短双歧杆菌CCFM683缓解结直肠腺瘤的应用

本发明涉及短双歧杆菌ccfm683缓解结直肠腺瘤的应用，属于生物。

背景技术：

1、结直肠腺瘤泛指结直肠粘膜表面向肠腔突出的隆起性病变，包括有腺瘤(其中有绒毛状腺瘤)，儿童型息肉、炎症息肉及息肉病等，并不属于结直肠癌。结直肠腺瘤一般是良性病变，但是也有一定癌变风险，并未发展成腺癌，如果不加以控制，而任由结直肠腺瘤的发展，则有可能发展成结直肠腺癌(结直肠癌的一种)。结直肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤。结直肠腺瘤为良性的，结直肠癌为恶性的，且这两种疾病的预后截然不同。结直肠癌是全球第三大常见癌症，也是癌症死亡的第二大原因，在40-70岁人群中发病率较高。环境和遗传因素，如长期慢性炎症、结直肠息肉家族史、不健康的饮食、生活方式和肠道菌群失调可能会增加发生结直肠腺瘤甚至是结直肠癌的可能性。因此，需要更多的研究来关注结直肠腺瘤的预防、治疗和预后，这样可以杜绝结直肠癌的发生，提高患者的生活质量。

2、结直肠腺瘤性息肉基因(adenomatous polyposis coil,apc)是诱发家族性腺瘤息肉病的主要原因，且apc基因突变是诱发结直肠癌发生的早期事件。家族性腺瘤息肉病的主要特征是：结直肠中发育异常的病灶逐渐增长，并发展成为数百或数千个腺瘤性息肉，更严重的甚至能发展成腺癌。apcmin+小鼠是目前公认的自发性结直肠腺瘤模型专用的小鼠，通过控制小鼠的周龄，能高度还原结直肠腺瘤的发生和发展过程，使小鼠不发生癌变。

3、常规的结直肠腺瘤治疗策略，如放疗和化疗不能区分正常细胞和腺瘤细胞，并可能在周围组织中诱发癌症；手术和息肉切除术仅限于小的局部腺瘤，并可能导致术后并发症；新兴的免疫疗法只是补充疗法；这些方法价格昂贵，副作用大，并会严重影响患者的生活质量。因此，世界各地的研究人员都在努力寻找治疗结直肠腺瘤的新干预措施。最著名的益生菌是乳杆菌和双歧杆菌，与肠道相关的疾病可以通过特定的乳杆菌或双歧杆菌进行调节和改善。争夺粘附位点、产生细菌素等杀菌物剂、改善肠道通透性、释放活性代谢物、调节免疫、刺激细胞保护反应可能是乳杆菌和双歧杆菌预防结直肠腺瘤发生的潜在功能。而目前缺乏对结直肠腺瘤起缓解作用的双歧杆菌进行研究，多数研究集中在结肠癌的研究，因此，筛选对结直肠腺瘤起缓解作用的双歧杆菌并开发出相关的药物显得尤为重要。

技术实现思路

1、本发明提供了短双歧杆菌在制备预防和/或治疗结直肠腺瘤的药物中的应用，所述短双歧杆菌能够用于制备预防和/或治疗结直肠腺瘤的产品中。

2、所述短双歧杆菌为短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683，所述短双歧杆菌ccfm683保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为cgmcc no.11828，保藏日期为2015年12日04日，已公开于公开号为cn106038611a的专利申请文件中。

3、在一种实施方式中，所述应用包括但不限于如下至少一种作用：

4、(1)减少结直肠腺瘤个体的结肠腺瘤数量和腺瘤体积，减轻结肠的组织损伤；

5、(2)降低结直肠腺瘤个体结肠中促肿瘤蛋白pcna、ki67的表达量；

6、(3)恢复结直肠腺瘤个体结肠中黏蛋白muc2表达量和浓度，修复结肠黏液层；

7、(4)促进结直肠腺瘤个体结肠肿瘤细胞的凋亡，上调肿瘤细胞促凋亡蛋白bax的浓度，降低抗凋亡蛋白bcl-2的浓度；

8、(5)短双歧杆菌ccfm683干预显著升高了结直肠腺瘤个体肠道菌群的多样性，上调产丁酸的有益菌odoribacter splanchnicus(内脏臭气杆菌)，下调潜在的有害菌ruminococcus flavefaciens(黄色瘤胃球菌)和clostridium cocleatum(梭状芽孢杆菌)。

