耐受诱导性构建体和组合物及其在治疗免疫疾病中的用途的制作方法

本公开涉及构建体和组合物用于治疗涉及不期望的免疫反应的病症，例如用于预防性或治疗性治疗自身免疫疾病、过敏性疾病和移植物排斥。

背景技术：

1、免疫应答为防范疾病(例如由病原体如病毒、细菌或寄生虫引起的疾病)所需要。但是，不期望的免疫激活可引起导致自身组织损伤或破坏的过程。例如，不期望的免疫激活发生于自身免疫疾病中，其中抗体和/或t淋巴细胞与自身抗原反应，导致例如组织损伤和病变。不期望的免疫激活还发生于过敏反应中，其特征是对环境中一般无害的物质产生过大的免疫应答并且可能产生导致组织破坏的炎性应答。另外，不期望的免疫激活还发生于移植物排斥中，例如对所移植器官或组织的排斥，所述排斥由宿主中存在的同种异体反应性t细胞显著介导，识别供体的同种异体抗原或异种抗原并且导致所移植器官或组织被破坏。免疫耐受是对能够在给定生物体中激发免疫应答的物质或组织不能获得特异性免疫应答。

2、通常，为了诱导针对特定抗原的耐受性，抗原必须由抗原呈递细胞(apc)在活化信号不存在时呈递至其他免疫细胞，导致抗原特异性淋巴细胞的死亡或功能性失活或导致维持耐受性的抗原特异性细胞的产生。该过程通常解释了对自身抗原的耐受性，或自身耐受性。免疫抑制性药物可用于抑制或减少不期望的免疫应答，例如，用于治疗患有自身免疫疾病或具有同种异体移植物的患者。

3、对不希望的免疫应答生成免疫抑制的常规策略是基于广谱作用的免疫抑制性药物。另外，为了维持免疫抑制，免疫抑制性药物治疗往往持续终生。不幸的是，使用广谱作用的免疫抑制性药物与重度副作用(如免疫缺陷)风险相关，原因是这些药物中的大多数非选择性地起效，导致感染易感性增加和癌症免疫监视降低。因此，诱导抗原特异性耐受的新化合物和组合物是有益的。

4、apc如树突细胞在调节免疫应答中发挥关键作用，并且根据树突细胞的活化状态和微环境(细胞因子和生长因子)，它向抗原特异性t细胞发出信号，从而对抗所呈递的抗原(推测的病原体)或使针对所呈递抗原(推测的非致病抗原)的反应沉默并且诱导外周耐受性。开发致耐受性免疫疗法的挑战在于以不触发炎症或免疫应答(例如炎性免疫应答)的方式高效递送抗原至apc(例如树突细胞)。

5、科学文章“schjetne k w et al.,eur.j.immunol.35(11),3142-3152,2005”公开了称为“troybody”的重组抗体构建体。这些troybody是具有对apc表面分子特异的v区和在其c结构域的β-链之间的环中所移植的t细胞表位的重组抗体。

技术实现思路

0、发明概述

1、本公开涉及耐受诱导性构建体(tolerance-inducing construct)，其包含抗原性单元和靶向单元，所述靶向单元以非炎性或致耐受性方式与apc(例如树突细胞)上的表面分子相互作用，从而导致在没有激活(例如炎性激活)的情况下呈递抗原。

2、本发明人惊奇地发现，vaccibody平台可以通过与apc上的所选表面受体结合并发出信号，以对诱导所选择的抗原特异性耐受应答最佳的方式，将疾病相关抗原递送至抗原呈递细胞(apc)，所述apc将所述构建体内化并以耐受诱导性方式(例如诱导调节性t细胞(treg)以及抑制记忆和效应t细胞应答)呈递抗原。

3、与已知的构建体相比，例如与schjetne k w et al.,eur.j.immunol.35(11),3142-3152,2005所公开的“troybody”相比，本公开的耐受诱导性构建体可具有改善的灵活性。例如，本公开构建体的靶向单元不限于衍生自抗体的v区，而可以是多种不同的单元。

4、与已知的构建体相比，本公开的耐受诱导性构建体的另一个优点可以是更少的剂量(例如一个剂量)即可足以达到相同的功效。例如，更少的剂量(例如一个剂量)可足以降低免疫应答的水平，延迟免疫应答的发生或进展和/或降低免疫应答发生或进展的风险。

