抗TIGIT抗体和抗CTLA-4抗体联合用于治疗肿瘤中的应用的制作方法

本发明属于生物医药领域，具体涉及抗tigit抗体和抗ctla-4抗体联合用于治疗肿瘤中的应用。

背景技术：

1、tigit(t cell immunoreceptor with ig and itim domains)是一种具有免疫球蛋白(ig)和酪氨酸抑制剂基序(itim)结构域的t细胞免疫受体，主要表达于激活的t细胞和nk细胞上。tigit结构显示包含一个细胞外免疫球蛋白结构域，一个i型跨膜区和两个itim基序。tigit是共同刺激网络的一部分，这个共刺激网络主要由t细胞上的激活性受体cd226和抑制性受体tigit，以及在apc、肿瘤细胞、感染的细胞表面表达的配体cd155(也称为pvr，一种在人类中被pvr基因编码的脊髓灰质炎病毒受体蛋白质)和cd112组成。tigit与pvr或cd112结合后会引起tigit胞质内tyr225被磷酸化，tigit和细胞自适应生长因子受体结合蛋白2(grb2)进行结合。grb2可以招募ship1抑制磷脂酰肌醇三激酶(pi3k)和促分裂原活化蛋白激酶(mapk)信号。除此之外，磷酸化的tigit通过beta抑制蛋白2(β-arrestin2)招募ship1和通过阻断tnf受体相关因子6(traf6)的自身泛素化并破坏核因子kb(nf-kb)激活，一系列的信号传导最终导致t细胞或nk细胞的功能受到抑制，细胞因子的产生受到抑制。pvr既是tigit的配体，又是cd226分子的配体。在和cd112或cd155结合之后，cd226的胞内结构域的ser329和tyr322被磷酸化；ser329磷酸化促进蛋白激酶(pkc)的激活和cd226与淋巴细胞关联抗原1(lfa1)的相互结合。lfa1然后被用于tyn介导的tyr322磷酸化和cd226介导的下游信号传导。一系列的信号传导最终导致t细胞或nk细胞的功能受到激活，促进细胞因子的产生。存在于t细胞或nk细胞表面的tigit分子与cd226分子之间也发生着相互作用，表现在tigit分子可以直接扰乱cd226形成正常的二聚体，从而破坏cd226的正常生理功能。tigit和cd226如同天平的两端，通过pvr这个支点，通过共刺激和共抑制信号的传导巧妙地调节着机体的免疫功能。

2、细胞毒性t淋巴细胞抗原-4(ctla-4)是一种影响t细胞功能的关键抑制性受体，在免疫应答的启动阶段发挥关键作用(scalapino kj1,daikh di.(2008),immunol rev.223:143-155)。当抗原被mhc-i类或ii类抗原提呈细胞运输到t细胞受体(tcr)时，tcr上的信号就会放大，并被共刺激分子抵消。t细胞上的cd28与抗原提呈细胞上的b7-1(cd80)和b7-2(cd86)结合后，会发出一种需要t细胞全激活的信号。这种cd28/b7的结合导致白介素2及其他刺激性的细胞因子产生的增加，提高代谢，促进细胞周期进程，上调细胞存活基因，最终使t细胞得到增殖和分化。当cd28结合并引起t细胞增殖后，ctla-4被运送并表达在t细胞表面(linsley ps,et al.(1996),immunity.4(6):535-543)。通过tcr的激活信号越强烈，就越多ctla-4运送并表达。当在细胞表面上时，ctla-4的抑制信号就被传播(egen jg,allison jp.(2002),immunity.16(1):23-25)。与cd28相比，ctla-4与b7有更高的亲和力，并能阻碍更进一步的共激活(krummel mf,allison jp.(1995),j exp med.182(2):458-465)。并且，ctla-4表达的细胞能通过内吞作用捕获和降解b7-1和b7-2(qureshi os,etal.(2011),science.332(6029):600-603)。

3、鉴于免疫检查点的重要性，亟需开发新的联合疗法。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种联合用药物及其用于治疗肿瘤中的应用。

