一种野马追乙醇提取物及其黄酮部位在制备预防或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用

本发明涉及生物医药，具体涉及一种野马追乙醇提取物及其黄酮部位在制备预防或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。

背景技术：

1、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，uc)是一种原因不明的非特异性炎症，病变位于大肠，呈连续性弥漫性分布，多累及直肠和乙状结肠。其典型的临床过程包括黏液脓血便和腹痛、腹泻，病程较长，易反复发作，甚至癌变，严重影响患者的生存质量；目前uc真正病因尚不清楚，免疫调节功能障碍，遗传因素，吸烟，饮食，生活环境，感染，精神心理等多种因素可能促进这种疾病的发生和发展。临床上，uc的治疗，以药物为主，①氨基水杨酸制剂，如柳氮磺胺吡啶，服药周期较长，易产生与剂量相关的不良反应，如胃肠道症状、荨麻疹、呼困难、关节痛、肝毒性等；②糖皮质激素及免疫抑制剂不良反应较多，不能控制uc复发；③抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体，病情易反复，不良反应多应用；④益生菌疗法，改善uc症状的效果一般，临床常与其他类药合用；⑤锡类散、庆大霉素、2％普鲁卡因以及地塞米松等灌肠治疗，患者依从性差(李楠,溃疡性结肠炎研究进展,吉林医学,2014,35(7):1486-1487.；马清林，杜丽东，臧凯宏，孙敏，曹如冰，任远,溃疡性结肠炎研究进展概述,医药论坛杂志,2020,41(1):175-177.taku kobayashi,britta siegmund,catherine le berre,shu chen wei,marc ferrante,bo shen,charles n.bernstein,silvio danese,laurent peyrin-biroulet&toshifumi hibi.ulcerative colitis.nature reviews diseaseprimers.2020,6:74.)。

2、野马追黄酮部位是指含有棕矢车菊素和泽兰叶黄素的野马追黄酮部位，具有抗急性肺损伤作用以及抗乙肝病毒的活性(chunjun chu,shiyao,jinglei chen,xiaochenwei,long xia,daofeng chen,jian zhang.eupatorium lindleyanum dc.flavonoidsfraction attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury inmice.international immunopharmacology.2016,39:23-33.；张健，陈道峰，任慧玲，褚纯隽，李显伦，严彪，吴双庆，野马追黄酮部位在制备抗乙肝病毒药物中的应用，zl201810046069.6)。

3、目前关于野马追黄酮部位是否具有抗溃疡性结肠炎作用，未见报道。本发明发现野马追黄酮部位具有抗溃疡性结肠炎的作用，因此，可将野马追黄酮部位用于制备防治溃疡性结肠炎相关药物中。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是提供一种野马追乙醇提取物及其黄酮部位在制备预防或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案：

3、本发明第一方面提供了野马追黄酮部位在制备预防或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。

4、进一步地，所述野马追黄酮部位优选包含棕矢车菊素和泽兰叶黄素的野马追黄酮部位。

5、进一步地，所述野马追黄酮部位的制备包括以下步骤：

6、(1)取野马追干燥全草，切段2-3cm，加8-15倍体积的体积分数为60％～95％乙醇水溶液，回流提取1-3小时，40-60℃减压回收溶剂，得到野马追乙醇提取物；

7、(2)将步骤(1)制备的野马追乙醇提取物溶于水中，制备得到0.1-0.2g/ml的溶液，经弱极性大孔吸附树脂吸附，先以水洗脱除去大分子化合物，后用体积分数为90％-95％乙醇水溶液洗脱，40-60℃减压回收溶剂，得大孔树脂部位；

8、(3)将步骤(2)制备的大孔树脂部位经ods反相硅胶色谱柱吸附，以体积分数为50％甲醇水溶液洗脱，然后70％-75％甲醇水溶液洗脱，40-60℃减压回收溶剂，得到提取物，该提取物再经30-60目聚酰胺色谱柱吸附，先以体积分数为70％乙醇水溶液洗脱，后用体积分数为95％乙醇水溶液洗脱，40-60℃减压回收溶剂，得到所述野马追黄酮部位。

9、进一步地，步骤(2)中，所述弱极性大孔吸附树脂优选为ab-8、d101、hpd-100、hpd-200a、hpd-200b、hpd-300、hpd-700或hpd-722大孔吸附树脂。

