抗流感病毒和金黄色葡萄球菌合并感染的新型抗感染策略的制作方法

本发明涉及用在用于预防和/或治疗包含细菌感染和流感病毒感染的合并感染或单独细菌感染的方法中的mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfκb抑制剂。本发明还提供包含用在预防和/或治疗包含细菌感染和流感病毒感染的合并感染或单独细菌感染中的这类抑制剂的组合物。此外，还提供一种体外测试系统，其中所述测试系统包含感染流感病毒和细菌或单独感染细菌的培养细胞。

背景技术：

1、流感a病毒是导致显著发病率和死亡率的严重呼吸道疾病的病原体。在感染流感病毒(iv)期间，大部分死亡案例实际上是由诸如金黄色葡萄球菌(s.aureus)、肺炎双球菌和流感嗜血杆菌的不同细菌引起的继发性肺炎所造成的(morens等人,2008,chertow等人,2013)。细菌合并感染最突出的问题是突然增强的致病性(lwao等人,2012,paddock等人,2012,parker等人,2012)和对抗不同病原体的有效抗感染药的有限的库存(arsenal)。流感病毒的高变异性和新菌株的不断出现(neumann等人,2009,taubenberger等人,2010,parry,2013)、菌株的具体特征(grundmann等人,2006,moran等人,2006,gillet等人,2007,shilo等人,2011)以及流感病毒(hayden等人,1992,bright等人,2006,pinto等人,2006,declercq等人,2007,pinto等人,2007)和细菌(grundmann等人,2006,moran等人,2006,shilo等人,2011)对可用的药物/抗体迅速产生的耐受性是造成治疗选择贫瘠的主要原因。此外，偶发的情况是，迄今为止治疗流感病毒和细菌合并感染不可能使用单一化合物。本发明解决这一问题在于其提出了通过使用单一药物对抗iv和金黄色葡萄球菌合并感染的新的抗感染策略。而且，本发明通过提供以细胞因子而非细菌本身为靶向的药物而解决了细菌迅速产生耐受性的问题。

2、发明概述

3、本发明的技术问题通过在权利要求中所反映的、在说明书中所描述的以及在实施例和附图中所列举的实施方案来解决。

4、如上所述，本发明涉及用在用于预防和/或治疗包含细菌感染和流感病毒感染的合并感染的方法中的mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfκb抑制剂。

5、此外，本发明涉及用在用于预防和/或治疗细菌感染的方法中的mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfκb抑制剂。

6、尽管在上一世纪进行了密集的研究，iv仍然表现出对人类的严重威胁。对老年人和免疫功能低下的个体尤为危险的季节性暴发是由于感染流感a或b病毒。

7、在过去几十年内，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌发病率提高，造成婴幼儿和儿童同时感染iv的问题(iverson等人,2011,thorburn等人,2012)。在细菌合并感染中出现的一个主要问题是可能由加速的细胞因子表达所引起的突然且高度增强的致病性，这导致组织损伤。特别地，在具有表达杀白细胞毒素(pvl)的金黄色葡萄球菌的合并感染中观察到严重的肺上皮细胞破坏，这是由于pvl-介导的中性粒细胞杀死后蛋白酶的失控性释放所致(gillet等人,2007,niemann等人,2012)。细菌合并感染通常发生在感染iv的前六天之内，这甚至会引发更多的爆发性疾病、肺炎以及更高的死亡率(iverson等人,2011,chertow等人,2013)。然而，在某些情况下，当病毒感染似乎已被清除时，细菌合并感染才发生。对于病毒/细菌合并感染的治疗，仅存在有限的可能性。