2、在一些实施方案中，所述联合用药物包括抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述联合用药物包括治疗有效量的抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段。

3、另一方面，本发明提供治疗肿瘤的药物组合，包括抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段。

4、另一方面，本发明提供了抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段联合用于治疗肿瘤。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗肿瘤的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段。

5、另一方面，本发明提供了抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段在制备与抗ctla-4抗体或抗原结合片段联合用于治疗肿瘤的药物中的应用。

6、另一方面，本发明提供了抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

7、另一方面，本发明提供了抗ctla-4抗体或抗原结合片段在制备与抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段联合用于治疗肿瘤的药物中的应用。

8、另一方面，本发明提供了抗ctla-4抗体或抗原结合片段和抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

9、另一方面，本发明提供了抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段在制备用于治疗肿瘤的药物组合物中的应用。

10、另一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包含抗tigit抗体和包装插页，该包装插页包含关于与抗ctla-4抗体组合使用所述抗tigit抗体治疗肿瘤的说明书。

11、另一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包含抗ctla-4抗体和包装插页，该包装插页包含关于与抗tigit抗体组合使用所述抗ctla-4抗体治疗肿瘤的说明书。

12、另一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包含抗tigit抗体和抗ctla-4抗体的药剂，和包装插页，该包装插页包含关于使用所述抗tigit抗体和抗ctla-4抗体的药剂治疗肿瘤的说明书。

13、另一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包含抗tigit抗体的药剂和包装插页，该包装插页包含关于与抗ctla-4抗体组合使用所述抗tigit抗体的药剂治疗肿瘤的说明书。

14、另一方面，本发明提供了一种试剂盒，其包含抗ctla-4抗体的药剂和包装插页，该包装插页包含关于与抗tigit抗体组合使用所述抗ctla-4抗体的药剂治疗肿瘤的说明书。

15、另一方面，本发明提供了一种试剂盒，包含抗tigit抗体或抗原结合片段(或制剂)、抗ctla-4抗体或抗原结合片段(或制剂)和用于指导有需要患者给药抗tigit抗体或抗原结合片段(或制剂)和抗ctla-4抗体或抗原结合片段(或制剂)的说明书。

16、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体或抗原结合片段至少包含seq id no:1所示的hcdr1、seq id no:2所示的hcdr2、seq id no:3所示的hcdr3、seq id no:4所示的lcdr1、seq id no:5所示的lcdr2、seq id no:6所示的lcdr3中一个或多个。

17、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体或抗原结合片段包含seq id no:1所示的hcdr1、seq id no:2所示的hcdr2、seq id no:3所示的hcdr3、seq id no:4所示的lcdr1、seq id no:5所示的lcdr2和seq id no:6所示的lcdr3。

18、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区。

19、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体或抗原结合片段的重链可变区包含seq idno:7所示的氨基酸序列，或与seq id no:7所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:7所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

20、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含seq idno:8所示的氨基酸序列，或与seq id no:8所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:8所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

21、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体或抗原结合片段的重链可变区包含seq idno:7所示的氨基酸序列，或与seq id no:7所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:7所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；所述抗tigit抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含seq id no:8所示的氨基酸序列，或与seq idno:8所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:8所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

22、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体或抗原结合片段的重链可变区包含seq idno:7所示的氨基酸序列，所述抗tigit抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含seq id no:8所示的氨基酸序列。

23、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体的重链包含seq id no:9所示的氨基酸序列，或与seq id no:9所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:9所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

24、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体的轻链包含seq id no:10所示的氨基酸序列，或与seq id no:10所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:10所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

25、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体的重链包含seq id no:9所示的氨基酸序列，或与seq id no:9所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:9所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；所述抗tigit抗体的轻链包含seq id no:10所示的氨基酸序列，或与seq id no:10所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:10所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

26、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体为抗体h10d8of或h10d8ofkf，其重链包含如seq id no:9所示的氨基酸序列，其轻链包含如seq id no:10所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体h10d8of或h10d8ofkf含有两条序列相同的重链和两条序列相同的轻链。

