一种含有唾液酸脂质衍生物的脂质纳米颗粒及其应用的制作方法

本发明涉及医药，尤其涉及一种含有唾液酸脂质衍生物的脂质纳米颗粒及其应用。

背景技术：

1、基因治疗(gene therapy)是指将外源正常基因导入机体细胞，纠正或补偿缺陷和异常基因引起的疾病，以达到治疗目的。随着分子生物学的发展，基因疗法逐渐成为治疗恶性肿瘤、遗传性疾病以及心血管疾病的新希望。基因治疗可对目的细胞和目的基因进行更具针对性的治疗，其长期疗效更为显著。现有的基因疗法可分为dna疗法、rna疗法以及crispr/cas9基因编辑疗法，相比于基因编辑和dna疗法，rna疗法没有基因组插入风险，因此具有更高安全性。外源基因易被核酸酶降解，因此，构建安全高效的基因递送载体是推动基因治疗发展的关键。现有的基因递送载体可分为病毒载体和非病毒载体，其中，非病毒载体具有无免疫原性、安全、易于大规模生产等优点而具有重要的应用价值。为实现rna的高效传递，现已经开发了多种非病毒纳米载体，其中脂质纳米粒(lipid nanoparticles,lnps)显示出了最佳临床转化价值。

2、目前市售的mrna疫苗bnt162b2(biontech公司的sars-cov-2-19mrna疫苗)和mrna-1273(mordena公司的sars-cov-2mrna疫苗)均采用了lnps技术。这些上市的基因药物的配方中均含有不可断裂的聚乙二醇偶联脂质，其中bnt162b2采用的不可断裂peg脂质为双四烷基乙酰胺甲氧基聚乙二醇2000(alc0159)；mrna-1273采用的不可断裂peg脂质为二肉豆蔻酰甘油-3-甲氧基聚乙二醇2000(mpeg2000dmg)。

3、peg脂质的引入，使得mrna脂质纳米颗粒的成型性良好，可以在简单的制备条件下获得粒径均匀的脂质纳米颗粒。然而，sars-cov-2mrna疫苗中所含的辅料聚乙二醇脂质衍生物自sars-cov-2保护疫苗接种活动开始以来，一直被认为是疫苗接种者产生严重ige介导的过敏反应的可能因素之一。由于环境的暴露，健康人群中也存在较低水平的抗peg抗体，并且这些预先存在的抗peg抗体在接种sars-cov-2mrna疫苗后显著增加。并且mrna-1273接种后peg特异性抗体的增加与临床相关peg化lnps与体外血液吞噬细胞相关性的显著增加有关，且peg特异性抗体的水平与lnps中的peg脂质含量呈正相关。此外，较高的聚乙二醇脂质阻碍lnps与细胞核内体膜的融合，进而降低rna的早期核内体逃逸，最终导致基因转染效率的降低。

4、实现编码抗原的mrna在抗原提呈细胞(antigen presenting cells,apcs)中的高效递送和翻译是进一步提升mrna疫苗效力的关键。因此，将编码抗原的mrna传递给特定的apcs成为疫苗开发的又一个关键问题。

5、抗原提呈细胞可分为专职性抗原提呈细胞和非专职性抗原提呈细胞。专职性抗原提呈细胞表达mhc-ii类分子和t细胞活化相关的共刺激分子及黏附分子，具有显著的抗原摄取、加工处理和呈递功能，这类细胞主要包括树突状细胞(dendritic cells，dcs)、单核-巨噬细胞和b淋巴细胞。非专职性抗原提呈细胞在通常情况下不表达mhc-ii类分子，在i型干扰素的刺激下可表达mhc-ii类分子和参与t细胞活化的共刺激分子以及黏附分子，并具有一定的抗原处理和提呈功能。这类细胞主要包括内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞、间皮细胞和嗜酸性粒细胞。在专职性抗原提呈细胞中，dcs具有最强的抗原提呈能力。dcs也是唯一能够刺激初始t细胞增殖的抗原提呈细胞，而其他种类的抗原提呈细胞(单核巨噬细胞和b细胞)仅能刺激已活化的或记忆性的t细胞。

6、现有的疫苗中，已经开发了包括使用自体或异体肿瘤细胞、多肽、蛋白质和dna疫苗等多种方法，但在多数情况下，这些疫苗依赖与宿主dcs的随机相遇，疫苗所携带的抗原与dcs的接触缺乏可导致免疫反应降低。例如未激活的dcs，可能会导致免疫应答的沉默，这也是目前癌症疫苗存在的缺陷之一。

7、研究表明未成熟dcs中的核内体和溶酶体酸化效率低下，这不利于所递送的mrna逃离核内体和溶酶体进入细胞质翻译成编码的抗原蛋白，无法逃离溶酶体的mrna会被降解从而无法发挥作用。目前基于dcs靶向的甘露糖、dec-205、单克隆抗体等靶向策略都存在溶酶体逃逸效率低的问题。因此，能够同时高效溶酶体逃逸和靶向dcs对于mrna疫苗发挥疗效极为重要。目前，尚无兼顾dcs靶向和高效的溶酶体逃逸的mrna疫苗。

8、因此，如何提供一种聚乙二醇脂质含量较低、且能够兼顾dcs靶向和高效的溶酶体逃逸的mrna疫苗，成为本领域亟待解决的技术难题。

技术实现思路

1、为解决上述技术难题，特提出本发明。

2、首先，本发明提供了一种脂质纳米颗粒，其中包含唾液酸脂质衍生物；

3、所述唾液酸脂质衍生物由唾液酸与脂质片段偶连形成；

4、所述唾液酸脂质衍生物为唾液酸的1位羧基或9位碳上羟基偶联有脂质片段，所述脂质片段为胆固醇、脂肪酸或其衍生物。

5、虽然在一些研究中，唾液酸被应用于脂质体、磷脂复合物组成的纳米制剂的修饰，但目前未见其在mrna疫苗中的应用，这是因为唾液酸修饰的lnps存在以下技术难题：

6、(1)唾液酸的分子结构中含有羧酸基团，带负电荷，如果不能采用合理的化学修饰手段掩闭羧酸基团，那么唾液酸的加入会影响mrna的封装效率，严重影响基因转染效率，甚至不能实现基因转染；

