负载生物分子的细胞外囊泡的制作方法

背景技术：

1、细胞外囊泡由各种各样的细胞类型分泌。一般来说，细胞外囊泡(例如，外泌体、微囊泡和凋亡小体)是膜结合的，并且可以负载治疗性货物。外泌体是由大多数真核细胞分泌的一种类型的细胞外囊泡。当内体内陷夹入多泡体，形成腔内囊泡时，外泌体生物发生可能开始。如果多泡体与细胞的质膜融合，则腔内囊泡可以作为外泌体而释放。微囊泡是从细胞表面膜向外出芽的另一种类型的细胞外囊泡。另一方面，凋亡小体是由死亡细胞碎片形成的细胞外囊泡。

2、细胞外基质(ecm)为许多不同类型的组织提供结构支持，并且还影响体内的某些细胞过程。皮肤中ecm的组分包括胶原、弹性纤维、蛋白聚糖和糖胺聚糖。ecm的蛋白质的年龄相关的变化可能具有许多不同的后果。皱纹和弹性降低是皮肤老化的典型现象，并且很可能是真皮中细胞外基质(ecm)(例如，胶原)的量逐渐减少的结果。老化皮肤中胶原的减少可能归因于胶原产生的减少和/或胶原降解的增加。胶原和其他ecm蛋白质的结构变化还可能涉及真皮老化。

3、血管内皮生长因子(vegf)是一种促进血管生成(新血管生长)的信号传导蛋白。当细胞和组织由于血液循环受损而失去含氧血液时，vegf形成恢复向细胞和组织的血液供应的机制的一部分。

技术实现思路

1、在一些方面，本文描述多个细胞外囊泡，其包含外源性细胞外基质信使rna(mrna)。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna编码胶原。在一些情况下，胶原选自：i型胶原、ii型胶原、iii型胶原、iv型胶原、v型胶原、vi型胶原、vii型胶原、viii型胶原、ix型胶原、x型胶原、xi型胶原、xii型胶原、xiii型胶原、xiv型胶原、xv型胶原、xvi型胶原、xvii型胶原、xviii型胶原、xix型胶原、xx型胶原、xxi型胶原、xxii型胶原、xxiii型胶原、xxiv型胶原、xxv型胶原、xxvi型胶原、xxvii型胶原、xxviii型胶原或其任何组合。在一些情况下，胶原为i型胶原。在一些情况下，胶原为ii型胶原。在一些情况下，胶原为i型胶原α1链(col1a1)。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna为编码前α1(i)链的mrna。在一些情况下，胶原为col1a1，并且多个细胞外囊泡不包含i型胶原α2链(col1a2)。在一些情况下，胶原为col1a2。

2、在一些情况下，多个细胞外囊泡包含平均每450个ev至少一个外源性细胞外基质mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含平均每200个ev至少一个外源性细胞外基质mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含平均每约0.1至100个ev至少一个外源性细胞外基质mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含平均每2000个ev、每1000个ev、每500个ev、每400个ev、每300个ev、每200个ev、每150个ev、每100个ev、每90个ev、每80个ev、每70个ev、60个ev、50个ev、每40个ev、每30个ev、每20个ev、每15个ev、每10个ev、每5个ev、每2个ev或每1个ev至少一个外源性细胞外基质mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含平均每个ev至少1、2、5、10、50、100、200、300、500或1000个外源性细胞外基质mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含平均每个ev约1至10个外源性细胞外基质mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含平均每个ev约1个外源性细胞外基质mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含平均每30个ev至少一个外源性细胞外基质mrna的拷贝。

3、在一些情况下，多个细胞外囊泡通过用编码细胞外基质蛋白的质粒转染细胞来产生。在一些情况下，细胞的转染是通过细胞纳米穿孔进行的。在一些情况下，细胞的转染是通过电穿孔进行的。在一些情况下，细胞为人细胞。在一些情况下，细胞为选自以下的成纤维细胞：真皮成纤维细胞、人成纤维细胞、成体成纤维细胞、人成体成纤维细胞、新生儿成纤维细胞、人新生儿成纤维细胞和人新生儿真皮成纤维细胞。在一些情况下，细胞为贴壁细胞。在一些情况下，细胞为人真皮成纤维细胞(例如，人新生儿真皮成纤维细胞)。

4、在一些情况下，多个细胞外囊泡包括选自以下的细胞外囊泡：外泌体、微囊泡、凋亡小体及其任何组合。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少一个外泌体。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含至少一个凋亡小体。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含至少一个微囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括以下中的至少任何两个的混合物：外泌体、微囊泡或凋亡小体。

5、在一些情况下，多个细胞外囊泡被配制用于经由静脉内途径、肌内途径、皮下途径或其任何组合来注射。在一些情况下，制剂包含一种或多种稳定剂和/或一种或多种防腐剂。在一些情况下，制剂包含一种或多种dna酶和/或rna酶抑制剂。在一些情况下，制剂包含一种或多种dna酶、dna酶抑制剂、rna酶和/或rna酶抑制剂。

6、在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少1x1013个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少1x1014个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少1x109个细胞外囊泡并且至多1x1020个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至多1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x101、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少1x106个细胞外囊泡并且至多1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含至少1ng、10ng、20ng、40ng、50ng、100ng、500ng、1μg、10μg、20μg、30μg、40μg或50μg细胞外基质mrna。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含至多1ng、10ng、20ng、40ng、50ng、100ng、500ng、1μg、10μg、20μg、30μg、40μg或50μg细胞外基质mrna。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含至少1ng并且至多20μg细胞外基质mrna。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含至少5ng并且至多30μg细胞外基质mrna。

7、在一些情况下，多个细胞外囊泡包括包含靶向多肽的细胞外囊泡。在一些情况下，靶向多肽靶向真皮细胞。在一些情况下，靶向多肽靶向氨肽酶n、cd26/dpp4、成纤维细胞激活蛋白α或其任何组合。在一些情况下，多个细胞外囊泡不包含以下mirna中的一种或多种：hsa-mir-29c-3p、hsa-mir-29a-3p、hsa-mir-378a-3p、hsa-mir-125b-5p、hsa-mir-23a-3p、hsa-mir-449a、hsa-mir-196a-5p、hsa-mir-744-5p、hsa-mir-223-3p、hsa-mir-23a-3p、hsa-mir-133a-3p、hsa-mir-223-3p、hsa-mir-5011-5p、hsa-mir-325或hsa-mir-199b-5p。