27、在一些实施方案中，所述抗tigit抗体(例如抗体h10d8ofkf)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-10％。在一些实施方案中，所述抗tigit抗体(例如抗体h10d8ofkf)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-5％。在一些实施方案中，所述抗tigit抗体(例如抗体h10d8ofkf)或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为约0、约0.1％、约0.5％、约0.8％、约1％、约1.3％、约1.6％、约2.1％、2.9％、约3％、约3.3％、3.8％、约4％、约4.2％、4.3％、约4.6％、约5％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，所述抗tigit抗体(例如抗体h10d8ofkf)或抗原结合片段没有结合岩藻糖。在一些实施方案中，所述抗tigit抗体(例如抗体h10d8ofkf)或抗原结合片段具有增强的adcc效应(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)。

28、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段至少包含seq id no:11所示的hcdr1、seq id no:12所示的hcdr2、seq id no:13所示的hcdr3、seq id no:14所示的lcdr1、seq id no:15所示的lcdr2、seq id no:16所示的lcdr3中一个或多个。

29、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段包含seq id no:11所示的hcdr1、seq id no:12所示的hcdr2、seq id no:13所示的hcdr3、seq id no:14所示的lcdr1、seq id no:15所示的lcdr2和seq id no:16所示的lcdr3。

30、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区。

31、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的重链可变区包含seq idno:17所示的氨基酸序列，或与seq id no:17所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:17所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

32、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含seq idno:18所示的氨基酸序列，或与seq id no:18所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:18所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

33、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的重链可变区包含seq idno:17所示的氨基酸序列，或与seq id no:17所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:17所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含seq id no:18所示的氨基酸序列，或与seq id no:18所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:18所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

34、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的重链可变区包含seq idno:17所示的氨基酸序列，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的轻链可变区包含seq idno:18所示的氨基酸序列。

35、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体的重链包含seq id no:19所示的氨基酸序列，或与seq id no:19所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:19所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

36、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体的轻链包含seq id no:20所示的氨基酸序列，或与seq id no:20所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:20所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

37、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体的重链包含seq id no:19所示的氨基酸序列，或与seq id no:19所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:19所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列；所述抗ctla-4抗体的轻链包含seq id no:20所示的氨基酸序列，或与seq id no:20所示序列相比具有至少80％同一性的氨基酸序列，或与seq id no:20所示序列相比具有一个或多个保守氨基酸取代的氨基酸序列。

38、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体的重链包含如seq id no:19所示的氨基酸序列，所述抗ctla-4抗体的轻链包含如seq id no:20所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体含有两条序列相同的重链和两条序列相同的轻链。

39、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的高甘露糖糖型总量<5％和/或唾液酸化糖型总量<3％。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段的高甘露糖糖型总量为约0.1％、约0.3％、约0.9％、约1.18％、约1.7％、约2.6％、约3.3％、约4.1％、约4.9％、约4.99％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的唾液酸化糖型总量为约0.1％、0.2％、约0.36％、约0.8％、约1.5％、约2.2％、约2.7％、约2.9％、2.99％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。

40、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的高甘露糖糖型总量<2％和/或唾液酸化糖型总量<1％。

41、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-10％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-5％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为约0、约0.1％、约0.5％、约0.8％、约1％、约1.3％、约1.6％、约2.1％、2.9％、约3％、约3.3％、3.8％、约4％、约4.2％、4.3％、约4.6％、约5％，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段没有结合岩藻糖。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段具有增强的adcc效应(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)。

42、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-10％，高甘露糖糖型总量<5％和/或唾液酸化糖型总量<3％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-5％，高甘露糖糖型总量<5％和/或唾液酸化糖型总量<3％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为约0％，高甘露糖糖型总量<5％和/或唾液酸化糖型总量<3％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-10％，高甘露糖糖型总量<3％和/或唾液酸化糖型总量<2％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-5％，高甘露糖糖型总量<3％和/或唾液酸化糖型总量<2％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为约0％，高甘露糖糖型总量<3％和/或唾液酸化糖型总量<2％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-10％，高甘露糖糖型总量<2％和/或唾液酸化糖型总量<1％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为0-5％，高甘露糖糖型总量<2％和/或唾液酸化糖型总量<1％。在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段的岩藻糖基化水平为约0％，高甘露糖糖型总量<2％和/或唾液酸化糖型总量<1％。