7、(2)疫苗主要针对dcs发挥作用，而唾液酸对dcs的靶向效率和机制尚不明确。

8、本发明将亲水的唾液酸作为脂质纳米颗粒的修饰配体，将其与多种脂质片段偶联，所得唾液酸脂质衍生物具有两亲性，能够通过与脂质之间的非极性相互作用排列在脂质膜中。

9、将上述唾液酸脂质衍生物添加到脂质纳米颗粒中，能够使得脂质纳米颗粒在不含有或含有少量peg脂质时形成并维持稳定。同时，添加上述唾液酸脂质衍生物的脂质纳米颗粒能够靶向抗原提呈细胞，特别是dcs，且溶酶体逃逸率大幅提升。相比不添加唾液酸脂质衍生物的mrna疫苗，经唾液酸脂质衍生物修饰的mrna疫苗的溶酶体逃逸率提升了4～5倍，dcs靶向效率提升了2～3倍。

10、而且，制备得到的脂质纳米颗粒能够满足药品的物理稳定性、化学稳定性以及生物稳定性方面的要求，可以满足治疗的适用性，同时适合制剂生产、不影响制剂的稳定性；制备的脂质纳米颗粒粒径均匀、可满足静脉内、皮下、鼻内等多种给药途经施用的要求。

11、本发明利用上述唾液酸脂质衍生物制备的脂质纳米颗粒相比用甘露糖等其他配体修饰的基于树突状细胞靶向的纳米颗粒具有以下优势：

12、(i)唾液酸脂质衍生物不仅克服了树突状细胞核内体低酸度造成的逃逸阻碍，还加速了脂质纳米颗粒(lnps)的溶酶体逃逸效率。

13、(ii)唾液酸的靶点是具有高度人-鼠同源性的siglec-1。

14、(iii)siglec-1在mrna疫苗促进ifn-α分泌，启动免疫响应的同时，进一步上调。

15、优选地，所述唾液酸脂质衍生物中，采用酰胺键或羧酸酯键连接唾液酸与脂质片段。

16、优选地，所述唾液酸脂质衍生物的通式如式i或式ii所示：

17、

18、式i中，r1为h原子或c1-c6烷基；

19、r2为h、(ch2)m、c2-c6烯基，m＝1-17；

20、r4为-oh、-nhcoch3或-nhcoch2oh；

21、x为h原子、o原子或羰基；

22、当x为h原子或o原子时，r3为(ch2)n或胆固醇基，n＝1-17；

23、当x为羰基时，r3为c12-c24烷氧基、c12-c24烷基取代氨基或胆固醇基；

24、

25、式ii中，r1为-s-(ch2)n-或-s-s-(ch2)n-，n＝1-6；

26、r2为-oh、-nhcoch3或-nhcoch2oh；

27、r3为c12-c24烷氧基、c12-c24烷基取代氨基或胆固醇基。

28、优选地，所述唾液酸脂质衍生物为以下至少一种：

29、

30、

31、

32、进一步，本发明发现，通过唾液酸1位羧基与脂质片段通过酰胺键连接的唾液酸脂质衍生物(例如sa-ch，sa-oda,sa-tda,sa-hda等)制备的脂质纳米颗粒，被唾液酸酶切割后保留的脂质片段具有质子化基团(例如伯氨基团等)，能够在酸性条件下质子化，进一步增加脂质纳米颗粒的表面正电荷，促进溶酶体逃逸。

33、优选地，所述唾液酸脂质衍生物为胆固醇或其衍生物偶联的唾液酸脂质衍生物；次优选地，所述唾液酸脂质衍生物为双链脂肪酸偶联的唾液酸脂质衍生物；次优选地，所述唾液酸脂质衍生物为单链脂肪酸偶联的唾液酸脂质衍生物。

34、在一些实施方案中，所述脂质纳米颗粒中不含有peg脂质。

35、在一些实施方案中，所述脂质纳米颗粒中还包括peg脂质，所述peg脂质占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为3％以下；优选1％以下；较优选0.5％以下；更优选为0.1％～0.5％；最优选为0.2％～0.5％。

36、上述实施方案中，所述peg脂质为可断裂的peg脂质衍生物或不可断裂的peg脂质衍生物。

37、优选地，所述唾液酸脂质衍生物与peg脂质的摩尔比为5～50：1；更优选为20～50:1。

38、优选地，所述唾液酸脂质衍生物占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为1％～30％。

39、更优选地，所述唾液酸脂质衍生物占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为3％～20％。

40、更优选地，所述唾液酸脂质衍生物占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为5％～10％。

41、优选地，所述peg脂质为可断裂的peg脂质衍生物。

42、目前用于lnps制备首选不可断裂的peg脂质，以延长lnps的体内循环时间。而本发明意外发现，选择可断裂的peg脂质衍生物与上述唾液酸脂质衍生物搭配制备lnps时，效果优于不可断裂的peg脂质衍生物，而且采用可断裂的peg脂质衍生物与上述唾液酸脂质衍生物共修饰时，可断裂的peg脂质衍生物能够促进上述唾液酸脂质衍生物修饰的lnps对dcs的转染效率。

43、优选地，可断裂的peg脂质衍生物的可断裂化学键选自光、热、酶、酸性、氧化还原、生理条件或特殊病理条件中任一条件下可降解。

44、优选地，所述可断裂的peg脂质衍生物的可断裂化学键为以下至少一种：羧酸酯键、碳酸酯键、磷酸酯键、膦酸酯键、原酸酯键、硫酯键、硫代酯键、二硫代酯键、碳酸酯键、硫代碳酸酯键、二硫代碳酸酯键、三硫代碳酸酯键、氨基甲酸酯键、硫代氨基甲酸酯键、二硫代氨基甲酸酯键、磺酸酯键、亚磺酸酯、脲基甲酸酯键、硫脲基甲酸酯键、肼基硫代甲酸酯键、二硫键、乙烯醚键、腙键、酰腙键、肟键、硫肟醚键、缩醛、半缩醛、环缩醛、氮杂缩醛、杂环缩醛、二硫代缩醛、硫代半缩醛、缩酮、杂环缩酮、亚胺、马来酰亚胺、苯甲酰亚胺、肼基、酰肼基、硫代碳酰肼基、偶氮羰酰肼基、硫代偶氮羰酰肼基、偶氮基、胍基、脒基、氨基胍基、氨基脒基、亚氨酸基、磺酰肼基、磺酰脲基、亚磷酸酯基、膦酸酯基、硫代酰胺、磺酰胺基、聚酰胺、磷酰胺、亚磷酰胺、焦磷酰胺、硫代磷酰胺、多肽片段、核苷酸及其衍生物骨架、脱氧核苷酸及其衍生物骨架。