5、vaccibody构建体是由多个多肽组成的多聚体蛋白，例如由两个多肽组成的二聚体蛋白，每个多肽均包括靶向抗原呈递细胞的靶向单元、二聚体单元和抗原性单元——参见例如wo2004/076489a1、wo2011/161244a1、wo2013/092875a1或wo2017/118695a1。这些构建体已显示出在产生针对包含在抗原性单元中的抗原或表位的免疫应答方面是有效的。

6、本公开的vaccibody或耐受诱导性构建体可以以包含编码多肽的核苷酸序列的多核苷酸(例如dna质粒)的形式施用于受试者。在施用于宿主细胞例如人的肌细胞后，多肽被表达，并且由于多聚化单元而形成多聚体蛋白；当使用二聚化单元时，多肽在表达时形成二聚体蛋白。

7、本公开提供了基于vaccibody结构的耐受诱导性构建体，用于预防性或治疗性治疗免疫疾病，如自身免疫疾病、过敏性疾病和移植物排斥。

8、本公开的耐受诱导性构建体包含抗原性单元、多聚化单元例如二聚化单元和靶向apc的靶向单元，所述抗原性单元包含自身抗原、变应原或同种异体抗原/异种抗原的一个或多个t细胞表位。靶向单元与apc上的表面分子相互作用，使得构建体被内化并且抗原性单元中的表位以诱导耐受的方式被呈递。

9、因此，在第一方面，本公开提供了耐受诱导性构建体，其包含：

10、i)多核苷酸，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列编码靶向或能够靶向抗原呈递细胞的靶向单元、多聚化单元例如二聚化单元和抗原性单元；或者

11、ii)多肽，其由(i)中定义的核酸序列编码；或者

12、iii)多聚体蛋白例如二聚体蛋白，其由多个(ii)中定义的多肽例如两个多肽组成；

13、其中所述抗原性单元包含自身抗原、变应原、同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位。

14、在另一方面，本公开提供了耐受诱导性构建体，其包含：

15、i)多核苷酸，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列编码靶向或能够靶向抗原呈递细胞的靶向单元、多聚化单元和抗原性单元；或者

16、ii)多肽，其由(i)中定义的核酸序列编码；或者

17、iii)多聚体蛋白，其由多个(ii)中定义的多肽组成；

18、其中所述抗原性单元包含自身抗原、变应原、同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位。

19、在另一方面，本公开提供了耐受诱导性构建体，其包含：

20、i)多核苷酸，其包含核苷酸序列，所述核苷酸序列编码靶向或能够靶向抗原呈递细胞的靶向单元、二聚化单元和抗原性单元；或者

21、ii)多肽，其由(i)中定义的核酸序列编码；或者

22、iii)二聚体蛋白，其由两个(ii)中定义的多肽组成；

23、其中所述抗原性单元包含自身抗原、变应原、同种异体抗原或异种抗原的一个或多个t细胞表位。

24、在另一方面，本公开提供了如本文所定义的多核苷酸。

25、在另一方面，本公开提供了包含如本文所定义的多核苷酸的载体。

26、在另一方面，本公开提供了包含如本文所定义的多核苷酸的宿主细胞。

27、在另一方面，本公开提供了由两个本文所定义的多肽组成的二聚体蛋白。

28、在另一方面，本公开提供了由本文定义的核酸编码的多肽。

29、在另一方面，本公开提供了药物组合物，其包含本文定义的耐受诱导性构建体和药学上可接受的载体。

30、在另一方面，本公开提供了一种制备本文定义的药物组合物的方法，其中所述药物组合物包含本文定义的多肽或本文定义的多聚体蛋白如二聚体蛋白，其中所述方法包括：

31、a)用本文定义的多核苷酸转染细胞；

32、b)培养所述细胞；

33、c)收集和纯化由所述细胞表达的多聚体蛋白例如二聚体蛋白或多肽；和

34、d)将从步骤c)获得的多聚体蛋白例如二聚体蛋白或多肽与药学上可接受的载体混合。

35、在另一方面，本公开提供了一种制备本文定义的药物组合物的方法，其中所述药物组合物包含本文定义的多核苷酸，所述方法包括：

36、a)制备所述多核苷酸；

37、b)任选地将所述多核苷酸克隆到表达载体中；和

38、c)将从步骤a)获得的多核苷酸或从步骤b)获得的载体与药学上可接受的载体混合。

39、在另一方面，本公开提供了一种治疗患有涉及不期望的免疫反应的病况例如自身免疫疾病、过敏性疾病或移植物排斥的受试者或需要预防所述病况的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文定义的药物组合物。

40、在另一方面，本公开提供了如本文所定义的药物组合物，用于治疗涉及不期望的免疫反应的病况，如自身免疫疾病、过敏性疾病或移植物排斥。