43、在一些实施方案中，所述抗ctla-4抗体或抗原结合片段为伊匹单抗(yervoytm或其生物类似物)。

44、抗体可以通过基因工程在宿主细胞中表达，并通过纯化获得；纯化可以采用常规方法进行，例如先离心细胞悬液并收集上清液，再次离心进一步去除杂质。proteina亲和柱和离子交换柱等方法可以用于纯化抗体。

45、在一些实施方案中，低岩藻糖基化或无岩藻糖基化的抗tigit抗体(例如抗体h10d8ofkf)或抗原结合片段或者抗ctla-4抗体或抗原结合片段由α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的细胞系表达，例如由α-(1,6)-岩藻糖基转移酶基因敲除的cho-k1细胞表达。

46、在一些实施方案中，本发明还提供了包含抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物为适合注射用的药物组合物，如推注型药物组合物或输液(滴注)型药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物至少包含0.1％的抗tigit抗体或抗原结合片段和0.1％的抗ctla-4抗体或抗原结合片段。抗体的百分比可以变化，可以为给定剂型重量的约2％和约90％之间。这种治疗上有用的药物组合物中抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段可以为给药的有效量。

47、另一方面，本发明还提供了上述药物组合物的制备方法：分别将本文所述的抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段与药学上可接受的适合注射用的载体(例如注射用水，生理盐水等)混合。在一些实施方案中，上述药物组合物的制备方法：将本文所述的抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段与药学上可接受的适合注射用的载体(例如注射用水，生理盐水等)混合。上述抗体或抗原结合片段与载体的混合方法是本领域通常已知的。

48、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的质量比为1-50:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的质量比为5-25:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的质量比为1-15:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的质量比为1-10:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的质量比为约5:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的质量比为15-30:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的质量比为20-30:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的质量比为约25:1。

49、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每次施用的剂量为约0.05mg至1200mg、约0.5mg至1000mg、约5mg至500mg、约5mg至100mg、约10mg至100mg、约10mg至50mg，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每次施用的剂量为约0.05mg、约0.1mg、约0.5mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约12mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约80mg、约100mg、约120mg、约200mg、约250mg、约290mg、约300mg、约330mg、约380mg、约400mg、约480mg、约500mg、约580mg、约600mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1200mg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗tigit抗体为抗体h10d8of或h10d8ofkf。

50、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每次施用的剂量为约0.01mg/kg至20mg/kg、约0.01mg/kg至2mg/kg、约0.01mg/kg至1mg/kg、约0.05mg/kg至1mg/kg、约0.1mg/kg至1mg/kg，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每次施用的剂量为约0.01mg/kg、约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约12mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约18mg/kg、约20mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗tigit抗体为抗体h10d8of或h10d8ofkf。

51、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约0.05mg至1200mg、约0.5mg至1000mg、约5mg至500mg、约5mg至100mg、约10mg至100mg、约10mg至50mg，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约0.05mg、约0.1mg、约0.5mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约12mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约80mg、约100mg、约120mg、约200mg、约250mg、约290mg、约300mg、约330mg、约380mg、约400mg、约480mg、约500mg、约580mg、约600mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1200mg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗tigit抗体为抗体h10d8of或h10d8ofkf。

52、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约0.01mg/kg至20mg/kg、约0.01mg/kg至2mg/kg、约0.01mg/kg至1mg/kg、约0.05mg/kg至1mg/kg、约0.1mg/kg至1mg/kg，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约0.01mg/kg、约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg、约12mg/kg、约14mg/kg、约15mg/kg、约18mg/kg、约20mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗tigit抗体为抗体h10d8of或h10d8ofkf。