8、在一些情况下，多个细胞外囊泡包含直径的峰值在约50-200nm处的大小分布。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含直径的峰值在约100nm处的大小分布。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含直径的峰值在约75-130nm处的大小分布。在一些情况下，细胞外囊泡的直径大于20nm、30nm、50nm、75nm或100nm。在一些情况下，至少90％的细胞外囊泡的直径大于20nm、30nm、50nm、75nm或100nm。在一些情况下，细胞外囊泡不包括直径小于50nm的细胞外囊泡。在一些情况下，细胞外囊泡不包括直径小于30nm的细胞外囊泡。在一些情况下，细胞外囊泡不包括直径小于20nm的细胞外囊泡。在一些情况下，细胞外囊泡不包括直径小于10nm的细胞外囊泡。在一些情况下，细胞外囊泡不包括直径小于5nm的细胞外囊泡。

9、在一些情况下，外源性细胞外基质mrna存在的水平是相同量的天然存在的细胞外囊泡中外源性细胞外基质mrna的水平的至少2倍。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna存在的水平是相同量的天然存在的细胞外囊泡中外源性细胞外基质mrna的水平的至少3倍。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna存在的水平是相同量的天然存在的细胞外囊泡中外源性细胞外基质mrna的水平的至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少75倍、至少100倍、至少500倍、至少1000倍、至少1500倍或至少2000倍。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna存在的水平是相同量的天然存在的细胞外囊泡中外源性细胞外基质mrna的水平的约3000倍。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna存在的水平是相同量的天然存在的细胞外囊泡中外源性细胞外基质mrna的水平的约2000倍。在一些情况下，与可比数量的天然存在的细胞外囊泡相比，多个细胞外囊泡表达较高水平的以下标志物中的至少一个：cd9、cd63、tsg101或arf6。

10、在一些方面，本文描述一种细胞外囊泡，其包含外源性细胞外基质信使rna(mrna)。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna编码胶原。在一些情况下，胶原选自：i型胶原、ii型胶原、iii型胶原、iv型胶原、v型胶原、vi型胶原、vii型胶原、viii型胶原、ix型胶原、x型胶原、xi型胶原、xii型胶原、xiii型胶原、xiv型胶原、xv型胶原、xvi型胶原、xvii型胶原、xviii型胶原、xix型胶原、xx型胶原、xxi型胶原、xxii型胶原、xxiii型胶原、xxiv型胶原、xxv型胶原、xxvi型胶原、xxvii型胶原、xxviii型胶原或其任何组合。在一些情况下，胶原为i型胶原。在一些情况下，胶原为ii型胶原。在一些情况下，胶原为i型胶原α1链(col1a1)。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna为编码前α1(i)链的mrna。在一些情况下，胶原为col1a1，并且细胞外囊泡不包含i型胶原α2链(col1a2)。在一些情况下，胶原为col1a2。在一些情况下，细胞外囊泡包括选自以下的细胞外囊泡：外泌体、微囊泡、凋亡小体及其任何组合。在一些情况下，细胞外囊泡为外泌体。在一些情况下，细胞外囊泡为凋亡小体。在一些情况下，细胞外囊泡为微囊泡。

11、在一些方面，本文描述一种容器，其包括如前述权利要求中任一项所述的多个细胞外囊泡，其中容器还包括细胞。在一些情况下，细胞包括人细胞、人成纤维细胞、成纤维细胞、真皮成纤维细胞、人成纤维细胞、成体成纤维细胞、人成体成纤维细胞、新生儿成纤维细胞、人新生儿成纤维细胞、人新生儿真皮成纤维细胞或其任何组合。在一些情况下，多个细胞外囊泡以每个细胞至少1000、2000、5000、10000或12000个细胞外囊泡的比率存在于容器中。在一些情况下，多个细胞外囊泡以不大于每个细胞1000、2000、5000、10000、12000、15000、20000、25000、50000、75000、90000或100000个细胞外囊泡的比率存在于容器中。

12、在一些方面，本文描述一种针，其包含本文所公开的多个细胞外囊泡。在一些情况下，针为微针。在一些情况下，针为实心的。在一些情况下，针为水凝胶针。在一些情况下，针的至少50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％包含水凝胶。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸、海藻酸钠、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-乙醇酸、软骨硫黄素、丝蛋白、麦芽糖、壳聚糖、羧甲基纤维素或其任何组合。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少1％、5％、7％、10％、12％、15％、20％、25％、50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至多1％、5％、7％、10％、12％、15％、20％、25％、50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含约15％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸并且至多30％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多20％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多15％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多18％透明质酸。

13、在一些方面，本文描述一种注射器，其包含本文所公开的多个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡悬浮在注射器内的透明质酸中。

14、在一些方面，本文描述一种水凝胶微针，其中水凝胶微针包含多个细胞外囊泡。在一些情况下，水凝胶包含至少1％、5％、7％、10％、12％、15％、20％、25％、50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％、7％、10％、15％或20％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含不大于1％、5％、7％、10％、12％、15％、20％、25％、50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸、海藻酸钠、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-乙醇酸、软骨硫黄素、丝蛋白、麦芽糖、壳聚糖、羧甲基纤维素或其任何组合。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括选自以下的细胞外囊泡：外泌体、微囊泡、凋亡小体及其任何组合。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少一个外泌体。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少一个凋亡小体。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少一个微囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括不大于1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025、1x1030、1x1030、1x1040、1x1050、1x1060、1x1070、1x1080、1x1090或1x10100个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括约1x106至1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括约1x1010至1x1014个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括约1x1013至1x1014个细胞外囊泡。

