一种易吸收牛羊皮胶原蛋白肽制备工艺及应用的制作方法

本发明属于胶原蛋白肽制备，具体是指一种易吸收牛羊皮胶原蛋白肽制备工艺及应用。

背景技术：

1、由于近年频发的环境问题以及全球人口的不断增长，可持续发展目标逐渐步入大众视野，将废弃材料再次利用不仅可以最大程度的减少浪费，还能够生产出具有高附加值的产品，如畜牧业的加工会产生牛羊皮，富含胶原蛋白肽，具有优异的生物相容性和低免疫原性，在生物医学方面具备应用的可能性。

2、专利cn107961189a公开了一种祛痘美白凝胶，该发明中以芹菜提取液、柠檬提取液、乳香提取液、丹参提取液、猕猴桃提取液和樱桃提取液为主要原料，能够抑菌消炎，调控油脂分泌，达到快速治疗痤疮、消除痘印的效果，缺点是祛痘印见效慢，效果不理想；专利cn102580166公开了一种医用仿生透明薄膜植入材料及其制备方法和应用，该材料是通过静电纺丝和交联得到的透明多孔薄膜，含有胶原、多糖以及治疗性物质，所载治疗性物质随着薄膜降解而缓释，但制备该材料采用的静电纺丝方法成本较高且对环境湿度、温度等要求较苛刻，同时胶原蛋白在酶解过程中容易产生腥臭味物质，稳定性差，因而其使用受到限制，因此开发新型修复凝胶有着重要的意义。

技术实现思路

1、针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种易吸收牛羊皮胶原蛋白肽制备工艺及应用，为了去除胶原蛋白在酶解过程中产生的挥发性腥臭味物质，本发明提出通过加入小檗碱，催化腥臭物质与乙醇发生酯化反应，生成易挥发的酯类物质，从而达到去除肽粉腥臭味并消炎抗菌的目的；此外，为了解决胶原蛋白肽在单独使用时存在的降解速率过快、极易受到细菌污染的问题，本发明将胶原蛋白肽接枝到改性盐角草多糖分子上，形成稳定的盐角草多糖胶原蛋白肽支架，并将其应用于凝胶的制备，使凝胶结构更加蓬松，增大了凝胶与皮肤的接触面积，显著提升了凝胶的抗菌能力和机械强度。

2、为了实现上述目的，本发明提出的技术方案如下，本发明提供了一种易吸收牛羊皮胶原蛋白肽制备工艺，具体包括如下步骤：

3、（1）原料加入10倍体积的5%的nac1溶液浸泡搅拌2h，清水漂洗2-3次，得到去除盐溶性非胶原成分；

4、（2）将所述去除盐溶性非胶原成分加入蒸馏水，放入组织捣碎机，捣碎后离心去除多余水分，加入10倍体积的2%（v/v）的乙酸溶液，再次使用组织捣碎机至混匀搅碎，得到匀浆液；

5、（3）所述匀浆液中加入匀浆液重量的0.1%的木瓜蛋白酶，超声处理后以4000r/min离心20min，分离上清液和沉淀，保留上清液；

6、（4）用截留分子量为1500da的超滤膜，在进水压力0.1mpa下，对上清液进行超滤，得到滤液；

7、（5）将滤液在55°c、真空度为0.1mpa条件下减压浓缩，再真空冷冻干燥，得到牛羊皮胶原蛋白肽粉末；

8、（6）牛羊皮胶原蛋白肽粉末中加入100ml去离子水，水浴加热至80℃，用催化剂调节ph值至10，加入2%（v/v）乙醇反应30min，真空冷冻干燥，得到脱臭后的牛羊皮胶原蛋白肽粉末；

9、（7）称取10g盐角草多糖，加入1ml乙酸溶液，加入2g抗坏血酸和0.8gγ-谷维素，搅拌至充分溶解，加入60mlh2o2，搅拌混匀，24h后进行冷冻干燥，得到改性盐角草多糖粉末；

10、（8）取1gγ-谷维素盐角草多糖粉末，加入50ml无菌水，搅拌至溶解，得到改性盐角草多糖溶液；

11、（9）称取30g脱臭后的牛羊皮胶原蛋白肽粉末，加入到所述改性盐角草多糖溶液中，搅拌至混匀，加入转谷氨酰胺酶，5h后水浴加热至90℃，15min后冷却至室温，过滤，得到盐角草多糖胶原蛋白肽支架。

12、优选地，步骤（3）中，所述超声处理的条件为超声功率为390w，频率为20khz，时间为30min。

13、优选地，步骤（6）中，所述催化剂为小檗碱。

14、优选地，步骤（7）中，所述乙酸溶液的浓度为2%（v/v）。

15、优选地，步骤（9）中，所述转谷氨酰胺酶的质量为4g。

16、此外，本发明还提供了一种易吸收牛羊皮胶原蛋白肽制备工艺制备的盐角草多糖胶原蛋白肽支架的应用，所述应用为制备胶原蛋白肽修复凝胶，所述胶原蛋白肽修复凝胶包括如下重量份的组分：卡波姆80-100份、盐角草多糖胶原蛋白肽支架10-20份、山茶籽油5-20份、冬凌草甲素1-10份、牛蒡子提取物1-15份、茶多酚1-10份、单硬脂酸甘油酯1-10份、透明质酸5-15份、促渗剂1-10份、ph调节剂5-18份。