9、在一种实施方式中，所述应用还包括改善肠道机械屏障和/或调节肠道免疫屏障。

10、在一种实施方式中，所述改善肠道机械屏障包括恢复结肠中紧密连接蛋白zo-1、claudin-1等与肠道机械屏障相关的蛋白含量。

11、在一种实施方式中，所述调节肠道免疫屏障包括降低结直肠腺瘤个体结肠中促炎细胞因子tnf-α和il-1β的浓度，提高抑炎细胞因子il-10和il-4的浓度。

12、在一种实施方式中，所述药物中，短双歧杆菌的活菌数为不低于1×1010cfu/g。

13、在一种实施方式中，所述药物的形式为益生菌冻干粉。

14、在一种实施方式中，所述冻干粉的制备方法为：将上述短双歧杆菌接种至培养基中进行培养，得到种子液；将种子液接种到培养基中进行培养，得到培养液；将培养液离心，收集菌泥；将菌泥用生理盐水清洗后重悬，得到重悬液；向重悬液中添加冻干保护剂，得到混合液；将混合液真空冷冻干燥，得到冻干粉。

15、在一种实施方式中，将种子液按2～4％(v/v)的接种量接种到培养基中进行培养。

16、在一种实施方式中，所述冻干保护剂的成分包括脱脂乳粉、海藻糖、蔗糖和水。

17、在一种实施方式中，所述冻干保护剂成分为80-120g/l脱脂乳粉、80-140g/l海藻糖、140-180g/l蔗糖和水。

18、在一种实施方式中，所述冻干保护剂的成分包括100g/l脱脂乳粉、100g/l海藻糖、160g/l蔗糖和水。

19、在一种实施方式中，所述冻干保护剂在重悬液中的添加量为菌泥总重量的2～4倍。

20、在一种实施方式中，种子培养基为mrs固体培养基，发酵培养基为mrs液体培养基。

21、在一种实施方式中，所述mrs液体培养基是加了半胱氨酸盐酸盐的mrs液体培养基。

22、在一种实施方式中，所述半胱氨酸盐酸盐的添加量为按质量分数0.04-0.1％。

23、在一种实施方式中，将种子液按2-4％的接种量接种到mrs液体培养基中进行培养的培养条件为：34-38℃厌氧培养24h～36h，7000-12000rmp离心20～30min，收集菌泥，用生理盐水清洗3～4次后重悬。

24、本发明还提供了一种用于预防和/或治疗结直肠腺瘤的药物，所述产品中含有上述短双歧杆菌。

25、在本发明的一种实施方式中，所述药物中短双歧杆菌的活菌数为不低于1×1010cfu/g。

26、有益效果：

27、(1)本发明所提供的短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683分离自新生儿的肠道菌群，该菌株对人体无毒副作用，因此采用本发明提供的短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683制备的药物，相对于用于治疗结直肠腺瘤的传统药物具有一定的优势，并且该菌株可用于制作益生菌制剂等，具有广阔的市场前景。

28、(2)采用本发明所提供的短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683，能够显著降低结直肠腺瘤个体的结肠腺瘤数量和腺瘤体积，降低结肠的组织损伤。

29、(3)短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683干预下，能显著降低结直肠腺瘤个体结肠中促肿瘤蛋白pcna，ki67的表达量。

30、(4)在短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683干预下，结直肠腺瘤个体结肠中黏蛋白muc2表达量和浓度升高，结肠黏液层得到显著的修复。

31、(5)短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683干预能促进结直肠腺瘤个体结肠肿瘤细胞的凋亡，上调肿瘤细胞促凋亡蛋白bax的浓度，降低抗凋亡蛋白bcl-2的浓度。

32、(6)在短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683干预组中，结直肠腺瘤个体结肠中紧密连接蛋白zo-1、claudin-1等与肠道机械屏障相关的蛋白显著高于pbs对照组，改善肠道机械屏障。

33、(7)短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683干预显著降低了结直肠腺瘤个体结肠中促炎细胞因子tnf-α和il-1β的浓度，并且上调了抑炎细胞因子il-10和il-4的浓度，调节肠道免疫屏障。

34、(8)短双歧杆菌(bifidobacterium breve)ccfm683干预显著升高了结直肠腺瘤个体肠道菌群的多样性，上调产丁酸的有益菌内脏臭气杆菌，下调潜在的有害菌黄色瘤胃球菌和梭状芽孢杆菌，改善肠道的微生物屏障。