一种填充剂组合物及其制备方法和其应用与流程

本发明属于医学美容材料领域，具体涉及一种填充剂组合物及其制备方法和其应用。

背景技术：

1、透明质酸(hyaluronan、hyaluronic acid)，又称玻尿酸，是一种由双糖(d-葡萄糖醛酸及n-乙酰葡糖胺)基本结构组成的糖胺聚糖，为细胞外基质的主要成分之一。透明质酸广泛存在于结缔组织、上皮组织和神经组织中。与多数糖胺聚糖不同，透明质酸不含硫，并在细胞膜而非高基氏体中形成，其相对分子质量可达106量级。透明质酸为当今公认的最佳保湿成分，被广泛应用于保养品和化妆品中。以透明质酸为主要原料研发的透明质酸凝胶经注射进入到人体皮肤真皮浅层，可保持皮肤内的水分，促进营养物质的供给和代谢物的排泄；促进表皮细胞增殖和分化，以及清除氧自由基，从而防止皮肤老化，起到美容养颜的作用。已知透明质酸钠降解周期短，交联的透明质酸钠一般为6-12个月，其在体内降解周期较短无法达到长期效果。

2、pdrn(多聚脱氧核苷酸)帮助细胞基因规格化，促进成纤维细胞数增加，及分泌的活性化，使伤口迅速愈合；利用这种特性，快速恢复伤口，缩短伤口愈合时间，可应用于消除疤痕或细皱纹、防止皮肤老化、增强皮肤弹性等多种领域，是从本质上促进皮肤再生的治疗方法。

3、聚己内酯作为皮肤填充剂的原料，多应用于皮肤皱纹和凹陷的填充。聚酯类材料具有良好的生物相容性、抗凝血性、无毒和低免疫性等优点，在生理环境中可水解降解成低分子量碎片，而低分子量碎片可被巨噬细胞内吞并在细胞内降解，在降解过程中通过刺激宿主的免疫反应，吸引皮下大量的巨噬细胞和其他免疫细胞，导致成纤维细胞的增殖及其肌成纤维细胞的分化，合成大量的胶原蛋白，从而恢复皮下容量、修复皱纹。聚己内酯可被人体100％吸收，相比于聚乳酸，植入皮肤后，聚己内酯比聚乳酸吸收得更慢，能够促进胶原蛋白的产生，效果可持续1至4年。

4、聚酯类材料具有疏水性，在真皮填充中易于团聚形成大颗粒，并且仅在注入皮肤后的6到8周后显示效果，其治疗满意度低于在治疗后立即显示效果的透明质酸填充物。

5、因此，需要开发新的聚己内酯填充组合物，改善目前聚己内酯注射剂起效慢，注射刺激性强，且不稳定的技术问题。

技术实现思路

1、鉴于现有技术的不足，本发明提供了一种填充剂组合物，促进了细胞及组织再生，不仅能快速刺激胶原蛋白的再生，而且表现出了高的组织修复特性，延长了保持效果，防止皮肤老化，增强皮肤弹性。

2、本发明的目的之一是提供一种填充剂组合物，包括以下组分：20-50wt％聚己内酯微球，0.1-3wt％的多核苷酸和/或多聚脱氧核苷酸，1-60wt％的悬浮稳定剂，和10-70wt％的缓冲液。

3、本发明的优选技术方案中，所述填充剂组合物中聚己内酯微球的含量为25-40wt％，优选为25-35wt％。

4、本发明的优选技术方案中，所述填充剂组合物中多核苷酸和/或多聚脱氧核苷酸的含量为0.3-2wt％，优选为0.5-1wt％。

5、本发明的优选技术方案中，所述填充剂组合物中悬浮稳定剂的含量为2-55wt％，优选为3-50wt％。

6、本发明的优选技术方案中，填充剂组合物任选地含有甘油，甘油的含量为0.1-1wt％，优选为0.2-0.8wt％，更优选为0.4-0.7wt％。

7、本发明的优选技术方案中，填充剂组合物任选地含有利多卡因，利多卡因的含量为0.1-0.5wt％，优选为0.2-0.4wt％。

8、本发明的优选技术方案中，所述组合物的ph为6-8。

9、本发明的优选技术方案中，所述的悬浮稳定剂选自聚乙烯醇、透明质酸钠、交联透明质酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素的任一种或其组合。

