一种重组胶原蛋白脂质体敷料及其制备方法和使用方法与流程

本发明属于敷料制备，尤其涉及一种重组胶原蛋白脂质体敷料及其制备方法和使用方法。

背景技术：

1、胶原蛋白作为生物药物和生物材料，存在着易被酶解，热不稳定问题，且因分子量和结构的特点，水溶性的胶原蛋白难以穿透角质层细胞间的脂质结构。市面现有的胶原蛋白敷料均为水凝胶或乳膏。胶原蛋白主要是通过毛囊进入真皮层中，但是皮肤附属器官占比小，透皮效率低。

2、重组胶原蛋白是指采用重组脱氧核糖核酸(deoxyribo nucleic acid，dna)技术，对编码所需人胶原蛋白质的基因进行遗传操作和(或)修饰，利用质粒或病毒载体将目的基因带入适当的宿主细胞(细菌，酵母或其他真核细胞等)中，表达并翻译成胶原蛋白或类似胶原蛋白的多肽，经过提取和纯化等步骤制备而成。由于重组胶原蛋白具有良好的生物学相容性、细胞黏附性、促新细胞形成和止血功能以及促进皮细胞生长的功能，且与源于动物组织提取的胶原蛋白相比具有可加工性更高、无病毒隐患、水溶性好以及排异反应低等优点，已成为目前敷料类产品的热门成分，逐渐成为研究热点。

3、期刊文献(“重组人源化ⅲ型胶原蛋白对皮肤功能性相关基因表达的影响”，范婷等，《日用化学工业(中英文)》)探究了重组人源化ⅲ型胶原蛋白应用在化妆品中，对减缓皮肤皱纹的功效作用，通过测试其作用于人皮肤成纤维细胞和角质形成细胞，在皮肤功能性基因层面验证其抗皱功效。结果表明，重组人源化胶原蛋白具有良好的透皮性能，可以透过毛囊进入真皮层并扩散至胶原纤维层，补充皮肤中的胶原纤维5mg/ml rhcⅲ作用于人皮肤成纤维细胞可显著促进胶原合成相关基因collagenⅰ，collagenⅲ和smad3的表达；同时，在uva刺激条件下可显著抑制胶原降解相关基因mmp-1、mmp-3、c-jun和c-fos的表达。作用于角质形成细胞可显著促进皮肤屏障修复和保湿相关基因lor、tgm1、ivl、ocln1、dsg1、flg、caspase14和k1的表达。但该技术方案并未对重组胶原蛋白的透皮性进行进一步改善。

4、期刊文献(“脂质体包裹胶原蛋白的制备及其透皮性能”，闫森等，《精细化工》，2012年6期)为提高胶原蛋白体外透皮吸收性能，以卵磷脂和胆固醇为成膜材料，采用薄膜分散法制备了鱼皮水解胶原蛋白脂质体。以模拟franze扩散池进行小鼠离体皮肤渗透扩散实验，采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，hplc)测定胶原蛋白含量，考察胶原蛋白脂质体的透皮吸收量与吸收率.实验结果表明，相对分子质量(简称分子量，下同)3 500的鱼皮水解胶原蛋白经脂质体包封后，透皮吸收量在24h内达到21.9％，较直接涂抹胶原蛋白的透皮吸收率提高一倍，证明小分子胶原蛋白经脂质体包封能够改善其体外透皮吸收性能。但是该技术方案仅研究了脂质体包封对胶原蛋白透皮性能的影响，改善程度仍相对有限。

5、基于此，有必要提供一种重组胶原蛋白脂质体敷料及其制备方法和使用方法，以解决上述技术背景中水溶性的胶原蛋白难以穿透角质层细胞间的脂质结构、透皮效率低的问题。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种重组胶原蛋白脂质体敷料及其制备方法和使用方法，本发明将通过将大分子的重组胶原蛋白与促渗透剂(中药挥发油与月桂氮卓酮)、吐温80制备成含有促渗透剂的脂质体混悬液，再与蛋黄卵磷脂和胆固醇制备的凝胶基质混合均匀制备所述重组胶原蛋白脂质体敷料，可以使脂质体均匀分散在凝胶基质中，借助凝胶剂的生物粘附性，能够在局部位置实现药物的缓释作用提高生物利用度，从而制备得到具有良好修复作用的重组胶原蛋白脂质体敷料。通过在皮肤表面形成保护层构建皮肤物理屏障，为创面修复提供愈合的微环境，促进创面愈合，适用于皮肤瘙痒、过敏等皮肤的修复护理。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、第一方面，本发明提供了一种重组胶原蛋白脂质体敷料，包括如下重量百分比的原料：增稠剂3-6％、保湿剂10-15％、胶原蛋白0.01-0.1％、防腐剂0.03-0.10％、ph调节剂0.03-0.06％、油脂0.2-0.4％、促渗透剂0.6-1.2％、水余量；其中，所述胶原蛋白为重组人源化胶原蛋白；所述促渗透剂为中药挥发油和月桂氮卓酮；所述油脂为吐温80、蛋黄卵磷脂、胆固醇的混合物。

4、促进药物渗透性的方法主要有改变角质层的理化性质，角质层的水溶性和通过载体改变细胞间通道中脂质和蛋白结构。脂质体中的磷脂结构与人体的皮肤相似，所以脂质体的生物相容性高，生物降解性好，能够促进药物的透皮吸收。另在脂质体中另增加中药挥发油与月桂氮卓酮复配的促渗透剂，增加胶原蛋白的吸收效果。月桂氮卓酮作为皮肤渗透促进剂，能改变皮肤角质层与蛋白结构，促进药物经皮吸收，对亲水性和疏水性的化合物都能增强其透皮作用。中药挥发油，经多篇文献支持，挥发油可改变皮肤表皮结构促进药物吸收。

