用于治疗皮肤缺损的间充质干细胞的制作方法

本发明涉及用于治疗皮肤缺损的包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物。

背景技术：

1、慢性皮肤伤口被认为是医疗保健系统的巨大挑战。由糖尿病、血管功能不全和压疮导致的慢性溃疡的发病率对应渐增的年龄平均值而上升。腿部溃疡估计使欧盟的总医疗保健费用占其预算的约1％-2％。在英国，与压疮相关的费用是医疗保健总预算的约4％。此外，难愈性的伤口可能与可能持续数月或数年的疼痛、活动受限、生活质量下降、生产力有限以及财务压力相关。另一方面，烧伤受害者可能遭受危及生命的损伤以及长期后果。当前的管理政策与死亡率的显著降低相关，但尚未实现对>50％-60％的全身表面积的大面积烧伤的功能或美学结果的对应改善。

2、细胞疗法是一种新兴方法，该方法用于在结合或不结合网状自体皮肤移植的情况下改善大烧伤伤口的伤口愈合和覆盖范围从而替代受损皮肤并增强再生(el-serafi等人2017；el-serafi等人2018)。研究了作为先进的治疗药物的培养的自体角质形成细胞。不幸的是，遇到许多挑战，如难以分离、增殖速率慢以及需要进行皮肤活检以分离细胞(这在严重的情况下可能无法做到)(karlsson等人2020)。此外，由这些细胞形成的表皮层由于有限的柔性而通常是脆弱的。作为可替代和潜在的来源，脂肪来源的干细胞(adsc)具有分化成各种细胞谱系(包括表皮细胞)的潜力(kosaric等人2019；raghuram等人2020)。不幸的是，adsc在体外有效分化为表皮细胞代表了未解决的挑战。另一方面，adsc和其他干细胞类型的局部施加可以与增强的愈合特性相关。

3、在1995年，msc首次在人中用作细胞药剂。在使用msc作为治疗剂几年之后，关于其行为的许多问题仍未解决，这些问题包括msc群体在最终产物中的异质性、在体内激活其免疫调节能力的充足条件、建库程序的后果、其递送的最佳途径、其对应激条件的反应(garcía-bernal等人2021)。

技术实现思路

1、本发明涉及一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物，因此涉及msc的同质组合物，所述整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物和msc的同质组合物用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损。事实上，诸位发明人已经发现，在伤口上局部施加整合素α10选择的msc(在本文中也称为xstem)导致猪模型中伤口的优异愈合，并且新形成的皮肤组织非常类似于正常皮肤。显示了基底膜的再生、皮肤的角化和皮肤中高水平的呈束结构并且类似于天然存在的胶原蛋白的胶原蛋白的形成。与移植的皮肤细胞相比，整合素α10选择的msc也显示更少的瘢痕化。最有趣的是，整合素α10选择的msc产生比测试的其他细胞(包括自体角质形成细胞或干细胞)更稳健和完全的再上皮化，后者是也包含未针对特定标记物进行选择、特别是未针对整合素α10表达进行选择的msc的异质细胞组合物。

2、基于整合素α10在msc表面上的表达来选择msc导致产生同质细胞组合物，所述同质细胞组合物与包含未选择的msc的细胞组合物相比具有优异的免疫调节、抗炎和皮肤再生能力。

3、在本公开文本的一方面，提供了一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物，所述组合物用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损。

4、在本公开文本的另一方面，提供了包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的美容组合物用于减少哺乳动物中由皮肤缺损的愈合导致的瘢痕形成的用途。

5、在本公开文本的另一方面，提供了包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物用于非治疗性治疗哺乳动物的皮肤缺损的用途。

1.一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物，所述组合物用于治疗和/或再生哺乳动物的皮肤缺损。

2.一种包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物，所述组合物用于预防哺乳动物的皮肤纤维化。

3.一种用于在哺乳动物中再生皮肤缺损部位的皮肤和/或减少由皮肤缺损的愈合导致的瘢痕形成的方法，所述方法包括将包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物施用于所述皮肤缺损。

4.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是难愈性伤口，如慢性伤口。

5.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述难愈性伤口与静脉功能不全、动脉功能不全和糖尿病并发症、罕见疾病如镰状细胞贫血相关，或者是压力相关难愈性伤口。

6.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述难愈性伤口是由血管功能不全或糖尿病对血管的影响导致的真皮溃疡、伤口或皮肤缺损。

7.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是由外部因素引起的皮肤障碍。

8.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述由外部因素引起的皮肤障碍是压力性溃疡形成、由摩擦或机械应力引起的皮肤病、由异物引起的皮肤病、由于暴露于寒冷而引起或加剧的皮肤病、由热或电引起的皮肤病、由光或紫外线辐射引起的皮肤病、由电离辐射引起的皮肤病、过敏性接触性皮炎、光过敏性接触性皮炎、刺激性接触性皮炎、过敏性接触性荨麻疹、蛋白质接触性皮炎、过敏性接触性致敏、皮肤接触光敏剂引起的光毒性反应、对有毒或有害动物的皮肤反应。