8、对抗流感的一种有前景的抗病毒策略基于以下事实：作为细胞内病原体的iv高度依赖于细胞信号传导机构(gong等人,2009,ludwig,2009)。iv获得为其自身目的抢夺细胞因子的能力(ludwig等人,2003)。而且，iv能够抑制其宿主的先天性免疫应答。考虑到这些依赖性，细胞病毒支持性功能是新型抗病毒干扰最具前景的候选者(ludwig等人,2003,ludwig,2011,planz,2013)。在过去的几年中，我们和其他人确定了raf/mek/erk促有丝分裂激酶级联(pleschka等人,2001,ludwig等人,2004,olschlager等人,2004,marjuki等人,2006,ludwig,2009,droebner等人,2011)、ikk/nfκb模块(pleschka等人,2001,wurzer等人,2004,marjuki等人,2006,mazur等人,2007,ludwig等人,2008,dudek等人,2010,droebner等人,2011,ehrhardt等人,2013,haasbach等人,2013)、p38-(borgeling等人,2014)以及pi3k-信号(ehrhardt等人,2006,ehrhardt等人,2007a,ehrhardt等人,2007b,ehrhardt等人,2009,eierhoff等人,2010)通路作为抗病毒方法的合适靶点。

9、以细胞而非病毒因子为靶向防止了耐受性问题，这是因为病原体并不能够替代丢失的细胞功能。对于一些细胞因子，化学化合物是有效的，尽管处于早期阶段，这些化学化合物中的一些已经进入临床试验甚至已经获得许可。

10、与iv复制相反，金黄色葡萄球菌门是与宿主细胞相独立的。新型抗菌替代品不以所述病原体产生的必需基因产品为靶点，而是在金黄色葡萄球菌感染期间不通过杀害细菌或增强宿主免疫力而抑制致病因子(park等人,2012)。其他策略防止金黄色葡萄球菌在人类宿主中的移植(park等人,2012)。这些化合物还显示出较低的引发耐受性的可能性。近期，越来越多的证据证明金黄色葡萄球菌在感染期间也会为其自身利益使用细胞信号(oviedo-boyso等人,2011)，但这样的细菌-支持性细胞因子尚未被详细表征为抗菌疗法的靶点。

11、本发明惊奇地观察到，以前示出的具有抗流感活性的对抗细胞内信号因子的药物，诸如nfкb,mek或p38 map激酶也表现出抗金黄色葡萄球菌活性，并且在合并感染情况下同时降低病毒和细菌的效价。因此，这些信号抑制剂是用于治疗单独的iv感染或金黄色葡萄球菌感染的最具前景的候选者，然而，最重要的是，其还对抗伴有细菌合并感染的严重流感。

12、在一个实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染或细菌感染的方法中，其中，所述细菌感染由以下细菌调解：葡萄球菌科、链球菌科、人菌科、假单胞菌科、衣原体科、支原体科、肠杆菌科、假单胞菌目和/或巴斯德氏菌科。

13、在另一个实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染的方法中，其中，所述流感病毒感染由流感a病毒或流感b病毒介导，优选地，所述流感a病毒为h1n1、h2n2、h3n2、h6n1、h7n7、h7n9、h9n2 h10n7、h10n8或h5n1。在一个实施方案中，所述流感a病毒是h1n1。在其他实施方案中，所述流感a病毒为h3n2、h5n1和h7n9。在另外的实施方案中，所述流感a病毒为h3n2、h5n1、h1n1和h7n9。

14、在进一步的实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染或细菌感染的方法中，其中，所述mek抑制剂选自u0126、plx-4032、azd6244、azd8330、as-703026、gsk-1120212、rdea-119、ro-5126766、ro-4987655、ci-1040、pd-0325901、gdc-0973、tak-733、pd98059、arry-438162、pf-3644022和pd184352，优选为azd8330、gsk-1120212、u0126、gdc-0973、ci-1040、pd0325901、arry-438162、pf-3644022和azd6244，最优选为u0126、gdc-0973、ci-1040、azd8330和gsk-1120212。