5、本发明将大分子的重组人源化胶原蛋白制备成一种脂质体凝胶剂，通过将重组胶原蛋白与促渗透剂、吐温80制备成含有促渗透剂的脂质体混悬液，再与蛋黄卵磷脂和胆固醇制备的凝胶基质混合均匀制备所述重组胶原蛋白脂质体敷料，可以使脂质体均匀分散在凝胶基质中，借助凝胶剂的生物粘附性，能够在局部位置实现药物的缓释作用提高生物利用度，从而制备得到具有良好修复作用的重组胶原蛋白脂质体敷料。

6、优选的，所述重组人源化胶原蛋白选自i型重组人源化胶原蛋白、重组人源化ii型胶原蛋白和重组iii型人源化胶原蛋白中的至少一种，更优选为重组iii型人源化胶原蛋白。

7、优选的，所述中药挥发油为积雪草挥发油。

8、优选的，所述积雪草挥发油提取工艺包括如下步骤：

9、1)向粉碎后的积雪草中药材中加入2-4倍重量的水，室温浸泡10-30h；

10、2)加热至沸，并保持微沸4-8小时，至挥发油量不再增加，接取挥发油，所得挥发油即为积雪草挥发油。

11、优选的，所述胶原蛋白的含量为0.03-0.05％，更优选为0.035％。

12、优选的，所述增稠剂为卡波姆，更优选为卡波姆940；所述增稠剂用量为0.4％。

13、优选的，所述保湿剂选自小分子多元醇，更优选为甘油；所述保湿剂用量为10％。

14、优选的，所述防腐剂为羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯甲酸钠的混合物；所述防腐剂中，羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯甲酸钠的质量比为1-2:1-2:1-3，更优选为1:2:3。

15、优选的，所述ph调节剂选自氢氧化钠和/或三乙醇胺，更优选为氢氧化钠，其用量优选为0.045％。

16、优选的，所述油脂中，吐温80、蛋黄卵磷脂、胆固醇的质量比为6-10:4-6:1，更优选为8:5:1。

17、优选的，所述促渗透剂中，中药挥发油和月桂氮卓酮的质量比为1:2-3，更优选的，中药挥发油和月桂氮卓酮的质量比为1:2、1:2.5或1:3。

18、优选的，所述水为纯化水。

19、第二方面，本发明还提供了上述重组胶原蛋白脂质体敷料的制备方法，包括如下步骤：

20、s1.制备凝基质：将第一部分水与防腐剂、增稠剂、保湿剂混匀，用ph调节剂调节ph，即得所述凝基质；

21、s2.制备含促渗透剂的脂质体混悬液：s21.将蛋黄卵磷脂和胆固醇溶于醇中，蒸发除去所述醇，得到脂质薄膜；s22.将胶原蛋白、月桂氮卓酮和第二部分水混合，得到溶液1，将中药挥发油、吐温80与第三部分水混合，得到溶液2，将溶液1、溶液2和剩下的水混匀得到混合溶液；s23.将所述脂质薄膜与所述混合溶液混合并水化，过滤从而得到所述含促渗透剂的脂质体混悬液；

22、s3.用凝胶基质制备脂质体敷料：向凝胶基质中加入步骤s2得到的含促渗透剂的脂质体混悬液，搅拌均匀，即得所述重组胶原蛋白脂质体敷料。

23、优选的，步骤s1中，所述第一部分水的用量为水总量的70-85％，步骤s22中，所述第二部分水的用量为水总量的0.5-5％，所述第三部分水的用量为水总量的3-10％，所述剩下的水的用量为余量；步骤s21中醇为乙醇，所述乙醇与蛋黄卵磷脂和胆固醇总质量的体积质量比为20-40ml/g。

24、第三方面，本发明提供了前述重组胶原蛋白脂质体敷料的使用方法，所述重组胶原蛋白脂质体敷料的使用方法为外用。

25、优选的，所述使用方法包括如下步骤：清洁患处皮肤，将所述重组胶原蛋白脂质体敷料均匀外敷于皮肤，每天1次，连续使用一周，第二周使用2-3次，两周为一疗程。

26、优选的，步骤s21中醇为乙醇，所述乙醇与蛋黄卵磷脂和胆固醇总质量的体积质量比为20-40ml/g。

27、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

28、1、本发明借助脂质体中的磷脂结构与人体的皮肤相似，提高胶原蛋白的吸收率。

29、2、本发明利用月桂氮酮卓促进皮肤渗透的特性，能改变皮肤角质层与蛋白结构，提高胶原蛋白的吸收率。

30、3、本发明采用积雪草挥发油，能改变皮肤表皮结构，提高胶原蛋白的吸收率。

31、4、本发明利用凝胶剂的生物粘附性，能够在局部位置实现胶原蛋白的缓释作用提高生物利用度。

32、5、本发明提供的重组胶原蛋白脂质体敷料对皮肤有较好的修复作用，通过在皮肤表面形成保护层构建皮肤物理屏障，为创面修复提供愈合的微环境，促进创面愈合，适用于皮肤瘙痒、过敏等皮肤的修复护理。