45、采用少量可断裂的peg脂质衍生物与唾液酸脂质衍生物共修饰脂质纳米颗粒，可以增加lnps进入细胞的能力、降低疫苗过敏风险、减弱重复注射疫苗产生的加速血液清除现象，同时兼具dcs等抗原提呈细胞的靶向能力；既增强了脂质纳米颗粒的物理稳定性，又不影响mrna逃逸核内体，且使得脂质纳米颗粒在dcs等专职性抗原提呈细胞中具有更高的转染效率。

46、在具体实施过程中，也可采用不可断裂的peg脂质衍生物。

47、当采用不可断裂的peg脂质衍生物时，其占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为1％以下，更优选为0.5％以下。

48、所述不可断裂的peg脂质衍生物为以下至少一种：

49、聚乙二醇-1，2二肉豆蔻酸甘油酯(pegn-dmg)、聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(pegn-dspe)、peg-胆固醇、聚乙二醇-二酰基甘油(pegn-dag)、聚乙二醇-二烷氧基丙基(pegn-daa)、支链乙二醇-1，2二肉豆蔻酸甘油酯(peg2,n-dmg)、支链聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(pegn-dspe)、支链peg-胆固醇、支链聚乙二醇-二酰基甘油(peg2,n-dag)、支链聚乙二醇-二烷氧基丙基(peg2,n-daa)。

50、优选地，所述peg脂质为支链peg脂质。

51、所述支链peg脂质包括但不限于以下至少一种：

52、

53、式中，r为-ch3、-ch2ch3、-och3、-och2ch3、-oh、-sh、-cooh、-nh2。

54、优选地，所述peg脂质中含有分子量为200-400000da的1～2条peg链。

55、优选地，所述可断裂的peg脂质衍生物的可断裂化学键为酯酶敏感化学键。例如对羧酸酯酶和碳酸酯酶敏感的化学键。

56、在一些实施方案中，所述可断裂的peg脂质衍生物具有以下结构通式：

57、

58、式中，r为c12-c24烷氧基或胆固醇基，x1为可断裂化学键，r2为peg的功能性末端。

59、优选地，所述可断裂的peg脂质衍生物为mpegnchs或mpegnche；

60、其中，n代表peg的分子量，n为2000～20000，mpegnchs或mpegnche为一种peg分子量的化合物或多种peg分子量的组合物；

61、mpegnchs占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为0.2％～2％；

62、mpegnche占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为0.2％～3％。

63、优选地，所述可断裂的peg脂质衍生物为聚乙二醇单甲醚胆固醇琥珀酸单酯偶联物(mpegnchs)，其中n代表peg的分子量，可为2000～20000之间的任一种或多种，下面列举了n＝2000，5000，10000，20000时，mpegnchs的化学结构式：

64、

65、

66、下面列举了n＝2000，5000，10000，20000时，mpegnche的化学结构式：

67、

68、

69、当可断裂的peg脂质衍生物为mpegnche时，其占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为3％以下，优选为0.2％～3％；更优选为0.5％以下，优选为0.2％～0.5％。

70、当可断裂的peg脂质衍生物为mpegnchs时，其占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为2％以下，优选为0.2％～2％，更优选为0.2％～1.5％；更优选为1％以下或0.5％以下，优选为0.2％～0.5％。

71、优选地，所述可断裂的peg脂质衍生物为聚乙二醇单甲醚与胆固醇碳酸酯偶联物(mpeg2000chmc)。mpeg2000chmc的化学结构式为：

72、

73、在一些实施方案中，脂质纳米颗粒中还包括阳离子脂质；

74、所述阳离子脂质占所述脂质纳米颗粒的摩尔百分比为30％～60％。

75、优选地，所述阳离子脂质与唾液酸脂质衍生物的摩尔比为4～8:1。

76、所述阳离子脂质为永久带电的阳离子脂质、可电离的阳离子脂质、电荷可逆阳离子脂质中的至少一种。具体如表1所示。

77、表1阳离子脂质

78、

79、

80、

81、其中，永久带电的阳离子脂质在正常生理ph条件下带正电荷，用这类阳离子脂质合成的rna脂质纳米颗粒之间存在静电排斥作用，从而阻碍聚集，有利于稳定性维持，但其具有较强的细胞毒性、较短的循环半衰期。

82、dotap是在阳离子脂质体制备中使用最多的药用辅料，其结构式为：

83、

84、可电离的阳离子脂质通常具有叔胺基团，在中性条件下脱质子，在低于脂质酸解离常数(pka)的ph条件下带正电荷，这类脂质具有较低的毒性，但由于生理ph条件下呈电中性，因此所形成的脂质纳米颗粒在缺少稳定剂时容易发生聚集。

85、电荷可逆阳离子脂质dop-deda是一种电荷可逆的脂类衍生物，由dop-deda组成的脂质纳米颗粒在ph小于6.0时持续带正电，在ph为7.4时接近中性，在ph为8.0时带负电。其具有更宽的电离范围，且用这类阳离子脂质合成的rna脂质纳米颗粒在ph＝8.0时带负电，存在静电排斥作用，从而阻碍聚集，有利于稳定性维持。

86、dop-deda的结构式为：

87、

88、优选地，所述阳离子脂质为永久带电的阳离子脂质或可电离的阳离子脂质中的至少一种。

89、阳离子脂质具体可选自包括但不限于以下中的至少一种：n-(1-(2,3-二油基氧基)丙基)-n,n,n-氯化三甲铵(dotma)、n-(1-(2,3-二油酰氧基)丙基)-n,n,n-氯化三甲铵(dotap)、n,n-二油基-n,n-氯化二甲铵(dodac)、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵(dospa)、溴化三甲基十二烷基铵(dtab)、溴化三甲基十四烷基铵(ttab)、溴化三甲基十六烷基铵(ctab)、n,n-二硬脂基-n,n-溴化二甲铵(ddab)、溴化二甲基-2-羟乙基-2,3-二油酰氧基丙基铵(dori)、溴化二甲基-2-羟乙基-2,3-二油烯氧基丙基铵(dorie)、溴化二甲基-3-羟丙基-2,3-二油烯氧基丙基铵(dorie-hp)、溴化二甲基-4-羟丁基-2,3-二油烯氧基丙基铵(dorie-hb)、溴化二甲基-2-羟乙基-2,3-双十六烷氧基丙基铵(dprie)、溴化二甲基-2-羟乙基-2,3-双十八烷氧基丙基铵(dsrie)、溴化二甲基-2-羟乙基-2,3-双十四烷氧基丙基铵(dmrie)、1，2-二油酰-3-琥珀酰-sn-甘油胆碱酯(dosc)、n,n-二硬脂基-n,n-溴化二甲铵(ddab)、n,n-二甲基-2,3-二油基氧基丙胺(dodma)、1,2-二亚油基氧基-n,n-二甲基氨基丙烷(dlin-dma)、2，2-二亚油基-4-二甲基氨基乙基-[1，3]-二氧戊环(dlin-kc2-dma)、4-(二甲基氨基)丁酸三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基酯(dlin-mc3-dma)、十七烷-9-基-8-((2-羟乙基)(6-氧代-6-((十一烷氧基)己基)氨基)辛酸酯)(sm-102)、((4-羟基丁基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)(alc-0315)、甲氧基聚乙二醇双十四烷基乙酰胺(alc-0159)、二油酰磷脂-二乙基二胺偶联物(dop-deda)、3-(双十二烷基氨基)-n1,n1,4-三-十二烷基-1-哌嗪乙胺(kl10)、n1-[2-(双十二烷基氨基)乙基]-n1,n4,n4-三-十二烷基-1,4-哌嗪二乙胺(kl22)、14,25-双十三烷基-15,18,21,24-四氮杂-三十八烷(kl25)、2-({8-[(3β)-胆甾-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-n,n-二甲基-3-[(9z,12z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(辛基-clindma)、(2r)-2-({8-[(3β)-胆甾-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-n,n-二甲基-3-[(9z,12z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(辛基-clindma(2r))和(2s)-2-({8-[(3β)-胆甾-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-n,n-二甲基-3-[(9z,12z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(辛基-clindma(2s))。