10、本发明的优选技术方案中，所述的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、氯化钠缓冲液的任一种或其组合。优选地，该缓冲液为氯化钠或磷酸盐缓冲液。

11、本发明的另一目的在于提供一种填充剂组合物的制备方法，填充剂组合物，20-50wt％聚己内酯微球，0.1-3wt％的多核苷酸和/或多聚脱氧核苷酸，1-60wt％的悬浮稳定剂，和10-70wt％的缓冲液；制备方法包括下述步骤：(1)称取缓冲液过滤；(2)过滤后加入悬浮稳定剂以及多核苷酸和/或多聚脱氧核苷酸，搅拌使其溶解；(3)将聚己内酯微球加入溶液中，搅拌使聚己内酯分散均匀，即得。

12、本发明的优选技术方案中，所述步骤(1)中任选地加入甘油后混合均匀过滤。

13、本发明的优选技术方案中，所述填充剂组合物中聚己内酯微球的含量为25-40wt％，优选为25-35wt％。

14、本发明的优选技术方案中，所述填充剂组合物中多核苷酸和/或多聚脱氧核苷酸的含量为0.3-2wt％，优选为0.5-1wt％。

15、本发明的优选技术方案中，所述填充剂组合物中悬浮稳定剂的含量为2-55wt％，优选为3-50wt％。

16、本发明的优选技术方案中，填充剂组合物任选地含有甘油，甘油的含量为0.1-1wt％，优选为0.2-0.8wt％，更优选为0.4-0.7wt％。

17、本发明的优选技术方案中，填充剂组合物任选地含有利多卡因，利多卡因的含量为0.1-0.5wt％，优选为0.2-0.4wt％。

18、本发明的优选技术方案中，所述的悬浮稳定剂选自聚乙烯醇、透明质酸钠、交联透明质酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素的任一种或其组合。

19、本发明的优选技术方案中，所述的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、氯化钠缓冲液的任一种或其组合。优选地，该缓冲液为氯化钠或磷酸盐缓冲液。

20、本发明的另一目的在于是提供一种注射填充物，所述的填充物为聚己内酯微球，所述微球的粒径为20-100μm，所述聚己内酯微球具有粗糙的表面或不光滑的表面。

21、本发明的优选技术方案中，所述聚己内酯微球粗糙的表面或不光滑的表面具有不规则孔径。

22、本发明的优选技术方案中，所述微球的粒径优选20-70μm，更优选为25-50μm。

23、本发明的优选技术方案中，所述聚己内酯的分子量为5000-30000。

24、本发明的优选技术方案中，所述聚己内酯的分子量为10000-25000。

25、本发明的优选技术方案中，所述聚己内酯的分子量为15000-22000。

26、本发明的另一目的在于提供一种注射填充物的制备方法，包括下述步骤：

27、(1)水相制备：将表面活性剂加入到纯化水中，搅拌，溶解；

28、(2)有机相制备：将可注射填充物加入到有机溶剂中，搅拌至完全溶解；

29、(3)乳化制粒：将有机相和水相混合均匀，搅拌，使用膜乳化器进行乳化，制备微球；

30、(4)搅拌挥发：搅拌使有机溶剂全部挥发；

31、(5)微球收集：收取混悬液，过滤，清洗，干燥，得到可注射填充物微球。

32、本发明的优选技术方案中，所述的表面活性剂为聚乙烯醇、甲基纤维素、聚氧乙烯、聚氧丙烯、聚乙烯亚胺、聚苯乙烯、聚氧硅烷、羟丙基纤维素中的任一种或其组合。

33、本发明的优选技术方案中，所述的有机溶剂为丙酮、乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷中的任一种或其组合。

