一种结膜修复材料及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物医学材料，具体涉及一种结膜修复材料及其制备方法和应用。

背景技术：

1、眼球是人类及哺乳动物的视觉器官，眼球的结构非常精细。眼结膜处于眼球的表面，直接与外界接触，很容易受到外界损伤，同时也容易发生内源性疾病，严重的会导致失明。恢复视力要求结膜上皮细胞迅速正常再生覆盖。治愈结膜损伤的机制包括以下3步：首先是上皮细胞的黏附、伸展和迁移，然后是上皮细胞的增殖，最后是上皮细胞的分化。经过上述3个步骤才能回复到井然排列层状结构的上皮。

2、目前常用的结膜损伤的治疗方法是用正常的结膜或结膜替代物进行结膜重建，包括自体结膜移植、唇粘膜移植、羊膜移植、异体结膜移植等。但由于可用于移植的自体结膜有限，具有良好组织配型的异体结膜的获得相当困难，大大影响治疗可实施性。

3、异种结膜移植是利用异源动物结膜为材料，脱除细胞后，制备一种生物相容性好，具有与人结膜相似的组织结构形态和性能，有利于细胞的增殖和发挥其功能。对于脱细胞后结膜组织需要交联处理使组织材料具有韧性，然而现有技术中交联的方法常用材料戊二醛溶液进行交联保护，但戊二醛试剂本身具有一定的毒性，在生物组织修复材料的制备中应用，难免会导致材料的残留。这大大影响结膜材料的临床应用。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种结膜修复材料的制备方法，采用超高静压交联技术对结膜组织进行交联，有利于提高材料的机械性能和力学性能。

2、本发明提供了一种结膜修复材料的制备方法，包括以下步骤：

3、将分离的动物结膜组织进行超声处理，得到超声处理的结膜组织；

4、将所述超声处理的结膜组织在核酸酶作用下进行脱细胞处理，得到的脱细胞的结膜组织；

5、将脱细胞的结膜组织在交联剂存在条件下进行超高静压处理交联，得到结膜修复材料；所述交联剂包括以下种类的物质：碳二亚胺、京尼平、表儿茶素没食子酸酯和原花青素。

6、优选的，所述交联时，超高静压处理的压力为200～800mpa，超高静压处理的时间为1～30min。

7、优选的，所述交联剂的质量浓度为0.1％～5％。

8、优选的，所述核酸酶包括dna酶、rna酶、重组核酸酶中的至少一种；

9、所述核酸酶的终浓度为50～1500u/ml；

10、优选的，所述脱细胞处理的温度为20～40℃，所述脱细胞处理的时间为1～4h。

11、优选的，所述脱细胞处理或交联时，以保护液作为处理材料的介质；

12、所述保护液为含硫酸软骨素5～50g/l、透明质酸5～50g/l、右旋糖酐5～20g/l的pbs或hbss缓冲液，ph值为6.8～7.4，渗透压为300～400mosm。

13、优选的，所述超声处理的频率为20～60hz，所述超声处理的时间为2～20min。

14、优选的，所述动物包括以下任意一种：猪、牛和羊。

15、本发明提供了所述制备方法制备的结膜修复材料，缝线撕裂力不低于1.0n；拉伸强度为不低于3.0n。

16、本发明提供了所述制备方法制备的结膜修复材料在制备结膜损伤修复的工程材料中的应用。

17、本发明提供了一种结膜修复材料的制备方法，包括以下步骤：将分离的动物结膜组织进行超声处理，得到超声处理的结膜组织；将所述超声处理的结膜组织在核酸酶作用下进行脱细胞处理，得到的脱细胞的结膜组织；将脱细胞的结膜组织在交联剂存在条件下进行超高静压处理交联，得到结膜修复材料；所述交联剂包括以下种类的物质：碳二亚胺、京尼平、表儿茶素没食子酸酯和原花青素。本发明首先采用超声振荡松散结膜组织内的细胞；利用去垢剂和核酸酶的作用，能够快速有效地去除细胞碎片；采用超高静压交联技术可以对结膜组织结构在较短时间内进行交联，提高结膜修复材料的机械性能和力学性能，从而保持结膜特有纤维结构的排列、完整和保持原有的生物特性。实验证明，采用本发明制备方法的结膜修复材料具有良好的拉伸强度，拉伸强度不低于3.0n，结膜修复材料具有良好的抗缝线撕裂的能力，缝线撕裂力为不低于1.0n，与动物结膜组织和其他方法制备的结膜修复材料相比拉伸强度和缝线撕裂力有明显提高。

18、同时，采用本发明制备方法的结膜修复材料，异种细胞完全去除，细胞外胶原纤维基质结构保存良好，结膜原有的组织结构保持完整。并且α-gal残留检测符合要求，α-gal抗原清除率为99.87％，dna残留检测表明，dna残留检测结果，平均残留量为0.88ng/mg，远小于常见动物源材料所制得产品dna残留量小于50ng/mg的标准规定。

技术特征：

1.一种结膜修复材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述交联时，超高静压处理的压力为200～800mpa，超高静压处理的时间为1～30min。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述交联剂的质量浓度为0.1％～5％。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述核酸酶包括dna酶、rna酶、重组核酸酶中的至少一种；

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述脱细胞处理的温度为20～40℃，所述脱细胞处理的时间为1～4h。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述脱细胞处理或交联时，以保护液作为处理材料的介质；

7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述超声处理的频率为20～60hz，所述超声处理的时间为2～20min。

8.根据权利要求1～7中任意一项所述制备方法，其特征在于，所述动物包括以下任意一种：猪、牛和羊。

9.权利要求1～8中任意一项所述制备方法制备的结膜修复材料，其特征在于，缝线撕裂力不低于1.0n；拉伸强度不低于3.0n。

10.权利要求9所述制备方法制备的结膜修复材料在制备结膜损伤修复的工程材料中的应用。

技术总结
本发明提供了一种结膜修复材料及其制备方法和应用，属于生物医学材料技术领域。本发明提供了一种结膜修复材料的制备方法，将分离的动物结膜组织进行超声处理，将超声处理的结膜组织在核酸酶作用下进行脱细胞处理，将脱细胞的结膜组织在交联剂存在条件下进行超高静压处理交联，得到结膜修复材料；所述交联剂包括以下种类的物质：碳二亚胺、京尼平、表儿茶素没食子酸酯和原花青素。本发明采用上述方法制备的结膜修复材料能提高结膜修复材料的机械性能和力学性能，从而保持结膜特有纤维结构的排列、完整和保持原有的生物特性。

技术研发人员：史真,史伟云
受保护的技术使用者：拜欧迪赛尔（成都）生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15