耐受诱导性构建体和组合物及其在治疗免疫病症中的用途的制作方法

本公开涉及用于治疗涉及不期望的免疫反应的病症的构建体和组合物，例如用于自身免疫疾病、过敏性疾病和移植物排斥的预防性或治疗性治疗。

背景技术：

1、免疫应答对于保护免于疾病，例如由病毒、细菌或寄生虫等病原体引起的疾病，是必要的。然而，不期望的免疫激活可能会导致引起自身组织损伤或破坏的过程。不期望的免疫激活发生在例如自身免疫疾病中，其中抗体和/或t淋巴细胞与自身抗原反应，导致例如组织损伤和病理。不期望的免疫激活还会发生在过敏反应中，特征是对环境中通常无害的物质产生过度的免疫应答，并可能产生导致组织破坏的炎性应答。此外，不期望的免疫激活还发生在移植物排斥中，例如，由宿主中存在的同种异体反应性t细胞显著介导的移植器官或组织的排斥，t细胞识别供体同种异体抗原或异种抗原，这导致移植器官或组织被破坏。

2、免疫耐受是指对能够在给定生物体中引发免疫应答的物质或组织不能获得特异性免疫应答。通常，为了诱导对特定抗原的耐受，抗原必须在没有激活信号的情况下由抗原呈递细胞(apc)呈递至其他免疫细胞，这导致抗原特异性效应淋巴细胞的死亡或功能失活，或导致产生维持耐受性的抗原特异性细胞。该过程通常解释了对自身抗原的耐受或自身耐受。免疫抑制药物可用于预防或减少不期望的免疫应答，例如用于治疗患有自身免疫疾病或接受同种异体移植的患者。对不想要的免疫应答产生免疫抑制的常规策略是基于广泛作用的免疫抑制药物。此外，为了维持免疫抑制，免疫抑制性药物治疗通常是终生的建议。不幸的是，使用广泛作用的免疫抑制性药物与严重副作用的风险相关，例如免疫缺陷，原因是这些药物中大多数非选择性地作用，导致感染易感性增加和癌症免疫监视降低。因此，诱导抗原特异性耐受的新化合物和组合物是有益的。

3、抗原呈递细胞，如树突细胞，在调节免疫应答中发挥着关键作用，并且根据树突细胞的激活状态和微环境(细胞因子和生长因子)，它向抗原特异性t细胞发出信号，从而对抗所呈递的抗原(假定的病原体)，或者使针对所呈递抗原(假定的非致病性抗原)的反应沉默并诱导外周耐受。开发致耐受性免疫治疗的挑战在于以不触发炎性免疫应答的方式高效将抗原递送至apc/树突细胞。

技术实现思路

1、本公开涉及耐受诱导性构建体，其包含抗原性单元以及第一和第二靶向单元，所述第一和第二靶向单元以非炎性方式或以耐受方式与抗原呈递细胞例如树突细胞上的表面分子相互作用，导致抗原在没有炎性激活状态的情况下呈递。

2、本发明人吃惊地发现，本公开的构建体可以通过与apc上选定的表面受体结合并通过该表面受体进行信号传导，以用于诱导首选的抗原特异性致耐受性应答(antigen-specific tolerogenic response)的最佳方式，将疾病相关抗原递送至最佳抗原呈递细胞(apc)，所述表面受体将构建体内化并以耐受性诱导方式呈递抗原，例如诱导调节性t细胞(treg)和抑制记忆和效应t细胞应答。

3、因此，在第在一个方面，本公开提供了耐受诱导性构建体，其包含：

4、i)多核苷酸，所述多核苷酸包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽以指定顺序包含：

5、a.第一靶向单元，第一接合区；

6、b.抗原性单元；

7、c.第二接合区；和

8、d.第二靶向单元；

9、其中所述抗原性单元包含自身抗原、过敏原、同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位；或者

10、ii)由i)中定义的核苷酸序列编码的多肽；或者

11、iii)由多个ii)中定义的多肽组成的多聚体蛋白，例如由两个ii)中定义的多肽组成的二聚体蛋白。

12、在另一个方面，本公开提供了耐受诱导性构建体，其包含：

13、i)多核苷酸，所述多核苷酸包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽以指定顺序包含：

14、a.第一靶向单元，第一接合区；

15、b.抗原性单元；

16、c.第二接合区；和

17、d.第二靶向单元；

18、其中所述抗原性单元包含自身抗原、过敏原、同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位；或者