15、在一些情况下，水凝胶微针的长度小于2mm。在一些情况下，水凝胶微针的长度小于1mm。在一些情况下，水凝胶微针的长度为至少100、至少200、至少300、至少400、至少500、至少600、至少700、至少800、至少900、至少1000、至少1100、至少1200、至少1300、至少1400、至少1500、至少1600、至少1700、至少1800、至少1900、至少2000μm。在一些情况下，水凝胶微针的长度不大于100、不大于200、不大于300、不大于400、不大于500、不大于600、不大于700、不大于800、不大于900、不大于1000、不大于1100、不大于1200、不大于1300、不大于1400、不大于1500、不大于1600、不大于1700、不大于1800、不大于1900或不大于2000μm。在其他情况下，水凝胶微针的长度为100μm至3000μm、500μm至2500μm、1000μm至2500μm或1000μm至2000μm。在具体的实施方案中，水凝胶微针的长度为约1000μm。在具体的实施方案中，水凝胶微针的长度为约2000μm。

16、在一些情况下，水凝胶微针具有直径不大于10000μm、9000μm、8000μm、7000μm、6000μm、5000μm、4000μm、3000μm、2000μm、1800μm、1500μm、1000μm、900μm、800μm、700μm、600μm、500μm、400μm、300μm、200μm或100μm的基部。在一些情况下，水凝胶微针具有直径大于10000μm、9000μm、8000μm、7000μm、6000μm、5000μm、4000μm、3000μm、2000μm、1800μm、1500μm、1000μm、900μm、800μm、700μm、600μm、500μm、400μm、300μm、200μm或100μm的基部。在一些情况下，水凝胶微针包含负载一个或多个mrna货物的细胞外囊泡。

17、在一些方面，本文描述一种针，其包含多个细胞外囊泡，其中细胞外囊泡包含至少一个细胞外基质信使rna(mrna)。在一些情况下，细胞外基质mrna编码胶原。在一些情况下，胶原选自：i型胶原、ii型胶原、iii型胶原、iv型胶原、v型胶原、vi型胶原、vii型胶原、viii型胶原、ix型胶原、x型胶原、xi型胶原、xii型胶原、xiii型胶原、xiv型胶原、xv型胶原、xvi型胶原、xvii型胶原、xviii型胶原、xix型胶原、xx型胶原、xxi型胶原、xxii型胶原、xxiii型胶原、xxiv型胶原、xxv型胶原、xxvi型胶原、xxvii型胶原、xxviii型胶原或其任何组合。在一些情况下，胶原为i型胶原。在一些情况下，胶原为ii型胶原。在一些情况下，胶原为i型胶原α1链(col1a1)。在一些情况下，胶原为col1a1，并且多个细胞外囊泡不包含i型胶原α2链(col1a2)。在一些情况下，胶原为col1a2。在一些情况下，细胞外基质mrna为编码前α1(i)链的mrna。

18、在一些情况下，多个细胞外囊泡包括选自以下的细胞外囊泡：外泌体、微囊泡、凋亡小体及其任何组合。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少一个外泌体。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少一个凋亡小体。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少一个微囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括以下中的任何两个的混合物：外泌体、微囊泡或凋亡小体。

19、在一些情况下，针为微针。在一些情况下，针为实心的。在一些情况下，针为水凝胶针，并且任选地其中针的至少50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％包含水凝胶。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸、海藻酸钠、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-乙醇酸、软骨硫黄素、丝蛋白、麦芽糖、壳聚糖、羧甲基纤维素或其任何组合。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少1％、5％、7％、10％、12％、15％、20％、25％、50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含不大于1％、5％、7％、10％、12％、15％、20％、25％、50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含约15％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸并且至多30％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多20％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多15％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多18％透明质酸。

20、在一些情况下，针的长度小于2mm。在一些情况下，针的长度小于1mm。在一些情况下，针的长度为至少100、至少200、至少300、至少400、至少500、至少600、至少700、至少800、至少900、至少1000、至少1100、至少1200、至少1300、至少1400、至少1500、至少1600、至少1700、至少1800、至少1900、至少2000μm。在一些情况下，针的长度不大于100、不大于200、不大于300、不大于400、不大于500、不大于600、不大于700、不大于800、不大于900、不大于1000、不大于1100、不大于1200、不大于1300、不大于1400、不大于1500、不大于1600、不大于1700、不大于1800、不大于1900或不大于2000μm。在其他情况下，针的长度为100μm至3000μm、500μm至2500μm、1000μm至2500μm或1000μm至2000μm。在具体的实施方案中，针的长度为约1000μm。在具体的实施方案中，针的长度为约2000μm。

21、在一些情况下，针具有直径不大于10000μm、9000μm、8000μm、7000μm、6000μm、5000μm、4000μm、3000μm、2000μm、1800μm、1500μm、1000μm、900μm、800μm、700μm、600μm、500μm、400μm、300μm、200μm或100μm的基部。在一些情况下，针具有直径不大于10000μm、9000μm、8000μm、7000μm、6000μm、5000μm、4000μm、3000μm、2000μm、1800μm、1500μm、1000μm、900μm、800μm、700μm、600μm、500μm、400μm、300μm、200μm或100μm的基部。

22、在一些方面，本文描述一种治疗对象的皮肤病况的方法，其包括向有需要的对象施用至少一个细胞外基质mrna，从而治疗皮肤病况。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna编码胶原。在一些情况下，胶原选自：i型胶原、ii型胶原、iii型胶原、iv型胶原、v型胶原、vi型胶原、vii型胶原、viii型胶原、ix型胶原、x型胶原、xi型胶原、xii型胶原、xiii型胶原、xiv型胶原、xv型胶原、xvi型胶原、xvii型胶原、xviii型胶原、xix型胶原、xx型胶原、xxi型胶原、xxii型胶原、xxiii型胶原、xxiv型胶原、xxv型胶原、xxvi型胶原、xxvii型胶原、xxviii型胶原或其任何组合。在一些情况下，胶原为i型胶原。在一些情况下，胶原为ii型胶原。在一些情况下，胶原为i型胶原α1链(col1a1)。在一些情况下，胶原为col1a1，但不为i型胶原α2链(col1a2)。在一些情况下，胶原为col1a2。在一些情况下，细胞外基质mrna为编码前α1(i)链的mrna。