10、进一步地，步骤(2)中，以水洗脱除去大分子化合物的步骤中，所述水与弱极性大孔吸附树脂的体积比为8-15:1，例如8:1、9:1、10:1、12:1、13:1、14:1、15:1等，包括但不限于上述列举的体积比。

11、进一步地，步骤(2)中，用体积分数为90％-95％乙醇水溶液洗脱的步骤中，所述90％-95％乙醇水溶液与弱极性大孔吸附树脂的体积比为8-15:1，例如8:1、9:1、10:1、12:1、13:1、14:1、15:1等，包括但不限于上述列举的体积比。

12、进一步地，步骤(3)中，所述ods反相硅胶色谱柱为daisogel ods反相硅胶色谱柱、cosmsil ods反相硅胶色谱柱或ymcods-a反相硅胶色谱柱；所述ods反相硅胶色谱柱的填料粒径50-70μm，例如50μm、55μm、60μm、65μm、70μm等，包括不不限于上述所列举的粒径大小。

13、进一步地，步骤(3)中，以体积分数为50％甲醇水溶液洗脱的步骤中，所述50％甲醇水溶液与ods反相硅胶色谱柱的体积比优选为4-6:1。

14、进一步地，步骤(3)中，70％-75％甲醇水溶液洗脱的步骤中，所述70％-75％甲醇水溶液与ods反相硅胶色谱柱的体积比优选为4-6:1。

15、进一步地，步骤(3)中，所述提取物与聚酰胺色谱柱的质量体积比为1mg:20-30ml，例如1:25mg/ml。

16、进一步地，步骤(3)中，以体积分数为70％乙醇水溶液洗脱的步骤中，所述70％乙醇水溶液与聚酰胺色谱柱的体积比为3-5:1，例如4:1。

17、进一步地，步骤(3)中，用体积分数为95％乙醇水溶液洗脱的步骤中，所述95％乙醇水溶液与聚酰胺色谱柱的体积比为3-5:1，例如4:1。

18、进一步地，步骤(3)中，所述野马追黄酮部位含有63％-68％的棕矢车菊素和24％-29％的泽兰叶黄素。

19、本发明第二方面提供了一种野马追乙醇提取物在制备预防或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用，所述野马追乙醇提取物为采用60％-95％的乙醇水溶液处理野马追得到的提取物。

20、进一步地，所述野马追乙醇提取物的制备为：取野马追干燥全草，切段2-3cm，加8-15倍体积的体积分数为60％-95％乙醇水溶液，回流提取1-3小时，40-60℃减压回收溶剂，得到野马追乙醇提取物。

21、进一步地，在上述应用中，所述预防或治疗溃疡性结肠炎药物还包含药学上可接受的载体和/或辅料。

22、进一步地，在上述应用中，所述辅料为抗氧化剂、防腐剂、增溶剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、分散剂、表面活性剂中的一种或多种。

23、进一步地，在上述应用中，所述预防或治疗溃疡性结肠炎药物的给药方式优选为胃肠道给药。

24、进一步地，在治疗溃疡性结肠炎中，所述药物用于降低血清中c3c、tnf-α、il-6水平。

25、进一步地，在治疗溃疡性结肠炎中，所述药物用于提高il-10水平。

26、进一步地，在治疗溃疡性结肠炎中，所述药物用于改善结肠组织损伤。

27、进一步地，在治疗溃疡性结肠炎中，所述药物用于降低结肠缩短程度以及脾指数。

28、与现有技术相比，本发明的有益效果：

29、本发明首次将野马追的乙醇提取物、野马追黄酮部位应用于防治溃疡性结肠炎相关药物中，并通过构建小鼠溃疡性结肠炎模型进行验证。结果表明野马追黄酮部位以及野马追的乙醇提取物能改善溃疡性结肠炎小鼠体内炎症水平，抑制补体水平；且可改善结肠组织损伤，明显降低dai评分，减小结肠缩短程度，减轻结肠充血红肿的症状；此外，还可缓解脾脏肿大，降低脾脏指数。本发明通过动物实验不仅验证了野马追黄酮部位以及野马追的乙醇提取物具有抗溃疡性结肠炎的作用，且研究了野马追黄酮部位以及野马追的乙醇提取物对溃疡性结肠炎的作用机制，为野马追黄酮部位以及野马追的乙醇提取物用于防治溃疡性结肠炎提供了科学依据。