53、在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段每次施用的剂量为约0.05mg至600mg、约0.5mg至600mg、约1mg至100mg、约1mg至50mg、约1mg至10mg，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段每次施用的剂量为约0.05mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.5mg、约0.8mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约12mg、约20mg、约30mg、约50mg、约60mg、约80mg、约100mg、约120mg、约200mg、约250mg、约290mg、约300mg、约330mg、约380mg、约400mg、约434mg、约480mg、约500mg、约567mg、约580mg、约600mg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体为抗体1。

54、在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段每次施用的剂量为约0.01mg/kg至10mg/kg、约0.01mg/kg至2mg/kg、约0.01mg/kg至1mg/kg、约0.02mg/kg至1mg/kg、约0.02mg/kg至0.5mg/kg、约0.02mg/kg至0.2mg/kg，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段每次施用的剂量为约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体为抗体1。

55、在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约0.05mg至600mg、约0.5mg至600mg、约1mg至100mg、约1mg至50mg、约1mg至10mg，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约0.05mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.5mg、约0.8mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约12mg、约20mg、约30mg、约50mg、约60mg、约80mg、约100mg、约120mg、约200mg、约250mg、约290mg、约300mg、约330mg、约380mg、约400mg、约434mg、约480mg、约500mg、约567mg、约580mg、约600mg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体为抗体1。

56、在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约0.01mg/kg至10mg/kg、约0.01mg/kg至2mg/kg、约0.01mg/kg至1mg/kg、约0.02mg/kg至1mg/kg、约0.02mg/kg至0.5mg/kg、约0.02mg/kg至0.2mg/kg，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约0.5mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg，或这些数值中任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体为抗体1。

57、在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗肿瘤的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用约0.05mg至1200mg、约0.5mg至1000mg、约5mg至500mg、约5mg至100mg、约10mg至100mg、约10mg至50mg，比如约0.05mg、约0.08mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约12mg、约20mg、约30mg、约50mg、约60mg、约80mg、约100mg、约120mg、约200mg、约250mg、约290mg、约300mg、约330mg、约380mg、约400mg、约434mg、约480mg、约500mg、约567mg、约580mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg的抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段，或含此剂量抗tigit抗体或抗原结合片段的制剂；还向有需要的患者施用约0.05mg至600mg、约0.5mg至600mg、约1mg至100mg、约1mg至50mg、约1mg至10mg，比如约0.05mg、约0.08mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约12mg、约20mg、约30mg、约50mg、约60mg、约80mg、约100mg、约120mg、约200mg、约250mg、约290mg、约300mg、约330mg、约380mg、约400mg、约434mg、约480mg、约500mg、约567mg、约580mg、约600mg的抗ctla-4抗体或抗原结合片段，或含此剂量抗ctla-4抗体或抗原结合片段的制剂。

58、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为1-50:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为5-25:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为1-15:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为1-10:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为约5:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为15-30:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为20-30:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为约25:1。

59、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约10mg、30mg、100mg、300mg、600mg、或900mg，且抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为1-50:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约10mg、30mg、100mg、300mg、600mg、或900mg，且抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为5-25:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约10mg、30mg、100mg、300mg、600mg、或900mg，且抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为1-15:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约10mg、30mg、100mg、300mg、600mg、或900mg，且抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为1-10:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约10mg、30mg、100mg、300mg、600mg、或900mg，且抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为约5:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约10mg、30mg、100mg、300mg、600mg、或900mg，且抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为15-30:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约10mg、30mg、100mg、300mg、600mg、或900mg，且抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为20-30:1。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段每个治疗周期施用的剂量为约10mg、30mg、100mg、300mg、600mg、或900mg，且抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段给药的质量比为约25:1。