23、在一些情况下，皮肤病况为皮肤损伤。在一些情况下，皮肤损伤是由老化或阳光损伤引起的。在一些情况下，皮肤病况为伤口。

24、在一些情况下，施用包括向对象施用至少1ng、10ng、20ng、40ng、50ng、100ng、500ng、1μg、10μg、20μg、30μg、40μg或50μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向对象施用不大于500ng、1μg、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、150μg、200μg、250μg、300μg、350μg、400μg、450μg或500μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向对象施用1ng-20μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向对象施用1ng-10μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向对象施用10ng-10μg、10ng-1μg、50ng-1μg、100ng-1μg或500ng-1μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向对象施用约50ng细胞外基质mrna。

25、在一些情况下，细胞外基质mrna被包封在至少一个细胞外囊泡(ev)中。在一些情况下，ev不包含以下mirna中的一种或多种：hsa-mir-29c-3p、hsa-mir-29a-3p、hsa-mir-378a-3p、hsa-mir-125b-5p、hsa-mir-23a-3p、hsa-mir-449a、hsa-mir-196a-5p、hsa-mir-744-5p、hsa-mir-223-3p、hsa-mir-23a-3p、hsa-mir-133a-3p、hsa-mir-223-3p、hsa-mir-5011-5p、hsa-mir-325或hsa-mir-199b-5p。

26、在一些情况下，至少一个ev为外泌体。在一些情况下，至少一个ev为凋亡小体或微囊泡。在一些情况下，至少一个ev包括以下中的至少两个的混合物：外泌体、微囊泡和/或凋亡小体。

27、在一些情况下，治疗皮肤损伤导致皱纹的出现减少至少10％。在一些情况下，皱纹的出现减少至少10％发生在向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的7-14天内。在一些情况下，治疗皮肤损伤导致皱纹的出现减少至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％。在一些情况下，皱纹的出现减少至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％发生在向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的7-14天内。在一些情况下，治疗皮肤损伤导致总皱纹数减少至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些情况下，治疗皮肤损伤导致总皱纹数减少约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。在一些情况下，治疗皮肤损伤导致总皱纹面积减少至少5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些情况下，治疗皮肤损伤导致总皱纹面积减少不大于5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些情况下，治疗皮肤损伤导致总皱纹面积减少约70％、80％或90％。在一些情况下，皱纹面积通过对皮肤的治疗部分进行显微摄影来测量，并且通过摄影分析软件来量化。

28、在一些情况下，治疗皮肤病况包括治疗皮肤损伤，并且其中治疗皮肤损伤导致在治疗皮肤病况之后持续至少20天、30天、40天、50天、60天、70天、80天、90天或100天的皮肤损伤减少。在一些情况下，皮肤损伤减少为以下中的一种或多种：总皱纹数减少、总皱纹面积减少、皱纹的出现减少或其任何组合。

29、在一些情况下，施用是经由皮下注射进行的。在一些情况下，皮下注射在皮肤损伤或伤口部位处或附近进行。在一些情况下，皮下注射使用规格(gauge)为至少23s、23、22s、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10的针进行。在一些情况下，皮下注射使用规格不大于34、33、32、31、30、29、28、27、26s、26、25s、25、24、23s、23、22s、22、21或20的针进行。在一些情况下，皮下注射使用规格为34、33、32、31、30、29、28、27、26s、26、25s、25、24、23s、23、22s、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11或10的针进行。在一些情况下，皮下注射使用规格为28的针进行。

30、在一些情况下，施用包括向有需要的对象施用至少1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡，并且细胞外囊泡的至少一部分包含至少一个细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向有需要的对象施用不大于1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡，并且细胞外囊泡的至少一部分包含至少一个细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向有需要的对象施用约1x107至1x1017、1x108至1x1016、1x109至1x1015个细胞外囊泡，并且细胞外囊泡的至少一部分包含至少一个细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向有需要的对象施用约1x1010至1x1014个细胞外囊泡，并且细胞外囊泡的至少一部分包含至少一个细胞外基质mrna。

31、在一些情况下，细胞外囊泡以多剂量或呈单剂量施用。在一些情况下，细胞外囊泡以至少每天一次、每周一次、每2周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每10周一次、每12周一次或每16周一次的间隔施用于对象。在一些情况下，细胞外囊泡以至多每天一次、每周一次、每2周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每10周一次、每12周一次或每16周施用于对象。在一些情况下，施用是单次进行的，并且向对象施用至多1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是单次进行的，并且向对象施用至少10、1x102、5x102、1x103、5x103、1x104、5x104、1x105、5x105、1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且每次向对象施用至多1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且每次向对象施用至少10、1x102、5x102、1x103、5x103、1x104、5x104、1x105、5x105、1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，细胞外囊泡以至少一个包含至少1,000个细胞外囊泡的剂量施用，其中细胞外囊泡的至少一部分包含至少一个细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向对象的组织施用至少一个细胞外基质mrna。

32、在一些情况下，组织为皮下组织。在一些情况下，组织为真皮。在一些情况下，组织为表皮。在一些情况下，组织为牙龈。在一些情况下，组织为嘴唇。

33、在一些情况下，在向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的72小时内，组织的细胞外基质蛋白的浓度为至少6000pg/ml。在一些情况下，在向对象的组织施用细胞外基质mrna之后，对象的组织的细胞外基质蛋白的浓度为至少200、300、500、750、1000、2000、3000、4000或5000pg/ml。在一些情况下，在向对象的组织施用细胞外基质mrna之后，对象的组织的细胞外基质蛋白的浓度不大于200、300、500、750、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000或18000pg/ml。在一些情况下，在向对象的组织施用包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡之后，对象的组织的细胞外基质蛋白的浓度为至少200、300、500、750、1000、2000、3000、4000或5000pg/ml。在一些情况下，在向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的72小时内，组织的细胞外基质蛋白的浓度为至少200、300、500、750、1000、2000、3000、4000或5000pg/ml。在一些情况下，在向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的72小时内，组织的细胞外基质蛋白的浓度不大于200、300、500、750、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000、15000、16000、17000或18000pg/ml。在一些情况下，在向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的约4天内，组织具有峰值浓度的细胞外基质蛋白。

