser val phe val asn val thr asp
2512、 260 265 270
2513、pro ser gln val ser his gly thr gly phe thr ser phe gly leu leu
2514、 275 280 285
2515、lys leu glu gly lys ser ser gly ser gly ser gln ile ala ala his
2516、 290 295 300
2517、val ile ser glu ala ser ser lys thr thr ser val leu gln trp ala
2518、305 310 315 320
2519、glu lys gly tyr tyr thr met ser asn asn leu val thr leu glu asn
2520、 325 330 335
2521、gly lys gln leu thr val lys arg gln gly leu tyr tyr ile tyr ala
2522、 340 345 350
2523、gln val thr phe cys ser asn arg glu ala ser ser gln ala pro phe
2524、 355 360 365
2525、ile ala ser leu cys leu lys ser pro gly arg phe glu arg ile leu
2526、 370 375 380
2527、leu arg ala ala asn thr his ser ser ala lys pro cys gly gln gln
2528、385 390 395 400
2529、ser ile his leu gly gly val phe glu leu gln pro gly ala ser val
2530、 405 410 415
2531、phe val asn val thr asp pro ser gln val ser his gly thr gly phe
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2533、thr ser phe gly leu leu lys leu
2534、 435 440
2535、<210> 39
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2537、<212> prt
2538、<213> 人工序列
2539、<220>
2540、<223> 接头
2541、<220>
2542、<221> 杂项_特征
2543、<222> (1)..(4)
2544、<223> gggs可重复n次,其中n为1至20的整数
2545、<400> 39
2546、gly gly gly ser
2547、1
2548、<210> 40
2549、<211> 5
2550、<212> prt
2551、<213> 人工序列
2552、<220>
2553、<223> 接头
2554、<220>
2555、<221> 杂项_特征
2556、<222> (1)..(5)
2557、<223> ggggs可重复n次,其中n为1至20的整数
2558、<400> 40
2559、gly gly gly gly ser
2560、1 5
技术实现思路