90、优选地，所述阳离子脂质为可电离的阳离子脂质。

91、优选地，所述可电离的阳离子脂质为二亚油基-甲基-4-二甲基氨基丁酸酯(dlin-mc3-dma)。dlin-mc3-dma的化学结构式为：

92、

93、dlin-mc3-dma是一种可电离的阳离子脂质，具有独特的ph依赖电荷可变性，酸性条件下带正电，而生理ph条件下呈中性。核酸在酸性条件下被包裹，形成的脂质体在血液中则具有很小的正电荷密度，即很低的细胞毒性。

94、选择可电离的阳离子脂质时，具有佐剂特性，能够协同所递送的mrna，共同促进dcs的成熟和迁移，促进细胞免疫和体液免疫反应。

95、在一些实施方案中，脂质纳米颗粒中还包括类固醇脂质；

96、所述类固醇脂质占组成所述脂质纳米颗粒总脂质的摩尔百分比为30％～60％。

97、优选地，所述类固醇脂质为胆固醇、植物甾醇、粪固醇、谷固醇、菜籽固醇、麦角固醇、豆固醇、番茄碱、熊果酸中的至少一种。

98、优选地，所述类固醇脂质为β-谷甾醇、胆固醇、麦角固醇中的至少一种。

99、在一些实施方案中，脂质纳米颗粒中还包含两性离子脂质；

100、所述两性离子脂质占组成所述脂质纳米颗粒总脂质的摩尔百分比为10％～20％。

101、优选地，所述两性离子脂质选自1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1，2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)、1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dopc)、1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(dmpc)、1，2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dlpc)、1，2-双十一烷酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(dupc)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(popc)、1，2-二-o-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二亚麻酰基-sn-甘油-、1，2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-rac-(1-甘油)钠盐(dopg)、二油酰基磷脂酰丝氨酸(dops)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(dppg)、棕榈酰基油酰基磷脂酰乙醇胺(pope)、二硬脂酰基-磷脂酰-乙醇胺(dspe)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(dppe)、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺(dmpe)、1-硬脂酰基-2-油酰基-硬脂酰乙醇胺(sope)、1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱(sopc)、1，2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dope)、1，2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1，2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、鞘磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕榈酰基油酰基磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺(lpe)、蛋黄磷脂酰胆碱中的至少一种。

102、优选地，所述两性离子脂质为dope、dspc、dppc、dopc中的至少一种。

103、此外，本发明提出了用转染指数作为lnps或其他基因递送载体效率评估的指标。mrna主要在细胞质中的核糖体中发挥作用，lnps在被细胞吞噬后首先进入早期核内体，早期核内体逐渐酸化，当ph达到可电离脂质的pka(通常为6.2～6.5)，可电离脂质带正电荷，lnps开始从早期核内体中逃离，未逃离早期核内体的lnps最终会进入溶酶体，在溶酶体中一部分lnps可以逃逸出来，另一部分被溶酶体中的消化酶降解；因此，lnps只有逃离细胞内的各种核内体屏障，才能有效将mrna交付到核糖体进行翻译。

104、目前的mrna lnps主要针对提升早期核内体逃逸效率来优化可电离脂质的结构，但是mrna的有效交付是细胞摄取、早期核内体逃逸和溶酶体逃逸等多个事件共同决定的，同时提升以上多个环节的效率是现有的基于mrna递送的lnps尚无法做到的。为了更科学地评价不同lnps的基因传递效率，将细胞对lnps的摄取效率、lnps的早期核内体逃逸效率和lnps的溶酶体逃逸效率整合在一起，本发明提出了转染指数。转染指数的计算公式可以为以下两种形式：

105、转染指数a ＝细胞摄取率×(溶酶体逃逸率+(1-早期核内体逃逸率)×溶酶体逃逸率)

106、转染指数b＝细胞摄取率×早期核内体逃逸率×溶酶体逃逸率。

107、fluc mrna不同浓度的情况下，1.5％mpeg2000dmg修饰的lnps(1.5％mpeg2000dmg)、0.2％mpeg2000chs修饰的lnps(0.2％mpeg2000chs)和0.2％mpeg2000chs与10％sa-ch共修饰lnps(0.2％mpeg2000chs-10％sa)的dcs转染效率(即fluc表达后检测到的相对光单位relative light unit,rlu)与其对应的早期核内体逃逸率、核内体逃逸指数a、核内体逃逸指数b之间的线性关系表明，早期核内体逃逸效率与rlu之间的线性关系r2仅为0.7～0.9，而转染指数a与rlu之间线性关系r2为0.96～1.00，转染指数b与rlu之间的线性关系r2为0.98～0.99；说明相比于早期核内体逃逸率，细胞转染效率与转染指数具有更好的相关性；采用correl函数，进一步计算早期核内体逃逸率，转染指数a和b与rlu之间的相关性，correl函数返回值为-1～1的数，数值在-1～0之间为负相关，数值在0～1之间为正相关，数值越接近1，说明相关性越强；通过计算发现早期核内体逃逸率与不同mrna浓度下细胞转染效率之间的相关性只有0.88～0.94，但是转染指数a与不同mrna浓度下细胞转染效率之间的相关性为0.98～1.00，转染指数b与不同mrna浓度下细胞转染效率之间的相关性为0.99～1.00，均与早期核内体与rlu的相关性具有极显著性差异，说明lnps的转染指数与转染效率之间的相关性强于lnps的早期核内体逃逸率与转染效率之间的相关性；因此相比于早期核内体逃逸率，用转染指数作为lnps或其他基因递送载体效率评估的指标更合理。