34、在一些情况下，至少每天、每3天、每5天、每7天、每10天、每20天、每30天、每40天或每50天重复向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡。在一些情况下，约每10天、每20天、每30天、每40天或每50天重复向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡。在一些情况下，约每30天重复向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡。在一些情况下，约每60天重复向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡。在一些情况下，约每90天重复向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡。

35、在一些情况下，方法还包括通过以下方式产生包含至少一个细胞外基质mrna的细胞外囊泡：(a)经由转染，将对应于细胞外基质mrna的载体或质粒引入至供体细胞中；(b)将供体细胞在培养基中培养足够量的时间，以便产生包封从载体或质粒转录的至少一个细胞外基质mrna的细胞外囊泡；以及(c)从培养基收集细胞外囊泡。在一些情况下，在步骤(c)中，收集细胞外囊泡发生在转染之后约8-24h。在一些情况下，细胞外囊泡以每个供体细胞至少1000、2000、5000、10000或12000个细胞外囊泡的比率存在。在一些情况下，细胞外囊泡以不大于每个供体细胞1000、2000、5000、10000、12000、15000、17000、20000、25000、30000、35000、40000、45000或50000个细胞外囊泡的比率存在。在一些情况下，供体细胞为人细胞、人成纤维细胞、成纤维细胞、真皮成纤维细胞、人成纤维细胞、成体成纤维细胞、人成体成纤维细胞、新生儿成纤维细胞、人新生儿成纤维细胞、人新生儿真皮成纤维细胞或其任何组合。

36、在一些方面，本文描述一种产生包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的方法，其包括：(a)经由转染，将对应于细胞外基质mrna的载体或质粒引入至供体细胞中；(b)将供体细胞在培养基中培养足够量的时间，以便产生包封从载体或质粒转录的至少一个细胞外基质mrna的细胞外囊泡；以及(c)从培养基收集细胞外囊泡。在一些情况下，在步骤(c)中，收集细胞外囊泡发生在转染之后约8-24h。在一些情况下，包封从载体或质粒转录的细胞外基质mrna的细胞外囊泡以每个供体细胞至少1000、2000、5000、10000或12000个细胞外囊泡的水平存在。在一些情况下，细胞外囊泡以不大于每个供体细胞1000、2000、5000、10000、12000、15000、17000、20000、25000、30000、35000、40000、45000或50000个细胞外囊泡的比率存在。在一些情况下，供体细胞为人细胞、人成纤维细胞、成纤维细胞、真皮成纤维细胞、人成纤维细胞、成体成纤维细胞、人成体成纤维细胞、新生儿成纤维细胞、人新生儿成纤维细胞、人新生儿真皮成纤维细胞或其任何组合。

37、在一些方面，本文描述一种微针装置，该微针装置包括基材和多个微针，其中多个微针从基材突出，并且其中多个微针中的至少一个微针包含至少一个细胞外囊泡(ev)。

38、在一些方面，基材上多个微针的密度为每平方毫米基材0.1个微针至100个微针。在一些情况下，基材上多个微针的密度为每平方毫米基材至少0.3个微针。在一些情况下，基材上多个微针的密度为每平方毫米基材约0.59个微针。在一些情况下，多个微针包括约10-1000个微针，并且其中基材的面积为20-1000mm2。在一些情况下，多个微针包括约100个微针，并且其中基材的面积为约169mm2。

39、在一些情况下，多个微针被布置成至少2行并且每行中至少2个微针。在一些情况下，多个微针被布置成10行并且每行10个微针。

40、在一些情况下，多个微针中的至少一个微针包含水凝胶。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸、海藻酸钠、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-乙醇酸、软骨硫黄素、丝蛋白、麦芽糖、壳聚糖、羧甲基纤维素或其任何组合。

41、在一些情况下，多个微针中的至少一个微针的形状为锥形。在一些情况下，多个微针中的至少一个微针具有逐渐变细的形状。

42、在一些情况下，多个微针中的至少一个微针包括直径小于1000μm的基部。在一些情况下，多个微针中的至少一个微针包括直径为约100μm至约800μm的基部。在一些情况下，多个微针中的至少一个微针包括直径为约400μm的基部。

43、在一些情况下，多个微针中的至少一个微针的长度为至少100μm。在一些情况下，多个微针中的至少一个微针的长度为100μm至3000μm。在一些情况下，多个微针中的至少一个微针的长度为约1000μm。在一些情况下，多个微针中的微针的长度为约2000μm。

44、在一些情况下，多个微针中的微针之间的中心至中心的距离为至少100μm。在一些情况下，多个微针中的微针之间的中心至中心的距离为约100至2000μm。在一些情况下，多个微针中的微针之间的中心至中心的距离为约1000μm。

45、在一些情况下，多个微针中的至少一个微针包含至少3x105个ev。在一些情况下，多个微针中的至少一个微针包含约3x108至3x1010个ev。

46、在一些情况下，ev悬浮在水凝胶中。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸、海藻酸钠、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-乙醇酸、软骨硫黄素、丝蛋白、麦芽糖、壳聚糖、羧甲基纤维素或其任何组合。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸。

47、在一些情况下，ev包含外源性细胞外基质mrna。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna包含：i型胶原、ii型胶原、iii型胶原、iv型胶原、v型胶原、vi型胶原、vii型胶原、viii型胶原、ix型胶原、x型胶原、xi型胶原、xii型胶原、xiii型胶原、xiv型胶原、xv型胶原、xvi型胶原、xvii型胶原、xviii型胶原、xix型胶原、xx型胶原、xxi型胶原、xxii型胶原、xxiii型胶原、xxiv型胶原、xxv型胶原、xxvi型胶原、xxvii型胶原、xxviii型胶原或其任何组合。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna为编码前α1(i)链的mrna。

48、在一些情况下，ev包含外源性vegf mrna。在一些情况下，外源性vegf mrna包含vegfa、vegfb、vegfc、vegfd、pigf或其任何组合。

