一种治疗肿瘤的组合药物的制备方法及其应用与流程

本发明涉及肿瘤免疫治疗，具体涉及一种治疗肿瘤的组合药物的制备方法及其应用。

背景技术：

1、癌症是指生物体内细胞异常地增殖并扩散到机体其他部位，最终危害生命健康的恶性肿瘤。在人类中肺癌、结直肠癌、胃癌、乳腺癌和肝癌发病率较高。正常情况下，免疫系统具备清除肿瘤细胞的能力。cd8+t细胞是一类具有细胞毒性的t淋巴细胞，对机体的适应性免疫应答和抗肿瘤免疫反应有重要作用。然而，肿瘤浸润的cd8+t细胞，其分泌如il-2、ifn-γ和tnf-α等细胞因子的能力往往受损，其抗肿瘤免疫反应较弱，处于低应答(hyporesponsive)的状态。在肿瘤发展过程中，其微环境中低氧、酸性的环境，以及免疫抑制性细胞(如调节性t细胞和髓源性抑制细胞)、受体(如ctla-4)和细胞因子(如il-10)等因素也抑制了cd8+t细胞清除肿瘤的能力。为了解除该环境中的免疫抑制，提升机体自身对抗肿瘤的能力，近年来国内外聚焦肿瘤免疫治疗研究。和传统治疗方法不同，肿瘤免疫治疗目的在于增强机体免疫系统识别并清除肿瘤细胞的能力，主要手段有：免疫检查点阻断疗法、过继性细胞疗法和癌症疫苗等。此外，结合免疫治疗和传统治疗(如pd-l1抗体配合化疗治疗小细胞肺癌)，或免疫治疗药物的联合应用(如ctla-4和pd-1抗体治疗黑色素瘤等)均比单一治疗手段更有效地提高患者总生存期。这些研究表明，合理地结合肿瘤治疗的手段，可“双管齐下”式地提升治疗效果。

2、前文所提的技术在肿瘤免疫治疗中有一定的成效，但仍存在明显的不足。首先，免疫检查点抑制剂的应答率较低，据2018年一份研究显示，使用这类药物治疗的美国癌症患者中，仅有12.5％的患者有应答；仅有20-30％的癌症患者对pd-1/pd-l1阻断药物有应答。由于t细胞在活化后，也表达部分免疫抑制性受体，如ctla-4，使用这类抗体的同时，也容易打击具有抗肿瘤功能的效应cd4+和cd8+t细胞。另外，抑制性受体本身是免疫系统调控免疫反应的手段，阻断这类受体容易引起自身免疫反应。一项临床研究显示，在联合ctla-4和pd-1抗体治疗的黑色素瘤患者中，有55％出现3-4级的治疗相关不良反应。而针对细胞的car-t疗法，对实体瘤治疗效果不佳，并可引发细胞因子释放综合征。

3、综合上述，目前的肿瘤免疫治疗有不少问题存在，因此市场需要针对具有高度免疫抑制性的肿瘤微环境，开发更有特异性的靶点。

技术实现思路

1、本发明的目的在于解决现有技术中存在的免疫检查点抑制剂的应答率较低、阻断抑制性受体容易引起自身免疫反应的问题，解决了上述背景技术中提出的car-t疗法对实体瘤治疗效果不佳，并可引发细胞因子释放综合征的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明的第一个方面在于提供了一种治疗肿瘤的组合药物的制备方法，包括将诱导因子-1抑制剂和调节性t细胞清除药物溶解于生理盐水中。

4、缺氧诱导因子-1(hif-1α)对介导细胞的糖酵解途径有重要作用，帮助细胞在低氧环境下生存。在缺氧的肿瘤微环境中，hif-1可抑制自然杀伤(nk)和树突状(dc)细胞的分化与功能，促进免疫抑制性受体的表达，以及诱导t细胞的耗竭(exhaustion)，从而有助于肿瘤细胞的逃逸。调节性t细胞(treg)是一类抑制机体免疫反应、防止自身免疫疾病发生的抑制性cd4+t细胞，正常情况其对维持机体免疫稳态不可或缺。而在肿瘤中treg富集程度较高，可占到肿瘤浸润cd4+t细胞的10-50％。treg主要通过分泌免疫抑制性的细胞因子或分子(如il-10,tgf-β,il-35)、高表达白细胞介素-2受体α链(cd25)和免疫抑制性受体等，发挥免疫抑制功能。本方法首次将诱导因子-1抑制剂和调节性t细胞清除药物结合，获得包含诱导因子-1抑制剂和调节性t细胞清除药物的小分子药物，通过hif1α抑制剂提升cd8+t细胞的肿瘤杀伤作用，treg清除药物去降低tme中的高度免疫抑制作用，放大t细胞的杀伤反应，降低免疫抑制，双管齐下地提升免疫系统的抗肿瘤免疫反应。