9.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述由外部因素引起的皮肤障碍是烧伤、长时间卧床休息引起的压疮、由创伤诱导的皮肤缺损或割伤。

10.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是炎性皮肤病。

11.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述炎性皮肤病是皮炎、湿疹、特应性皮炎、丘疹鳞屑性皮肤病、荨麻疹、血管性水肿或其他荨麻疹障碍、炎性红斑和其他反应性炎性皮肤病、皮肤免疫大疱性疾病、皮肤红斑狼疮、瘢痕化或硬化性炎性皮肤病。

12.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是术后皮肤障碍。

13.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述术后皮肤障碍是不令人满意的皮肤手术瘢痕、皮瓣坏死、肌皮瓣坏死、皮肤移植失败、复合移植失败。

14.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述术后皮肤障碍是手术切口。

15.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是影响皮肤的遗传和/或发育障碍。

16.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述影响皮肤的遗传和/或发育障碍是大疱性表皮松解症或遗传性皮肤病如天疱疮遗传性皮肤病。

17.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述大疱性表皮松解症选自单纯型大疱性表皮松解症、交界型大疱性表皮松解症、营养不良型大疱性表皮松解症、隐性营养不良型大疱性表皮松解症、综合征型大疱性表皮松解症和大疱性表皮松解症。

18.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是外部缺损。

19.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是开放性缺损。

20.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是发炎的伤口。

21.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损被感染。

22.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是急性缺损或慢性缺损。

23.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述皮肤缺损是全层厚度皮肤缺损。

24.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述组合物适于局部施用。

25.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物局部施用于所述皮肤缺损。

26.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物经由注射施用。

27.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物给药以包含在20.000与150.000个之间的msc/cm2的待治疗的皮肤缺损。

28.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物以在药学上可接受的液体介质中的细胞悬浮液的形式施用。

29.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述药学上可接受的液体介质包含人血清白蛋白。

30.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述药学上可接受的液体介质包含在盐水中稀释的人血清白蛋白，如临床级人血清白蛋白。

31.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物以在盐水中稀释的2.5％临床级人血清白蛋白中的细胞悬浮液的形式施用。

32.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中将所述组合物在敷料或储器上施用。

33.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中至少50％的所述msc表达整合素α10亚基。

34.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中至少50％，如至少55％、如至少60％、如至少65％、如至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％、如至少96％、如至少97％、如至少98％、如至少99％、如至少100％的所述msc表达整合素α10亚基。

35.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中从含有间充质干细胞的组织分离所述msc，针对整合素α10β1的表达对所述msc进行选择，并在培养物中对所选择的msc进行扩增。

36.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中含有间充质干细胞的组织是脂肪组织、骨髓、滑膜、脐带血、华通氏胶或羊水。

37.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述msc呈mhcii阴性、cd45阴性、cd34阴性、cd11b阴性、cd19阴性和/或cd79α阴性。

38.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述msc表达cd73、cd90和/或cd105。

39.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述组合物分泌抗炎因子和/或免疫调节因子。

40.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中与其中少于50％的所述msc表达整合素α10亚基的组合物相比，所述组合物以更高的浓度分泌抗炎因子和/或免疫调节因子。

41.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述组合物分泌生长因子。

42.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述生长因子、抗炎因子和/或免疫调节因子是吲哚胺2,3-双加氧酶(ido)、前列腺素e2(pge2)、血管内皮生长因子(vegf)和/或肝细胞生长因子(hgf)。

43.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述msc选自间充质干细胞、间充质祖细胞和间充质基质细胞；或其混合物。

44.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述msc被诱导以表达整合素α10亚基。

45.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述msc是体外细胞悬浮液。

46.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中已经用抗整合素α10抗体进行所述msc的选择。

47.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述msc是同种异体或自体的。

48.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述施用导致在施用部位的胶原蛋白产生增加。

49.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述施用导致在施用部位的基底膜再生。

50.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述施用导致在施用部位的皮肤角化。

51.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合物进一步包含水凝胶。

52.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中所述水凝胶是纤维蛋白胶、透明质酸、明胶、胶原蛋白、海藻酸、纤维素或果胶。

53.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合物进一步包含角质形成细胞，如自体或同种异体角质形成细胞。

54.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合物进一步包含抗炎剂。

55.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合物进一步包含用于防止细胞排斥的免疫抑制剂。

56.包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的美容组合物用于减少哺乳动物中由皮肤缺损的愈合导致的瘢痕形成的用途。

57.包含整合素α10选择的间充质干细胞(msc)的组合物用于非治疗性治疗哺乳动物的皮肤缺损的用途。

58.根据权利要求56和57中任一项所述的用途，其中所述组合物是根据权利要求24至47中任一项所述的。

59.包含整合素α10选择的msc的组合物用于制备用以治疗皮肤缺损的药剂的用途。

60.一种治疗有需要的哺乳动物的皮肤缺损的方法，所述方法包括以有效治疗所述皮肤缺损的量向所述哺乳动物施用包含整合素α10选择的msc的组合物。