49、在一些方面，本文描述一种向对象的组织施用细胞外囊泡(ev)的方法，该方法包括向对象的组织施用本文所公开的针、注射器、水凝胶针、微针或微针装置。在一些情况下，该方法包括向对象的组织施用本文所公开的微针装置。在一些情况下，在至少5、10、15、20、25或30分钟之后去除微针装置。在一些情况下，在约10、15、20或30分钟之后去除微针装置。

50、在一些情况下，ev包含至少一个mrna。在一些情况下，施用包括向对象的组织施用至少1ng、10ng、50ng、100ng、1μg、10μg或20μg至少一个mrna。在一些情况下，施用包括向对象的组织施用1ng-10μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括向对象的组织施用1ng-20μg细胞外基质mrna。

51、在一些情况下，组织为皮下组织。在一些情况下，组织为真皮。在一些情况下，组织为表皮。在一些情况下，组织为牙龈。在一些情况下，组织为嘴唇。在一些情况下，对象为哺乳动物。在一些情况下，对象为人。在一些情况下，对象为啮齿动物。在一些情况下，对象为猴子。在一些情况下，对象为兔子。

52、在一些情况下，施用是单次进行的，并且施用至少1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013或1x1014个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是单次进行的，并且施用至多1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1017、1x1018、1x1019、1x1020或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是单次进行的，并且施用至多1x1013-14个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且每次施用至少1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013或1x1014个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且每次施用至多1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1017、1x1018、1x1019、1x1020或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且每次施用至多1x1013-14个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且在6-8周内施用至多1x1013-14个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是历经一段时间多次进行的，并且施用至多1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1017、1x1018、1x1019或1x1020、1x1030个细胞外囊泡。

53、在一些情况下，与施用在常规的微针或注射器中的ev相比，该方法导致ev的破损较少。在一些情况下，与施用在常规的微针或注射器中的ev相比，该方法导致在施用部位处的刺激较小。在一些情况下，与施用在常规的微针或注射器中的ev相比，该方法导致ev在组织中的分布更均匀。在一些情况下，常规的微针为实心微针或中空微针。

54、在一些方面，本文描述一种治疗有需要的对象的皮肤病况的方法，该方法包括向对象应用本文所公开的针、注射器、水凝胶针、微针或微针装置。在一些情况下，该方法包括向对象施用本文所公开的微针。

55、在一些情况下，皮肤病况为皮肤损伤。在一些情况下，皮肤损伤是由老化或阳光损伤引起的。在一些情况下，皮肤病况为伤口。

56、在一些情况下，施用包括施用至少0.1ng、1ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng、50ng、100ng、200ng、300ng、400ng、500ng、600ng、700ng、800ng、900ng、1μg或10μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括施用不大于0.1ng、1ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng、50ng、100ng、200ng、300ng、400ng、500ng、600ng、700ng、800ng、900ng、1μg、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、200μg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg或900μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括施用约0.1ng-50μg、1ng-50μg、1ng-30μg、1ng-25μg细胞外基质mrna。在一些情况下，施用包括施用约1ng-20μg细胞外基质mrna。

57、在一些情况下，该方法导致皱纹的出现减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些情况下，该方法产生多至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％的胶原纤维。在一些情况下，该方法导致真皮厚度增加至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。在一些情况下，该方法导致持续至少30天、至少40天、至少50天、至少60天、至少70天、至少80天或至少90天的延长的效果。

58、在一些情况下，针、微针或微针装置的微针的至少50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％包含水凝胶。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸、海藻酸钠、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-乙醇酸、软骨硫黄素、丝蛋白、麦芽糖、壳聚糖、羧甲基纤维素或其任何组合。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少1％、5％、7％、10％、12％、15％、20％、25％、50％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含约15％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸并且至多30％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多20％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多15％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多18％透明质酸。

59、在一些情况下，施用是单次进行的，并且施用至少1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013或1x1014个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是单次进行的，并且施用至多1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1017、1x1018、1x1019、1x1020或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是单次进行的，并且施用至多1x1013-14个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且每次施用至少1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013或1x1014个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且每次施用至多1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1017、1x1018、1x1019、1x1020或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且每次施用至多1x1013-14个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是多次进行的，并且在6-8周内施用至多1x1013-14个细胞外囊泡。在一些情况下，施用是历经一段时间多次进行的，并且施用至多1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1017、1x1018、1x1019或1x1020、1x1030个细胞外囊泡。

60、在一些方面，本文描述一种制造微针装置的方法，其中该方法包括：(a)将细胞外囊泡(ev)与第一批可聚合的溶液混合；以及(b)将来自(a)的混合物浇注至具有至少一个针样形状的聚二甲基硅氧烷(pdms)模具中。在一些情况下，(a)中的混合在真空下进行。

61、在一些情况下，该方法还包括将ev浓缩在pdms模具的至少一个针样形状的尖端中。在一些情况下，浓缩是通过将pdms模具维持在至多10℃的温度进行的。在一些情况下，浓缩是通过将pdms模具维持在约4℃进行的。在一些情况下，浓缩持续约2至约6小时。

62、在一些情况下，该方法还包括将第二批可聚合的溶液添加在pdms模具的顶部。在一些情况下，可聚合的溶液包含水凝胶。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸、海藻酸钠、聚乳酸、聚乙醇酸和聚乳酸-乙醇酸、软骨硫黄素、丝蛋白、麦芽糖、壳聚糖、羧甲基纤维素或其任何组合。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含约15％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含至少5％透明质酸并且至多30％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多20％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多15％透明质酸。在一些情况下，水凝胶包含大于10％透明质酸并且至多18％透明质酸。

63、在一些情况下，ev与可聚合的溶液之间的最终比率为至少1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45、1:50、1:55、1:60、1:65、1:70、1:80、1:90或1:100。在一些情况下，ev与可聚合的溶液之间的最终比率不大于1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45或1:50。在一些情况下，ev与可聚合的溶液之间的最终比率为约1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35或1:40。