60、在一些实施方案中，抗tigit抗体为抗体h10d8ofkf，抗ctla-4抗体为抗体1。

61、在一些实施方案中，抗tigit抗体为抗体h10d8of，抗ctla-4抗体为抗体1。

62、制剂可以为适于注射用途的制剂包括无菌水性溶液或分散体以及用于即时制备无菌注射液或分散体的无菌粉末。合适的载体包括生理盐水、抑菌水或磷酸盐缓冲盐水(pbs)、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的溶剂或分散介质，及其适宜的混合物。在一些实施方案中，制剂至少包含0.1％的抗体或抗原结合片段。

63、在一些实施方案中，一个治疗周期为1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周，2个月、5个月、6个月、一年，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括端点)或其中任何值。在一些实施方案中，给药频率为每天给药一次至每7周给药一次。在一些实施方案中，给药频率为每天给药一次、每周给药三次、每周给药两次、每周给药一次、每2周给药一次、每3周给药一次、每4周给药一次、每5周给药一次、每6周给药一次或每7周给药一次。抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的给药频率可以相同或者不同。

64、在一些实施方案中，患者接受单次抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的治疗。在一些实施方案中，单次给药后，患者的症状得到缓解。在一些实施方案中，单次给药后，患者后的症状未得到预期缓解，再对患者给药抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，患者接受治疗直至病症得到缓解而不再需要治疗。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内分别给药一次抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，患者每个治疗周期内多次给药抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段，例如2次、3次、4次或5次。在一些实施方案中，患者接受一个治疗周期治疗。在一些实施方案中，患者接受多个治疗周期(例如2个、3个或4个)治疗。

65、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段、抗ctla-4抗体或抗原结合片段是通过皮下(s.c.)注射、腹膜内(i.p.)注射、肠胃外注射、动脉内注射或静脉内(i.v.)注射或输液等方式进行给药。抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段可以通过相同或者不同方式进行给药。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段是通过腹腔注射给药。

66、在一些实施方案中，抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段分别为独立的给药单元，联合用药。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段可以在不同时间给药。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段在施加抗ctla-4抗体或抗原结合片段之前给药。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段在施加抗ctla-4抗体或抗原结合片段之后给药。在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段与抗ctla-4抗体或抗原结合片段同时给药。在一些实施方案中，分别将抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段配制成药物组合物，并以适合于所选给药途径的形式向患者给药，例如通过肠胃外、静脉内(iv)、肌肉内、局部或皮下途径。

67、在一些实施方案中，抗tigit抗体(例如抗体h10d8of或h10d8ofkf)或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段同时形成组合给药单元，联合用药。在一些实施方案中，将抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段组合配制成药物组合物，并以适合于所选给药途径的形式向患者给药，例如通过肠胃外、静脉内(iv)、肌肉内、局部或皮下途径。

68、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段(或制剂)、抗ctla-4抗体或抗原结合片段(或制剂)可以与其他治疗方法联合使用用于治疗肿瘤，例如化疗、放疗和手术治疗等。

69、在一些实施方案中，患者患有肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤包括但不限于良性肿瘤、癌症。在一些实施方案中，肿瘤包括但不限于血液癌症、实体瘤。在一些实施方案中，血液癌症包括但不限于白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。在一些实施方案中，白血病包括急性淋巴细胞性白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)和骨髓性增生疾病/肿瘤(mpds)。在一些实施方案中，淋巴瘤包括霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤和滤泡性淋巴瘤(小细胞和大细胞)。在一些实施方案中，骨髓瘤包括多发性骨髓瘤(mm)、巨细胞骨髓瘤、重链骨髓瘤和轻链或本斯-琼斯骨髓瘤。在一些实施方案中，实体瘤包括乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、头颈癌、肝癌、肾癌、鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、肺癌、非小细胞肺癌、宫颈癌、食管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、结肠癌、结直肠癌、尿路上皮癌、膀胱癌、脑癌。在一些实施方案中，肿瘤为尚无有效治疗手段的经病理学确诊的局部晚期或转移性恶性实体肿瘤。

70、在一些实施方案中，抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段的组合，其与单独使用抗tigit抗体或抗原结合片段和抗ctla-4抗体或抗原结合片段治疗相比，所述组合可提高肿瘤抑制作用和/或延长生存期。