本发明属于细胞治疗及再生医学领域,尤其涉及凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用。
背景技术:
1、视网膜新生血管(retinal neovascularization,rnv)是众多疾病如早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,rop)、糖尿病性视网膜病变(diabeticretinopathy,dr)、视网膜静脉阻塞(retinal vein occlusions,rvo)等发生的共同病理改变,其造成的渗出、出血和增生等一系列变化最终会导致视力丧失的严重后果。目前,rnv的常用临床疗法为抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,vegf)治疗。虽然此药物可在一定程度上缓解患者症状,但仍存在响应率不高、易发生耐药、伴随局部与全身并发症等缺点,注射频繁、成本高和治疗抵抗等问题仍未得到解决。因此,临床上迫切需要开发新的治疗方法。
2、人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduousteeth,shed)是一种从人脱落乳牙牙髓中分离培养出的间充质干细胞(mesenchymal stemcells,mscs),具有更强的增殖与多向分化能力。此外,shed可分泌细胞因子和趋化因子,有利于调节血管生成、抵抗炎症。在发育生物学中,shed与眼部细胞共同来源于神经嵴细胞,且能够在特定条件下分化为cd31+内皮细胞。与主要从人骨髓中获得的mscs相比,shed具有来源丰富、取材安全方便、免疫原性低、尚无伦理限制等优点,成为一种潜在的生物制剂。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供pd1+apovs用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用,以期达到对视网膜新生血管的良好治疗效果。
2、为达到上述目的,本发明实施例采用如下技术方案:
3、凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用。
4、可选的,所述的凋亡囊泡由凋亡的shed分泌得到;且所述的凋亡囊泡表达pd1;所述的凋亡囊泡的直径为150~200nm。
5、可选的,所述凋亡囊泡由以下方法制备而成:
6、s1:将shed进行传代培养后,加入星孢菌素溶液诱导细胞凋亡,12~16h后收集上清液;
7、s2:将步骤s1中所述上清液经差速离心后获得凋亡囊泡沉淀。
8、可选的,s1中:
9、所述shed由第3-5代的shed培养而成;
10、传代培养的培养液组分为:500份体积的α-mem基础培养基、55.5份体积的胎牛血清、浓度为100u/ml的青霉素和浓度为100u/ml的链霉素。
11、传代培养的培养环境为:37℃、体积比为5%的co2;培养密度为:按六孔板每孔2×105个细胞的密度接种培养;培养至细胞融合度为80%~85%;
12、所述的星孢菌素溶液的溶剂选自乙醇和二甲基亚砜;所述星孢菌素在培养液中的浓度为1~10μm。
13、可选的,s2中:
14、所述的差速离心的步骤为:将所述上清液于4℃下800g离心10min,收集上清液,除去细胞碎片与死细胞;
15、上清液于4℃下16000g进一步离心30min以获得凋亡囊泡沉淀。
16、可选的,所述的视网膜新生血管包括早产儿视网膜病变、糖尿病性视网膜病变和/或视网膜静脉阻塞。
17、可选的,所述的哺乳动物指的是小鼠、大鼠、兔、猴、羊、牛、猪、狗或人。
18、一种治疗哺乳动物视网膜新生血管的药物,所述的药物中含有凋亡囊泡。
19、可选的,所述的凋亡囊泡的施药方式为玻璃体腔注射;注射剂量为10μg/次。
20、可选的,所述的凋亡囊泡由凋亡的shed分泌得到;且所述的凋亡囊泡表达pd1;
21、所述的凋亡囊泡的直径为150~200nm。
22、与现有药物相比,本发明具有以下有益的技术效果:pd1+apovs注射剂可显著改善小鼠的视网膜新生血管症状;治疗后小鼠视网膜新生血管减少,血管改建增加,视网膜功能明显恢复;同时相比于传统治疗方式,pd1+apovs单侧玻璃体注射可使对侧视网膜新生血管症状得到显著改善。
1.凋亡囊泡用于制备治疗哺乳动物视网膜新生血管药物的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的凋亡囊泡由凋亡的脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,shed)分泌得到;且所述的凋亡囊泡表达pd1;
3.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述凋亡囊泡由以下方法制备而成:
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,s1中:
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,s2中:
6.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述的视网膜新生血管包括早产儿视网膜病变、糖尿病性视网膜病变和/或视网膜静脉阻塞。
7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述的哺乳动物指的是小鼠、大鼠、兔、猴、羊、牛、猪、狗或人。
8.一种治疗哺乳动物视网膜新生血管的药物,其特征在于,所述的药物中含有凋亡囊泡。
9.根据权利要求8所述的治疗哺乳动物视网膜新生血管的药物,其特征在于,所述的凋亡囊泡的施药方式为玻璃体腔注射;注射剂量为10μg/次。
10.根据权利要求8或9所述的治疗哺乳动物视网膜新生血管的药物,其特征在于,所述的凋亡囊泡由凋亡的shed分泌得到;且所述的凋亡囊泡表达pd1;