64、在一些情况下，ev包含外源性细胞外基质mrna。在一些情况下，外源性细胞外基质mrna包含：i型胶原、ii型胶原、iii型胶原、iv型胶原、v型胶原、vi型胶原、vii型胶原、viii型胶原、ix型胶原、x型胶原、xi型胶原、xii型胶原、xiii型胶原、xiv型胶原、xv型胶原、xvi型胶原、xvii型胶原、xviii型胶原、xix型胶原、xx型胶原、xxi型胶原、xxii型胶原、xxiii型胶原、xxiv型胶原、xxv型胶原、xxvi型胶原、xxvii型胶原、xxviii型胶原或其任何组合。在一些情况下，ev包含外源性vegf mrna。在一些情况下，外源性vegf mrna包含vegfa、vegfb、vegfc、vegfd、pigf或其任何组合。

65、在一些方面，本文描述一种在组织中产生i型胶原的异二聚体或异三聚体的方法，其中该方法包括向组织施用本文所公开的多个细胞外囊泡。在一些情况下，异二聚体或异三聚体包含至少一条i型胶原α链(col1a1)和至少一条i型胶原α链(col1a2)，并且其中col1a1通过本文所公开的多个细胞外囊泡外源性地递送。在一些情况下，col1a2为组织内源性的。

66、在一些方面，本文描述多个细胞外囊泡，其包含平均每400个细胞外囊泡至少一个外源性vegf mrna的拷贝。在一些情况下，外源性vegf mrna选自vegfa、vegfb、vegfc、vegfd、pigf及其任何组合。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括选自以下的细胞外囊泡：外泌体、微囊泡、凋亡小体或其任何组合。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括包含靶向多肽的细胞外囊泡。

67、在一些情况下，多个细胞外囊泡包含每至多1、5、10、15、20、25、30、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300或350个细胞外囊泡至少一个外源性vegf mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含每个细胞外囊泡至少1、2、5、10、20、25、30、35、30、50、60、70、90或100个vegf mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含每个细胞外囊泡至少1、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100个vegf mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含每个细胞外囊泡至多1、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000个vegf mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含每约0.001至100、0.01至100或0.01至50个细胞外囊泡至少一个外源性vegf mrna的拷贝。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含每约0.02至50个细胞外囊泡至少一个外源性vegf mrna的拷贝。

68、在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至少1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。在一些情况下，多个细胞外囊泡包括至多1x106、5x106、1x107、5x107、1x108、3x108、5x108、1x109、3x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1020、1x1025或1x1030个细胞外囊泡。

69、在一些情况下，多个细胞外囊泡被配制用于静脉内注射、肌内注射、皮下注射或经由冠状动脉导管注射。

70、在一些情况下，混合物包含至少两个包含一个至六个外源性vegf mrna的拷贝的细胞外囊泡，并且其中混合物包含外泌体、微囊泡和凋亡小体。在一些情况下，所述混合物被配制用于经由静脉内、肌内或皮下途径注射。在一些情况下，所述混合物被配制用于经由冠状动脉导管注射。在一些情况下，vegf mrna存在的水平是相同量的天然存在的细胞外囊泡中的vegf mrna的水平的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少75倍、至少100倍、至少500倍、至少1000倍、至少1500倍或至少2000倍。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含至少10pg、50pg、100pg、200pg、300pg、400pg、500pg、600pg、700pg、800pg、900pg、1ng、100ng、500ng、1000ng、10μg、50μg、100μg、150μg或200μg vegf mrna。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含不大于10pg、50pg、100pg、200pg、300pg、400pg、500pg、600pg、700pg、800pg、900pg、1ng、100ng、500ng、1000ng、10μg、50μg、100μg、150μg、200μg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg或1000μgvegf mrna。在一些情况下，多个细胞外囊泡包含约1ng至200μg vegf mrna。

71、在一些方面，本文描述一种治疗对象的血流病症的方法，其包括向对象施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡，从而治疗血流病症。在一些情况下，治疗血流病症导致再血管化增加至少5％。在一些情况下，再血管化增加至少5％发生在施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡的14天内。

72、在一些情况下，施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡包括经由静脉内、肌内或皮下注射或经由冠状动脉导管向对象施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡。在一些情况下，静脉内、肌内或皮下注射使用规格为至少14号的针进行。

73、在一些情况下，血流病症为缺血。在一些情况下，至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡以至少一个剂量施用。在一些情况下，至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡包括至少1,000个包含vegf mrna的细胞外囊泡。在一些情况下，至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡以至少两个剂量施用。

74、在一些情况下，施用包括单次施用至少1x105、1x106、1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015或1x1016个ev。在一些情况下，施用包括单次施用不大于1x105、1x106、1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1017、1x1018、1x1019、1x1020、1x1021、1x1022、1x1023或1x1024个ev。在一些情况下，施用包括单次施用约1x105至1x1020、1x106至1x1019、1x107至1x1018、1x108至1x1017或1x109至1x1016个ev。在一些情况下，施用包括单次施用约1x1010至1x1016个ev。在一些情况下，施用包括单次施用至少10pg、50pg、100pg、200pg、300pg、400pg、500pg、600pg、700pg、800pg、900pg、1ng、100ng、500ng、1000ng、10μg、50μg、100μg、150μg或200μg vegf mrna。在一些情况下，施用包括单次施用不大于10pg、50pg、100pg、200pg、300pg、400pg、500pg、600pg、700pg、800pg、900pg、1ng、100ng、500ng、1000ng、10μg、50μg、100μg、150μg、200μg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg或1000μg vegf mrna。

75、在一些情况下，施用包括多次施用，并且每次施用至少1x105、1x106、1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015或1x1016个ev。在一些情况下，施用包括多次施用，并且每次施用不大于1x105、1x106、1x107、1x108、1x109、1x1010、1x1011、1x1012、1x1013、1x1014、1x1015、1x1016、1x1017、1x1018、1x1019、1x1020、1x1021、1x1022、1x1023或1x1024个ev。在一些情况下，施用包括多次施用，并且每次施用约1x105至1x1020、1x106至1x1019、1x107至1x1018、1x108至1x1017或1x109至1x1016个ev。在一些情况下，施用包括多次施用，并且每次施用约1x1010至1x1016个ev。在一些情况下，施用包括多次施用，并且每次施用至少10pg、50pg、100pg、200pg、300pg、400pg、500pg、600pg、700pg、800pg、900pg、1ng、100ng、500ng、1000ng、10μg、50μg、100μg、150μg或200μg vegf mrna。在一些情况下，施用包括多次施用，并且每次施用不大于10pg、50pg、100pg、200pg、300pg、400pg、500pg、600pg、700pg、800pg、900pg、1ng、100ng、500ng、1000ng、10μg、50μg、100μg、150μg、200μg、300μg、400μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg或1000μg vegf mrna。