108、分别计算唾液酸脂质衍生物与可断裂的peg脂质衍生物共修饰lnps、可断裂的peg单独修饰lnps，mpeg2000-dmg单独修饰lnps的转染指数a或b，如图43所示，结果表明，唾液酸脂质衍生物修饰的lnps的转染指数是1.5％mpeg2000dmg修饰lnps的5倍，更加突出了唾液酸脂质衍生物修饰的脂质纳米颗粒在核酸类药物向dcs递送的优势。

109、进一步，本发明提供了上述任一实施方案中的脂质纳米颗粒在制备药品或疫苗中的应用；

110、所述药品或疫苗被用于预防、诊断或治疗癌症或传染性疾病或感染性疾病；

111、或所述药品或疫苗被用于全身或局部的免疫治疗、增强疫苗效力、免疫细胞基因编辑或构建car-t细胞。

112、进一步，本发明还提供了一种药品，其中含有上述任一实施方案中的脂质纳米颗粒。

113、所述药品可以包含一种或多种小分子化疗药物、免疫激活剂、佐剂、单克隆抗体、免疫检查点抑制剂、抗体偶联药物。例如，tlr7激动剂(咪喹莫特)、tlr8激动剂(雷西莫德)、疫苗佐剂(mf59、as04、as03、as01、cpg1018、matrix-m)、sting激动剂、曲妥珠单抗、贝伐木单抗、帕博利珠单抗等。在一些实施方案中，所述药品可与核酸共同被包封在所述脂质纳米颗粒中一同施用，在另一些实施方案中，药物未被包封，与所述脂质纳米颗粒混合或序贯施用。

114、进一步，本发明还提供了一种疫苗，其中含有上述任一实施方案中的脂质纳米颗粒。

115、所述疫苗可满足对患者进行静脉内、皮下、鼻内等多种给药途经施用的要求。

116、具体地，所述疫苗的施用途径包括但不限于：静脉注射、动脉注射、皮下注射、皮内注射、瘤内注射、淋巴结内注射、肌肉注射、髓内注射、鞘内注射、腹膜注射、腹腔注射。在一些实施方案中，所述疫苗也可以作为气雾剂/粉雾剂/口喷剂/鼻喷剂，通过鼻内、支气管、口腔滴注/吸入。在一些实施方案中，所述疫苗可作为凝胶剂、乳膏剂、洗剂、搽剂，直接涂抹于皮肤、舌下、鼻黏膜、直肠或阴道内。具体施用途经需要根据患者年龄、病情、身体状况等多种因素进行综合考虑后决定。

117、当鼻腔内施用时，所述疫苗中的脂质纳米颗粒能够占据纤毛上皮细胞上的ace2，进而降低由鼻腔吸入的病毒颗粒黏附于纤毛上皮细胞的几率，降低了进一步感染的风险。因此，在用于鼻腔吸入式疫苗时，本发明的脂质纳米颗粒可以是内部封装rna的疫苗，也可以不装载rna，用于一天数次施用的日常防护，或装入具有雾化功能的口罩或面罩，方便随时使用。

118、在一些实施方案中，所述脂质纳米颗粒包封治疗剂和/或预防剂(例如，编码肿瘤抗原的信使rna以及其他药物组合物)可指导体内细胞合成任何肿瘤相关或特异性抗原。含有本发明脂质纳米颗粒的疫苗可特异性转染抗原提呈细胞，并诱导抗癌免疫，包括体液免疫和细胞免疫，无基因组插入风险。

119、所述疫苗为肿瘤疫苗时，能够在体内选择性地进入抗原提呈细胞(特别是树突状细胞)中，所包封的编码抗原的mrna在细胞内被翻译并加工成mhc-i/ii分子限制性肽段，随后被呈递在抗原提呈细胞表面，因此优选编码完整抗原的mrna序列，而非仅编码mhc分子限制性肽段的mrna序列，这有助于同时产生效应t细胞和辅助t细胞应答。当施用于患者时，所述疫苗能够在体内准确被dcs识别，并在进入dcs后产生抗原蛋白，经过dcs的加工后通过mhc分子呈递给t淋巴细胞，通过主动免疫来诱导能够识别杀伤肿瘤细胞的抗原特异性t淋巴细胞扩增。

120、在具体实施过程中，所述疫苗包括但不限于灭活疫苗、减毒疫苗、重组蛋白疫苗、多肽疫苗、细胞疫苗、腺病毒疫苗、核酸疫苗。

121、在一些实施方案中，所述核酸疫苗可以治疗或预防不同阶段，不同转移程度的肿瘤。在一些实施方案中，所述核酸疫苗也被用于预防或治疗不同变异程度的病毒感染。

122、优选地，所述疫苗为核酸疫苗，所述核酸疫苗中的脂质的浓度为1～10mg/ml；优选为1～5mg/ml。

123、优选地，所述核酸疫苗中的核酸为核糖核酸(rna)。

124、优选地，所述核糖核酸为小干扰rna(sirna)、不对称干扰rna(airna)、微rna(mirna)、dicer-底物rna(dsrna)、小发夹rna(shrna)、环状rna(circrna)、信使rna(mrna)和长的非编码rna(lncrna)中的至少一种。

