低共熔溶剂协同超声波提取石上柏总双黄酮的方法

本发明涉及一种低共熔溶剂协同超声波提取石上柏总双黄酮的方法。

背景技术：

1、石上柏（ selaginella doederleiniihieron .）属于蕨类卷柏科卷柏属植物，多年生草本植物，也叫深绿卷柏，多分布在我国贵州、四川、重庆、广西等地。本药材甘、涩，性温平，传统中医理论认为其可治疗咽喉肿痛、肺热咳嗽[1]，具有清热解毒、活血化瘀、祛风除湿等功效[2]。临床上主要用于治疗鼻咽癌、绒毛膜上皮癌、消化道癌、宫颈癌、肺癌、肝癌[3]等肿瘤病。

2、现代化学成分研究表明，石上柏主要含双黄酮类、生物碱类、甾醇、皂苷、氨基酸等成分[4]。主要有效成分为双黄酮类化合物，主要包括穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、银杏双黄酮等[5]。双黄酮类化合物具有多种的生物活性，包括抗肿瘤、抗免疫、抗菌和抗氧化等活性[6-8]。

3、低共熔溶剂通常是指由一定化学计量比的氢键受体（hydrogen bondingacceptor, hba）如季铵盐和氢键供体（hydrogen bondingdonor, hbd），如羧酸和多元醇等化合物组合而成的两组分或三组分低共熔液体，其熔点显著低于任何单一组分的熔点[9]。与传统有机溶剂相比，dess具有较大的优点，包括原料价格低廉、可设计制备、过程操作简单、不易挥发、方便贮存、无副产物产生、实现了完全的原子利用率等，符合绿色化学的发展趋势，具有良好的物理化学性质、绿色特性和优异的萃取性能[10-12]，是一种理想的萃取溶剂。近年来，已有较多低共熔溶剂用于天然产物提取分离领域的报道。

技术实现思路

1、本发明所要解决的是制备多种类型低共熔溶剂替代传统有机溶剂，并协同超声波辅助萃取优化石上柏药材中总双黄酮的提取工艺[13-15]，从而满足绿色化学发展内涵的石上柏中总双黄酮高效制备，以及促进石上柏药材绿色利用的技术问题。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、低共熔溶剂协同超声波提取石上柏总双黄酮的方法，包括如下步骤：

4、步骤一：选取干燥好的石上柏全草，粉碎，精密称量8.0 g；

5、步骤二：采用配制好的低共熔溶剂80 ml，在 50 ℃下，超声 30 min，过滤、浓缩，提取液转移到 50 ml 容量瓶；

6、步骤三：再用甲醇定容至刻度，然后用 0.45 μm 微孔滤膜过滤。

7、所述低共熔溶剂包括9种溶剂，按摩尔数配比如下：

8、溶剂1名称为氯化胆碱-甘油：氯化胆碱和甘油的摩尔比为1:2；

9、溶剂2名称为氯化胆碱-柠檬酸：氯化胆碱和柠檬酸的摩尔比为1:2；

10、溶剂3名称为氯化胆碱-l-脯氨酸：氯化胆碱和l-脯氨酸的摩尔比为1:2；

11、溶剂4名称为氯化胆碱-1,2,4-丁三醇：氯化胆碱和1,2,4-丁三醇的摩尔比为1:2；

12、溶剂5名称为甜菜碱-苹果酸：甜菜碱和苹果酸的摩尔比为1:2；

13、溶剂6名称为甜菜碱-尿素：甜菜碱和尿素的摩尔比为1:2；

14、溶剂7名称为甜菜碱-香叶醇：甜菜碱和香叶醇的摩尔比为1:2；

15、溶剂8名称为甜菜碱-山梨醇：甜菜碱和山梨醇的摩尔比为1:2；

16、溶剂9名称为四丙基溴化铵-1,4-丁二醇：四丙基溴化铵和1,4-丁二醇的摩尔比为1:2。

17、采用上述技术方案的有益效果是：

18、本发明采用低共熔溶剂协同超声波提取石上柏总双黄酮，通过单因素试验考察对总双黄酮得率的影响并确定box-benhnken试验因素及水平。通过 box-benhnken 响应面设计进一步优化超声辅助提取最优条件为：提取温度48℃，超声功率370w，超声时间35min。

19、近年来，des 作为新型的绿色溶剂，在中药材萃取分离、催化反应及纳米材料等众多领域被广泛应用。经单因素试验筛选，再采用 box-benhnken响应面法优化 des 协同超声波提取石上柏总双黄酮的工艺条件，通过验证试验进一步说明该工艺稳定、可行，其总双黄酮得率高于传统的溶剂提取法，本研究可为其他植物黄酮类成分的提取研究提供参考。

技术特征：

1.低共熔溶剂协同超声波提取石上柏总双黄酮的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述低共熔溶剂协同超声波提取石上柏总双黄酮的方法，其特征在于：所述低共熔溶剂包括9种溶剂，按摩尔数配比如下：

技术总结
低共熔溶剂协同超声波提取石上柏总双黄酮的方法，包括如下步骤：选取干燥好的石上柏全草，粉碎，精密称量8.0 g；采用配制好的低共熔溶剂80 mL，在50℃下，超声30 min，过滤、浓缩，提取液转移到50 mL容量瓶；再用甲醇定容至刻度，然后用0.45μm微孔滤膜过滤。本发明通过单因素试验考察提取效果最好的DES的提取温度、超声功率和提取时间对石上柏总双黄酮得率的影响，并以石上柏总双黄酮得率(%)为指标，进一步采用响应面法优化DES协同超声辅助提取工艺条件，最佳工艺条件为：提取温度48℃，超声功率370W，超声时间35min。总双黄酮的平均得率为0.772%；DES协同超声波提取石上柏总双黄酮工艺具有稳定、可行、绿色环保的特点，可用于石上柏总双黄酮的提取。

技术研发人员：王刚,孙成新,蒋永梅,张欣,谯磊,任梦蝶
受保护的技术使用者：遵义医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14