5、进一步地，诱导因子-1抑制剂包括盐酸吖啶黄，盐酸吖啶黄，即acriflavine(hydrochloride)，是一种fda批准的，具有杀菌作用的hif1α的抑制剂，近十几年研究证明其对一系列癌症(如脑癌、肺癌、肝脏、结肠癌、卵巢癌和胰腺癌等)的疗效，并且副作用小，适合肿瘤治疗。

6、进一步地，调节性t细胞清除药物包括氮芥类烷化剂，例如，cytoxan环磷酰胺，是一类可用于治疗淋巴瘤和白血病以及瘤乳腺癌，卵巢癌和小细胞肺癌的化疗药物，适用于肿瘤药物的研发与应用。

7、进一步地，诱导因子-1抑制剂的浓度范围为1-3mg/kg，在此范围内治疗肿瘤的组合药物抑制诱导因子-1的效果最佳。

8、进一步地，调节性t细胞清除药物的浓度范围为50-150mg/kg，在此范围内治疗肿瘤的组合药物清除调节性t细胞的效果最佳。

9、本发明的第二个方面在于提供了一种治疗肿瘤的组合药物，由上述方法制得，本方案中所使用的药物，是已经通过fda批准，被多年应用于治疗癌症的药物，毒副作用较小，成本较低，作为广谱抗癌药物，非常适合联合用药。并且，hif1α本身对treg细胞分化具有抑制作用。在tme中，当hif1α降解或功能受损时，容易导致treg细胞分化上升，反而导致免疫抑制加重，市面上的hif1α抑制剂都无可避免地导致这个问题。因此，通过结合treg清除药物，能够弥补这个缺点，在抑制hif1α的同时，同时抑制treg的分化扩增，从而有效提升t细胞的免疫反应，最终达到清除肿瘤的治疗效果。

10、本发明的第三个方面在于提供了上述治疗肿瘤的组合药物在制备肿瘤治疗药物，和/或制备免疫增强剂药物，和/或作为功能性保健食品中的应用。该治疗肿瘤的组合药物能够有效杀伤肿瘤，同时下调免疫抑制性treg细胞，更有利于抗肿瘤免疫反应。

11、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

12、本申请提出了一种治疗肿瘤的组合药物的制备方法及其应用，首次将诱导因子-1抑制剂和调节性t细胞清除药物结合，通过hif1α抑制剂提升cd8+t细胞的肿瘤杀伤作用，treg清除药物去降低tme中的高度免疫抑制作用，放大t细胞的杀伤反应，降低免疫抑制，双管齐下地提升免疫系统的抗肿瘤免疫反应。并探索出了诱导因子-1抑制剂和调节性t细胞清除药物合适的配比，有利于肿瘤治疗药物的研究与开发。通过上述方法制备的治疗肿瘤的组合药物克服了现有技术中存在的免疫检查点抑制剂的应答率较低、阻断抑制性受体容易引起自身免疫反应的问题，进而解决了car-t疗法对实体瘤治疗效果不佳，引发细胞因子释放综合征的问题，该治疗肿瘤的组合药物能够有效杀伤肿瘤，同时下调免疫抑制性treg细胞，更有利于抗肿瘤免疫反应。

技术特征：

1.一种治疗肿瘤的组合药物的制备方法，其特征在于，包括将诱导因子-1抑制剂和调节性t细胞清除药物溶解于生理盐水中。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述诱导因子-1抑制剂包括盐酸吖啶黄。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述调节性t细胞清除药物包括氮芥类烷化剂。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述诱导因子-1抑制剂的浓度范围为1-3mg/kg。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述调节性t细胞清除药物的浓度范围为50-150mg/kg。

6.一种治疗肿瘤的组合药物，其特征在于，由权利要求1-5中任一方法制得。

7.权利要求6所述的治疗肿瘤的组合药物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。

8.权利要求6所述的治疗肿瘤的组合药物在制备免疫增强剂药物中的用途。

9.权利要求6所述的治疗肿瘤的组合药物作为功能性保健食品的用途。

技术总结
本申请提出了一种治疗肿瘤的组合药物的制备方法及其应用，将诱导因子‑1(HIF1α)抑制剂和调节性T细胞(Treg)清除药物结合，通过HIF1α抑制剂提升CD8+T细胞的肿瘤杀伤作用，Treg清除药物去降低TME中的高度免疫抑制作用，放大T细胞的杀伤反应，降低免疫抑制，双管齐下地提升免疫系统的抗肿瘤免疫反应。并探索出了诱导因子‑1抑制剂和调节性T细胞清除药物合适的配比，有利于肿瘤治疗药物的研究与开发。

技术研发人员：潘璠,魏萍,李奕葵
受保护的技术使用者：深圳先进技术研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22