34、本发明的优选技术方案中，所述的表面活性剂与纯化水的比例为10-50g/l，优选为15-40g/l，更优选为20-30g/l。

35、本发明的优选技术方案中，所述水相溶液的粘度为2-10cp，优选4-8cp。

36、本发明的优选技术方案中，所述的水相溶液制备过程中，向反应釜中加入纯化水，开启机械搅拌，调节转动功率为10-50hz，优选20-30hz；将表面活性剂缓慢加入纯化水中，加热至60-120℃，搅拌2～6小时，待表面活性剂完全溶解后降至室温。

37、本发明的优选技术方案中，所述可注射填充物和有机溶剂的比例为100-300g/l，优选150-250g/l。

38、本发明的优选技术方案中，所述的有机相制备过程中，将可注射填充物加入到有机溶剂中，搅拌使其完全溶解。

39、本发明的优选技术方案中，所述的乳化步骤中，调节机械搅拌功率为10～50hz，将有机相缓慢加入至水相中，搅拌3-10min后，使用膜乳化器调节压力为0.5-1bar，使用30μm膜管进行快速膜乳化。

40、本发明的优选技术方案中，所述的搅拌挥发步骤中，将乳化后样品转移至反应釜中，保持机械搅拌功率为10～50hz，使用氮气/压缩空气置换釜内气体，维持1-20m/s流速，搅拌12～48小时使有机溶剂完全挥发。。

41、本发明的优选技术方案中，所述的微球收集步骤中，采用离心、沉降、过滤的任一种或其组合方式收集微球。

42、本发明的优选技术方案中，所述的微球收集步骤中，有机溶剂挥发后，收取反应釜中混悬液，使用离心机分离固体微球，所述的离心机转速为2000-5000rpm，离心时间2-8min，优选离心机转速为3000-4000rpm，离心时间3-6min。

43、本发明的优选技术方案中，所述的微球收集步骤中，取收集到的微球，用纯化水和乙醇进行清洗，离心后收集，干燥，即得。

44、本发明的优选技术方案中，所述的干燥是在30～60℃下干燥10～30小时，优选30～40℃下干燥15～24小时。

45、本发明的优选技术方案中，所述的干燥为鼓风干燥或冷冻干燥。

46、本发明的优选技术方案中，所述的清洗步骤中，纯化水清洗2-5次，乙醇清洗1-2次。

47、本发明的另一目的在于提供一种填充剂组合物作为注射填充剂的应用，所述填充剂组合物包括以下组分：20-50wt％聚己内酯微球，0.1-3wt％的多核苷酸和/或多聚脱氧核苷酸，1-60wt％的悬浮稳定剂，和10-70wt％的缓冲液。

48、本发明的优选技术方案中，所述注射填充剂的填充部位选自面部、颈部、腹部、胸部、臀部、大腿、小腿、上臂、下臂的任一种或其组合，优选注射填充部位为面部。

49、本发明的优选技术方案中，所述注射填充剂用于改善患者面部消瘦、脂肪萎缩、面颊下陷、眼窝下陷、皮肤皱纹的任一种或其组合。

50、本发明的另一目的在于提供一种填充剂组合物的联用方式，将所述填充剂组合物与其他类型注射填充物、消炎剂、抗过敏剂的任一种或其组合联合使用；所述填充剂组合物包括下述组分：20-50wt％聚己内酯微球，0.1-3wt％的多核苷酸和/或多聚脱氧核苷酸，1-60wt％的悬浮稳定剂，和10-70wt％的缓冲液。

51、本发明的优选技术方案中，所述的其他类型注射填充物选自聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、硅胶、自体脂肪的任一种或其组合。