76、在一些情况下，其中向对象施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡包括向对象的组织施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡。在一些情况下，施用是使用负载包含vegf mrna的细胞外囊泡的微针进行的。

77、在一些情况下，微针包含水凝胶。在一些情况下，水凝胶包含透明质酸、海藻酸钠、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-乙醇酸、软骨硫黄素、丝蛋白、麦芽糖、壳聚糖、羧甲基纤维素或其任何组合。

78、在一些情况下，细胞外囊泡以至少每天一次、每周一次、每2周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每10周一次、每12周一次或每16周一次的间隔施用于对象。在一些情况下，细胞外囊泡以至多每天一次、每周一次、每2周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每10周一次、每12周一次或每16周一次施用于对象。

79、在一些方面，本文描述一种产生包含vegf mrna的细胞外囊泡的方法，其包括：(a)经由转染，将编码vegf的载体或质粒引入至供体细胞中；(b)将供体细胞温育足够的时间，以便产生包封从载体或质粒转录的vegf mrna的细胞外囊泡；以及(c)收集包封从载体或质粒转录的vegf mrna的细胞外囊泡。

80、在一些方面，本文描述一种治疗有需要的对象的血流病症的方法，该方法包括施用本文所公开的细胞外囊泡。在一些情况下，血流病症为缺血。

81、在一些方面，本文描述多个细胞外囊泡，其包含平均至少一个外源性vegf mrna的拷贝。在一些实施方案中，外源性vegf mrna选自vegfa、vegfb、vegfc、vegfd、pigf及其任何组合。在一些实施方案中，多个细胞外囊泡包括选自以下的细胞外囊泡：外泌体、微囊泡、凋亡小体或其任何组合。在一些实施方案中，多个细胞外囊泡包括包含靶向多肽的细胞外囊泡。

82、在一些方面，本文描述细胞外囊泡混合物，其中混合物包含至少两个包含一个至六个外源性vegf mrna的拷贝的细胞外囊泡，并且其中混合物包含外泌体、微囊泡和凋亡小体。在一些实施方案中，混合物被配制用于经由静脉内、肌内或皮下途径注射。在一些实施方案中，混合物被配制用于经由冠状动脉导管注射。

83、在一些方面，本文描述治疗对象的血流病症的方法，其包括向对象施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡，从而治疗血流病症。在一些实施方案中，治疗血流病症导致再血管化增加至少5％。在一些实施方案中，再血管化增加至少5％发生在施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡的14天内。在一些实施方案中，施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡包括经由静脉内、肌内或皮下注射或经由冠状动脉导管向对象施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡。在一些实施方案中，静脉内、肌内或皮下注射使用规格为至少14号的针进行。在一些实施方案中，血流病症为缺血。在一些实施方案中，至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡以至少一个剂量施用。在一些实施方案中，剂量包含至少1,000个包含vegf mrna的细胞外囊泡。在一些实施方案中，至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡以至少两个剂量施用。在一些实施方案中，向对象施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡包括向对象的组织施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡。

84、在一些方面，本文描述多个细胞外囊泡，其包含平均至少一个外源性细胞外基质mrna的拷贝。在一些实施方案中，外源性细胞外基质mrna选自：胶原、col1、i型胶原、ii型胶原、iii型胶原、v型胶原、xi型胶原、ix型胶原、xii型胶原、xiv型胶原、viii型胶原、x型胶原、iv型胶原、vi型胶原、vii型胶原、xiii型胶原、xv型胶原、xvii型胶原和xviiii型胶原。在一些实施方案中，多个细胞外囊泡包括选自以下的细胞外囊泡：外泌体、微囊泡、凋亡小体或其任何组合。在一些实施方案中，多个细胞外囊泡包括包含靶向多肽的细胞外囊泡。

85、在一些方面，本文描述细胞外囊泡混合物，其中混合物包含至少两个包含一个至两个外源性细胞外基质mrna的拷贝的细胞外囊泡，并且其中混合物包含外泌体、微囊泡和凋亡小体。在一些实施方案中，混合物被配制用于经由静脉内、肌内或皮下途径注射。

86、在一些方面，本文描述治疗对象的皮肤损伤的方法，其包括向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡，从而治疗对象的皮肤损伤。在一些实施方案中，治疗皮肤损伤导致皱纹的出现减少至少10％。在一些实施方案中，皱纹的出现减少至少10％发生在施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的14天内。在一些实施方案中，施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡包括经由皮下注射向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡。在一些实施方案中，皮下注射使用规格为至少14的针进行。在一些实施方案中，皮肤损伤是由老化或阳光损伤引起的。在一些实施方案中，至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡以至少一个剂量施用。在一些实施方案中，剂量包含至少1,000个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡。在一些实施方案中，至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡以至少两个剂量施用。在一些实施方案中，向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡包括向对象的组织施用至少一个包含vegf mrna的细胞外囊泡。在一些实施方案中，在向对象施用至少一个包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的72小时内，组织的细胞外基质蛋白的浓度为至少6000pg/ml。

87、在一些方面，本文描述产生包含vegf mrna的细胞外囊泡的方法，其包括：经由转染将编码vegf的载体或质粒引入至供体细胞中；将供体细胞温育足够的时间，以便产生包封从载体或质粒转录的vegf mrna的细胞外囊泡；以及收集包封从载体或质粒转录的vegfmrna的细胞外囊泡。

88、在一些方面，本文描述产生包含细胞外基质mrna的细胞外囊泡的方法，其包括：经由转染将编码细胞外基质蛋白的载体或质粒引入至供体细胞中；将供体细胞温育足够的时间，以便产生包封从载体或质粒转录的细胞外基质mrna的细胞外囊泡；以及收集包封从载体或质粒转录的细胞外基质mrna的细胞外囊泡。