125、优选地，所述核糖核酸为信使rna(mrna)。

126、所述mrna中的核苷酸碱基未被化学修饰，或全部或部分核苷酸碱基被化学修饰，所述化学修饰包括但不限于假尿嘧啶修饰。

127、在一些实施方案中，所述rna的核碱基是替代尿嘧啶，包括但不限于假尿苷(ψ)、吡啶-4-酮核糖核苷、5-氮杂-尿嘧啶、6-氮杂-尿嘧啶、2-硫代-5-氮杂-尿嘧啶、2-硫代-尿嘧啶(s2u)、4-硫代-尿嘧啶(s4u)、4-硫代-假尿苷、2-硫代-假尿苷、5-羟基-尿嘧啶(ho5u)、5-氨基烯丙基-尿嘧啶、5-卤代-尿嘧啶(例如，5-碘-尿嘧啶或5-溴-尿嘧啶)、3-甲基-尿嘧啶(m3u)、5-甲氧基-尿嘧啶(mo5u)、尿嘧啶5-羟乙酸(cmo5u)、尿嘧啶5-羟乙酸甲酯(mcmo5u)、5-羧甲基-尿嘧啶(cm5u)、1-羧甲基-假尿苷、5-羧基羟甲基-尿嘧啶(chm5u)、5-羧基羟甲基-尿嘧啶甲酯(mchm5u)、5-甲氧基羰基甲基-尿嘧啶(mcm5u)、5-甲氧基羰基甲基-2-硫代-尿嘧啶(mcm5s2u)、5-氨基甲基-2-硫代-尿嘧啶(nm5s2u)、5-甲基氨基甲基-尿嘧啶(mnm5u)、5-甲基氨基甲基-2-硫代-尿嘧啶(mnm5s2u)、5-甲基氨基甲基-2-硒-尿嘧啶(mnm5se2u)、5-氨基甲酰基甲基-尿嘧啶(ncm5u)、5-羧甲基氨基甲基-尿嘧啶(cmnm5u)、5-羧甲基氨基甲基-2-硫代-尿嘧啶(cmnm5s2u)、5-丙炔基-尿嘧啶、1-丙炔基-假尿嘧啶、5-牛磺酸甲基-尿嘧啶(τm5u)、1-牛磺酸甲基-假尿苷、5-牛磺酸甲基-2-硫代-尿嘧啶(τm5s2u)、1-牛磺酸甲基-4-硫代-假尿苷、5-甲基-尿嘧啶(m5u，即具有核碱基脱氧胸腺嘧啶)、1-甲基-假尿苷(m1ψ)、5-甲基-2-硫代-尿嘧啶(m5s2u)、1-甲基-4-硫代-假尿苷(m1s4ψ)、4-硫代-1-甲基-假尿苷、3-甲基-假尿苷(m3ψ)、2-硫代-1-甲基-假尿苷、1-甲基-1-脱氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-1-脱氮-假尿苷、二氢尿嘧啶(d)、二氢假尿苷、5,6-二氢尿嘧啶、5-甲基-二氢尿嘧啶(m5d)、2-硫代-二氢尿嘧啶、2-硫代-二氢假尿苷、2-甲氧基-尿嘧啶、2-甲氧基-4-硫代-尿嘧啶、4-甲氧基-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、n1-甲基-假尿苷、3-(3-氨基-3-羧丙基)尿嘧啶(acp3u)、1-甲基-3-(3-氨基-3-羧丙基)假尿苷(acp3ψ)、5-(异戊烯基氨基甲基)尿嘧啶(inm5u)、5-(异戊烯基氨基甲基)-2-硫代-尿嘧啶(inm5s2u)、5,2'-o-二甲基-尿苷(m5um)、2-硫代-2'-o_甲基-尿苷(s2um)、5-甲氧基羰基甲基-2'-o-甲基-尿苷(mcm5um)、5-氨基甲酰基甲基-2'-o-甲基-尿苷(ncm5um)、5-羧甲基氨基甲基-2'-o-甲基-尿苷(cmnm5um)、3,2'-o-二甲基-尿苷(m3um)和5-(异戊烯基氨基甲基)-2'-o-甲基-尿苷(inm5um)、1-硫代-尿嘧啶、脱氧胸苷、5-(2-甲氧羰基乙烯基)-尿嘧啶、5-(氨基甲酰基羟甲基)-尿嘧啶、5-氨基甲酰基甲基-2-硫代-尿嘧啶、5-羧甲基-2-硫代-尿嘧啶、5-氰甲基-尿嘧啶、5-甲氧基-2-硫代-尿嘧啶和5-[3-(1-e-丙烯基氨基)]尿嘧啶。

128、在一些实施方案中，所述rna的核碱基是替代胞嘧啶，包括但不限于5-氮杂-胞嘧啶、6-氮杂-胞嘧啶、假异胞苷、3-甲基-胞嘧啶(m3c)、n4-乙酰基-胞嘧啶(ac4c)、5-甲酰基-胞嘧啶(f5c)、n4-甲基-胞嘧啶(m4c)、5-甲基-胞嘧啶(m5c)、5-卤代-胞嘧啶(例如，5-碘-胞嘧啶)、5-羟甲基-胞嘧啶(hm5c)、1-甲基-假异胞苷、吡咯并-胞嘧啶、吡咯并-假异胞苷、2-硫代-胞嘧啶(s2c)、2-硫代-5-甲基-胞嘧啶、4-硫代-假异胞苷、4-硫代-1-甲基-假异胞苷、4-硫代-1-甲基-1-脱氮-假异胞苷、1-甲基-1-脱氮-假异胞苷、折布拉林(zebularine)、5-氮杂-折布拉林、5-甲基-折布拉林、5-氮杂-2-硫代-折布拉林、2-硫代-折布拉林、2-甲氧基-胞嘧啶、2-甲氧基-5-甲基-胞嘧啶、4-甲氧基-假异胞苷、4-甲氧基-1-甲基-假异胞苷、赖西丁(k2c)、5,2'-o-二甲基-胞苷(m5cm)、n4-乙酰基-2'-o-甲基-胞苷(ac4cm)、n4,2'-o-二甲基-胞苷(m4cm)、5-甲酰基-2'-o-甲基-胞苷(f5cm)、n4,n4,2'-o-三甲基-胞苷(m42cm)、1-硫代-胞嘧啶、5-羟基-胞嘧啶、5-(3-叠氮丙基)-胞嘧啶和5-(2-叠氮乙基)-胞嘧啶。