15、在另一个实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染或细菌感染的方法中，其中，所述p38抑制剂选自sb202190、ly2228820、cay10571、sb 203580、tie2激酶抑制剂、2-(4-氯苯基)-4-(氟苯基)-5-吡啶-4-基-1,2-二氢吡唑基-3-酮、cgh2466、sb220025、抗生素ll z1640-2、tak 715、sb202190盐酸盐、skf86002、amg548、cmpd-1、eo 1428、jx 401、ml 3403、rwj 67657、sb202190、sb203580、sb 203580盐酸盐、sb 239063、scio 469、sx 011、tak 715、pamapimod、losmapimod(gw856553)、dilmapimod(sb681323)、vx 702、vx 745、doramapimod(birb 796)、bms-582949、arry-797、ph797804，优选为vx-702、sb202190、pamapimod、losmapimod(gw856553)、dilmapimod(sb681323)、doramapimod(birb 796)、bms-582949、arry-797、ph797804和scio-469。

16、在另一个实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染或细菌感染的方法中，其中，所述nfкb抑制剂选自lasag(也叫lg-asa)、sc75741、mg 132、tpca-1、pctc、imd 0354、木犀草素、咖啡酸苯乙酯、豆蔻明、pf184、ikk 16、sc 514、醉茄素a、牛蒡甙元、bay 11-7085、psi、pr 39、ro 106-9920、bay 11-7821、ml-130、南蛇藤醇、丹参酮iia、hu 211、胶霉毒素、cid2858522、和厚朴酚、穿心莲内酯、10z-hymenialdisine、achp、扁塑藤素、柳氮磺胺吡啶、ml 120b二盐酸盐、氨来占诺、9-甲基链霉戊二酰亚胺、n-硬脂酰基植物鞘氨醇、2-(1,8-二氮杂萘-2-基)-苯酚、5-氨基水杨酸、bay11-7085、3,4-二羟基肉桂酸乙酯、helanalin、nf-κb活化抑制剂ii、jsh-23、糖皮质激素受体调节器、cpda、ppm-18、阿司匹林(asa)、吡咯烷二硫代羧酸铵盐、(r)-mg132、sc75741楝酰胺、水杨酸钠、qnz、ps-1145、cay10512、硼替佐米、双水杨酯、白藜芦醇、脱氧精胍菌素、苏灵大、萨力多胺、agro-100、chs 828和/或姜黄素，优选为硼替佐米、姜黄素、阿司匹林(asa)、双水杨酯、白藜芦醇、水杨酸钠、lasag(也叫lg-asa)、脱氧精胍菌素、苏灵大、萨力多胺、agro-100、chs 828，更优选为sc75741、asa和lasag(也叫lg-asa)，最优选为lasag(也叫lg-asa)。

17、在另外的实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染或细菌感染的方法中，其中，所述mek抑制剂与另外一种mek抑制剂、所述p38抑制剂和/或所述nfкb抑制剂联合；所述p38抑制剂与另外一种p38抑制剂、所述mek抑制剂和/或所述nfкb抑制剂联合；或者所述nfкb抑制剂与另外一种nfкb抑制剂、所述p38抑制剂和/或所述mek抑制剂联合。

18、在进一步的实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染的方法中，其中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂与针对所述流感病毒和/或所述细菌的一种或多种抑制剂联合。在一个实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂与针对所述流感病毒和/或所述细菌的一种或多种抑制剂同时施用、在针对所述流感病毒和/或所述细菌的一种或多种抑制剂之前或之后施用。这样，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂可以与1、2、3、4、5、6、7或8种针对流感病毒的抑制剂联合。类似地，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂可以与1、2、3、4、5、6、7或8种针对细菌的抑制剂联合。

19、在一个实施方案中，所述针对所述流感病毒的一种或多种抑制剂为神经氨酸苷酶抑制剂，优选为奥司他韦磷酸盐、扎那米韦、奥司他韦或帕拉米韦。

20、在另一个实施方案中，所述针对所述流感病毒的一种或多种抑制剂为针对离子通道蛋白(m2)的化合物，优选为金刚烷胺和/或金刚烷乙胺。

21、在进一步的实施方案中，所述针对所述流感病毒的一种或多种抑制剂为经由使用病毒聚合酶复合体成分、pb1、pb2、pa或np，优选为np阻断剂nucleozin或聚合酶抑制剂t-705干预聚合酶或核酸内切酶活性的化合物。