52、本发明的优选技术方案中，所述的消炎剂选自类固醇类消炎剂、非类固醇类消炎剂的任一种或其组合。

53、本发明的优选技术方案中，所述的类固醇类消炎剂选自氟轻松、氢化可的松、倍他米松的任一种或其组合。

54、本发明的优选技术方案中，所述的非类固醇类消炎剂选自阿司匹林、水杨酸镁、水杨酸钠、水杨酸胆碱镁、二氟尼柳、双水杨酸酯、布洛芬、吲哚美辛、氟比洛芬、苯氧基布洛芬、萘普生、萘丁美酮、吡罗昔康、保泰松、双氯灭痛、芬洛芬、酮基布洛芬、酮咯酸、四氯芬那酸、舒林酸、托美丁的任一种或其组合。

55、本发明的优选技术方案中，所述的抗过敏剂选自苯海拉明、异丙嗪、氯苯那敏、色甘酸钠、酮替芬、倍他司汀、孟鲁斯特、扎鲁斯特、沙丁胺醇、葡萄糖酸钙、肾上腺糖皮质激素的任一种或其组合。

56、本发明采用凝胶渗透色谱(gpc)法(中国药典2020年版四部通则0514)检测共聚物分子量，如下所示：

57、供试品溶液取本品适量，精密称定，加三氯甲烷溶解并稀释制成每1ml中约含10mg的溶液，用0.22μm的有机滤膜过滤，取续滤液。

58、对照品溶液分别取5-6个不同分子量的聚苯乙烯对照品适量，精密称定，加三氯甲烷溶解并稀释制成每1ml中各约含对照品2mg的溶液，溶解，混匀。

59、色谱条件采用凝胶色谱柱(styragel hr 4e thf，7.8×300mm或效能相当的色谱柱)；流动相为三氯甲烷；流速为每分钟0.7ml；检测器为示差折光检测器；柱温为35℃；进样体积10μl。

60、测定法精密量取供试品溶液及对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。由gpc软件分别计算出对照品溶液的回归方程与供试品的重均分子量(mw)、数均分子量(mn)及分子量分布(mw/mn)。

61、本发明采用电子拉力试验机测定推挤力：使用速度30mm/min，停机力值：250.00n，停机位移15.0mm。

62、本发明采用kinexus pro+流变仪剪切粘度和流变性能。

63、剪切粘度测试：选择转子型号：pu20 l1917 ss，设置间隙：0.3mm；装载样品后，选择剪切速率扫描程序，设置温度为25℃，起始剪切速率为0.01s-1，结束剪切速率为100.00-1，扫描时间为3min，每一个数量级采点数为20个。得到剪切速率为1s-1时的剪切粘度。

64、选择转子型号：pu20 l1917 ss，设置间隙：0.3mm。装载样品后，选择频率表(应变控制)，设置温度为25℃，起始频率为10hz，结束频率为0.1hz，剪切应变0.5％，每一个数量级采点数为10个，得到频率为1hz下的g’和g”。

65、除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量百分比。

66、与现有技术相比，本发明具有下述有益技术效果：

67、1、本发明在聚己内酯注射液中加入了多核苷酸和/或多聚脱氧核苷酸促进了细胞及组织再生，表现出了高的组织修复特性，延长了保持效果，防止皮肤老化，增强皮肤弹性。本发明科学筛选了各组分的含量，使得聚己内酯微球能够均匀稳定的悬浮在注射液中，聚己内酯微球粒径分布均匀，避免了注射时聚集、堵塞针孔和形成结节等缺陷。

68、2、本发明中的聚己内酯微球具有粗糙的表面或不光滑的表面，相比光滑的表面，表面粗糙、多孔结构的聚己内酯微球具有更高的比表面积，因此增加了与细胞的接触面积，提高了细胞的黏附能力和滞留时间，改善了聚己内酯微球的亲和力，可刺激并加快胶原蛋白的生长。

69、3、本发明在制备聚己内酯微球的过程中科学筛选了各组分的用量，在控制水相溶液粘度的基础上，配合快速膜乳化法，获得了规则的、表面粗糙、粒径均一的球形聚己内酯微粒。采用本发明的制备方法获得的聚己内酯微球粒径分布范围窄且粒径均一，提高了可注射的聚己内酯微球的收率。