129、在一些实施方案中，所述rna的核碱基是替代腺嘌呤，包括但不限于2-氨基-嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、2-氨基-6-卤代-嘌呤(例如，2-氨基-6-氯-嘌呤)、6-卤代-嘌呤(例如，6-氯-嘌呤)、2-氨基-6-甲基-嘌呤、8-叠氮-腺嘌呤、7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-腺嘌呤、7-脱氮-2-氨基-嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-2-氨基-嘌呤、7-脱氮-2,6-二氨基嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-2,6-二氨基嘌呤、1-甲基-腺嘌呤(m1a)、2-甲基-腺嘌呤(m2a)、n6-甲基-腺嘌呤(m6a)、2-甲基硫代-n6-甲基-腺嘌呤(ms2m6a)、n6-异戊烯基-腺嘌呤(i6a)、2-甲基硫代-n6-异戊烯基-腺嘌呤(ms2i6a)、n6-(顺-羟基异戊烯基)腺嘌呤(io6a)、2-甲基硫代-n6-(顺-羟基异戊烯基)腺嘌呤(ms2io6a)、n6-甘氨酰基氨基甲酰基-腺嘌呤(g6a)、n6-苏氨酰基氨基甲酰基-腺嘌呤(t6a)、n6-甲基-n6-苏氨酰基氨基甲酰基-腺嘌呤(m6t6a)、2-甲基硫代-n6-苏氨酰基氨基甲酰基-腺嘌呤(ms2g6a)、n6,n6-二甲基-腺嘌呤(m62a)、n6-羟基正缬氨酰基氨基甲酰基-腺嘌呤(hn6a)、2-甲基硫代-n6-羟基正缬氨酰基氨基甲酰基-腺嘌呤(ms2hn6a)、n6-乙酰基-腺嘌呤(ac6a)、7-甲基-腺嘌呤、2-甲基硫代-腺嘌呤、2-甲氧基-腺嘌呤、n6,2'-o-二甲基-腺苷(m6am)、n6,n6,2'-o-三甲基-腺苷(m62am)、1,2'-o-二甲基-腺苷(m1am)、2-氨基-n6-甲基-嘌呤、1-硫代-腺嘌呤、8-叠氮-腺嘌呤、n6-(19-氨基-五氧杂十九烷基)-腺嘌呤、2,8-二甲基-腺嘌呤、n6-甲酰基-腺嘌呤和n6-羟甲基-腺嘌呤。

130、在一些实施方案中，所述rna的核碱基是替代鸟嘌呤，包括但不限于肌苷(i)、1-甲基-肌苷(m1i)、怀俄苷(img)、甲基怀俄苷(mimg)、4-去甲基-怀俄苷(img-14)、异怀俄苷(img2)、怀丁苷(yw)、过氧怀丁苷(o2yw)、羟基怀丁苷(ohyw)、溶解不良的羟基怀丁苷(ohyw*)、7-脱氮-鸟嘌呤、辫苷(q)、环氧辫苷(oq)、半乳糖基-辫苷(galq)、甘露糖基-辫苷(manq)、7-氰基-7-脱氮-鸟嘌呤(preq0)、7-氨基甲基-7-脱氮-鸟嘌呤(preq1)、古嘌苷(g+)、7-脱氮-8-氮杂-鸟嘌呤、6-硫代-鸟嘌呤、6-硫代-7-脱氮-鸟嘌呤、6-硫代-7-脱氮-8-氮杂-鸟嘌呤、7-甲基-鸟嘌呤(m7g)、6-硫代-7-甲基-鸟嘌呤、7-甲基-肌苷、6-甲氧基-鸟嘌呤、1-甲基-鸟嘌呤(m1g)、n2-甲基-鸟嘌呤(m2g)、n2,n2-二甲基-鸟嘌呤(m22g)、n2,7-二甲基-鸟嘌呤(m2,7g)、n2,n2,7-二甲基-鸟嘌呤(m2,2,7g)、8-氧代-鸟嘌呤、7-甲基-8-氧代-鸟嘌呤、1-甲基-6-硫代-鸟嘌呤、n2-甲基-6-硫代-鸟嘌呤、n2,n2-二甲基-6-硫代-鸟嘌呤、n2-甲基-2'-o-甲基-鸟苷(m2gm)、n2,n2-二甲基-2'-o-甲基-鸟苷(m22gm)、1-甲基-2'-o-甲基-鸟苷(m1gm)、n2,7-二甲基-2'-o-甲基-鸟苷(m2,7gm)、2'-o-甲基-肌苷(im)、1,2'-o-二甲基-肌苷(m1im)、1-硫代-鸟嘌呤和o-6-甲基-鸟嘌呤。

131、在一些实施方案中，所述rna的核碱基包括天然存在的或合成的碱基衍生物，包括但不限于吡唑并[3,4-d]嘧啶、5-甲基胞嘧啶(5-me-c)、5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其他烷基衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其他烷基衍生物，2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶，6-氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶，8-卤代(例如，8-溴)、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羟基和其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代(尤其是5-溴、5-三氟甲基和其他5-取代的)尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、脱氮鸟嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、3-脱氮鸟嘌呤、脱氮腺嘌呤、7-脱氮腺嘌呤、3-脱氮腺嘌呤、吡唑并[3,4-d]嘧啶、咪唑并[1,5-a]1,3,5三嗪酮、9-脱氮嘌呤、咪唑并[4,5-d]吡嗪、噻唑并[4,5-d]嘧啶、吡嗪-2-酮、1,2,4-三嗪、哒嗪；或1,3,5三嗪。当使用简写a、g、c、t或u描绘核苷酸时，每个字母是指代表的碱基和/或其衍生物，例如a包括腺嘌呤或腺嘌呤类似物，例如7-脱氮腺嘌呤)。

132、优选地，所述mrna编码以下至少一种蛋白质的开放阅读框：

133、(1)肿瘤相关抗原；

134、(2)免疫调节性细胞因子；

135、(3)免疫共刺激分子；

136、(4)craspr-cas；

137、(5)car分子；

138、(6)病毒或病菌抗原；

139、(7)鸡卵清蛋白(ova)。

140、所述肿瘤相关抗原包括但不限于紧密连接蛋白(cldns)、酪氨酸激酶蛋白2(trp2)、甲胎蛋白、癌胚抗原。

141、所述免疫调节性细胞因子包括但不限于白细胞介素12、白细胞介素2、干扰素γ。

142、所述免疫共刺激分子包括但不限于ox40l、cd40。

143、所述craspr-cas包括但不限于craspr-cas9。

144、所述病毒或病菌抗原包括但不限于sars-cov-2。

145、优选地，按照n/p＝3:1～10:1将核酸封装在脂质纳米颗粒内部制备核酸疫苗；更优选地，n/p＝3:1～8:1，更优选地，n/p＝6:1～8:1。

146、优选地，所述核酸疫苗的制备方法包括：按照n/p比3:1～10:1将上述任一实施方案中的脂质纳米颗粒中的脂质与mrna分别溶于有机溶剂和柠檬酸缓冲液中，然后以流速比2:1～5:1(水相：脂质相)将两相同时注入微流体混合装置，所得初品迅速用磷酸盐缓冲液稀释30～60倍，使体系中的有机溶剂浓度低于1％。在4℃下，采用30kda的超滤膜对稀释后的样品进行浓缩，通过0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，得到封装mrna的唾液酸衍生物修饰的脂质纳米颗粒水分散液。

147、在一些实施方案中，所述有机溶剂为乙醇。

148、在一些实施方案中，用于配制mrna水分散液的溶液为20～100mmol/l的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，优选50～100mmol/l。所述缓冲液的ph范围为3～5.5，优选ph＝3.5～4.5。

