一种用于毛发再生的生物制剂及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物医药，涉及一种用于毛发再生的生物制剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、富含血小板的血浆，在本领域通常亦可称为富血小板血浆(platelet richplasma，prp)，其是通过离心人或动物自身的全血而得到的含高体积分数血小板的血浆。自从上世纪80年代david r.knighton等人发现血小板细胞能促进血管增生、胶原合成后，人们便致力于将富血小板血浆(prp)应用于临床，渴望解决修复能力低下的器官组织的损伤修复问题。但由于当时prp制备困难，限制了其在临床上的推广。

2、外泌体最早在1987年由johnstone等人在研究网织红细胞向红细胞的成熟过程中发现。他们注意到，这些囊泡(后来命名：外泌体)来源于所培养的单层细胞，并保留了转铁蛋白受体和许多膜相关蛋白。起初，人们认为外泌体只是一种“细胞垃圾”，是细胞为了去除不必要的蛋白质和其他分子而释放出来的。不过，到了上世纪90年代中期，科学家们认识到了外泌体的免疫功能。进一步研究表明，外泌体作为一种细胞间通讯方式，在正常生理过程中，以及重要的生物学过程，例如哺乳、炎症、细胞增殖、免疫反应和神经功能等，有着非常重要的角色。

3、外泌体是一种纳米级具有膜结构的囊泡样小体，可以来源于多种不同的细胞，包括肥大细胞、树突状细胞、b淋巴细胞、神经元、脂肪细胞、内皮细胞和上皮细胞等等。特别地，医学界已经证明，肿瘤细胞会比正常细胞产生和分泌更多数量的外泌体。外泌体已经在大部分的体液中被发现，不管是处于健康状态或者患病状态，包括血液、羊水、尿液、恶性腹水、脑脊液、乳汁、唾液、淋巴和胆汁等。

4、血液中的prp作为一种血液制品，免疫排斥反应小，产量大。prp中含高浓度的血小板，血小板激活后多种生长因子被释放出来，这些生长因子能够促进细胞增殖、迁移及毛细血管的生成；被广泛用于组织再生、创面修复、功能重建等各个领域。prp不仅具有促进血管再生及细胞增殖的作用，还具有抗菌作用——主要是针对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌。一般而言，富白细胞的prp(l-prp)具有抗菌作用，prp中的白细胞聚集于炎症部位，可能对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌、新型隐球菌产生一定的抑制作用，并且白细胞在促进炎症、增强免疫及细胞信号转导中具有积极作用，尤其是在感染风险大的手术中，prp中的白细胞可能发挥重要的抗菌作用。

5、目前外泌体和血小板同时应用于毛发再生中并没有进行研究。而如何获得含有高浓度外泌体的生物制品，同时提供一种含高浓度外泌体prp的制备方法，是我们要解决的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于毛发再生的生物制剂及其制备方法和应用。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种用于毛发再生的生物制剂，所述用于毛发再生的生物制剂的活性组分包括外泌体和血小板。

4、本发明所述用于毛发再生的生物制剂在毛发再生方面具有良好的效果，且外泌体和血小板在上述效果上具有一定的协同效果。

5、优选地，所述用于毛发再生的生物制剂的活性组分中外泌体和血小板的比例为(20-30):(1-1.2)。

6、其中(20-30)中的具体点值均可选择20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30等，(1-1.2)中的具体点值均可选择1、1.05、1.1、1.15、1.2等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

7、当外泌体和血小板以上述特定比例添加时，在毛发再生方面的效果最佳。

8、优选地，所述外泌体包括间充质干细胞来源外泌体和/或血浆来源外泌体。

9、优选地，所述血小板包括外周血来源血小板。

10、第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的用于毛发再生的生物制剂的制备方法，所述制备方法包括：

11、(1)将细胞培养上清进行预处理，得到含外泌体上清液；将血液离心，得到血小板；

12、(2)将血小板与含外泌体上清液混合，离心，得到富含外泌体的血小板；

13、或者，将含外泌体上清液离心后，与血小板混合，得到富含外泌体的血小板；

14、(3)将步骤(2)所得富含外泌体的血小板用血浆重悬，即得。

15、优选地，步骤(1)所述预处理包括将细胞培养上清在4-6℃条件下200-400g离心8-12min，1500-2500g离心18-22min，弃沉淀，9500-10500g离心25-35min，弃沉淀。

16、温度可以选择4℃、5℃、6℃等，200-400g离心8-12min中，离心力可以选择200g、250g、300g、350g、400g等，离心时间可以选择8min、9min、10min、11min、12min等；1500-2500g离心18-22min中，离心力可以选择1500g、1800g、2000g、2200g、2500g等，离心时间可以选择18min、19min、20min、21min、22min等；9500-10500g离心25-35min中，离心力可以选择9500g、9800g、10000g、10200g、10500g等，离心时间可以选择25min、26min、27min、28min、29min、30min、31min、32min、33min、34min、35min等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

17、优选地，步骤(2)所述血液离心具体包括将血液在1500-2500rpm条件下离心4-6min后，取上清在3000-3500rpm条件下离心18-22min。

18、在1500-2500rpm条件下离心4-6min中，离心转速可以选择1500rpm、1800rpm、2000rpm、2200rpm、2500rpm等，离心时间可以选择4min、5min、6min等，在3000-3500rpm条件下离心18-22min中，离心转速可以选择3000rpm、3100rpm、3200rpm、3300rpm、3400rpm、3500rpm等，离心时间可以选择18min、19min、20min、21min、22min等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

19、优选地，步骤(2)所述血小板与含外泌体上清液的体积比为(1-1.2):(2-2.5)。

20、其中(1-1.2)中的具体点值均可选择1、1.05、1.1、1.15、1.2等，(2-2.5)中具体点值均可选择2、2.05、2.1、2.15、2.2、2.25、2.3、2.35、2.4、2.45、2.5等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

21、优选地，步骤(2)所述离心的离心力为100000-120000g，时间为30-60min。

22、所述离心力可以选择100000g、101000g、102000g、103000g、104000g、105000g、106000g、107000g、108000g、109000g、110000g、111000g、112000g、113000g、114000g、115000g、116000g、117000g、118000g、119000g、120000g等，时间可以选择30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min等，上述数值范围内其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

23、第三方面，本发明提供一种根据第一方面所述的用于毛发再生的生物制剂在制备毛发再生产品中的应用。

24、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

25、本发明所述用于毛发再生的生物制剂在毛发再生方面具有良好的效果，且外泌体和血小板在上述效果上具有一定的协同效果。