19、ii)由i)中定义的核苷酸序列编码的多肽；或者

20、iii)由多个ii)中定义的多肽组成的多聚体蛋白。

21、因此，在另一个方面，本公开提供了耐受诱导性构建体，其包含：

22、i)多核苷酸，所述多核苷酸包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽以指定顺序包含：

23、a.第一靶向单元，第一接合区；

24、b.抗原性单元；

25、c.第二接合区；和

26、d.第二靶向单元；

27、其中所述抗原性单元包含自身抗原、过敏原、同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位；或者

28、ii)由i)中定义的核苷酸序列编码的多肽；或者

29、iii)由两个ii)中定义的多肽组成的二聚体蛋白。

30、本文还提供了如本文所述的多聚体蛋白，例如二聚体蛋白，其中多个多肽经由它们各自的第一接合区和经由它们各自的第二接合区彼此连接。

31、本文还提供了如本文所述的多聚体蛋白，其中多个多肽，例如两个多肽，经由它们各自的第一接合区和经由它们各自的第二接合区彼此连接。

32、本文还提供了如本文所述的二聚体蛋白，其中两个多肽经由它们各自的第一接合区和经由它们各自的第二接合区彼此连接。

33、在另一个方面，本公开提供了制备药物组合物的方法，所述方法包括：

34、a)提供如本文所述的多核苷酸、多肽或多聚体蛋白，例如二聚体蛋白；和

35、b)将多核苷酸、多肽或多聚体蛋白例如二聚体蛋白与药学上可接受的载体组合。

36、在另一个方面，本公开提供了制备药物组合物的方法，所述方法包括：

37、a)提供本文所述的多核苷酸、多肽或多聚体蛋白；和

38、b)将多核苷酸、多肽或多聚体蛋白与药学上可接受的载体组合。

39、在另一个方面，本公开提供了制备药物组合物的方法，所述方法包括：

40、a)提供本文所述的多核苷酸、多肽或二聚体蛋白；和

41、b)将多核苷酸、多肽或二聚体蛋白与药学上可接受的载体组合。

42、在另一个方面，本公开提供了药物组合物，其包含如本文所述的多核苷酸、多肽或多聚体蛋白，例如二聚体蛋白，以及药学上可接受的载体。

43、本文还提供了药物组合物，其包含本文所述的多核苷酸、多肽或多聚体蛋白，以及药学上可接受的载体。

44、本文还提供了药物组合物，其包含本文所述的多核苷酸、多肽或二聚体蛋白，以及药学上可接受的载体。

45、在另一个方面，本公开提供了包含本文所述的多核苷酸的载体。

46、在另一个方面，本公开提供了包含本文所述的载体的宿主细胞。

47、在另一个方面，本公开提供了制备多肽或多聚体蛋白如二聚体蛋白的方法，所述方法包括：

48、a)用本文所述的载体或本文所述的多核苷酸转染细胞；

49、b)培养细胞，由此所述细胞表达由所述多核苷酸编码的多肽；和

50、c)获得并纯化所述多聚体蛋白，例如二聚体蛋白，和/或由所述细胞表达的所述多肽。

51、在另一个方面，本公开提供了制备多肽或多聚体蛋白的方法，所述方法包括：

52、a)用本文所述的载体或本文所述的多核苷酸转染细胞；

53、b)培养细胞，由此所述细胞表达由所述多核苷酸编码的多肽；和

54、c)获得并纯化由所述细胞表达的所述多聚体蛋白和/或多肽。

55、在另一个方面，本公开提供了制备多肽或二聚体蛋白的方法，所述方法包括：

56、a)用本文所述的载体或本文所述的多核苷酸转染细胞；

57、b)培养细胞，由此所述细胞表达由所述多核苷酸编码的多肽；和

58、c)获得并纯化由所述细胞表达的所述二聚体蛋白和/或多肽。

59、在另一个方面，本公开提供了用于治疗涉及不期望的免疫反应的病症的方法，例如在自身免疫疾病、过敏性疾病和移植物排斥的预防性或治疗性治疗中，所述方法包括向有此需要的受试者施用如本文所述的多核苷酸、多肽或多聚体蛋白如二聚体蛋白、如本文所述的载体或如本文所述的药物组合物。

60、在另一个方面，本公开提供了治疗涉及不期望的免疫反应的病症的方法，例如在自身免疫疾病、过敏性疾病和移植物排斥的预防性或治疗性治疗中，所述方法包括向有此需要的受试者施用如本文所述的多核苷酸、多肽或多聚体蛋白、如本文所述的载体或如本文所述的药物组合物。

61、在另一个方面，本公开提供了治疗涉及不期望的免疫反应的病症的方法，例如在自身免疫疾病、过敏性疾病和移植物排斥的预防性或治疗性治疗中，所述方法包括向有此需要的受试者施用如本文所述的多核苷酸、多肽或二聚体蛋白、如本文所述的载体或如本文所述的药物组合物。