149、优选地，脂质与mrna的质量比为10:1～100:1，优选20:1～50:1，更优选20:1～30:1。

150、优选地，在封装核酸的脂质纳米颗粒中，唾液酸脂质衍生物的摩尔数为总脂质摩尔数的1％～50％，优选5％～20％，更优选5％～10％。

151、进一步，本发明还提供了上述任一实施方案中的脂质纳米颗粒、药品或疫苗在以下至少一方面的应用：

152、(1)预防、诊断或治疗癌症或传染性疾病或感染性疾病；

153、(2)全身或局部的免疫治疗、增强疫苗效力、免疫细胞基因编辑或构建car-t细胞。

154、在本发明中，所述癌症包括但不限于白血病，急性淋巴母细胞白血病，急性髓细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，急性淋巴母细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，多发性骨髓瘤，骨髓异常增生综合症，巨球蛋白血症，慢性骨髓增生性障碍；淋巴瘤，aids相关淋巴瘤，中枢神经系统淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤；脑瘤，小脑星形细胞瘤，脑干胶质瘤，颅内生殖细胞肿瘤，脑膜瘤，听神经瘤，室管膜瘤，幕上原始神经外胚层肿瘤，视觉通路和下丘脑胶质瘤，髓母细胞瘤，颅内表皮样囊肿；眼癌，眼内黑色素瘤，视网膜母细胞瘤；鼻腔和鼻窦癌，鼻咽癌，鼻窦和鼻腔癌；口腔癌，唇癌；喉癌；肺癌，非小细胞肺癌，肺腺癌，鳞状细胞肺癌，透明细胞肺癌，小细胞肺癌，基底细胞癌，支气管腺瘤/类癌；肉瘤；卡波西肉瘤，骨肉瘤，平滑肌肉瘤，淋巴肉瘤，滑膜肉瘤，尤文肉瘤，横纹肌肉瘤，软组织肉瘤；胆管癌，胆囊癌；肝癌，原发性，肝细胞癌；继发性，肝转移；食道癌；骨癌，恶性纤维组织细胞瘤；乳腺癌；胃癌；结直肠癌；小肠癌；子宫内膜癌；卵巢癌，卵巢上皮癌；卵巢生殖细胞肿瘤，卵巢低恶性潜力肿瘤；宫颈癌；神经母细胞瘤；皮肤癌，sezary综合征，皮肤黑色素瘤，皮肤默克尔细胞；胰腺癌，胰岛细胞；甲状旁腺癌；阴茎癌；嗜铬细胞瘤；膀胱癌；肾上腺皮质；胰岛细胞；生殖细胞肿瘤，性腺外；生殖细胞肿瘤，卵巢；妊娠滋养细胞肿瘤；肾癌；输尿管和肾盂，移行细胞癌；尿道癌；阴道癌；睾丸癌；胸腺瘤；甲状腺癌。

155、在本发明中，所述传染性疾病或感染性疾病包括但不限于获得性免疫缺陷综合症(aids)、病毒肺炎、新型冠状病毒肺炎(sars-cov-2)、严重急性呼吸综合征(sars)、流感、亨尼帕病毒感染、甲肝、乙肝、丙肝、丁肝、戊肝、带状疱疹、单纯疱疹、i型单纯疱疹、ii型单纯疱疹、天花(痘疹)、水痘、猴痘、白喉症、人乳头状瘤病毒(hpv)感染、幽门螺杆菌感染、鼠疫、狂犬病、鹦鹉热、埃博拉出血热、阿米巴病、马尔堡病毒、麻疹、结核病、梅毒、破伤风、猩红热、利什曼病、伤寒、伤寒热、风疹、百日咳(whooping cough)、pfeiffer腺热、星状病毒感染、霍乱、霍曼不动杆菌感染、炭疽病、巨细胞病毒感染、登革热、曲霉菌病、麻风、疟疾、支原体肺炎、蛔虫病、巴贝斯虫病、小袋虫病、裂体吸虫病、贝蛔虫感染、人芽囊原虫感染、黑毛结节病、丝虫病、龙线虫病、肝片吸虫病、姜片虫病、囊虫病、圆孢球虫病、皮肤幼虫移行症(clm)、狐狸绦虫、钩虫感染、肺吸虫病、膜壳绦虫病、孢子球虫病、弓形虫病、旋毛虫病、滴虫病、鞭虫病(鞭虫感染)、tripper、锥虫病(昏睡病)、恙虫病、类圆线虫病、绦虫病、包虫病、蛲虫病(蛲虫感染)、血吸虫病(裂体吸虫病)、头癣(头皮癣)、股癣(体癣)、股癣(jock痒)、手足癣(手癣)、黑癣、足癣(脚癣)、甲癣(甲真菌病)、花斑癣(花斑糠疹)、白毛结节病(白癣)、立克次氏体感染、恩里克体病、沙眼衣原体感染、肺炎衣原体感染、肉毒杆菌中毒(和婴儿肉毒杆菌中毒)、产气荚膜梭菌食物中毒、流行性斑疹伤寒、eb病毒感染性单核细胞增多症、腮腺炎、鼠斑疹伤寒(地方性斑疹伤寒)、脓毒血症、脊髓灰质炎、百日咳、酵母真菌斑点、黄热病、脑膜炎、沙门氏菌副伤寒、沙门氏菌伤寒、沙门氏菌病、人博卡病毒感染、手足口病(hfmd)、汉坦病毒肺综合征(hps)、溶血性尿毒症综合征(hus)、钩端螺旋体病、李氏杆菌、莱姆疏螺旋体病、莱姆病、淋巴管丝虫病(象皮病)、淋巴细胞脉络丛脑膜炎、马尔堡出血热(mhf)、类鼻疽(惠特莫尔病)、脑膜炎、结膜炎、角膜炎、脑膜炎球菌病、溶血性杆菌感染、金黄色葡萄球菌感染、志贺氏菌病(细菌性痢疾)、尖锐湿疣、皮肤真菌病、皮肤利什曼病。

156、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

157、本发明的脂质纳米颗粒在不含有或含有极少量的peg脂质时仍然具有良好的稳定性，能够高选择性地递送mrna至抗原提呈细胞(特别是树突状细胞)，并能够在dcs中实现快速溶酶体逃逸，进而在体内外施用含有本发明的脂质纳米颗粒的疫苗时，均能够在dcs中获得高效基因转染。

158、含有本发明的脂质纳米颗粒的疫苗在用于肿瘤治疗时，相比于市售处方配制的mrna疫苗具有更好的疗效。在用于预防接种时，显著降低了现有mrna疫苗的副作用并为疫苗接种者提供持久的保护。