22、在进一步的实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的细菌感染的方法中，其中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂与针对所述细菌的一种或多种抑制剂联合。

23、在另一个实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染或细菌感染的方法中，其中，所述针对所述细菌的一种或多种抑制剂为抗生素，优选为庆大霉素、利福平、溶葡萄球菌酶(lysosthaphin)、红霉素、左氧氟沙星、替考拉宁、盘尼西林和苯甲异恶唑青霉素。

24、在另外的实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染或细菌感染的方法中，其用于患者，优选用于脊椎动物。

25、本发明还提供一种组合物，包含用在用于预防和/或治疗包含细菌感染和流感病毒感染的合并感染的方法中的mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂。优选地，所述组合物进一步包含载体。

26、本发明还涉及一种组合物，包含用在用于预防和/或治疗细菌感染的方法中的mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂。优选地，所述组合物进一步包含载体。

27、本发明还提供一种组合物，包含用在用于预防和/或治疗包含细菌感染和流感病毒感染的合并感染的方法中的mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂以及针对所述流感病毒和/或所述细菌的一种或多种抑制剂。优选地，所述组合物进一步包含载体。

28、本发明还涉及一种组合物，包含用在用于预防和/或治疗细菌感染的方法中的mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂以及针对所述细菌的一种或多种抑制剂的组合物。优选地，所述组合物进一步包含载体。

29、在进一步的实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的合并感染的方法中，其中，与接触前的体外测试系统相比，与体外测试系统相接触时，所述mek抑制剂，所述p38抑制剂和/或所述nfкb抑制剂同时降低了病毒和细菌感染，其中，所述测试系统包含感染

30、a)流感病毒，和

31、b)细菌的培养细胞。

32、在一个实施方案中，所述病毒感染的降低是指血小板形成单位(pfu)/ml的降低，所述细菌感染的降低是指菌落形成单位(cfu)/ml的降低。

33、在另一个实施方案中，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfкb抑制剂用在用于预防和/或治疗本发明的细菌感染的方法中，其中，与接触前的体外测试系统相比，与体外测试系统相接触时，所述mek抑制剂，p38抑制剂和/或nfκb抑制剂会降低细菌感染，其中所述测试系统包括感染细菌的培养细胞。

34、本发明还涉及一种体外测试系统，其中所述测试系统包含感染

35、a)流感病毒，和

36、b)细菌的培养细胞。

37、本发明还提供本发明的所述体外测试系统用于确定抑制剂有效降低包含细菌感染和流感病毒感染的合并感染的用途。在一个实施方案中，所述病毒感染的降低是指血小板形成单位(pfu)/ml的降低，所述细菌感染的降低是指菌落形成单位(cfu)/ml的降低。

38、此外，本发明涉及一种检测有效预防和/或治疗包含细菌感染和流感病毒感染的合并感染的分子的方法，包括将感兴趣的化合物与本发明的体外测试系统接触，其中，与接触前的体外测试系统相比，所述感兴趣的化合物会同时降低病毒和细菌感染。

39、本发明还提供一种体外测试系统，其中所述体外测试系统包含感染细菌的培养细胞。

40、此外，本发明涉及本发明的体外测试系统用于确定有效降低细菌感染的抑制剂的用途。

41、此外，本发明涉及本发明的体外测试系统用于检查先天宿主细胞反应的用途，所述检查先天宿主细胞反应任选地包括检查信号传导水平、产生的细胞因子和趋化因子表达、细胞凋亡和坏死的诱导和/或调解健康和疾病的氧化还原止血作用。

42、本发明还提供一种检测有效预防和/或治疗细菌感染的分子的方法，包括将感兴趣的化合物与本发明的体外测试系统接触，其中，与接触前的体外测试系统相比，所述感兴趣的化合物会降低细菌感染。

43、此外，本发明涉及感染流感病毒和细菌的培养细胞。

44、本发明还提供感染细菌的培养细胞。

技术实现思路