17、优选地，所述胶原蛋白肽修复凝胶包括如下重量份的组分：卡波姆86-97份、盐角草多糖胶原蛋白肽支架13-20份、山茶籽油6-15份、冬凌草甲素2-8份、牛蒡子提取物1-10份、茶多酚1-9份、单硬脂酸甘油酯3-8份、透明质酸5-12份、促渗剂1-7份、ph调节剂5-15份。

18、所述胶原蛋白肽修复凝胶的制备方法具体包括如下步骤：

19、（1）将卡波姆加入无菌水中，60℃水浴加热5h，冷却至室温，搅拌均匀，得到卡波姆凝胶；

20、（2）将盐角草多糖胶原蛋白肽支架、山茶籽油、冬凌草甲素、牛蒡子提取物、茶多酚加入500ml无菌水中，搅拌30min，得到修复溶液；

21、（3）将所述修复溶液加入步骤（1）得到的卡波姆凝胶中，加入单硬脂酸甘油酯、透明质酸、促渗剂、加入ph调节剂，调节ph为6.7，置于捏合机中，于36℃下捏合5h，得到胶原蛋白肽修复凝胶。

22、优选地，所述ph调节剂包括三乙醇胺、柠檬酸、酒石酸中的一种或多种。

23、进一步地，所述ph调节剂为酒石酸。

24、优选地，所述促渗剂包括噻酮、聚乙二醇、聚丙二醇、聚甘油、莪术二醇中的一种或多种。

25、进一步地，所述促渗剂为莪术二醇。

26、优选地，步骤（2）中所述牛蒡子提取物的制备方法具体包括如下步骤：

27、（1）将牛蒡子粉碎，过100目筛，得到牛蒡子粉末；

28、（2）牛蒡子粉末中加入70%（v/v）的乙醇溶液，超声提取50min，采用布氏漏斗过滤三次，得到牛蒡子乙醇提取物；

29、（3）将牛蒡子乙醇提取物进行减压浓缩，所述减压浓缩的条件为：真空度为0.1mpa，浓缩温度为50℃，得到牛蒡子提取物。

30、本发明取得的有益效果如下：

31、（1）小檗碱催化腥臭味物质与乙醇发生酯化反应，使其生成易挥发的酯类物质，小檗碱既可做为酯化反应的催化剂，也可抑制大肠杆菌、丙酸杆菌的繁殖，改善痤疮炎症，从而达到除去肽粉腥臭味物质并消炎抗菌的目的；

32、（2）本发明通过h2o2/抗坏血酸氧化还原形成酯键，将γ-谷维素接枝至盐角草多糖分子上，得到了改性盐角草多糖，接着在转谷氨酰胺酶的催化下形成酰胺键，将胶原蛋白肽接枝到改性盐角草多糖分子上，得到了稳定的盐角草多糖胶原蛋白肽支架；

33、（3）盐角草多糖胶原蛋白肽支架的加入显著提升了凝胶的抗菌能力和机械强度，增大了凝胶与皮肤的接触面积，使得抗菌效果能够更好地发挥；且加入盐角草多糖胶原蛋白肽支架能够使凝胶结构更加蓬松，防止凝胶在后续冷冻储存中产生较大的冰晶而被冻裂；

34、（4）目前，透皮治疗系统的研制中使用较多的促渗剂都是化学合成的促渗剂，主要是烃、酮、亚砜等有机化合物，对皮肤有一定的刺激性和副作用，而我国中药的历史悠久，本发明从中药中挖掘出具有潜力的、安全、高效、天然的促渗成分莪术二醇，增加脂质双层的流动性，改变角质层类脂膜紧密结构，使皮肤出现大量腔隙，从而起到促渗作用，提高了创面的愈合时间；而透明质酸能促进皮肤对生长因子的吸收，加快修复创面损伤；各组分相互协同增效，形成具有优异的修复创面能力、抗菌能力，良好的吸湿性能的修复凝胶；同时避免了使用抗生素引发的耐药性、二重感染、过敏反应等弊端；

35、（5）牛羊皮中可以提取胶原蛋白肽，具有优异的生物相容性和低免疫原性，但胶原蛋白肽在单独使用时存在的降解速率过快、极易受到细菌污染等问题，因此，本研究通过绿色方法对盐角草多糖进行改性，接枝胶原蛋白肽，并将其应用至修复凝胶领域，对副产物进行了有效的二次利用，减少浪费，符合可持续发展观念。